Name: preclinical model of hind limb ischemia in diabetic rabbits
Uploaded: 2019-06-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits at JoVE.com

Los autores reconocen con gratitud el financiamiento a través del programa de investigación dirigida por el Congreso del Departamento de defensa (DOD CDMRP; W81XWH-16-1-0582) a ABB y RS. Los autores también reconocen la financiación a través de la Asociación Americana del corazón (17IRG33410888), el CDMRP DOD (W81XWH-16-1-0580) y los institutos nacionales de salud (1R21EB023551-01; 1R21EB024147-01A1; 1R01HL141761-01) a ABB.

Se realizaron estudios con animales con la aprobación de la Universidad de Texas en Austin y el centro de Ciencias UTHealth en el Comité institucional de cuidado y uso de animales de Houston (IACUC), la oficina de revisión de cuidado y uso de animales (ACURO) del ejército de los Estados Unidos Investigación médica y oficina de comando de materiales de protección de investigación, y de acuerdo con las pautas de NIH para el cuidado de animales.
1. inducción de la diabetes y la hiperlipide...

Hemos presentado un modelo preclínico para inducir isquemia de los miembros posteriores en conejos con diabetes e hiperlipidemia. En muchos estudios, hay ambigüedad en la técnica utilizada para crear isquemia de los miembros posteriores en conejos. En ratones, la severidad y la recuperación de la isquemia de los miembros posteriores depende en gran medida de la ubicación de la ligadura y la técnica utilizada para inducir la isquemia. La importancia de la técnica presentada en este trabajo es que permite la inducci...

La enfermedad arterial periférica (PAD) es un trastorno circulatorio común en el que la progresión de la formación de placa aterosclerótica conduce a un estrechamiento de los vasos sanguíneos en las extremidades del cuerpo. El reciente aumento de los factores de riesgo de la aterosclerosis, incluyendo la diabetes, la obesidad y la inactividad, ha provocado un aumento de la prevalencia de la enfermedad vascular1. Actualmente, se estima que el 12% – 20% de la población general de más de 60 años de edad tiene enfermedad arterial periférica2. Una consecuencia importante de la enfermedad arterial periférica es el desarrollo de isquemia periférica, que se encuentra más comúnmente en las extremidades inferiores. En casos severos, los pacientes pueden desarrollar isquemia crítica de las extremidades, un estado en el cual hay dolor constante debido a la falta de flujo sanguíneo. Los pacientes con isquemia crítica de las extremidades tienen una probabilidad del 50% de que un miembro sea amputado dentro de un año de diagnóstico. Además, los pacientes con diabetes tienen una mayor incidencia de enfermedad arterial periférica y resultados más pobres después de intervenciones para revascularización3,4. Las terapias actuales para la isquemia periférica incluyen intervenciones percutáneas tales como aterectomía y colocación de stents o bypass quirúrgico. Sin embargo, para muchos pacientes estos tratamientos sólo proporcionan beneficios a corto plazo y muchos no son lo suficientemente sanos para los procedimientos quirúrgicos mayores. En este trabajo, describimos un modelo de animales preclínicos para la prueba de nuevos tratamientos dirigidos a la enfermedad vascular periférica que incorpora la generación de isquemia periférica en conejos a través de la ligadura quirúrgica en el contexto del estado de la enfermedad diabética.
El modelo de isquemia de las extremidades traseras en conejos se ha utilizado como un modelo fisiológico para la enfermedad vascular obstructiva y precursor preclínico de estudios en humanos durante más de medio siglo5,6. Los conejos son a menudo una especie preferida para estudios sobre isquemia periférica debido a la musculatura desarrollada del músculo del tobillo y de la pantorrilla, en contraste con los modelos animales grandes comunes que son unguatos (animales con pezuñas). Varios comentarios recientes han abordado el uso de este modelo y otros en el modelado de la enfermedad vascular periférica en los seres humanos7,8. Modelos similares utilizando isquemia de los miembros posteriores en conejos se utilizaron en estudios preclínicos de factores de crecimiento9,10,11,12,13,14, 15,16,17,18,19,20, terapia génica21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31,32, 33,34,35,36,37,38,39,40,41, 42,43,44y células madre45,46,47,48,49,50 ,51para la neovascularización terapéutica en las extremidades. Desafortunadamente, los ensayos clínicos que siguieron a estos exitosos estudios en animales no muestran beneficios significativos para los pacientes52.
Una explicación sugerida de la razón de este fracaso traslacional es que la condición de isquemia periférica en pacientes humanos es aquella que incluye resistencia a las señales angiogénicas53,54,55, 56 , 57 , 58 , 59. varios estudios han demostrado defectos en las vías de señalización angiogénicas en la diabetes y la hiperglucemia. La diabetes y la hiperlipidemia conducen a una pérdida de proteoglicanos de sulfato de heparán y un aumento en las enzimas que cortan el sulfato de heparán, presentando un mecanismo potencial para la resistencia a la angiogénesis/Arteriogénesis terapéutica con factores de crecimiento60 , 61. por lo tanto, una característica clave de un modelo de isquemia periférica debe incluir un aspecto de resistencia terapéutica para que las terapias puedan evaluarse en el contexto del estado de la enfermedad presente en pacientes humanos.
En este trabajo, describimos un modelo de conejo de isquemia periférica a través de la ligadura quirúrgica de las arterias femorales. En el modelo se incorpora un período de introducción con la inducción de la diabetes y la hiperlipidemia. Comparamos este modelo con otro modelo que incorpora una dieta más alta en grasas sin diabetes y descubrió que el modelo con diabetes y menor nivel de hiperlipidemia fue más eficaz en la reducción del crecimiento de los vasos sanguíneos. Nuestro modelo combina avances que han sido utilizados por grupos separados, con el objetivo de proporcionar un método práctico y estandarizado para lograr resultados consistentes en la investigación de enfermedades vasculares periféricas.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1537468 / 1531434</td>
			<td>250 mL bag / 1000 mL irrigation btl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>23-245684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Dextrose</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-800-9689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>VEDC207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alfaxalone</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-891-6051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1471-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alloxan Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiography Equipment</td>
			<td>Toshiba</td>
			<td>Infinix-i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiography Injector</td>
			<td>Medrad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ab Alexa 594</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11032</td>
			<td>Secondary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Rabbit Ab Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td>Secondary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>a-SMA Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baytril</td>
			<td>Bayer Animal Health</td>
			<td>724089904201</td>
			<td>Enrofloxacin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Chemistry Panel</td>
			<td>IDEXX</td>
			<td>2616</td>
			<td>Rabbit Panel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Cuff</td>
			<td>WelchAllyn</td>
			<td></td>
			<td>Flexiport Disposable BP Cuff-infant size 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Monitor</td>
			<td>Vmed Technology</td>
			<td></td>
			<td>Vmed Vet-Dop2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>6023287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>42023017905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Sulfate</td>
			<td>CB Minerals</td>
			<td></td>
			<td>Food and Pharmaceutical Grade USP and FCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Scrub</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-4598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>C298-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear Vein Catheter</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>SR-OX165</td>
			<td>Surflo IV catheters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal tube</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td>Sheridan Brand, Depends on Rabbit Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B001A67WH2</td>
			<td>Accu-Chek Aviva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer Test Strips</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>788222</td>
			<td>Accu-Chek Aviva Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guidewire</td>
			<td>Boston Scientific</td>
			<td>39122-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Clippers</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000CQZI3Q</td>
			<td>Oster #40 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Cincinnati Subzero</td>
			<td>273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad Pump</td>
			<td>Gaymar</td>
			<td></td>
			<td>Gaymar T/Pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13009-12</td>
			<td>Curved Mosquito Hemostat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insertion Tool</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>MAP550</td>
			<td>metal wire insertion tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>HPB Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Novalin R &#38; Novalin N</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>942674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Introducer</td>
			<td>Cook Medical</td>
			<td>G28954</td>
			<td>3F Check Flo Performer Introducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1100734</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>856440301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringers</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>186662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>239936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine/Prilocaine cream</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>761240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ligaloop</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH117 / CH116</td>
			<td>White Mini / Yellow Mini</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mazola Corn Oil</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0049IIVCI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medrad Syringe</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>346920</td>
			<td>150 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal ball sutures</td>
			<td>Ethicon-Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>K891H</td>
			<td>4-0 silk C-1 30&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14019-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1215470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitroglycerin</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>927528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM Antibody</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB600-562</td>
			<td>Primary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Pump</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pigtail Catheter</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>1310-21-0053</td>
			<td>3F pigtail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydioxanone (PDS II) suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>129271</td>
			<td>4-0 taper RB-1 (needle comes on suture)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydioxanone (PDS II) suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>129031</td>
			<td>4-0 reverse cutting FS-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910 (Vicryl) suture</td>
			<td>Butler</td>
			<td>7233-41</td>
			<td>3-0 taper RB-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910 (Vicryl) suture</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>104373</td>
			<td>4-0 reverse cutting FS-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Chow (Alfalfa)</td>
			<td>LabDiet</td>
			<td>5321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Restrainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10718-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Cutters</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10015-00</td>
			<td>#15 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Sutures</td>
			<td>Ethicon-Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>A183H</td>
			<td>4-0 silk ties 18&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ball</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1598K23</td>
			<td>3-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drapes</td>
			<td>Gepco</td>
			<td>8204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>DRE Veterinary</td>
			<td></td>
			<td>Versaflow VF-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visipaque contrast media</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>509055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weitlaner Retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17012-13</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preclinical model of hind limb ischemia in diabetic rabbits

La enfermedad vascular periférica es un problema clínico generalizado que afecta a millones de pacientes en todo el mundo. Una consecuencia importante de la enfermedad vascular periférica es el desarrollo de la isquemia. En casos severos, los pacientes pueden desarrollar isquemia de extremidades críticas en la que experimentan dolor constante y un mayor riesgo de amputación de las extremidades. Las terapias actuales para la isquemia periférica incluyen cirugía de bypass o intervenciones percutáneas como la angioplastia con stent o aterectomía para restaurar el flujo sanguíneo. Sin embargo, estos tratamientos a menudo fallan en la progresión continua de la enfermedad vascular o reestenosis o están contraindicados debido a la mala salud general del paciente. Un enfoque potencial prometedor para tratar la isquemia periférica involucra la inducción de la neovascularización terapéutica para permitir que el paciente desarrolle vasculatura colateral. Esta red recién formada alivia la isquemia periférica restaurando la perfusión a la zona afectada. El modelo preclínico empleado con mayor frecuencia para la isquemia periférica utiliza la creación de isquemia de las extremidades traseras en conejos sanos a través de la ligadura de la arteria femoral. En el pasado, sin embargo, ha habido una fuerte desconexión entre el éxito de los estudios preclínicos y el fracaso de los ensayos clínicos con respecto a los tratamientos para la isquemia periférica. Los animales sanos suelen tener una regeneración vascular robusta en respuesta a la isquemia inducida quirúrgicamente, en contraste con la reducción de la vascularización y la regeneración en pacientes con isquemia periférica crónica. Aquí describimos un modelo animal optimizado para isquemia periférica en conejos que incluye hiperlipidemia y diabetes. Este modelo ha reducido la formación de colaterales y la recuperación de la presión arterial en comparación con un modelo con una dieta de colesterol más alta. Por lo tanto, el modelo puede proporcionar una mejor correlación con pacientes humanos con angiogénesis comprometida de las co-morbididades comunes que acompañan a la enfermedad vascular periférica.

Después de la inducción de la diabetes y el inicio de la dieta de colesterol 0,1%, el colesterol total para los conejos con diabetes y la dieta de colesterol fue de 123,3 ± 35,1 mg/dL (n = 6 conejos masculinos) promedió los puntos de tiempo totales y conejos. El nivel de BGL para estos conejos fue de 248,3 ± 50,4 mg/dL (n = 6 conejos masculinos). En la figura 3 , en comparación con los conejos bajo una dieta de colesterol más alta (1% de colesterol), se muestra un ...

Watch this Scientific Journal Video about Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits at JoVE.com

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Describimos un procedimiento quirúrgico utilizado para inducir isquemia periférica en conejos con hiperlipidemia y diabetes. Esta cirugía actúa como un modelo preclínico para afecciones experimentadas en la enfermedad arterial periférica en pacientes. La angiografía también se describe como un medio para medir la magnitud de la isquemia introducida y la recuperación de la perfusión.

Modelo preclínico de isquemia de extremidades traseras en conejos diabéticos

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Un tratamiento regenerativo para la enfermedad arterial periférica sería extremadamente beneficioso y este modelo animal puede ser capaz de probar mejor si los tratamientos experimentales podrían funcionar en pacientes humanos. Nuestro procedimiento tiene como objetivo presentar un modelo mejorado. Uno que replica con mayor precisión la resistencia terapéutica encontrada en pacientes con diabetes o hiperlipidemia.Este modelo animal se puede utilizar para probar nuevas terapias para la isquemia periférica y proporciona un modelo preclínico que ha comprometido la neovascularización a la isquemia. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de la pata trasera en un conejo diabético e hiperlipidémico anestesado de cuatro a seis meses de edad, utilice un bisturí con una hoja número 15 para hacer una incisión de cuatro a cinco centímetros de largo justo lateralmente en el lado derecho de la tráquea y utilice la disección contundente para exponer la arteria carótida común derecha. Utilice pequeños retractores weitlaner para abrir la incisión y aislar cuidadosamente la arteria carótida de la vena yugular y el nervio vago.Cuando la arteria carótida se haya separado completamente del nervio y la vena yugular, coloque una sutura de seda de 4 O en los extremos proximal y distal de la arteria expuesta y ate el extremo distal de la carótida con un nudo de cirujano y cuatro nudos cuadrados. En el extremo proximal, utilice una corbata de silicona vascular para permitir el apriete o aflojamiento del vaso, según sea necesario. A continuación, aplicar aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína a lo largo de la arteria carótida expuesta y nervio para promover la vasodilatación y reducir la irritación nerviosa.Administrar 500 unidades internacionales de heparina IV.Coloque una herramienta de inserción de alambre de cuatro pulgadas en la arteria. Alimente un cable guía de 0,014 pulgadas por 185 centímetros a través de la herramienta de inserción a la bifurcación aórtica en la cresta ilíaca en la aorta descendente, y avance un catéter angiográfico de tres coletas francesa sobre el alambre. Avanzar el catéter de cola de cerdo a dos centímetros proximal a la bifurcación aórtica en la cresta ilíaca en la aorta descendente, colocando la punta del catéter entre la séptima vértebra lumbar y la primera vértebra sacra.Pruebe la ubicación del catéter inyectando manualmente de dos a cuatro mililitros de agente de contraste. Una vez confirmado el posicionamiento correcto, administrar una inyección intraarterial de 100 microgramos de nitroglicerina a través del catéter para aumentar la vasodilatación. Luego administre de 0,8 a un mililitro de 1%lidocaína a través del catéter para ayudar con la vasodilatación y lavar el catéter con solución salina heparinizada.Fije el tubo para el inyector angiográfico automatizado al catéter, asegurándose de eliminar cualquier aire de la línea. Utilice el inyector angiográfico automatizado para entregar nueve mililitros de medio de contraste a través del catéter a tres mililitros por segundo y realizar angiografía por resta digital a seis fotogramas por segundo. Seleccione las imágenes en serie y modifique la imagen del angiograma utilizando un ajuste de menos 40% para minimizar la apariencia del hueso y capturar una imagen completa de la perfusión del vaso con contraste.Para aislar la arteria femoral, utilice una hoja de bisturí número 15 para hacer una incisión longitudinal de la piel sobre la arteria femoral derecha, asegurándose de que la incisión se extienda inferiormente desde el ligamento inguinal y termine en la zona sólo proximal a la rótula. Utilice la disección contundente para exponer la arteria femoral y abrir la incisión con los retractores de Weitlaner. Aplicar aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína localmente para reducir la irritación nerviosa y promover la vasodilatación.Continuar la disección contundente de los tejidos para liberar toda la longitud de la arteria femoral junto con todas sus ramas, incluyendo las arterias epigástricas inferiores, femorales profundas, circunflejo lateral y epigástricas superficiales. Diseccionar a lo largo de las arterias popliteales y safenosas, así como la arteria ilíaca externa, hidratando periódicamente la zona con solución salina para proteger contra el daño tisular. Separe cuidadosamente la arteria femoral de la vena femoral y el nervio y coloque dos suturas de seda 4-O en la arteria femoral con suficiente espacio entre las suturas para permitir que la arteria se se teje.Luego usa pequeñas tijeras Metzenbaum para cortar entre las dos corbatas de la arteria ligada. Exclusa la arteria femoral desde donde la arteria se bifurca para formar las arterias safenosas y popliteales, trabajando cerca, atando cualquier rama lateral para extirpar el resto de la arteria femoral justo debajo de la arteria epigástrica. Para la angiografía repetida, utilice una hoja silástica con una bola de acero inoxidable de tres milímetros montada.Para fijar la bola de acero inoxidable en la parte superior del músculo del cuádriceps con suturas de seda 4-O. Tire de la piel sobre la pelota cuando esté en su lugar. Administrar una inyección intraarterial de 100 microgramos de nitroglicerina a través del catéter para aumentar la vasodilatación.Si es necesario, administre otro 0,8 a un mililitro de 1%lidocaína a través del catéter para ayudar con la vasodilatación y lavar con solución salina heparinizada. Utilice el inyector angiográfico automatizado en los mismos ajustes para inyectar otros nueve mililitros de medio de contraste. A continuación, realice otra angiografía, como se ha demostrado.Al final del procedimiento, retire el catéter de la arteria derecha y ate la arteria usando la sutura de seda 4-O ya en su lugar alrededor de la arteria. A continuación, cierre las capas musculares y subcuticulares con 4-O polidioxanona o 3-O poliglactitina 910 suturas en una aguja cónica en un patrón de sutura continua y cierre la piel usando 4-O polidioxanona o 4-O poliglactina 910 suturas en una aguja de corte inverso en un patrón de sutura subcuticular continua enterrada. En animales no diabéticos, incluso con colesterol más alto, hay una mayor recuperación de la presión arterial en la extremidad isquémica y la vascularización en las angiografías en el punto final en comparación con los animales diabéticos.Histológicamente, cambios en la estructura muscular consistentes con edema y daño isquémico se observan como una pérdida o interrupción de las fibras musculares. Además, la inmunostaining para PECAM uno y alfa fuerza muscular actina se puede utilizar para identificar el número y tamaño de los vasos en las secciones de tejido. Se pueden agregar otros métodos de diagnóstico por imágenes, como el ultrasonido Doppler, la imagen Doppler láser, la termografía infrarroja y la RMN para un mayor seguimiento de la reperfusión isquémica de las extremidades.Con esta incorporación de resistencia terapéutica, nuestro modelo imita con mayor precisión la isquemia en un estado enfermo, avanzando en la evaluación de nuevas terapias para la enfermedad arterial periférica.

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Transferencia génica para la insuficiencia cardiaca isquémica en un modelo preclínico

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Investigación

Medicina

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

Evaluación longitudinal de ratón posteriores pérdida de masa ósea del miembro después de una lesión de la médula espinal utilizando Novel, En vivo Metodología

Spinal cord injury (SCI) is often accompanied by osteoporosis in the sublesional regions of the pelvis and lower extremities, leading to a higher ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Un modelo de trasplante heterotópico porcina Hind extremidades Modificado traslacional vascularizado compuesto Allotransplantation (VCA) Investigación

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

A preclínicos modelo murino de metástasis hepática

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Ortotópico de la extremidad posterior de trasplante en el ratón

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² and Tau Neuropathology

Evaluación de la Alternancia Espontánea, el Reconocimiento de Objetos Novelos y la Clasificación de Miembros en Modelos de Ratón Transgénico de la Neuropatología Amiloide-β y Tau

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Un modelo de cultivo de tejidos Ex Vivo para las complicaciones Fibrovascular en la retinopatía diabética proliferativa

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Evaluación de la angiogénesis terapéutica en un modelo murino de isquemia de las extremidades posteriores

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Establishment of a Severe Dry Eye Model Using Complete Dacryoadenectomy in Rabbits

Establecimiento de un modelo de ojos secos severos mediante dacrioadenectomía completa en conejos

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

Dar el siguiente paso: un modelo de trasplante de extremidades hindópicos ortotópicos de coaptación neuronal para maximizar la recuperación funcional en rata

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...