Name: assessing stem cell dna integrity for cardiac cell therapy
Uploaded: 2019-01-25T14:00:00
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यह काम राष्ट्रीय हार्ट, फेफड़े, और रक्त संस्थान अनुदान RO1-एचएल-९९५०७, एचएल-११४१२०, एचएल-१३१०१७, HL138023, और UO1-एचएल-१३४७६४ (जे जांग के लिए) और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन वैज्ञानिक विकास अनुदान 17SDG33670677 (आर Kannappan) द्वारा भाग में समर्थित किया गया था ।

1. धूमकेतु परख
<ol><li>
एजेंट तैयारी
	<ol>
<li>कम पिघलने बिंदु agarose के लिए, जगह ५०० मिलीग्राम कम पिघलने agarose के १०० मिलीलीटर में डीएनए-/RNA-free पानी । एक माइक्रोवेव ओवन में बोतल गर्मी जब तक agarose घुल । एक ३७ ° c पानी स्नान ?...

<ol>
	<li>Bolli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+stem+cells+in+patients+with+ischaemic+cardiomyopathy+(SCIPIO):+initial+results+of+a+randomised+phase+1+trial.">Cardiac stem cells in patients with ischaemic cardiomyopathy (SCIPIO): initial results of a randomised phase 1 trial.</a> The Lancet. 378 (9806), 1847-1857 (2011).</li><li>Makkar, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cardiosphere-derived+cells+for+heart+regeneration+after+myocardial+infarction+(CADUCEUS):+a+prospective,+randomised+phase+1+trial.">Intracoronary cardiosphere-derived cells for heart regeneration after myocardial infarction (CADUCEUS): a prospective, randomised phase 1 trial.</a> The Lancet. 379 (9819), 895-904 (2012).</li><li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+neural+crest+cells+contribute+to+the+dormant+multipotent+stem+cell+in+the+mammalian+heart.">Cardiac neural crest cells contribute to the dormant multipotent stem cell in the mammalian heart.</a> Journal of Cell Biology. 170 (7), 1135-1146 (2005).</li><li>Oyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+side+population+cells+have+a+potential+to+migrate+and+differentiate+into+cardiomyocytes+in+vitro+and+in+vivo.">Cardiac side population cells have a potential to migrate and differentiate into cardiomyocytes in vitro and in vivo.</a> Journal of Cell Biology. 176 (3), 329-341 (2007).</li><li>Fischer, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+myocardial+regeneration+through+genetic+engineering+of+cardiac+progenitor+cells+expressing+Pim-1+kinase.">Enhancement of myocardial regeneration through genetic engineering of cardiac progenitor cells expressing Pim-1 kinase.</a> Circulation. 120 (21), 2077-2087 (2009).</li><li>Cottage, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+progenitor+cell+cycling+stimulated+by+pim-1+kinase.">Cardiac progenitor cell cycling stimulated by pim-1 kinase.</a> Circulation Research. 106 (5), 891-901 (2010).</li><li>Angert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+the+injured+adult+heart+involves+new+myocytes+potentially+derived+from+resident+cardiac+stem+cells.">Repair of the injured adult heart involves new myocytes potentially derived from resident cardiac stem cells.</a> Circulation Research. 108 (10), 1226-1237 (2011).</li><li>Kannappan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+Modulates+the+Fate+of+Cardiac+Progenitor+Cells+Ex+vivo+and+in+the+Diabetic+Heart+In+vivo.">p53 Modulates the Fate of Cardiac Progenitor Cells Ex vivo and in the Diabetic Heart In vivo.</a> EBioMedicine. 16, 224-237 (2017).</li><li>Hatzistergos, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+stimulate+cardiac+stem+cell+proliferation+and+differentiation.">Bone marrow mesenchymal stem cells stimulate cardiac stem cell proliferation and differentiation.</a> Circulation Research. 107 (7), 913-922 (2010).</li><li>Okita, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells:+opportunities+and+challenges.">Induced pluripotent stem cells: opportunities and challenges.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B Biological Sciences. 366 (1575), 2198-2207 (2011).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cardiomyocytes+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Functional cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Circulation Research. 104 (4), e30-e41 (2009).</li><li>Ye, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+repair+in+a+porcine+model+of+acute+myocardial+infarction+with+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiovascular+cells.">Cardiac repair in a porcine model of acute myocardial infarction with human induced pluripotent stem cell-derived cardiovascular cells.</a> Cell Stem Cell. 15 (6), 750-761 (2014).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+high+engraftment+of+patient-specific+cardiomyocyte+sheet+using+induced+pluripotent+stem+cells+generated+from+adult+cardiac+fibroblast.">Derivation and high engraftment of patient-specific cardiomyocyte sheet using induced pluripotent stem cells generated from adult cardiac fibroblast.</a> Circulation: Heart Failure. 8 (1), 156-166 (2015).</li><li>Hirakawa, K., Midorikawa, K., Oikawa, S., Kawanishi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinogenic+semicarbazide+induces+sequence-specific+DNA+damage+through+the+generation+of+reactive+oxygen+species+and+the+derived+organic+radicals.">Carcinogenic semicarbazide induces sequence-specific DNA damage through the generation of reactive oxygen species and the derived organic radicals.</a> Mutation Research. 536 (1-2), 91-101 (2003).</li><li>Martinez, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+and+alkylating+damage+in+DNA.">Oxidative and alkylating damage in DNA.</a> Mutation Research. 544 (2-3), 115-127 (2003).</li><li>Valko, M., Rhodes, C. J., Moncol, J., Izakovic, M., Mazur, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals,+metals+and+antioxidants+in+oxidative+stress-induced+cancer.">Free radicals, metals and antioxidants in oxidative stress-induced cancer.</a> Chemico-Biological Interactions. 160 (1), 1-40 (2006).</li><li>Wiseman, H., Halliwell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+DNA+by+reactive+oxygen+and+nitrogen+species:+role+in+inflammatory+disease+and+progression+to+cancer.">Damage to DNA by reactive oxygen and nitrogen species: role in inflammatory disease and progression to cancer.</a> Biochemical Journal. 313 (Pt 1), 17-29 (1996).</li><li>Ostling, O., Johanson, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microelectrophoretic+study+of+radiation-induced+DNA+damages+in+individual+mammalian+cells.">Microelectrophoretic study of radiation-induced DNA damages in individual mammalian cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 123 (1), 291-298 (1984).</li><li>Singh, N. P., McCoy, M. T., Tice, R. R., Schneider, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+quantitation+of+low+levels+of+DNA+damage+in+individual+cells.">A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells.</a> Experimental Cell Research. 175 (1), 184-191 (1988).</li><li>Goichberg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+defects+in+EphA2+signaling+impair+the+migration+of+human+cardiac+progenitor+cells.">Age-associated defects in EphA2 signaling impair the migration of human cardiac progenitor cells.</a> Circulation. 128 (20), 2211-2223 (2013).</li><li>Kannappan, R., Mattapally, S., Wagle, P. A., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transactivation+domain+of+p53+regulates+DNA+repair+and+integrity+in+human+iPS+cells.">Transactivation domain of p53 regulates DNA repair and integrity in human iPS cells.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. , (2018).</li><li>Al-Baker, E. A., Oshin, M., Hutchison, C. J., Kill, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+UV-induced+damage+and+repair+in+young+and+senescent+human+dermal+fibroblasts+using+the+comet+assay.">Analysis of UV-induced damage and repair in young and senescent human dermal fibroblasts using the comet assay.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 126 (6-7), 664-672 (2005).</li><li>Azqueta, A., Gutzkow, K. B., Brunborg, G., Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+more+reliable+comet+assay:+optimising+agarose+concentration,+unwinding+time+and+electrophoresis+conditions.">Towards a more reliable comet assay: optimising agarose concentration, unwinding time and electrophoresis conditions.</a> Mutation Research. 724 (1-2), 41-45 (2011).</li><li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellProfiler:+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes.">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biology. 7 (10), R100 (2006).</li><li>Paradis, A. N., Gay, M. S., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binucleation+of+cardiomyocytes:+the+transition+from+a+proliferative+to+a+terminally+differentiated+state.">Binucleation of cardiomyocytes: the transition from a proliferative to a terminally differentiated state.</a> Drug Discovery Today. 19 (5), 602-609 (2014).</li></ol>

डीएनए अखंडता कोशिका अखंडता चित्रित । क्षतिग्रस्त डीएनए के साथ कोशिकाओं को अक्सर तनाव में है और अंततः अपनी अखंडता खो देते हैं । स्टेम और स्टेम सेल व्युत्पंन कोशिकाओं है कि प्रत्यारोपण के प्रयोजन के लि?...

प्रयोगात्मक और नैदानिक सबूत दर्शाता है कि कोशिका प्रत्यारोपण मामूली असफल दिल1,2,3,4,5 के वाम निलय सिकुड़ा प्रदर्शन में सुधार कर सकते हैं ,6,7,8,9. हाल के अग्रिमों हृदय पुनर्जनन के लिए आगे अपील के अवसर खुल गए हैं; ये दैहिक कोशिकाओं में reprogramminging कारकों की मजबूर अभिव्यक्ति के लिए pluripotency प्रेरित और इन प्रेरित pluripotent स्टेम कोशिकाओं अलग कार्डियक वंश में (iPSC) अंतर शामिल हैं, महत्वपूर्ण बात cardiomyocyte (मुख्यमंत्री)10, 11 , 12 , 13. हर कोशिका में वंशानुगत सामग्री, जिसमें कृत्रिम रूप से सृजित iPSCs और iPSC-व्युत्पन्न मुख्यमंत्री (आईपीएस-cm) शामिल हैं, डीएनए है । डीएनए में संग्रहित आनुवंशिक निर्देश वृद्धि, विकास, और कोशिकाओं, ऊतकों, अंगों, और जीवों के समारोह हुक्म । डीएनए निष्क्रिय नहीं है; सेल चयापचयों, जैसे प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन, carbonyl, और नाइट्रोजन प्रजातियों, और alkylating एजेंटों डीएनए नुकसान इन विट्रो में और vivo14,15,16,17में पैदा कर सकता है । महत्वपूर्ण बात, डीएनए क्षति हर कोशिका में सहज रूप से होता है, एक महत्वपूर्ण आवृत्ति के साथ. इन नुकसानों को सही नहीं कर रहे हैं, यह डीएनए उत्परिवर्तन, सेलुलर वार्धक्य, डीएनए और सेल अखंडता की हानि, और संभवतः, जीवन धमकी कैंसर सहित रोगों, के लिए नेतृत्व करेंगे । इसलिए, डीएनए अखंडता को बनाए रखने के किसी भी कोशिका के लिए आवश्यक है, विशेष रूप से iPSCs, कि क्लिनिक में भारी क्षमता है ।
मात्रा और अलग जीनोमिक डीएनए की अखंडता का आकलन करने के लिए, महंगे उपकरण बाजार पर उपलब्ध है । हालांकि, कोशिकाओं को अलग करने के बिना कोशिकाओं में डीएनए अखंडता का आकलन करने के लिए कोई सरल और लागत प्रभावी तरीके हैं । इसके अलावा, डीएनए अलगाव के दौरान उपयोगकर्ता प्रेरित डीएनए क्षरण इन तरीकों का उपयोग करने में प्रमुख खामियों में से एक है । एकल सेल जेल ट्रो (धूमकेतु परख के रूप में जाना जाता है)18,19 और γH2A. X immunolabeling8 तकनीक डीएनए क्षति का आकलन करने के लिए अनुसंधान प्रयोगशालाओं में मौलिक दृष्टिकोण हैं । इन दो तरीकों महंगा उपकरण या पृथक जीनोमिक डीएनए डीएनए अखंडता8,20,21का विश्लेषण करने की आवश्यकता नहीं है । के बाद से, इन तकनीकों पूरे कोशिकाओं के साथ प्रदर्शन किया गया है; उपयोगकर्ता प्रेरित डीएनए/आरएनए/नमूना तैयारी के दौरान प्रोटीन क्षरण इन प्रोटोकॉल को प्रभावित नहीं करेगा । यहां, डीएनए क्षति और स्टेम में डीएनए क्षति की प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए सेल व्युत्पंन कोशिकाओं, हम कदम दर कदम प्रोटोकॉल प्रदान करने के लिए दोनों धूमकेतु परख और γH2A. X immunolabeling प्रदर्शन करते हैं । इसके अलावा, इन दो तरीकों के संयोजन, हम एक भोली आकलन है कि प्रत्यारोपण के लिए सेल की उपयुक्तता का मूल्यांकन किया जा सकता है का प्रस्ताव ।
धूमकेतु परख, या एकल सेल जेल ट्रो, कोशिकाओं में डीएनए टूटता उपाय । कम पिघलने agarose में एंबेडेड कोशिकाओं supercoiled डीएनए युक्त nucleoids फार्म करने के लिए लीजड ड हैं । ट्रो पर, खंडित डीएनए के छोटे टुकड़े और टूट डीएनए किस्में agarose pores के माध्यम से विस्थापित, जबकि बरकरार डीएनए, उनके विशाल आकार और मैट्रिक्स प्रोटीन के साथ उनके विकार के कारण, एक सीमित प्रवास होगा । एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत सना हुआ डीएनए का पैटर्न एक धूमकेतु की नकल । धूमकेतु सिर बरकरार डीएनए है और पूंछ टुकड़े और टूटे डीएनए किस्में से बना है । डीएनए क्षति के अंश क्षतिग्रस्त डीएनए (धूमकेतु पूंछ) के सापेक्ष बरकरार डीएनए (धूमकेतु सिर) की तीव्रता के प्रतिदीप्ति तीव्रता से मापा जा सकता है. पैरामीटर पूंछ पल चित्रा 1में दिखाया गया के रूप में गणना की जा सकती है ।
डीएनए क्षति हिस्टोन H2A के फास्फारिलीकरण लाती है । एटीएम, एटीआर, और डीएनए-पीके kinases द्वारा Ser139 पर एक्स (γH2A. x) । फास्फारिलीकरण और H2A की भर्ती । डीएनए किनारा टूटता में एक्स डीएनए क्षति प्रतिक्रिया (DDR) कहा जाता है और डीएनए क्षतिग्रस्त होने के बाद तेजी से होता है । इस प्रक्रिया के बाद, चौकी-मध्यस्थता सेल चक्र गिरफ्तारी और डीएनए मरंमत प्रक्रियाओं शुरू कर रहे हैं । डीएनए की मरंमत के सफल समापन के बाद, γH2A. X dephosphorylated और phosphatases द्वारा निष्क्रिय है । लंबे समय तक और कई डीएनए किनारा टूट जाता है डीएनए में γH2A. X घावों के संचय के लिए सीसा । इससे डीएनए की क्षति और डीएनए अखंडता की क्षति की मरम्मत करने में कोशिका की अक्षमता का संकेत मिलता है । डीएनए में इन γH2A. X घावों की पहचान की जा सकती है और DDR घावों की संख्या खंड 2 में प्रोटोकॉल का उपयोग करके गिना जा सकता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-well chamber slide</td>
			<td>Millicell</td>
			<td>PEZGS0816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7920</td>
			<td>Cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 AffiniPure 
			Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immuno 
			Research Laboratories</td>
			<td>711-545-152 
			(RRID: AB_2313584)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immuno 
			Research Laboratories</td>
			<td>711-165-152 
			(RRID:AB_2307443)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco B-27 Supplement, Serum Free,</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel growth factor reduced</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>85850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhalloidinA488</td>
			<td>Life Technology</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>2577 (RRID: AB_2118010)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR&#160;Green I nucleic acid gel stain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>BP151-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Low melting Point Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td>Antifade</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing stem cell dna integrity for cardiac cell therapy

स्टेम और स्टेम सेल-व्युत्पन्न कोशिकाओं को विभिन्न अपक्षयी रोगों के लिए एक पुनः अपक्षय चिकित्सा के रूप में अपार क्षमता है । डीएनए, स्टेम सेल सहित सभी कोशिकाओं में आनुवंशिक डेटा की गोदाम है, और इसकी अखंडता अपनी अपक्षयी क्षमता के लिए मौलिक है । स्टेम सेल प्रयोगशालाओं में तेजी से प्रसार के लिए प्रत्यारोपण के लिए आवश्यक संख्या को प्राप्त करने के लिए गुजरना । त्वरित कोशिका वृद्धि संचित चयापचयों, जैसे प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन, carbonyl, और alkylating एजेंटों द्वारा डीएनए अखंडता की हानि की ओर जाता है । इन कोशिकाओं के प्रत्यारोपण गरीब engraftment और बिगड़ती अंग के उत्थान में परिणाम होगा । इसके अलावा, डीएनए प्रत्यारोपण क्षतिग्रस्त कोशिकाओं उत्परिवर्तनों की ओर जाता है, डीएनए अस्थिरता, सेलुलर वार्धक्य, और संभवतः, जीवन की धमकी रोगों जैसे कैंसर । इसलिए, प्रत्यारोपण के लिए सेल की उपयुक्तता का मूल्यांकन करने के लिए एक गुणवत्ता नियंत्रण विधि के लिए एक तत्काल की जरूरत है । यहां, हम कोशिका प्रत्यारोपण से पहले स्टेम सेल के डीएनए अखंडता के आकलन के लिए कदम दर कदम प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं ।

मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल, संस्कृति और डीएनए क्षति और पूंछ पल, जो डीएनए अखंडता का एक उपाय के रूप में इस्तेमाल किया गया धूमकेतु परख द्वारा विश्लेषण थे । आईपीएस कोशिकाओं कम पिघलने बिंदु agarose ?...

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Assessing Stem Cell DNA Integrity for Cardiac Cell Therapy

कार्डियक सेल थेरेपी के लिए स्टेम सेल डीएनए अखंडता का आकलन

यहां, हम स्टेम सेल में डीएनए अखंडता के आकलन के एक विश्लेषण के लिए एक प्रयोगात्मक सेटअप के एक विस्तृत विवरण प्रदान करने से पहले कोशिका प्रत्यारोपण ।

Stem and stem-cell-derived cells have immense potential as a regenerative therapy for various degenerative diseases. DNA is the storehouse of genetic data ...

Research

JoVE Journal

Genetics

Engineering Artificial Factors to Specifically Manipulate Alternative Splicing in Human Cells

इंजिनियरिंग कृत्रिम कारक विशेष रूप से मानव कोशिकाओं में वैकल्पिक स्पष्टीकरण में हेरफेर करने के लिए

The processing of most eukaryotic RNAs is mediated by RNA Binding Proteins (RBPs) with modular configurations, including an RNA recognition module, which ...

Mapping RNA-RNA Interactions Globally Using Biotinylated Psoralen

वैश्विक बायोटिनिलेटेड Psoralen का उपयोग आरएनए-आरएनए अंतरण मैपिंग

Knowing how RNAs interact with themselves and with others is key to understanding RNA based gene regulation in the cell. While examples of RNA-RNA ...

Using a Fluorescent PCR-capillary Gel Electrophoresis Technique to Genotype CRISPR/Cas9-mediated Knockout Mutants in a High-throughput Format

एक उच्च throughput प्रारूप में / Cas9 की मध्यस्थता नॉकआउट म्यूटेंट CRISPR जीनोटाइप के लिए एक फ्लोरोसेंट पीसीआर केशिका जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीक का उपयोग करते हुए

The development of programmable genome-editing tools has facilitated the use of reverse genetics to understand the roles specific genomic sequences play ...

A Universal Protocol for Large-scale gRNA Library Production from any DNA Source

किसी भी डीएनए स्रोत से बड़े पैमाने पर gRNA पुस्तकालय उत्पादन के लिए एक सार्वभौमिक प्रोटोकॉल

The popularity of the CRISPR/Cas9 system for both genome and epigenome engineering stems from its simplicity and adaptability. An effector (the Cas9 ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

मानव टेलोमिरेज रिवर्स Transcriptase प्रोटीन की आरएनए-निर्भर आरएनए पोलीमरेज़ गतिविधि का अर्द्ध मात्रात्मक पता लगाना

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

डीएनए प्रतिकृति एक Vivo में मॉडल प्रणाली के रूप में Zebrafish का उपयोग समय की रूपरेखा

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

Murine और मानव टेम जनक कोशिकाओं के अत्यधिक कुशल जीन व्यवधान CRISPR द्वारा Cas9/

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

A Combinatorial Single-cell Approach to Characterize the Molecular and Immunophenotypic Heterogeneity of Human Stem and Progenitor Populations

मानव स्टेम और जनक आबादी के आणविक और Immunophenotypic विविधता की विशेषताएं करने के लिए एक मिश्रित एकल सेल दृष्टिकोण

Immunophenotypic characterization and molecular analysis have long been used to delineate heterogeneity and define distinct cell populations. FACS is ...

Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells

अलगाव, लक्षण वर्णन और मानव दंत कूप स्टेम सेल के MicroRNA आधारित आनुवंशिक संशोधन

To date, several stem cell types at different developmental stages are in the focus for the treatment of degenerative diseases. Yet, certain aspects, such ...