Name: efficient differentiation of human pluripotent stem cells into liver cells
Uploaded: 2019-06-11T13:30:00
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Nous remercions Bing Lim pour ses discussions et le Stanford Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine pour le soutien de l'infrastructure. Ce travail a été soutenu par le California Institute for Regenerative Medicine (DISC2-10679) et le Stanford-UC Berkeley Siebel Stem Cell Institute (à L.T.A. et K.M.L.) et le Stanford Beckman Center for Molecular and Genetic Medicine ainsi que les Anonymous, Familles Baxter et DiGenova (à K.M.L.).

1. Préparation des médias de différenciation
REMARQUE: Consultez le Tableau des matériaux pour obtenir de l'information sur les matériaux et les réactifs utilisés.
<ol><li>
Préparation des supports de base définis chimiquement (MDP) REMARQUE : Les CDM2, CDM3, CDM4 et CDM5 sont des médias définis chimiquement qui sont utilisés comme supports de base pour différencier les hPSC des cellules hépatiques à divers stades. La compo...

<ol>
	<li>Bernal, W., Wendon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Liver+Failure.">Acute Liver Failure.</a> New England Journal of Medicine. 369, 2525-2534 (2013).</li><li>Ang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Roadmap+for+Human+Liver+Differentiation+from+Pluripotent+Stem+Cells.">A Roadmap for Human Liver Differentiation from Pluripotent Stem Cells.</a> Cell Reports. 22, 2190-2205 (2018).</li><li>Fisher, R. A., Strom, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Hepatocyte+Transplantation:+Worldwide+Results.">Human Hepatocyte Transplantation: Worldwide Results.</a> Transplantation. 82, 441-449 (2006).</li><li>Dhawan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+human+hepatocyte+transplantation:+Current+status+and+challenges.">Clinical human hepatocyte transplantation: Current status and challenges.</a> Liver transplantation. 21, S39-S44 (2015).</li><li>Salama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+Hematopoietic+Stem+Cell+Transplantation+in+48+Patients+with+End-Stage+Chronic+Liver+Diseases.">Autologous Hematopoietic Stem Cell Transplantation in 48 Patients with End-Stage Chronic Liver Diseases.</a> Cell Transplantation. 19, 1475-1486 (2017).</li><li>Tan, A. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+Pairwise+Choices+Leading+from+Pluripotency+to+Human+Bone,+Heart,+and+Other+Mesoderm+Cell+Types.">Mapping the Pairwise Choices Leading from Pluripotency to Human Bone, Heart, and Other Mesoderm Cell Types.</a> Cell. , 451-467 (2016).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+the+efficient+metabolic+maturation+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+hepatocytes+by+correcting+specification+defects.">Promotion of the efficient metabolic maturation of human pluripotent stem cell-derived hepatocytes by correcting specification defects.</a> Cell Research. 23, 157-161 (2012).</li><li>Si Tayeb, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+generation+of+human+hepatocyte-like+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Highly efficient generation of human hepatocyte-like cells from induced pluripotent stem cells.</a> Hepatology. 51, 297-305 (2010).</li><li>Carpentier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+in+miniaturized+format+suitable+for+high-throughput+screen.">Hepatic differentiation of human pluripotent stem cells in miniaturized format suitable for high-throughput screen.</a> Stem Cell Research. 16, 640-650 (2016).</li><li>Avior, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial-derived+lithocholic+acid+and+vitamin+K2+drive+the+metabolic+maturation+of+pluripotent+stem+cells-derived+and+fetal+hepatocytes.">Microbial-derived lithocholic acid and vitamin K2 drive the metabolic maturation of pluripotent stem cells-derived and fetal hepatocytes.</a> Hepatology. 62, 265-278 (2015).</li><li>Ogawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+and+cAMP+signaling+promote+the+maturation+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+hepatocytes.">Three-dimensional culture and cAMP signaling promote the maturation of human pluripotent stem cell-derived hepatocytes.</a> Development. 140, 3285-3296 (2013).</li><li>Rostovskaya, M., Bredenkamp, N., Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+consistent+generation+of+pancreatic+lineage+progenitors+from+human+pluripotent+stem+cells.">Towards consistent generation of pancreatic lineage progenitors from human pluripotent stem cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 370, 20140365 (2015).</li><li>Haridass, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repopulation+Efficiencies+of+Adult+Hepatocytes,+Fetal+Liver+Progenitor+Cells,+and+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Hepatic+Cells+in+Albumin-Promoter-Enhancer+Urokinase-Type+Plasminogen+Activator+Mice.">Repopulation Efficiencies of Adult Hepatocytes, Fetal Liver Progenitor Cells, and Embryonic Stem Cell-Derived Hepatic Cells in Albumin-Promoter-Enhancer Urokinase-Type Plasminogen Activator Mice.</a> The American Journal of Pathology. 175, 1483-1492 (2009).</li></ol>

Cette méthode permet la génération de populations enrichies d'ancêtres de bourgeons hépatiques, puis de cellules semblables à des hépatocytes, à partir de hPSC. La capacité de générer des populations enrichies de cellules hépatiques humaines est importante pour l'utilisation pratique de ces cellules. Les méthodes précédentes pour produire des hépatocytes à partir des hPSCont ont donné des populations impures de cellules contenant des cellules de foie et non-foie qui, sur la transplantation dans des rong...

Le but de ce protocole est de différencier efficacement les cellules souches pluripotentes humaines (HPSC) en populations enrichies d'ancêtres de bourgeons hépatiques et de cellules hépatocytes2. L'accès à un approvisionnement prêt des progéniteurs humains de foie et des cellules hépatocyte-comme accélérera des efforts pour étudier la fonction et la maladie hépatiques et pourrait permettre de nouvelles thérapies cellulaires de transplantation pour l'échecde foie 3,4, 5. Cela s'est avéré difficile dans le passé depuis hPSCs (qui comprennent les cellules souches embryonnaires et induites pluripotentes) peut se différencier en tous les types cellulaires du corps humain; par conséquent, il a été difficile de les différencier exclusivement en une population pure d'un seul type cellulaire, comme les cellules hépatiques6.
Pour différencier précisément les hPSC en cellules hépatiques, il est d'abord essentiel de comprendre non seulement comment les cellules hépatiques sont spécifiées, mais aussi comment les types de cellules non hépatiques se développent. La connaissance de la façon dont les cellules non hépatiques se développent est importante pour supprimer logiquement la formation de lignées non hépatiques pendant la différenciation, guidant ainsi exclusivement les hPSC vers un destin de foie2. Deuxièmement, il est essentiel de délimiter les multiples étapes de développement par lesquelles les HPSC se différencient vers un destin de foie. On sait que les hPSC se différencient séquentiellement en plusieurs types de cellules connus sous le nom de strie primitive (APS), endoderm définitif (DE), foregut postérieur (PFG) et progéniteurs de bourgeons hépatiques (LB) avant de former des cellules hépatocytes (HEP). Des travaux antérieurs ont révélé les signaux spécifiant le destin du foie et les signaux qui ont supprimé la formation de différents types de cellules non hépatiques (y compris les progéniteurs de l'estomac, du pancréas et de l'intestin) à chaque choix de lignée développementale2, 7 Annonces , 8.
Collectivement, ces idées ont donné lieu à une méthode monocouche sans sérum pour différencier les hPSC s'orientent vers les stries primitives, l'endoderm définitif, le foregut postérieur, les progéniteurs de bourgeons hépatiques et enfin, les cellules hépatocytes2. Dans l'ensemble, la méthode consiste à ensemencer des hPSC dans une monocouche à une densité appropriée, à préparer six cocktails de médias de différenciation (contenant des facteurs de croissance et de petites molécules qui régulent diverses voies de signalisation du développement), et séquentiellement l'ajout de ces médias pour induire la différenciation au cours de 18 jours. Pendant le processus, aucun passage des cellules n'est nécessaire. Il convient de noter, parce que cette méthode comprend explicitement des signaux qui suppriment la formation de non-foie cell-types, cette approche de différenciation1 génère plus efficacement progéniteurs du foie et les cellules hépatocytes-like par rapport à existant méthodes de différenciation2,9,10,11,12. En outre, le protocole décrit dans ce texte permet la génération plus rapide d'hépatocytes qui expriment finalement des niveaux plus élevés de facteurs et d'enzymes de transcription hépatique que ceux produits par d'autres protocoles9,10 , 11 Ans, états-unis ( , 12.
Le protocole décrit ici présente certains avantages par rapport aux protocoles actuels de différenciation. Tout d'abord, il implique la différenciation monocouche des hPSC, ce qui est techniquement plus simple par rapport aux méthodes de différenciation tridimensionnelle, telles que celles qui reposent sur des corps embryonnaires13. Deuxièmement, cette méthode exploite une avancée récente par laquelle les cellules endoderm définitives (un précurseur précoce des cellules hépatiques) peuvent être générées efficacement et rapidement dans les 2 jours suivant la différenciation hPSC2,7, permettant ainsi la suite production d'hépatocytes avec une pureté accrue. Troisièmement, dans les comparaisons côte à côte, les cellules hépatocytes produites par cette méthode2 produisent plus d'ALBUMIN et expriment des niveaux plus élevés de facteurs et d'enzymes de transcription hépatique comparés aux hépatocytes produits dans d'autres méthodes10, 11,12.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >&#160;Geltrex</td>
			<td >Thermofisher Scientific</td>
			<td >A1569601</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1:1 DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.2&#160;&#956;m pore membrane filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>GTTP02500</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >mTeSR1</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>5850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Thiazovivin</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;Accutase</td>
			<td>Gibco or Millipore&#160;</td>
			<td>Gibco A11105, Millipore&#160; SCR005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >IMDM, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31980030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31765035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KOSR, Knockout serum replacement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Poly(vinyl alcohol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td>P8136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Transferrin&#160;</td>
			<td >Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td >10652202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chemically Defined Lipid Concentrate</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td >11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human Activin</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CHIR99201</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PI103</td>
			<td >Tocris</td>
			<td >2930/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human FGF2</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>233-FB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DM3189</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>6053/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >A83-01</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>2939/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Human BMP4</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>314-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >C59</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>5148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TTNPB</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>0761/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forskolin</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>1099/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oncostatin M</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>295-OM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dexamethasone</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ro4929097</td>
			<td >Selleck Chem</td>
			<td>S1575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >AA2P</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>16457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human recombinant Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td>11061-68-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient differentiation of human pluripotent stem cells into liver cells

Le foie détoxifie les substances nocives, sécrète des protéines vitales et exécute des activités métaboliques clés, soutenant ainsi la vie. Par conséquent, l'insuffisance hépatique, qui peut être causée par une consommation chronique d'alcool, une hépatite, un empoisonnement aigu ou d'autres insultes, est une affection grave qui peut entraîner des saignements, une jaunisse, un coma et, éventuellement, la mort. Cependant, les approches pour traiter l'échec de foie, aussi bien que des études de la fonction et de la maladie de foie, ont été bloquées en partie par l'absence d'un approvisionnement abondant des cellules humaines de foie. À cette fin, ce protocole détaille la différenciation efficace des cellules souches pluripotentes humaines (HPSC) en cellules hépatocytes, guidée par une feuille de route développementale qui décrit comment le destin du foie est spécifié à travers six étapes consécutives de différenciation. En manipulant les voies de signalisation développementale pour favoriser la différenciation du foie et pour supprimer explicitement la formation de destins cellulaires indésirables, cette méthode génère efficacement des populations d'ancêtres de bourgeons hépatiques humains et de cellules hépatocytes par les jours 6 et 18 de la différenciation de la CFP, respectivement. Ceci est réalisé par le contrôle temporel-précis des voies de signalisation développementale, exercé par de petites molécules et des facteurs de croissance dans un milieu de culture sans sérum. La différenciation dans ce système se produit dans les monocouches et donne des cellules hépatocyte-comme qui expriment les enzymes caractéristiques d'hépatocyte et ont la capacité d'engraft un modèle de souris de l'échec chronique de foie. La capacité de générer efficacement un grand nombre de cellules hépatiques humaines in vitro a des ramifications pour le traitement de l'insuffisance hépatique, pour le dépistage des médicaments, et pour les études mécanistes de la maladie du foie.

Après 24 h de différenciation APS, les colonies adopteront généralement une morphologie différente de celle des colonies indifférenciées concomitantes avec une perte de la frontière lumineuse qui circonscrit généralement les colonies de hPSC. Morphologiquement, les cellules primitives de strie ont généralement des frontières déchiquetées et sont plus écartées et moins compactes que hPSCs-ceci est évocateur d'une transition épithéliale-à-mesenchymal pendant que les cel...

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Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Ce protocole détaille une méthode monocouche, sans sérum, pour générer efficacement des cellules hépatocytes à partir de cellules souches pluripotentes humaines (HPSC) en 18 jours. Cela implique six étapes que les hPSC se différencient séquentiellement en types de cellules intermédiaires tels que la strie primitive, endoderm définitif, prégut postérieur et progéniteurs de bourgeons hépatiques avant de former des cellules hépatocytes.

Différenciation efficace des cellules souches pluripotentes humaines en cellules hépatiques

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

Cette méthode permet la génération d’un grand nombre d’progéniteurs de bourgeons hépatiques humains et de cellules hépatocytes d’une grande pureté. La capacité de générer ces cellules hépatiques pourrait être importante pour la médecine régénérative et d’autres domaines. En contrôlant les voies de signalisation développementales pour favoriser la différenciation hépatique et supprimer la formation de types de cellules indésirables, cette méthode permet une génération efficace d’progéniteurs de bourgeons hépatiques humains et de cellules de type hépatocyte par six et 18 jours de différenciation respectivement.Le principal avantage de cette technique est la grande pureté des cellules hépatiques humaines générées. Pour être cette procédure, ajouter 50 millilitres d’IMDM à un flacon conique contenant une barre d’agitation. Chauffer le milieu à 50 degrés Celsius et ajouter 0,5 gramme de PVA tout en remuant continuellement pour préparer un stock de PVA à une concentration de 10 milligrammes par millilitre.Après cela, retirez la solution PVA du coussin chauffant et laissez-la refroidir à température ambiante. Une fois la solution refroidie, filtrez-la à travers un filtre stérile de 0,2 micromètre. Préparer le CDM2 et le CDM3 en combinant l’AAC filtrée avec d’autres réaccés tel qu’il est décrit dans le tableau un du protocole textuel.Utilisez un filtre stérile de 0,2 micromètre pour filtrer tous les supports. Ensuite, préparez les autres médias de base, CDM4 et CDM5, tels qu’ils sont décrits dans le tableau un du protocole du texte. Pour préparer le milieu de différenciation, décongelez d’abord les petites molécules congelées et/ou les facteurs de croissance à température ambiante.Aliquot la quantité requise de milieu de base et ajouter les petites molécules spécifiées et les facteurs de croissance au milieu de base aux concentrations appropriées. La veille de l’utilisation, décongeler la matrice à quatre degrés Celsius. Le lendemain, diluer la matrice à un rapport de un à 100 en ajoutant 500 microlitres de matrice en 50 millilitres de DMEM froid.Pipette la matrice diluée dans le nombre requis de puits en utilisant juste assez de volume de solution pour couvrir la surface du puits. Transférer la plaque enduite de matrice dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant au moins 60 minutes. Immédiatement avant l’ensemencement, aspirez la solution matricielle restante des puits enduits.Ensuite, aspirez le milieu à partir d’une plaque de culture hPSC largement confluente et ajoutez un agent de dissociation acheté commercialement, en vous assurant d’utiliser juste assez pour couvrir la surface sur laquelle les cellules se développent. Incuber les hPSCs dans l’agent de dissociation à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes ou jusqu’à ce que certaines colonies commencent à se détacher. Ensuite, ajoutez DMEM et F-12 pour diluer l’agent de dissociation.Utilisez une pipette sérologique de cinq millilitres pour pipette doucement de haut en bas plusieurs fois pour laver toutes les cellules de la surface du puits. Recueillir les cellules individuelles résuspendues dans un tube conique de 50 millilitres et diluer avec DMEM et F-12 au besoin. Centrifugeuse ce tube de hPSCs collectés à 350 fois g et à quatre degrés Celsius pendant trois minutes pour pelleter les cellules.En attendant la centrifugation, aspirez la matrice de la plaque dans laquelle les hPSCs seront ensemencés. Ajoutez une quantité suffisante de supports mTeSR aux puits destinataires pour les couvrir. Lorsque la centrifugation est terminée, aspirez soigneusement le supernatant, en laissant les hPSCs granulés au fond du tube conique.Resuspendez la pastille cellulaire dans mTeSR complétée par un micromolaire de Thiazovivin obtenu commercialement. À l’aide d’une pipette P1000, triturer délicatement deux à trois fois pour résusquer uniformément la pastille cellulaire en une seule suspension cellulaire. Pipette immédiatement 10 microlitres de la suspension cellulaire dans un hémocytomètre et compter le nombre de cellules.Ajustez le volume des hPSCs résuspendus avec le mTeSR complété par Thiazovivin pour atteindre la concentration cellulaire désirée pour le placage. Ensuite, secouez la plaque en croix plusieurs fois pour vous assurer que les cellules sont réparties uniformément. Une fois que les hPSC ont été plaqués pendant au moins 24 heures, utilisez un microscope à contraste de phase pour vérifier la morphologie des cellules en mettant l’accent sur le diamètre des colonies de hPSC plaquées.Ensuite, préparez le premier jour de différenciation APS tel que décrit dans le tableau deux du protocole texte. Un jour après l’ensemencement, aspirez le mTeSR complété par Thiazovivin des hPSCs plaqués et lavez-les brièvement avec des supports IMDM. Après cela, ajouter le premier jour moyen aux hPSCs.Enregistrez l’heure et placez les cellules dans l’incubateur à 37 degrés Celsius. Continuez avec les étapes de différenciation suivantes en préparant le support de différenciation nécessaire et en l’ajoutant aux cellules les jours respectifs de différenciation à peu près à la même heure de la journée. Dans cette étude, des populations enrichies d’progéniteurs de bourgeons hépatiques et, par la suite, de cellules hépatocytes sont générées à partir de hPSCs.Au deuxième jour de différenciation, les cellules primitives de strie se sont différenciées en cellules endoderm définitives de jour deux. La grande majorité de ces cellules expriment SOX17 et FOXA2. Au troisième jour de différenciation, les cellules endoderm se sont différenciées en progéniteurs de foregut qui semblent polygonaux dans la forme.Plus tard, au sixième jour, les progéniteurs de foregut se sont différenciés en progéniteurs de bourgeons hépatiques. Ces progéniteurs de bourgeon de foie expriment AFP, TPX3, et HNF4alpha. Dans trois lignées hPSC, cette méthode génère des progéniteurs hépatiques positifs à l’AFP six jours à une efficacité d’environ 89%Enfin, après 18 jours de différenciation hépatique des hPSCs, albumin-positif hépatocyte-comme des cellules apparaissent.Morphologiquement, ces cellules apparaissent épithéliales, formant des bordures lumineuses rappelant le canaliculi biliaire. À ce stade, le cytoplasme des hépatocytes dérivés du jour 18 hPSC semble plus foncé que le noyau. Lors de l’ensemencement des cellules souches pluripotentes humaines pour la différenciation, il est impératif de les ensemencer à la bonne densité et aussi de les répartir à travers le puits en secouant la plaque.La capacité de produire des hépatocytes humains in vitro est une technologie habilitante qui permettra aux scientifiques d’étudier les mécanismes sous-jacents au développement du foie. Cette méthode produit un grand nombre d’hépatocytes humains in vitro qui pourraient être utilisés pour étudier la fonction hépatique et la maladie et pour éventuellement permettre de nouvelles thérapies pour l’insuffisance hépatique.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Réalisé la différenciation des progéniteurs hématopoïétiques primitives et définitif des cellules souches pluripotentes humaines

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Recherche

Biologie du développement

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

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Différenciation efficace de pluripotentes cellules souches à NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; pancréatiques progéniteurs

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

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In Vitro Différenciation des cellules souches pluripotentes humaines en cellules trophoblastiques

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Protocol for the Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into Mixed Cultures of Neurons and Glia for Neurotoxicity Testing

Protocole pour la différenciation de cellules souches pluripotentes induites par l&#39;homme dans des cultures mixtes de neurones et Glia pour des tests de neurotoxicité

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In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Différenciation des cellules souches mésenchymateuses humaines en cellules fonctionnelles Cardiomyocyte

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Rapide, réalisée la différenciation des cellules épithéliales pigmentaire rétinien de cellules souches pluripotentes humaines embryonnaires ou induit

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Efficace et évolutive différenciation dirigée de cliniquement compatibles cornéenne limbique épithéliales cellules souches à partir des cellules souches pluripotentes humaines

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In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Transient Treatment of Human Pluripotent Stem Cells with DMSO to Promote Differentiation

Traitement transitoire des cellules souches pluripotentes humaines avec DMSO pour promouvoir la différenciation

Despite the growing use of pluripotent stem cells (PSCs), challenges in efficiently differentiating embryonic and induced pluripotent stem cells (ESCs and ...

Efficient Neural Differentiation using Single-Cell Culture of Human Embryonic Stem Cells

Différenciation neuronale efficace à l'aide de la culture monocellulaire des cellules souches embryonnaires humaines

In vitro differentiation of human embryonic stem cells (hESCs) has transformed the ability to study human development on both biological and molecular ...