Name: efficient differentiation of human pluripotent stem cells into liver cells
Uploaded: 2019-06-11T13:30:00
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Wir danken Bing Lim für die Diskussionen und dem Stanford Institute for Stem Cell Biology & Regenerative Medicine für die Infrastrukturunterstützung. Diese Arbeit wurde vom California Institute for Regenerative Medicine (DISC2-10679) und dem Stanford-UC Berkeley Siebel Stem Cell Institute (zu L.T.A. und K.M.L.) und dem Stanford Beckman Center for Molecular and Genetic Medicine sowie dem Anonymous, Familien Baxter und DiGenova (zu K.M.L.).

1. Vorbereitung von Differenzierungsmedien
HINWEIS: Herstellerinformationen zu den verwendeten Materialien und Reagenzien finden Sie in der Tabelle der Werkstoffe.
<ol><li>
Herstellung chemisch definierter Basismedien (CDM) HINWEIS: CDM2, CDM3, CDM4 und CDM5 sind chemisch definierte Medien, die als Basismedien zur Unterscheidung von hPSCs zu Leberzellen in verschiedenen Stadien verwendet werden. Die Zusammensetzung dieser Medien ist <stro...

<ol>
	<li>Bernal, W., Wendon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Liver+Failure.">Acute Liver Failure.</a> New England Journal of Medicine. 369, 2525-2534 (2013).</li><li>Ang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Roadmap+for+Human+Liver+Differentiation+from+Pluripotent+Stem+Cells.">A Roadmap for Human Liver Differentiation from Pluripotent Stem Cells.</a> Cell Reports. 22, 2190-2205 (2018).</li><li>Fisher, R. A., Strom, S. 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Diese Methode ermöglicht die Erzeugung von angereicherten Populationen von Leberknospenvorläufern und anschließend hepatozytenähnlichen Zellen aus hPSCs. Die Fähigkeit, angereicherte Populationen menschlicher Leberzellen zu erzeugen, ist wichtig für die praktische Nutzung solcher Zellen. Frühere Methoden zur Erzeugung von Hepatozyten aus hPSCs ergaben unreine Zellpopulationen, die sowohl Leber- als auch Nicht-Leberzellen enthielten, die bei der Transplantation in Nagetiere neben Lebergewebe15</su...

Der Zweck dieses Protokolls ist es, menschliche pluripotente Stammzellen (hPSCs) effizient in angereicherte Populationen von Leberknospenvorläufern und Hepatozyten-ähnlichen Zellen2zu differenzieren. Der Zugang zu einer bereiten Versorgung mit menschlichen Lebervorläufern und hepatozytenähnlichen Zellen wird die Bemühungen zur Untersuchung der Leberfunktion und -krankheit beschleunigen und könnte neue zelluläre Transplantationstherapien für Leberversagen ermöglichen3,4, 5. Dies hat sich in der Vergangenheit als herausforderunglich erwiesen, da hPSCs (einschließlich embryonaler und induzierter pluripotenter Stammzellen) sich in alle Zelltypen des menschlichen Körpers differenzieren können; Folglich war es schwierig, sie ausschließlich in eine reine Population eines einzelnenZelltyps, wie Leberzellen 6, zu differenzieren.
Um hPSCs in Leberzellen genau zu differenzieren, ist es zunächst wichtig, nicht nur zu verstehen, wie Leberzellen spezifiziert werden, sondern auch, wie sich Nicht-Leberzelltypen entwickeln. Das Wissen darüber, wie sich Nicht-Leberzellen entwickeln, ist wichtig, um die Bildung von nicht-liver-Linien während der Differenzierung logisch zu unterdrücken und damit ausschließlich hPSCs zu einem Leberschicksal zu führen2. Zweitens ist es wichtig, die vielfältigen Entwicklungsschritte zu abgrenzen, durch die sich hPSCs in Richtung eines Leberschicksals differenzieren. Es ist bekannt, dass hPSCs sequenziell in mehrere Zelltypen differenzieren, die als Primitivstreifen (APS), definitives Endoderm (DE), hinteres Vorgut (PFG) und Leberknospenvorläufer (LB) bekannt sind, bevor hepatozytenähnliche Zellen (HEP) gebildet werden. Frühere Arbeiten zeigten die Signale, die das Leberschicksal angeben, und die Signale, die die Bildung von alternativen Nicht-Leber-Zelltypen (einschließlich Magen,Pankreas und Darmvorläufer) bei jeder Entwicklungslinie unterdrückten2, 7 , 8.
Zusammengenommen haben diese Erkenntnisse zu einer serumfreien, monolayerMethode geführt, um hPSCs in Richtung Primitivstreifen, definitives Endoderm, hinteres Vorgut, Leberknospenvorläufer und schließlich Hepatozyten-ähnliche Zellen2zu differenzieren. Insgesamt beinhaltet die Methode die Aussaat von hPSCs in einer Monoschicht mit entsprechender Dichte, die Vorbereitung von sechs Cocktails von Differenzierungsmedien (mit Wachstumsfaktoren und kleinen Molekülen, die verschiedene Entwicklungssignalwege regulieren) und diese Medien sequenziell hinzufügen, um eine Differenzierung im Laufe von 18 Tagen zu induzieren. Während des Prozesses ist keine Passierung von Zellen erforderlich. Da diese Methode explizit Signale enthält, die die Bildung von Nicht-Leberzelltypen unterdrücken, erzeugt dieser Differenzierungsansatz1 effizienter Lebervorläufer und Hepatozyten-ähnliche Zellen im Vergleich zu Differenzierungsmethoden2,9,10,11,12. Darüber hinaus ermöglicht das in diesem Text beschriebene Protokoll die schnellere Erzeugung von Hepatozyten, die letztlich höhere Mengen an hepatischen Transkriptionsfaktoren und Enzymen ausdrücken als die anderen Protokolle9,10 , 11 , 12.
Das hier beschriebene Protokoll hat gewisse Vorteile gegenüber aktuellen Differenzierungsprotokollen. Erstens beinhaltet sie eine monoschichtige Differenzierung von hPSCs, was im Vergleich zu dreidimensionalen Differenzierungsmethoden, wie z. B. solchen, die auf embryoiden Körpern beruhen, technisch einfacher ist13. Zweitens nutzt diese Methode einen kürzlichen Fortschritt, bei dem definitive Endodermzellen (ein früher Vorläufer von Leberzellen) innerhalb von 2 Tagen nach hPSC-Differenzierung2,7effizient und schnell erzeugt werden können, um so die Herstellung von Hepatozyten mit erhöhter Reinheit. Drittens produzieren die hepatozytenähnlichen Zellen, die mit dieser Methode2 hergestellt werden, in Nebeneinander-Vergleichen mehr ALBUMIN und drücken höhere Konzentrationen von hepatischen Transkriptionsfaktoren und Enzymen aus als Hepatozyten, die in anderen Methoden hergestellt werden10, 11,12.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >&#160;Geltrex</td>
			<td >Thermofisher Scientific</td>
			<td >A1569601</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1:1 DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.2&#160;&#956;m pore membrane filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>GTTP02500</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >mTeSR1</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>5850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Thiazovivin</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;Accutase</td>
			<td>Gibco or Millipore&#160;</td>
			<td>Gibco A11105, Millipore&#160; SCR005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >IMDM, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31980030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31765035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KOSR, Knockout serum replacement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Poly(vinyl alcohol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td>P8136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Transferrin&#160;</td>
			<td >Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td >10652202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chemically Defined Lipid Concentrate</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td >11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human Activin</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CHIR99201</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PI103</td>
			<td >Tocris</td>
			<td >2930/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human FGF2</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>233-FB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DM3189</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>6053/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >A83-01</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>2939/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Human BMP4</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>314-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >C59</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>5148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TTNPB</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>0761/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forskolin</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>1099/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oncostatin M</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>295-OM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dexamethasone</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ro4929097</td>
			<td >Selleck Chem</td>
			<td>S1575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >AA2P</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>16457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human recombinant Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td>11061-68-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient differentiation of human pluripotent stem cells into liver cells

Die Leber entgiftet Schadstoffe, sezerniert lebenswichtige Proteine und führt wichtige Stoffwechselaktivitäten aus und erhält so das Leben. Folglich ist Leberversagen – das durch chronischen Alkoholkonsum, Hepatitis, akute Vergiftung oder andere Beleidigungen verursacht werden kann – eine schwere Erkrankung, die in Blutungen, Gelbsucht, Koma und schließlich in todbringend gipfeln kann. Jedoch, Ansätze zur Behandlung von Leberversagen, sowie Studien über Leberfunktion und Krankheit, wurden teilweise durch das Fehlen einer reichlichen Versorgung mit menschlichen Leberzellen behindert. Zu diesem Zweck beschreibt dieses Protokoll die effiziente Differenzierung menschlicher pluripotenter Stammzellen (hPSCs) in Hepatozyten-ähnliche Zellen, geleitet von einer Entwicklungs-Roadmap, die beschreibt, wie das Leberschicksal in sechs aufeinanderfolgenden Differenzierungsschritten spezifiziert wird. Durch die Manipulation von Entwicklungssignalwegen zur Förderung der Leberdifferenzierung und zur expliziten Unterdrückung der Bildung unerwünschter Zellschicksale erzeugt diese Methode effizient Populationen menschlicher Leberknospenvorläufer und Hepatozyten-ähnliche Zellen nach Tagen 6 bzw. 18 der PSC-Differenzierung. Dies wird durch die zeitlich präzise Steuerung von Entwicklungssignalwegen erreicht, die von kleinen Molekülen und Wachstumsfaktoren in einem serumfreien Kulturmedium ausgeübt wird. Differenzierung in diesem System tritt in Monolayern auf und liefert Hepatozyten-ähnliche Zellen, die charakteristische Hepatozytenenzyme exprimieren und die Fähigkeit haben, ein Mausmodell des chronischen Leberversagens zu transplantieren. Die Fähigkeit, effizient eine große Anzahl von menschlichen Leberzellen in vitro zu erzeugen hat Auswirkungen für die Behandlung von Leberversagen, für Dask.-Screening, und für mechanistische Studien von Lebererkrankungen.

Nach 24 h APS-Differenzierung werden Kolonien in der Regel eine andere Morphologie anwenden als undifferenzierte Kolonien, die mit einem Verlust der hellen Grenze einhergehen, die typischerweise hPSC-Kolonien umgibt. Morphologisch haben primitive Streifenzellen im Allgemeinen zerrissene Grenzen und sind stärker verbreitet und weniger kompakt als hPSCs - dies erinnert an einen epitheliaal-mesenchymalen Übergang, da sich pluripotente Epiblastzellen differenzieren und in die primitiven Str...

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Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Dieses Protokoll beschreibt eine monolayer, serumfreie Methode zur effizienten Erzeugung von Hepatozyten-ähnlichen Zellen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen (hPSCs) in 18 Tagen. Dies beinhaltet sechs Schritte, da hPSCs sequenziell in zwischengeschaltete Zelltypen wie den Primitivstreifen, das definitive Endoderm, das hintere Vorgut und die Leberknospenvorläufer differenzieren, bevor hepatozytenähnliche Zellen gebildet werden.

Effiziente Differenzierung menschlicher pluripotenter Stammzellen in Leberzellen

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

Diese Methode ermöglicht die Erzeugung einer großen Anzahl von menschlichen Leberknospenvorläufern und Hepatozyten-ähnlichen Zellen mit hoher Reinheit. Die Fähigkeit, diese Leberzellen zu erzeugen, könnte für die regenerative Medizin und andere Bereiche wichtig sein. Durch die Steuerung der entwicklungsfördernden Signalwege zur Förderung der Leberdifferenzierung und Unterdrückung der Bildung unerwünschter Zelltypen ermöglicht diese Methode eine effiziente Generierung von menschlichen Leberknospenvorläufern und hepatozytenähnlichen Zellen um sechs bzw. 18 Tage Differenzierung.Der Hauptvorteil dieser Technik ist die hohe Reinheit der menschlichen Leberzellen erzeugt. Um dieses Verfahren zu sein, fügen Sie 50 Milliliter IMDM zu einem konischen Kolben hinzu, der einen Rührbalken enthält. Erhitzen Sie das Medium auf 50 Grad Celsius und fügen Sie 0,5 Gramm PVA hinzu, während Sie kontinuierlich rühren, um einen PVA-Bestand mit einer Konzentration von 10 Milligramm pro Milliliter vorzubereiten.Danach entfernen Sie die PVA-Lösung aus dem Heizkissen und lassen Sie sie auf Raumtemperatur abkühlen. Sobald die Lösung abgekühlt ist, filtern Sie sie durch einen sterilen 0,2 Mikrometer Filter. Bereiten Sie CDM2 und CDM3 vor, indem Sie die gefilterte PVA mit anderen Reagenzien kombinieren, wie in Tabelle 1 des Textprotokolls beschrieben.Verwenden Sie einen sterilen 0,2 Mikrometer-Filter, um alle Medien zu filtern. Bereiten Sie dann die verbleibenden Basismedien CDM4 und CDM5 vor, wie in Tabelle 1 des Textprotokolls beschrieben. Um das Differenzierungsmedium vorzubereiten, tauen Sie zunächst die gefrorenen kleinen Moleküle und/oder Wachstumsfaktoren bei Raumtemperatur auf.Aliquot out die erforderliche Menge an Basismedium und fügen Sie die angegebenen kleinen Moleküle und Wachstumsfaktoren auf das Basismedium in den entsprechenden Konzentrationen. Am Vortag vor Gebrauch, tauen Sie die Matrix bei vier Grad Celsius. Verdünnen Sie am nächsten Tag die Matrix im Verhältnis eins zu 100, indem Sie 500 Mikroliter Matrix in 50 Milliliter kaltes DMEM hinzufügen.Pipette die verdünnte Matrix in die erforderliche Anzahl von Brunnen mit gerade genug Volumen der Lösung, um die Oberfläche des Brunnens zu bedecken. Übertragen Sie die matrixbeschichtete Platte mindestens 60 Minuten lang bei 37 Grad Celsius in einen Inkubator. Unmittelbar vor der Aussaat die verbleibende Matrixlösung aus den beschichteten Brunnen absaugen.Dann, saugen Sie das Medium von einer weitgehend konfluenten hPSC-Kulturplatte und fügen Sie kommerziell gekaufte Dissoziationsmittel hinzu, um sicherzustellen, dass sie gerade genug verwenden, um die Oberfläche zu bedecken, auf der die Zellen wachsen. Inkubieren Sie die hPSCs im Dissoziationsmittel bei 37 Grad Celsius für fünf Minuten oder bis einige Kolonien beginnen, sich zu lösen. Fügen Sie als Nächstes DMEM und F-12 hinzu, um das Dissoziationsmittel zu verdünnen.Verwenden Sie eine serologische Pipette mit fünf Millilitern, um die Pipette mehrmals nach oben und unten zu pipette, um alle Zellen von der Oberfläche des Brunnens abzuwaschen. Sammeln Sie die resuspendierten Einzelzellen in einem 50 Milliliter konischen Rohr und verdünnen Sie sie bei Bedarf mit DMEM und F-12. Zentrifugieren Sie dieses Rohr von gesammelten hPSCs bei 350 mal g und bei vier Grad Celsius für drei Minuten, um die Zellen zu pellet.Während Sie auf die Zentrifugation warten, saugen Sie die Matrix von der Platte ab, in der die hPSCs gesät werden. Fügen Sie eine ausreichende Menge an mTeSR-Medien zu Dentrinsbrunnen hinzu, um sie abzudecken. Wenn die Zentrifugation abgeschlossen ist, saugen Sie vorsichtig den Überstand an und lassen Sie die pelletierten hPSCs an der Unterseite des konischen Rohres.Setzen Sie das Zellpellet in mTeSR mit einem Mikromolaren aus kommerziell erhaltenem Thiazovivin auf. Mit einer P1000 Pipette zwei- bis dreimal sanft trituieren, um das Zellpellet gleichmäßig in eine Einzelzellsuspension zurückzusetzen. Sofort 10 Mikroliter der Zellsuspension in ein Hämozytometer pipette und die Anzahl der Zellen zählen.Passen Sie das Volumen der resuspendierten hPSCs mit Thiazovivin-ergänztem mTeSR an, um die gewünschte Zellkonzentration für die Beschichtung zu erreichen. Schütteln Sie dann die Platte mehrmals in einem Kreuzmuster, um sicherzustellen, dass die Zellen gleichmäßig verteilt sind. Nachdem die hPSCs mindestens 24 Stunden lang plattiert wurden, verwenden Sie ein Phasenkontrastmikroskop, um die Morphologie der Zellen mit besonderem Schwerpunkt auf dem Durchmesser der plattierten hPSC-Kolonien zu überprüfen.Bereiten Sie als Nächstes das APS-Differenzierungsmedium tag1 vor, wie in Tabelle 2 des Textprotokolls beschrieben. Einen Tag nach der Aussaat die Thiazovivin-ergänzten mTeSR von den beschichteten hPSCs ansaugen und kurz mit IMDM-Medien waschen. Fügen Sie danach Tag einMedium zu den hPSCs hinzu.Zeichnen Sie die Zeit auf und legen Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius wieder in den Inkubator. Fahren Sie mit den nachfolgenden Differenzierungsschritten fort, indem Sie das benötigte Differenzierungsmedium vorbereiten und es den Zellen an den jeweiligen Tagen der Differenzierung um die gleiche Tageszeit hinzufügen. In dieser Studie werden angereicherte Populationen von Leberknospenvorläufern und anschließend hepatozytenähnlichen Zellen aus hPSCs erzeugt.Am zweiten Tag der Differenzierung haben sich primitive Streifenzellen in Tag zwei definitive Endodermzellen differenziert. Die überwiegende Mehrheit dieser Zellen drückt SOX17 und FOXA2 aus. Am dritten Tag der Differenzierung haben sich die Endodermzellen in Vorgut-Vorläufer differenziert, die polygonal in der Form erscheinen.Später, am sechsten Tag, haben sich die Vorgut-Vorläufer in Leberknospen-Vorläufer unterschieden. Diese Leberknospen-Vorläufer drücken AFP, TPX3 und HNF4alpha aus. Über drei hPSC-Linien erzeugt diese Methode Tag sechs AFP-positive Lebervorläufer mit einer Effizienz von ca. 89%Schließlich erscheinen nach 18 Tagen Leberdifferenzierung von hPSCs Albumin-positive Hepatozyten-ähnliche Zellen.Morphologisch erscheinen diese Zellen epitheliale und bilden helle Ränder, die an Gallenkanaliculi erinnern. In diesem Stadium erscheint das Zytoplasma des Tages 18 hPSC-abgeleitete Hepatozyten dunkler als der Kern. Bei der Aussaat menschlicher pluripotenter Stammzellen zur Differenzierung ist es unerlässlich, sie mit der richtigen Dichte auszusäen und sie auch durch Schütteln der Platte über den Brunnen zu verteilen.Die Fähigkeit, menschliche Hepatozyten in vitro zu produzieren, ist eine basisklastige Technologie, die es Wissenschaftlern ermöglicht, Mechanismen zu untersuchen, die der Leberentwicklung zugrunde liegen. Diese Methode produziert eine große Anzahl von menschlichen Hepatozyten in vitro, die verwendet werden könnten, um Leberfunktion und Krankheit zu untersuchen und schließlich neue Therapien für Leberversagen zu ermöglichen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Differenzierung der Primitive und Definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotente Stammzellen gerichtet

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Effiziente Differenzierung von pluripotenten Stammzellen zu NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; Pancreatic Vorläufern

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In vitro Differenzierung von humanen pluripotenten Zellen in Trophoblastische Stammzellen

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Protocol for the Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into Mixed Cultures of Neurons and Glia for Neurotoxicity Testing

Protokoll zur Differenzierung von human induzierten pluripotenten Stammzellen in Mischkulturen von Neuronen und Glia für Neurotoxizitätstests

Human pluripotent stem cells can differentiate into various cell types that can be applied to human-based in vitro toxicity assays. One major advantage is ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In-vitro- Differenzierung humaner mesenchymaler Stammzellen in funktionellen Cardiomyocyte-ähnlichen Zellen

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Schnelle, gezielte Differenzierung der retinalen Pigment epithelialen Zellen aus menschlichen embryonalen oder induzierte pluripotente Stammzellen

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Effiziente und skalierbare gerichtete Differenzierung von klinisch kompatibel Hornhaut limbischen epithelialen Stammzellen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

In vitro-Generation der Somiten Derivate aus menschlichen induzierten Zellen pluripotenten Stammzellen

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Transient Treatment of Human Pluripotent Stem Cells with DMSO to Promote Differentiation

Transiente Behandlung von humanen pluripotenten Stammzellen mit DMSO zur Förderung der Differenzierung

Despite the growing use of pluripotent stem cells (PSCs), challenges in efficiently differentiating embryonic and induced pluripotent stem cells (ESCs and ...

Efficient Neural Differentiation using Single-Cell Culture of Human Embryonic Stem Cells

Effiziente neuronale Differenzierung mit einzelzellischer Kultur menschlicher embryonaler Stammzellen

In vitro differentiation of human embryonic stem cells (hESCs) has transformed the ability to study human development on both biological and molecular ...