Name: efficient differentiation of human pluripotent stem cells into liver cells
Uploaded: 2019-06-11T13:30:00
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Agradecemos Bing Lim para discussões e do Stanford Institute for Stem Cell Biology & medicina regenerativa para suporte de infra-estrutura. Este trabalho foi apoiado pelo Instituto de medicina regenerativa da Califórnia (DISC2-10679) e pelo Stanford-UC Berkeley Siebel Stem Cell Institute (para L.T.A. e K.M.L.) e o centro de Stanford Beckman para medicina molecular e genética, bem como o Anonymous, Famílias de Baxter e de DiGenova (a K.M.L.).

1. preparação de meios de diferenciação
Nota: Refira a tabela de materiais para a informação do fabricante a respeito dos materiais e dos reagentes usados.
<ol><li>
Preparação de suportes de base quimicamente definidos (MDL) Nota: CDM2, CDM3, CDM4 e CDM5 são meios quimicamente definidos que são usados como mídias de base para diferenciar hPSCs para células hepáticas em vários estágios. A composição dessas mídias pode ser...

<ol>
	<li>Bernal, W., Wendon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Liver+Failure.">Acute Liver Failure.</a> New England Journal of Medicine. 369, 2525-2534 (2013).</li><li>Ang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Roadmap+for+Human+Liver+Differentiation+from+Pluripotent+Stem+Cells.">A Roadmap for Human Liver Differentiation from Pluripotent Stem Cells.</a> Cell Reports. 22, 2190-2205 (2018).</li><li>Fisher, R. A., Strom, S. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+Pairwise+Choices+Leading+from+Pluripotency+to+Human+Bone,+Heart,+and+Other+Mesoderm+Cell+Types.">Mapping the Pairwise Choices Leading from Pluripotency to Human Bone, Heart, and Other Mesoderm Cell Types.</a> Cell. , 451-467 (2016).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+the+efficient+metabolic+maturation+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+hepatocytes+by+correcting+specification+defects.">Promotion of the efficient metabolic maturation of human pluripotent stem cell-derived hepatocytes by correcting specification defects.</a> Cell Research. 23, 157-161 (2012).</li><li>Si Tayeb, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+generation+of+human+hepatocyte-like+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Highly efficient generation of human hepatocyte-like cells from induced pluripotent stem cells.</a> Hepatology. 51, 297-305 (2010).</li><li>Carpentier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+in+miniaturized+format+suitable+for+high-throughput+screen.">Hepatic differentiation of human pluripotent stem cells in miniaturized format suitable for high-throughput screen.</a> Stem Cell Research. 16, 640-650 (2016).</li><li>Avior, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial-derived+lithocholic+acid+and+vitamin+K2+drive+the+metabolic+maturation+of+pluripotent+stem+cells-derived+and+fetal+hepatocytes.">Microbial-derived lithocholic acid and vitamin K2 drive the metabolic maturation of pluripotent stem cells-derived and fetal hepatocytes.</a> Hepatology. 62, 265-278 (2015).</li><li>Ogawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+and+cAMP+signaling+promote+the+maturation+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+hepatocytes.">Three-dimensional culture and cAMP signaling promote the maturation of human pluripotent stem cell-derived hepatocytes.</a> Development. 140, 3285-3296 (2013).</li><li>Rostovskaya, M., Bredenkamp, N., Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+consistent+generation+of+pancreatic+lineage+progenitors+from+human+pluripotent+stem+cells.">Towards consistent generation of pancreatic lineage progenitors from human pluripotent stem cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 370, 20140365 (2015).</li><li>Haridass, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repopulation+Efficiencies+of+Adult+Hepatocytes,+Fetal+Liver+Progenitor+Cells,+and+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Hepatic+Cells+in+Albumin-Promoter-Enhancer+Urokinase-Type+Plasminogen+Activator+Mice.">Repopulation Efficiencies of Adult Hepatocytes, Fetal Liver Progenitor Cells, and Embryonic Stem Cell-Derived Hepatic Cells in Albumin-Promoter-Enhancer Urokinase-Type Plasminogen Activator Mice.</a> The American Journal of Pathology. 175, 1483-1492 (2009).</li></ol>

Este método permite a geração de populações enriquecidas de progenitores do botão do fígado, e subseqüentemente Hepatocyte-como pilhas, de hPSCs. A capacidade de gerar populações enriquecidas de células hepáticas humanas é importante para a utilização prática de tais células. Métodos prévios para gerar hepatócitos de hPSCs produziram populações de células impuras contendo células hepáticas e não hepáticas que, após transplante em roedores, produziram osso e cartilagem além do tecido hepático...

A finalidade deste protocolo é diferenciar eficientemente pilhas de haste pluripotentes humanas (hPSCs) em populações enriquecidas de progenitores do botão do fígado e Hepatocyte-como pilhas2. O acesso a um suprimento pronto de progenitores hepáticos humanos e células semelhantes a hepatócitos acelerará os esforços para investigar a função hepática e a doença e poderá permitir novas terapias de transplante celular para insuficiência hepática3,4, a 5. Isso tem provado desafiador no passado desde hPSCs (que incluem células-tronco pluripotentes embrionárias e induzidas) pode diferenciar em todos os tipos de células do corpo humano; Conseqüentemente, tem sido difícil diferenciá-los exclusivamente em uma população pura de um único tipo de célula, como as células hepáticas6.
Para diferenciar precisamente hPSCs em pilhas de fígado, primeiramente é crítico compreender não somente como as pilhas de fígado são especificadas mas igualmente como os Cell-Types do não-fígado se desenvolvem. O conhecimento de como as células não-hepáticas se desenvolvem é importante para suprimir logicamente a formação de linhagens não hepáticas durante a diferenciação, orientando, assim, exclusivamente hPSCs para um destino hepático2. Em segundo lugar, é essencial delinear as múltiplas etapas de desenvolvimento através das quais os hPSCs se diferenciam para um destino hepático. Sabe-se que os hPSCs se diferenciam sequencialmente em múltiplos tipos de células conhecidas como a raia primitiva (APS), endoderma definitivo (DE), foregut posterior (PFG) e progenitores de broto hepático (LB) antes de formar células de hepatócitos (HEP). O trabalho mais adiantado revelou os sinais que especificam o Fate do fígado e os sinais que suprimiram a formação de pilha-tipos alternativos do não-fígado (que incluem os progenitors do estômago, os pancreatic, e os intestinais) em cada escolha2do desenvolvimento da linhagem, 7 anos de , a 8.
Coletivamente, esses insights deram origem a um método de monocamada sem soro para diferenciar hPSCs em direção à raia primitiva, endoderma definitivo, foregut posterior, progenitores de broto hepático e, finalmente, células tipo hepatócitos2. Globalmente, o método envolve a semeadura de hPSCs em uma monocamada em uma densidade adequada, preparando seis coquetéis de meios de diferenciação (contendo fatores de crescimento e pequenas moléculas que regulam várias vias de sinalização de desenvolvimento), e sequencialmente adicionando esses meios para induzir a diferenciação ao longo de 18 dias. Durante o processo, nenhum de de células é necessário. De notar, porque este método inclui explicitamente sinais que suprimem a formação de células não-fígado-tipos, esta abordagem de diferenciação1 mais eficientemente gera progenitores do fígado e hepatócitos-como células em comparação com existentes métodos de diferenciação2,9,10,11,12. Além disso, o protocolo descrito neste texto possibilita a geração mais rápida de hepatócitos que, em última análise, expressam níveis mais elevados de fatores de transcrição hepática e enzimas do que os produzidos por outros protocolos9,10 , 11 anos de , doze anos.
O protocolo aqui descrito tem algumas vantagens sobre os protocolos de diferenciação atuais. Em primeiro lugar, implica diferenciação monocamada de hPSCs, que é tecnicamente mais simples em comparação com métodos de diferenciação tridimensional, como aqueles que dependem de corpos embrióides13. Em segundo, este método explora um avanço recente por meio de que as pilhas definitivas do endoderme (um precursor adiantado às pilhas de fígado) podem eficientemente e ràpida ser geradas dentro de 2 dias da diferenciação2,7de HPSC, assim permitindo a subsequente produção de hepatócitos com maior pureza. Em terceiro lugar, nas comparações lado a lado, as células do tipo hepatócito produzidas por este método2 produzem mais albumina e expressam níveis mais elevados de fatores de transcrição hepática e enzimas em comparação com os hepatócitos produzidos em outros métodos10, 11,12.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >&#160;Geltrex</td>
			<td >Thermofisher Scientific</td>
			<td >A1569601</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1:1 DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.2&#160;&#956;m pore membrane filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>GTTP02500</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >mTeSR1</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>5850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Thiazovivin</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;Accutase</td>
			<td>Gibco or Millipore&#160;</td>
			<td>Gibco A11105, Millipore&#160; SCR005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >IMDM, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31980030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31765035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KOSR, Knockout serum replacement</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Poly(vinyl alcohol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td>P8136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Transferrin&#160;</td>
			<td >Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td >10652202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chemically Defined Lipid Concentrate</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td >11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human Activin</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CHIR99201</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PI103</td>
			<td >Tocris</td>
			<td >2930/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human FGF2</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>233-FB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DM3189</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>6053/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >A83-01</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>2939/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Human BMP4</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>314-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >C59</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>5148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TTNPB</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>0761/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forskolin</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>1099/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oncostatin M</td>
			<td >R&#38;D</td>
			<td>295-OM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dexamethasone</td>
			<td >Tocris</td>
			<td>1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ro4929097</td>
			<td >Selleck Chem</td>
			<td>S1575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >AA2P</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>16457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >human recombinant Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;&#160;</td>
			<td>11061-68-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient differentiation of human pluripotent stem cells into liver cells

O fígado desintoxica substâncias nocivas, secreta proteínas vitais, e executa as principais atividades metabólicas, sustentando assim a vida. Consequentemente, a insuficiência hepática — que pode ser causada por ingestão crônica de álcool, hepatite, envenenamento agudo ou outros insultos — é uma condição grave que pode culminar em sangramento, icterícia, coma e, eventualmente, morte. Entretanto, as aproximações para tratar a falha de fígado, assim como estudos da função e da doença de fígado, foram stymied na parte pela falta de uma fonte abundante de pilhas humanas do fígado. Para este fim, este protocolo detalha a diferenciação eficiente de pilhas de haste pluripotentes humanas (hPSCs) em Hepatocyte-como pilhas, guiado por um roteiro desenvolvente que descreva como o Fate do fígado está especificado através de seis etapas consecutivas da diferenciação. Manipulando as vias de sinalização do desenvolvimento para promover a diferenciação hepática e para suprimir explicitamente a formação de Fates celulares indesejados, este método gera eficientemente populações de progenitores de gemas hepáticas humanas e células como hepatócitos por dias 6 e 18 de diferenciação do PSC, respectivamente. Isto é conseguido através do controle temporally-preciso de caminhos de sinalização desenvolventes, exercitado por moléculas pequenas e por factores de crescimento em um meio de cultura soro-livre. A diferenciação neste sistema ocorre em monocamadas e produz células hepatócito-like que expressam enzimas de hepatócitos característicos e têm a capacidade de entransplantar um modelo de rato de insuficiência hepática crónica. A capacidade de gerar eficientemente um grande número de células hepáticas humanas in vitro tem ramificações para o tratamento da insuficiência hepática, para a triagem de drogas, e para estudos mecanísticos de doença hepática.

Após 24 h de diferenciação de APS, as colônias geralmente adotam uma morfologia diferente do que as colônias não diferenciadas concomitantes com uma perda da borda brilhante que circunscreve tipicamente colônias de hPSC. Morfologicamente, células de raia primitiva geralmente têm bordas irregulares e são mais disseminadas e menos compactas do que hPSCs-isso é evocativo de uma transição epitelial-mesenquimais como células de epiblastos pluripotentes diferenciam e entram no pri...

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Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Este protocolo detalha um monolayer, método soro-livre para gerar eficientemente Hepatocyte-como pilhas das pilhas de haste pluripotentes humanas (hPSCs) em 18 dias. Isto implica seis etapas como hPSCs se diferenciam seqüencialmente em tipos de células intermediárias, como a raia primitiva, endoderma definitivo, foregut posterior e progenitores de broto hepático antes de formar células como hepatócitos.

Diferenciação eficiente de células-tronco pluripotentes humanas em células hepáticas

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

Este método permite a geração de um grande número de progenitores de brotos de fígado humanos e células semelhantes a hepatócitos com alta pureza. A capacidade de gerar essas células hepáticas pode ser importante para a medicina regenerativa e outros campos. Ao controlar as vias de sinalização do desenvolvimento para promover a diferenciação hepática e suprimir a formação de tipos de células indesejadas, este método permite uma geração eficiente de progenitores de brotos hepáticos humanos e células semelhantes a hepatócitos por seis e 18 dias de diferenciação, respectivamente.A principal vantagem dessa técnica é a alta pureza das células hepáticas humanas geradas. Para este procedimento, adicione 50 mililitros de IMDM a um frasco cônico contendo uma barra de agitação. Aqueça o médio a 50 graus Celsius e adicione 0,5 gramas de PVA enquanto mexe continuamente para preparar um estoque de PVA a uma concentração de 10 miligramas por mililitro.Depois disso, remova a solução PVA da almofada de aquecimento e deixe esfriar até a temperatura ambiente. Uma vez que a solução seja resfriada, filtre-a através de um filtro estéril de 0,2 micrômetros. Prepare o CDM2 e o CDM3 combinando o PVA filtrado com outros reagentes conforme descrito na tabela um do protocolo de texto.Use um filtro estéril de 0,2 micrômetros para filtrar todas as mídias. Em seguida, prepare as mídias de base restantes, CDM4 e CDM5, conforme descrito na tabela um do protocolo de texto. Para preparar o meio de diferenciação, primeiro descongele as pequenas moléculas congeladas e/ou fatores de crescimento à temperatura ambiente.Aliquotar a quantidade necessária de meio base e adicionar as pequenas moléculas especificadas e fatores de crescimento ao meio base nas concentrações apropriadas. Um dia antes do uso, descongele a matriz a quatro graus Celsius. No dia seguinte, diluir a matriz em uma proporção de 1 a 100 adicionando 500 microliters de matriz em 50 mililitros de DMEM frio.Pipeta a matriz diluída no número necessário de poços usando apenas volume suficiente de solução para cobrir a superfície do poço. Transfira a placa revestida de matriz para uma incubadora a 37 graus Celsius por pelo menos 60 minutos. Imediatamente antes da semeadura, aspire a solução matricial restante dos poços revestidos.Em seguida, aspire o meio a partir de uma placa de cultura hPSC em grande parte confluente e adicione agente de dissociação comprado comercialmente, certificando-se de usar apenas o suficiente para cobrir a superfície em que as células estão crescendo. Incubar os hPSCs no agente de dissociação a 37 graus Celsius por cinco minutos ou até que algumas colônias comecem a se desprender. Em seguida, adicione DMEM e F-12 para diluir o agente de dissociação.Use uma pipeta sorológica de cinco mililitros para in pipeta suavemente para cima e para baixo várias vezes para lavar todas as células da superfície do poço. Colete as células únicas resuspended em um tubo cônico de 50 mililitros e diluir com DMEM e F-12 conforme necessário. Centrifugar este tubo de hPSCs coletados a 350 vezes g e a quatro graus Celsius por três minutos para pelotar as células.Enquanto espera pela centrifugação, aspire a matriz da placa em que os hPSCs serão semeados. Adicione uma quantidade suficiente de mídia mTeSR para receber poços para cobri-los. Quando a centrifugação estiver completa, aspire cuidadosamente o supernasce, deixando os hPSCs pelleted na parte inferior do tubo cônico.Resuspend a pelota celular em mTeSR complementada com um micromolar de Thiazovivin obtido comercialmente. Usando uma pipeta P1000, triturar suavemente duas a três vezes para resuspensar uniformemente a pelota da célula em uma única suspensão celular. Imediatamente pipeta 10 microliters da suspensão celular em um hemócito e contar o número de células.Ajuste o volume dos hPSCs resuspendados com mTeSR suplementado por Thiazovivin para alcançar a concentração celular desejada para chapeamento. Em seguida, agite a placa em um padrão cruzado várias vezes para ter certeza de que as células estão distribuídas uniformemente. Após os hPSCs terem sido banhados por pelo menos 24 horas, use um microscópio de contraste de fase para verificar a morfologia das células com ênfase específica no diâmetro das colônias de hPSC banhadas.Em seguida, prepare o meio de diferenciação APS do primeiro dia, conforme descrito na tabela dois do protocolo de texto. Um dia após a semeadura, aspire o mTeSR suplementado por Thiazovivin a partir dos hPSCs banhados e lave-os brevemente com mídia IMDM. Depois disso, adicione o meio do primeiro dia aos hPSCs.Regissuas horas e coloque as células de volta na incubadora a 37 graus Celsius. Continue com as etapas de diferenciação subsequentes, preparando o meio de diferenciação necessário e adicionando-o às células nos respectivos dias de diferenciação na mesma hora do dia. Neste estudo, populações enriquecidas de progenitores de brotos hepáticos e, posteriormente, células semelhantes a hepatocititas são geradas a partir de hPSCs.No segundo dia de diferenciação, as células primitivas se diferenciaram no segundo dia de células de endoderme definitivas. A grande maioria dessas células expressa SOX17 e FOXA2. No terceiro dia de diferenciação, as células de endoderme se diferenciaram em progenitores foregut que parecem poligonais em forma.Mais tarde, no sexto dia, os progenitores foregut se diferenciaram em progenitores de brotos de fígado. Estes progenitores de brotos de fígado expressam AFP, TPX3 e HNF4alpha. Em três linhas hPSC, este método gera o sexto dia de progenitores hepáticos afp positivos a uma eficiência de aproximadamente 89%Finalmente, após 18 dias de diferenciação hepática dos hPSCs, aparecem células hepatócitas positivas em albumina.Morfologicamente, essas células parecem epiteliais, formando bordas brilhantes que lembram o canaliculi bile. Nesta fase, o citoplasma do dia 18 hPSC-derivado hepatócitos parece mais escuro do que o núcleo. Ao semear células-tronco pluripotentes humanas para diferenciação, é imperativo semeá-las na densidade certa e também distribuí-las através do poço, sacudindo a placa.A capacidade de produzir hepatócitos humanos in vitro é uma tecnologia que permite aos cientistas investigar mecanismos subjacentes ao desenvolvimento do fígado. Este método produz um grande número de hepatócitos humanos in vitro que poderiam ser usados para investigar a função hepática e a doença e eventualmente permitir novas terapias para insuficiência hepática.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Dirigido a diferenciação de progenitores hematopoiéticos primitivo e definitiva de células pluripotentes humanas

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Biologia do Desenvolvimento

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Diferenciação eficiente dos Pluripotent Stem Cells para NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; Progenitores pancreáticas

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

Na diferenciação in vitro de pluripotentes humanas Células-tronco em células Trofoblásticas

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Protocol for the Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into Mixed Cultures of Neurons and Glia for Neurotoxicity Testing

Protocolo para a Diferenciação de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas Humanas em Culturas Mistas de Neurônios e Glia para Teste de Neurotoxicidade

Human pluripotent stem cells can differentiate into various cell types that can be applied to human-based in vitro toxicity assays. One major advantage is ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Diferenciação de células-tronco mesenquimais humanas em células casos funcionais

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Rápida, dirigida a diferenciação de células epiteliais de pigmento Retinal de células-tronco humanas embrionárias ou induzida de Pluripotent

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Diferenciação dirigida eficiente e escalável de clinicamente compatível Corneal estroma epiteliais células-tronco de células pluripotentes humanas

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Na geração de Vitro do Somite derivados de humanos induzida por células tronco pluripotentes

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Transient Treatment of Human Pluripotent Stem Cells with DMSO to Promote Differentiation

Tratamento transitório de células-tronco pluripotentes humanas com DMSO para promover a diferenciação

Despite the growing use of pluripotent stem cells (PSCs), challenges in efficiently differentiating embryonic and induced pluripotent stem cells (ESCs and ...

Efficient Neural Differentiation using Single-Cell Culture of Human Embryonic Stem Cells

Diferenciação neural eficiente usando a cultura unicelular de células-tronco embrionárias humanas

In vitro differentiation of human embryonic stem cells (hESCs) has transformed the ability to study human development on both biological and molecular ...