Name: activity-based training on a treadmill with spinal cord injured wistar rats
Uploaded: 2019-01-16T14:30:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Activity-based Training on a Treadmill with Spinal Cord Injured Wistar Rats at JoVE.com

De auteurs erkennen Drs. Patricia Ward, April Herrity en Susan Harkema voor hun bijdrage en begeleiding, Christine Yarberry voor chirurgische hulp, Yangsheng Chen, Andrea Willhite en Johnny Morehouse voor technische bijstand en Darlene Burke voor bijstand met statistieken en gedrags-evaluaties. Financiering van de steun voor dit werk werd verzorgd door het ministerie van defensie (W81XWH-11-1-0668 en W81XWH-15-1-0656) en de Kentucky Spinal Cord en hoofd letsel Research Trust (KSCHIRT 14-5).

Alle methoden zijn goedgekeurd door de Universiteit van Louisville institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC).
1. pre blessure behandeling en testen (één Week voor SCI)
<ol><li>Behandelen elke rat voor een periode van 5-10 min eenmaal per dag gedurende vijf dagen. NB: Volwassen mannelijke Wistar ratten die aanvankelijk ~ 50 dagen oud en weeg 200-225 g worden gebruikt in dit protocol. Ratten op deze pre letsel tijdstip zijn niet gewend aan het harnas dat wordt gebruikt voor LT zoals volledige gebruik van hindlimbs kan de rat om te ontsnappen aan de jas.</li>
	<li>Pre letsel testen studie-specifieke (bijvoorbeeld, de auteurs doen metabole kooi evaluaties voor studies die betrekking hebben op de gevolgen van het GCB op blaas en darm functie).</li>
</ol>2. ruggenmerg kneuzingen25,26,27,28
<ol><li>Anesthetize dieren met ketamine (80 mg/kg) en xylazine (10 mg/kg) mengsel intraperitoneally volgens verstrekte dosering grafiek (tabel 1). Beheren aanvullende dosering zoals nodig. Test verdoving diepte ten minste elke 10 min door hoornvlies, ooglidreflex, pedaal, staart snuifje en pinna reflexen te bepalen.</li>
	<li>Scheren haar vanaf de achterkant van het dier waar ingesneden en schade zullen optreden. Schoonmaken van het chirurgische gebied met Dermachlor 4% Surgical scrub. Beheren van een langwerkende algemene antibioticum (bijvoorbeeld0,5 cc Luiksgezinden-Pen-G subcutaan).</li>
	<li>Plaats het narcose dier op een verwarming pad op een laag niveau te handhaven van de normale lichaamstemperatuur.</li>
	<li>Schatten van de locatie van gerichte laesie niveau gebaseerd op Vertebrale Vingervormige en met een scalpel #10, het maken van een incisie van naar schatting 5 cm op het dorsum van het dier, direct boven de middellijn wervels.</li>
	<li>Voor Midden-thoracale kneuzingen, bloot de T8/T9 niveau van ruggenmerg via verwijdering (met rongeurs) van de overlay T7 Vertebrale lamina.</li>
	<li>Met behulp van een kneuzingen apparaat zoals een oneindige horizon botslichaam29, de kneuzingen uitvoeren (voor een matige tot ernstige mate van SCI, gebruik een kracht van 210 kdyn met geen Nadruktijd)18.</li>
	<li>Suture samen de gespierde laag en fascia in het ruggenmerg met behulp van de 4-0 diameter monofilamenten en sluit de huid met 9 mm chirurgische wond clips.</li>
	<li>Beheren van postoperatieve drugs, zoals gentamicine sulfaat (5 mg/kg per dag gedurende 5 dagen; antibioticum te vermijden blaasontsteking) en meloxicam (1 mg/kg subcutaan, pijnstiller voor de eerste 48 uur en vervolgens als nodig).</li>
	<li>Dieren in een schone kooi op een verwarming pad plaatsen. Controleer dierlijke vital signs elke 15 minuten totdat ze volledig wakker uit de narcose.  Tijdens de eerste dag van de postoperatieve, de dieren worden aangemoedigd om te eten met een zoete traktatie. Gedurende de eerste 48 uur (driemaal per dag op het tijdstip van handmatige crede - zie 2.10), ratten op inactiviteit, vocalisatie in reactie op de behandeling, en het ontbreken van verlangen om te eten en drinken worden gecontroleerd.  Als analgesie toereikend is gevonden, is het veterinaire personeel gecontacteerd. Gedurende de eerste twee weken durende herstelfase geeft worden de dieren geobserveerd voor bewijs van infectie of andere complicaties. Eenmaal reflex leren rendement, de dieren zijn doorgaans twee keer per dag (vroege ochtend en late namiddag). Dieren met infecties of significant gewichtsverlies zijn onmiddellijk euthanized. Met betrekking tot de inname van voedsel en water, de cut off point voor euthanasie is wanneer het dier heeft bereikt iets meer dan 20% verlies van het gewicht. Normale gewichtsverlies na chirurgie en onbruik atrofie van de spieren onder het niveau van het letsel is 15-20%. Alle dieren worden ten minste eenmaal per week gewogen.</li>
	<li>Blaas legen met behulp van de handmatige Credé manoeuvre 3 keer per dag (8 uur, 3 uur, 10 pm) procedures uitvoeren totdat reflexieve blaas functie is teruggekeerd (3-6 dagen gemiddeld voor kneuzingen)26,30.</li>
</ol>3. de trainingsfase
<ol><li>LT niet eerder dan twee weken bericht-SCI, zoals initiatiefnemende interventies te vroeg secundaire schade cascades31 verergeren kunnenbeginnen.</li>
	<li>Week 1 acclimatisatie aan loopband opleiding: het vervoer van de ratten aan een stille ruimte die is gereserveerd voor de opleiding.</li>
	<li>Op dag 1, willekeurig en gelijkmatig verdelen de SCI dieren in opgeleid en niet-opgeleide controlegroepen, ter verantwoording voor potentiële variabiliteit in zowel de schade zelf, alsmede de mate van spontaan herstel na kneuzingen. Bijvoorbeeld, ratten te verdelen in 4 aparte groepen: viervoetig opgeleide (QT), alleen-voorpoot opgeleide (FT), niet-opgeleide controle (NT) en niet-opgeleide kooi controle (HC). Een schijnvertoning groep waar dieren ontvangen een laminectomie maar geen letsel en anders hetzelfde als de andere groepen worden behandeld kan ook worden gebruikt als een ongedeerd controlegroep zonder opleiding.</li>
	<li>Plaats van elk dier in de respectieve Tuigje (Figuur 1) en Fast harnassen aan het steunmechanisme dat lichaam gewicht boven de loopband via alligator clips die zijn vastgemaakt naar gewicht ondersteuning springs (Figuur 2 en figuur 3). Dit vereist het dier vast te stellen op een plek op de loopband, ervoor te zorgen dat ze gaan in de aangewezen voorwaartse richting en snelheid. Opmerking: Wegens de beperkingen van tijd en personeel voert de auteurs lab dagelijkse training in groepen van twaalf dieren, drie in elke deelverzameling groep.</li>
	<li>Start het proces van de acclimatisering na de eerder gepubliceerde protocol17. Beginnen acclimatisatie aan LT (begin van de week 3 post-SCI) met een geleidelijke loopband blootstelling regime, toegenomen van 10 min op dag 1 aan de volledige doelgroep van 58 min de eerste week (tabel 2). Meestal door dag 4 acclimatiseren de dieren goed aan de opleiding regime. Als een dier niet de voortgang op de derde dag van de acclimatisering toont, de tijd zou zijn verminderd en extra dagen toegevoegd op een meer geleidelijke helling-up (zelden).<ol>
<li>Als een dier tijdens de eerste dag of twee niet aan de opsluiting van de kabelboom en de loopband aanpassen doet, stoppen de trainingssessie, verwijderen uit het harnas, plaatst u het dier terug in zijn kooi en geef het twee traktaties te helpen versterken van de naleving van de toekomstige. De volgende dag, plaats het dier in het harnas en gewicht systeem opnieuw gedurende 10 minuten. Op de daaropvolgende dagen, in eerste instantie de duur uitbreiden door 20 min dan blijven stijgen de opleiding duur dagelijks om de volledige opleiding door dag 10.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Volg de gedetailleerde opleiding regime bepaald in tabel 2.<ol>
<li>Vanwege beperkte hind-limb gebruik na blessure vergt ratten in de QT-groep handmatige versoepeling voor juiste paw plaatsing terwijl intensivering op de loopband. Gebruik één vinger aan elke kant (meestal de derde cijfer) steun ter ondersteuning van de heup/taille. Wanneer het dier verdere bijstand vereist in de intensivering, deze dezelfde vinger gebruiken toe te passen druk boven de knie tot intensivering. Indien nodig, een aparte vinger (meestal het vijfde cijfer) gebruiken om te helpen de voet bij de intensivering. Opmerking: De hoeveelheid lichaam gewicht steun nodig varieert van dier tot dier en verandert naarmate de opleiding vordert. De steunregeling van het voorjaar geeft voldoende hulp om te houden van het dier geplaatst voor een juiste gang. Verdere steun is verleend zo nodig door de trainer per boven. Merk op dat een sleutelelement voor LT functioneel juiste paw plaatsing voor de intensivering is en interlimb van de coördinatie die wordt bevorderd door de trainer en is onafhankelijk van de steunregeling.</li>
		<li>Aanpassen voor de FT oefening groep, het lichaamssysteem voor het support van gewicht te licht verheffen de hind ledematen om ervoor te zorgen geen sensorische stimuli aan de poten en geen invloed van het gewicht gebeurt door contact met de loopband. Opmerking: De FT-groep dient als een oefening en metabole controle, vergelijkbaar met die van een hand-crank oefening in studies van de menselijke activiteit gebaseerde training.</li>
		<li>De NT-groep hebben ingezet en aangesloten op het lichaam gewicht support systeem op een soortgelijke manier als de QT en plaats de NT-groep in de buurt van de QT werkgroep datatransmissies met de toetsen (Figuur 2 en figuur 3). Opmerking: De NT-groep ontvangt geen activiteit en de besturingselementen voor de eventuele mogelijke gevolgen van het wordt ingezet voor een lange periode.</li>
		<li>Een groep van de kooi kan dienen als een extra controle. Vervoer van deze dieren naar de opleiding faciliteit als een extra stap voor deze groep.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dag 7 -10 na de start van LT, trainen elke dier eenmaal daags, elke dag tot de dag van beëindiging van de studie. Na elke dag van de opleiding, elk dier een zoete traktatie geven ter versterking van de compliance. Dagelijkse LT voort dieren na de 1U regime bepaald in tabel 2 voor de duur van de studie (b.v., 8-12 weken na te bootsen de geschatte 80 uur sessies die worden gedaan in klinische studies)9.</li>
</ol>4. euthanasie en weefsel collectie
<ol><li>Een dodelijke dosis van de verdoving toedienen aan het dier dat aan AVMA richtsnoeren inzake euthanasie voldoet.</li>
	<li>Wanneer het hart nog net klopt, onmiddellijk beginnen met het dier in een speciale zuurkast eerst zoogdierlevercellen met koude EDTA saline, gevolgd door koude, 4% paraformaldehyde-oplossing.<ol>
<li>Beginnen met behulp van chirurgische schaar te maken van een incisie over het middenrif, bloot de borstholte. Blijven te snijden door de ribbenkast rostrally aan beide zijden, het verwijderen van de ribbenkast. Steek de perfusie naald in het linkerventrikel van het hart en klem naald met hemostats en clip de juiste atrium.</li>
		<li>Met behulp van een perfusie pomp mechanisme, toestaan de koude heparinized zoutoplossing te stromen door de bloedvaatjes van het dier. Eenmaal duidelijk zoute voortvloeit uit het recht atrium, overschakelen naar de koude 4% paraformaldehyde oplossing, totdat het lichaam heeft verstijfd.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Nodige weefsel zoals de nieren, blaas, dikke darm, hersenen, zintuiglijke ganglia en ruggenmerg verwijderen en opslaan in 4% paraformaldehyde voor maximaal 48 uur bij 4 ° C. Na 24-48 h, weefsel te verhuizen naar 30% sucrose en bewaren bij 4 ° C.</li>
	<li>Verplaatsen verzamelde weefsel in een 30% sacharose/fosfaat gebufferde cryoprotectant oplossing totdat weefsel klaar voor het snijden is. Te snijden van weefsel, insluiten in een weefsel bevriezing omheind en snijd op een cryostaat op gewenste dikte afhankelijk van het soort weefsel gebruikt (bv, 35 µm voor hersenen en ruggenmerg weefsel, 5-7 µm voor orgel weefsels).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ahuja, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+spinal+cord+injury.">Traumatic spinal cord injury.</a> Nature Reviews Disease Primers. 3, 17018 (2017).</li><li>Behrman, A. L., Harkema, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+training+after+human+spinal+cord+injury:+a+series+of+case+studies.">Locomotor training after human spinal cord injury: a series of case studies.</a> Physical Therapy. 80 (7), 688-700 (2000).</li><li>Anderson, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+recovery:+priorities+of+the+spinal+cord-injured+population.">Targeting recovery: priorities of the spinal cord-injured population.</a> Journal of Neurotrauma. 21 (10), 1371-1383 (2004).</li><li>Steadman, C. J., Hubscher, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+function+after+spinal+cord+injury:+innervation,+assessment,+and+treatment.">Sexual function after spinal cord injury: innervation, assessment, and treatment.</a> Current Sexual Health Reports. 8 (2), 106-115 (2016).</li><li>Behrman, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+training+progression+and+outcomes+after+incomplete+spinal+cord+injury.">Locomotor training progression and outcomes after incomplete spinal cord injury.</a> Physical Therapy. 85 (12), 1356-1371 (2005).</li><li>Dietz, V., Harkema, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+in+spinal+cord-injured+persons.">Locomotor activity in spinal cord-injured persons.</a> Journal of Applied Physiology. 96 (5), 1954-1960 (2004).</li><li>Harkema, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+epidural+stimulation+of+the+lumbosacral+spinal+cord+on+voluntary+movement,+standing,+and+assisted+stepping+after+motor+complete+paraplegia:+a+case+study.">Effect of epidural stimulation of the lumbosacral spinal cord on voluntary movement, standing, and assisted stepping after motor complete paraplegia: a case study.</a> The Lancet. 377 (9781), 1938-1947 (2011).</li><li>Harkema, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+training:+as+a+treatment+of+spinal+cord+injury+and+in+the+progression+of+neurologic+rehabilitation.">Locomotor training: as a treatment of spinal cord injury and in the progression of neurologic rehabilitation.</a> Archives of physical medicine and rehabilitation. 93 (9), 1588-1597 (2012).</li><li>Jayaraman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+training+and+muscle+function+after+incomplete+spinal+cord+injury:+case+series.">Locomotor training and muscle function after incomplete spinal cord injury: case series.</a> The Journal of Spinal Cord Medicine. 31 (2), 185-193 (2008).</li><li>Behrman, A. L., Bowden, M. G., Nair, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplasticity+after+spinal+cord+injury+and+training:+an+emerging+paradigm+shift+in+rehabilitation+and+walking+recovery.">Neuroplasticity after spinal cord injury and training: an emerging paradigm shift in rehabilitation and walking recovery.</a> Physical Therapy. 86 (10), 1406-1425 (2006).</li><li>Edgerton, V. R., Tillakaratne, N. J., Bigbee, A. J., de Leon, R. D., Roy, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+the+spinal+neural+circuitry+after+injury.">Plasticity of the spinal neural circuitry after injury.</a> Annual Review of Neuroscience. 27, 145-167 (2004).</li><li>Barbeau, H., Rossignol, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+locomotion+after+chronic+spinalization+in+the+adult+cat.">Recovery of locomotion after chronic spinalization in the adult cat.</a> Brain Research. 412 (1), 84-95 (1987).</li><li>Lovely, R. G., Gregor, R., Roy, R., Edgerton, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+training+on+the+recovery+of+full-weight-bearing+stepping+in+the+adult+spinal+cat.">Effects of training on the recovery of full-weight-bearing stepping in the adult spinal cat.</a> Experimental Neurology. 92 (2), 421-435 (1986).</li><li>Multon, S., Franzen, R., Poirrier, A. -. L., Scholtes, F., Schoenen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+treadmill+training+on+motor+recovery+after+a+partial+spinal+cord+compression-injury+in+the+adult+rat.">The effect of treadmill training on motor recovery after a partial spinal cord compression-injury in the adult rat.</a> Journal of Neurotrauma. 20 (8), 699-706 (2003).</li><li>Moraud, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closed-loop+control+of+trunk+posture+improves+locomotion+through+the+regulation+of+leg+proprioceptive+feedback+after+spinal+cord+injury.">Closed-loop control of trunk posture improves locomotion through the regulation of leg proprioceptive feedback after spinal cord injury.</a> Scientific Reports. 8 (1), 76 (2018).</li><li>Hubscher, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+exercise+training+on+urinary+tract+function+after+spinal+cord+injury.">Effects of exercise training on urinary tract function after spinal cord injury.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 310 (11), F1258-F1268 (2016).</li><li>Ward, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+multi-system+functional+gains+via+task+specific+training+in+spinal+cord+injured+male+rats.">Novel multi-system functional gains via task specific training in spinal cord injured male rats.</a> Journal of Neurotrauma. 31 (9), 819-833 (2014).</li><li>Ward, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optically-induced+neuronal+activity+is+sufficient+to+promote+functional+motor+axon+regeneration+in+vivo.">Optically-induced neuronal activity is sufficient to promote functional motor axon regeneration in vivo.</a> PloS One. 11 (5), e0154243 (2016).</li><li>Edgerton, V. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retraining+the+injured+spinal+cord.">Retraining the injured spinal cord.</a> The Journal of physiology. 533 (1), 15-22 (2001).</li><li>Angeli, C. A., Edgerton, V. R., Gerasimenko, Y. P., Harkema, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altering+spinal+cord+excitability+enables+voluntary+movements+after+chronic+complete+paralysis+in+humans.">Altering spinal cord excitability enables voluntary movements after chronic complete paralysis in humans.</a> Brain. 137 (5), 1394-1409 (2014).</li><li>Behrman, A. L., Ardolino, E. M., Harkema, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-Based+Therapy:+From+basic+science+to+clinical+application+for+recovery+after+spinal+cord+injury.">Activity-Based Therapy: From basic science to clinical application for recovery after spinal cord injury.</a> Journal of Neurologic Physical Therapy. 41, S39-S45 (2017).</li><li>Hubscher, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+in+bladder,+bowel+and+sexual+outcomes+following+task-specific+locomotor+training+in+human+spinal+cord+injury.">Improvements in bladder, bowel and sexual outcomes following task-specific locomotor training in human spinal cord injury.</a> PloS One. 13 (1), e0190998 (2018).</li><li>Rejc, E., Angeli, C. A., Bryant, N., Harkema, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+stand+and+step+training+with+epidural+stimulation+on+motor+function+for+standing+in+chronic+complete+paraplegics.">Effects of stand and step training with epidural stimulation on motor function for standing in chronic complete paraplegics.</a> Journal of Neurotrauma. 34 (9), 1787-1802 (2017).</li><li>Hall, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+injuries+containing+asymmetrical+damage+in+the+ventrolateral+funiculus+is+associated+with+a+higher+incidence+of+at-level+allodynia.">Spinal cord injuries containing asymmetrical damage in the ventrolateral funiculus is associated with a higher incidence of at-level allodynia.</a> The Journal of Pain. 11 (9), 864-875 (2010).</li><li>Hubscher, C. H., Johnson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acute+and+chronic+midthoracic+spinal+cord+injury+on+neural+circuits+for+male+sexual+function.+II.+Descending+pathways.">Effects of acute and chronic midthoracic spinal cord injury on neural circuits for male sexual function. II. Descending pathways.</a> Journal of Neurophysiology. 83 (5), 2508-2518 (2000).</li><li>Hubscher, C. H., Johnson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+spinal+cord+injury+induced+changes+in+the+responses+of+thalamic+neurons.">Chronic spinal cord injury induced changes in the responses of thalamic neurons.</a> Experimental Neurology. 197 (1), 177-188 (2006).</li><li>Ward, P. J., Hubscher, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+polyuria+in+a+rat+spinal+contusion+model.">Persistent polyuria in a rat spinal contusion model.</a> Journal of Neurotrauma. 29 (15), 2490-2498 (2012).</li><li>Scheff, S. W., Rabchevsky, A. G., Fugaccia, I., Main, J. A., Lumpp, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+modeling+of+spinal+cord+injury:+characterization+of+a+force-defined+injury+device.">Experimental modeling of spinal cord injury: characterization of a force-defined injury device.</a> Journal of Neurotrauma. 20 (2), 179-193 (2003).</li><li>Ferrero, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+lateral+funiculus+sparing,+spinal+lesion+level,+and+gender+on+recovery+of+bladder+voiding+reflexes+and+hematuria+in+rats.">Effects of lateral funiculus sparing, spinal lesion level, and gender on recovery of bladder voiding reflexes and hematuria in rats.</a> Journal of Neurotrauma. 32 (3), 200-208 (2015).</li><li>Smith, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swim+training+initiated+acutely+after+spinal+cord+injury+is+ineffective+and+induces+extravasation+in+and+around+the+epicenter.">Swim training initiated acutely after spinal cord injury is ineffective and induces extravasation in and around the epicenter.</a> Journal of Neurotrauma. 26 (7), 1017-1027 (2009).</li><li>Oelke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+approach+to+the+management+of+nocturia.">A practical approach to the management of nocturia.</a> International Journal of Clinical Practice. 71 (11), e13027 (2017).</li><li>Claydon, V., Steeves, J., Krassioukov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthostatic+hypotension+following+spinal+cord+injury:+understanding+clinical+pathophysiology.">Orthostatic hypotension following spinal cord injury: understanding clinical pathophysiology.</a> Spinal Cord. 44 (6), 341 (2006).</li><li>Antunes-Rodrigues, J., De Castro, M., Elias, L. L., Valenca, M. M., McCANN, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+control+of+body+fluid+metabolism.">Neuroendocrine control of body fluid metabolism.</a> Physiological Reviews. 84 (1), 169-208 (2004).</li><li>C&#244;t&#233;, M. -. P., Azzam, G. A., Lemay, M. A., Zhukareva, V., Houl&#233;, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+increase+in+neurotrophic+factors+is+associated+with+an+enhanced+modulation+of+spinal+reflexes+after+spinal+cord+injury.">Activity-dependent increase in neurotrophic factors is associated with an enhanced modulation of spinal reflexes after spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 28 (2), 299-309 (2011).</li><li>Dupont-Versteegden, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+gene+expression+in+soleus+muscle+is+dependent+on+time+after+spinal+cord+injury+in+rats.">Exercise-induced gene expression in soleus muscle is dependent on time after spinal cord injury in rats.</a> Muscle &amp; Nerve: Official Journal of the American Association of Electrodiagnostic Medicine. 29 (1), 73-81 (2004).</li><li>De Leon, R., Hodgson, J., Roy, R., Edgerton, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+weight-bearing+hindlimb+standing+following+stand+training+in+the+adult+spinal+cat.">Full weight-bearing hindlimb standing following stand training in the adult spinal cat.</a> Journal of Neurophysiology. 80 (1), 83-91 (1998).</li><li>Pearson, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress in brain research. 143, 123-129 (2004).</li><li>Gerasimenko, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feed-forwardness+of+spinal+networks+in+posture+and+locomotion.">Feed-forwardness of spinal networks in posture and locomotion.</a> The Neuroscientist. 23 (5), 441-453 (2017).</li><li>Courtine, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+nonfunctional+spinal+circuits+into+functional+states+after+the+loss+of+brain+input.">Transformation of nonfunctional spinal circuits into functional states after the loss of brain input.</a> Nature Neuroscience. 12 (10), 1333 (2009).</li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Onze methoden van ABT op ratten na SCI een nieuwe therapeutische interventie is. Terwijl andere methoden van oefening en stap training in diermodellen35,bestaat bootst36,,37, deze methode LT klinisch uitgevoerd in de menselijke populatie van SCI, waar we hebben gezien van veelbelovende resultaten23. Met de combinatie van onze instelling, regime en gebruik van controledieren, zal de resultaten met behulp van onze opleiding paradigma helpen om te begrijpen van de voordelen van ABT nadat SCI. toekomst toepassingen van dit protocol omvatten observeren van de beschreven resultaten van ABT op verschillende opleiding termijnen, alsmede het effect dat ABT op het herstel van verschillende niveaus en afmetingen van letsel heeft.
Een beperking van dit ontwerp is de lengte van tijd voor dergelijke experimenten. Gezien het feit dat onze opleiding regime voor elk dier 1 uur per dag, elke dag 10 weken, vereist is aanzienlijke personeel tijd en een georganiseerde schema een noodzaak. Een belangrijk aspect dat speciale aandacht vereist omvat de FT-groep, die beschikt over unieke tuigen met haak-en-loop materiële bandjes om de ledematen van hind boven de loopband voor de eliminatie van gewicht veilig te ondersteunen. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat het dier geen gewicht ondersteuning, heeft daarom een platform is niet gepositioneerd onder de rat achterste poten ontvangt. Daarnaast, zoals vorige studies hebben aangegeven dat de sensorische input een belangrijkste bestuurder van het bewegingsstelsel plasticiteit in het ruggenmerg38,39,40 is, is er een constante behoefte aan behandeling van de QT-groep om te helpen met intensivering op dezelfde manier als fysiotherapeuten in de klinische setting.
Een belangrijke wijziging aangebracht aan het systeem van de verkrijgbare loopband gebruikt voor de dieren werd de polariteit omkeren. Na het blootstellen van de motor, waren de positieve en negatieve draden overgestapt die keert de richting die de loopband wordt verplaatst. Dit zorgt voor meer ruimte en gemakkelijker toegang te bereiken en te helpen bij het trainen van de dieren (het systeem is voorzien van een raster van de schok aan het ene uiteinde dat is ontworpen om te voorkomen dat niet-benut, spinally intact dieren stap uit de tredmolen gordel).

Wereldwijd, tussen 250000-500.000 nieuwe dwarslaesie (SCI) gevallen zich voordoen hetzij als gevolg van degeneratie, ziekten, of de meeste vaak (tot 90%) trauma1. Na traumatische SCI, een aantal fysiologische gebeurtenissen plaatsvinden die resulteren in neurologische tekorten die allerlei lichaamsfuncties beïnvloeden. Als gevolg van de chronische tekorten die volgen SCI, is de ontwikkeling en het testen van effectieve behandeling modaliteiten van cruciaal belang. Tot voor kort, hebben rehabilitatie strategieën meestal gericht op herstel van mobiliteit2,3. Naar aanleiding van SCI rang patiënten blaas/urinewegen, darm en seksuele functies onder de hoogste levenskwaliteit complicaties behoefte aan beter beheer1,-4,5. Daarom is richt op blaas, darm en seksuele functie van het grootste belang van een revalidatie oogpunt1,4,5.
Lichaamsbeweging en motorische opleiding (LT) zijn vaak gebruikt rehabilitatie therapieën in de SCI populatie met vele voordelen zoals cardiovasculaire functie, blaas/urine functie en mobiliteit6,7,8 ,9,10. Het is om deze reden dat we gebruik maken van een soortgelijke modaliteit in onze pre-klinische rat SCI model. Het is ons doel om te bepalen welke effecten LT op SCI Wistar ratten, specifiek met betrekking tot zowel bovenste (nier) en lagere (blaas, externe urethrale sluitspier) urinaire tractus functie darmfunctie en seksuele functie heeft. Verder, LT is aangetoond dat voldoende in het activeren van de neuromusculaire systemen onder het niveau van de schade die invloed op de hoeveelheid plasticiteit binnen het centrale zenuwstelsel (CNS)11,12 hebben kan.
Het succes van LT in pre-klinische studies is goed gedocumenteerd in zowel grote13,14 en kleine15,16,17,18,19 SCI diermodellen. Bewijs suggereert dat afferent sensorische input geboden door LT voldoende is om het stimuleren van spinale reflex trajecten die in plasticiteit resulteren en verbeteringen aan zintuiglijke-motor functie9,20. LT voordelen met betrekking tot vitale functies niet goed gekenmerkt. Daarom voeren wij onze opleiding paradigma met een focus op autonome resultaat maatregelen, met behulp van vier verschillende groepen die twee niet-opgeleide besturingselementen bevatten en een metabole/oefening niet-gewicht bearing groep naast een LT-groep die de timing bootst, sessie duur, handmatige bijstand en ondersteuning van gewicht die worden gebruikt in klinische studies19,21,22,23,24.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Exer-3R treadmill</td>
			<td>Columbus Instruments</td>
			<td></td>
			<td>reversed polarity of the motor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Body weight support system</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>modified spring scales with alligator clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat harness</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Our harnesses are custom made; please refer to Figure 1 for visual.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infinite Horizon (IH) impactor device</td>
			<td>Precision Systems and Instrumentation</td>
			<td>Model 0400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine HCl</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-2053-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (AnaSed Injection)</td>
			<td>Akorn Animal Health</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Eloxiject)</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>NDC 116695-6925-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin Sulfate (GentaFuse)</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>NDC 11695-4146-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>urethane, 97%</td>
			<td>Argos Organics</td>
			<td>CAS 51-79-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 monofilament suture kit (4-0 Ethilon Nylon Suture)</td>
			<td>Ethicon, LLC</td>
			<td>205016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel suture clips (9mm Auto Clips)</td>
			<td>MikRon Precision, Inc.</td>
			<td>1629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Mastex Industries, Inc</td>
			<td>Model 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tootie Fruitys cereal</td>
			<td>Malt O Meal</td>
			<td></td>
			<td>For training reward</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Wistar rats</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 10 surgical scalpel blades</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>SKU: 4-110</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

activity-based training on a treadmill with spinal cord injured wistar rats

Dwarslaesie (SCI) resulteert in een blijvende tekorten die bestaan uit zowel mobiliteit en een veelheid van autonome-gerelateerde stoornissen. Locomotor opleiding (LT) op een loopband wordt veel gebruikt als een instrument van de revalidatie in de SCI bevolking met veel voordelen en verbeteringen voor het dagelijks leven. Wij gebruiken deze methode van activity based taak-specifieke training (ABT) bij knaagdieren na SCI naar beide ophelderen van de mechanismen achter deze verbeteringen en om te verbeteren en verbetering van de bestaande klinische revalidatie-protocollen. Onze huidige doel is om te bepalen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan de ABT-geïnduceerde verbeteringen in urine, darm en seksuele functie bij SCI ratten na een matige tot ernstige kneuzingen. Na het veiligstellen van ieder dier afzonderlijk in een op maat gemaakte verstelbare vest, worden ze beveiligd naar een veelzijdige lichaam gewicht steunmechanisme, verlaagd naar een gemodificeerde drie-baans loopband en bijgestaan in stap-opleiding voor 58 minuten, eenmaal per dag gedurende 10 weken. Deze opzet zorgt voor de opleiding van zowel viervoetig en dit is een alleen-voorpoot dieren, naast twee verschillende niet-opgeleide groepen. Viervoetig getrainde dieren met lichaam gewicht steun worden geholpen door een technicus aanwezig om te helpen bij de versterking met goede hind-limb plaatsing als nodig, terwijl dit is een alleen-voorpoot getrainde dieren worden gefokt caudal eind om ervoor te zorgen geen hind-limb-contact met de loopband en geen gewicht dragende. Een niet-opgeleide SCI groep dieren wordt geplaatst in een harnas en ligt naast de loopband, terwijl de andere SCI controlegroep in haar kooi in de kamer van de opleiding in de buurt blijft. Dit paradigma zorgt voor de opleiding van meerdere SCI dieren tegelijk, waardoor het meer tijd-efficiënte naast ervoor te zorgen dat onze pre-klinische diermodel de klinische vertegenwoordiging als bootst dicht mogelijk te maken, met name met betrekking tot het lichaam gewicht ondersteuning met handmatige bijstand.

Na deze opleiding protocol, het is gedocumenteerd dat uitsluitend de QT dieren superieur motorische functie aantonen wanneer vergeleken bij de andere groepen18. Echter, vanwege de aard van onze lab, onze primaire focus is te onderzoeken niet-motorische voordelen van activity based taak-specifieke training (ABT), met inbegrip van de blaas, darm en seksuele functie. Bijvoorbeeld, hebben we eerder gepubliceerde gegevens waarin LT resultaten in een oefening geïnduceerde vermindering van polyurie in zowel QT en FT groepen van SCI ratten (Figuur 4)17. Een schade-geïnduceerde afname transformeren groeifactor-β (TGF-β) expressie in de nier, indicatief voor een gewijzigde immuunrespons, werd ook niet gezien in QT en FT groepen, die had TGF-β peil dat gelijk was aan sham (geen schade) dieren. In de dezelfde studie17, werd wakker cystometry uitgevoerd voordat euthanasie en weefsel collectie. De maximale amplitude van de contracties van de blaas tijdens nietig cycli was niet significant verschillend in schijn, QT en FT groepen, terwijl NT-groepen bleef aanzienlijk veranderd. Samen, blijkt deze gegevens een positieve oefening uitkomst op gezondheids-, blaas- en nierfunctie, dus verbetering van urinaire functie na SCI.
De mechanismen die onderliggende polyurie binnen de SCI-bevolking is momenteel niet duidelijk maar is waarschijnlijk multi factoriële32. Sommige hebben hypothetische, bijvoorbeeld dat pooling van vloeistof in de onderste ledematen terwijl SCI individuen zijn in een rolstoel kunnen leiden tot vloeistof overload en verhoogde vloeistof eliminatie tijdens posturale verschuivingen (zoals het verplaatsen van zitten tot liegen)33. Een dergelijke verklaring niet in het bezit voor de pre-klinische model, die heeft geleid tot het in eerste instantie richten op arginine vasopressine (AVP), het hormoon dat de controles vloeistof homeostase in het lichaam en met oefening kan worden gedifferentieerd. AVP besturingselementen vloeistof homeostase door activering van de V2-receptor in de nieren die water resorptie van de renale verzamelen leidingen34vergemakkelijkt. Voorlopig bewijs van een proefproject (chronische tijd-point met één laesie Ernst - 210 kdyn effect kracht) geven een gunstig effect van oefening (LT en FT) op V2 receptor niveaus in de rat nier (Figuur 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58983/58983fig1.jpg"> Figuur 1: op maat gemaakte tuigen maat voor mannelijke Wistar ratten. Zowel NT als QT dieren worden geplaatst in hetzelfde type van de jas (A) rekening houdend met het gebruik van hind ledematen in het geval van QT dieren. Er zijn extra bandjes naaide op het harnas voor FT dieren (B) gebruikt om te doen opstaan de hind ledematen, geen lichaam gewicht steun te verzekeren. De grote materiële gedeelten van de haak-en-loop van de kabelboom toestaan voor gemakkelijke aanpassingen aan verschillende formaat dieren en aan eventuele wijzigingen in de grootte van een afzonderlijk dier na verloop van tijd. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58983/58983fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58983/58983fig2.jpg"> Figuur 2: opleiding van station setup. Lichaam gewicht steunmechanisme rondom de loopband voor NT (uiterst links), QT (midden) of FT (rechts) groepen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58983/58983fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58983/58983fig3.jpg"> Figuur 3: met dieren-trainingsstation. Top (A) en (B) Zijaanzichten tonen lichaamsgewicht ondersteuning mechanisme en de locatie van bijlage ondersteuning clips aan de harnassen. Merk op dat de achterste ledematen van de FT dier (B) wordt verhoogd en de gordel van de loopband uitgeschakeld. Inzet (C) portretteert een nauwere weergave van de clip bevestigd aan het harnas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58983/58983fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58983/58983fig4.jpg"> Figuur 4: ABT effecten op rat polyurie na SCI. Het totale volume van de urineproductie (A) verhoogd na SCI (*; p < 0,05) en weer dichter bij basislijn na 9 weken LT training in zowel QT en FT groepen bleef maar meer in de groep NT ten opzichte van de opgeleide groepen (#; p < 0,05). Alle groepen aangetoond verhoogde urineproductie in vergelijking met basislijn op 9 weken en nietig toenemen (B). Het is belangrijk op te merken dat het aantal vides (C) en de hoeveelheid water inname (D) hetzelfde van alle fracties gebleven. Waarden zijn middelen ± standaardafwijking. Dit cijfer wordt gepubliceerd met de auteur toestemming17. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58983/58983fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58983/58983fig5.jpg"> Figuur 5: ABT effecten op rat nier. Western blot resultaten voor rat nier niveaus van V2 receptoren in 5 groepen van 4 ratten elke (20 totaal), tonen expressie niveaus voor de eiwit-bands waarin paneel A en groep betekent densitometrie resultaten van de analyse van de bands (met behulp van ImageJ; OD = optische dichtheid) in deelvenster B, die aangeeft een significante (*; p < 0.05) afname van de receptoren bij een chronische tijd-punt (12 weken) post-SCI en geen daling ten opzichte van de basislijn (sham chirurgische controles) voor groepen ontvangen 10 weken één uur durende dagelijkse ABT. Foutbalken vertegenwoordigen standaardfout. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58983/58983fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="3">Ketamine/Xylazine dosis grafiek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Effectieve dosis:</td>
			<td colspan="4">Met behulp van 100 mg/mL ketamine voorraad en 20 mg/mL xylazine voorraad ***</td>
		</tr>
<tr>
<td>80 mg/kg ketamine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>10 mg/kg xylazine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">1,0 mL van het mengsel injectie = 0.62 mL ketamine voorraad (100 mg/mL) + 0.38 mL xylazine voorraad (20 mg/mL)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Dierlijke gewicht</td>
			<td colspan="2">Mengsel injectie</td>
			<td>Dierlijke gewicht</td>
			<td>Mengsel injectie</td>
		</tr>
<tr>
<td>(g)</td>
			<td>(mL)</td>
			<td></td>
			<td>(g)</td>
			<td>(mL)</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>0.13</td>
			<td></td>
			<td>275</td>
			<td>0.36</td>
		</tr>
<tr>
<td>105</td>
			<td>0.14</td>
			<td></td>
			<td>285</td>
			<td>0.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>110</td>
			<td>0.14</td>
			<td></td>
			<td>290</td>
			<td>0.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>115</td>
			<td>0,15</td>
			<td></td>
			<td>300</td>
			<td>0.39</td>
		</tr>
<tr>
<td>120</td>
			<td>0.16</td>
			<td></td>
			<td>305</td>
			<td>0.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>125</td>
			<td>0.16</td>
			<td></td>
			<td>310</td>
			<td>0.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>130</td>
			<td>0,17</td>
			<td></td>
			<td>315</td>
			<td>0,41</td>
		</tr>
<tr>
<td>135</td>
			<td>0.18</td>
			<td></td>
			<td>320</td>
			<td>0,42</td>
		</tr>
<tr>
<td>140</td>
			<td>0.18</td>
			<td></td>
			<td>325</td>
			<td>0,42</td>
		</tr>
<tr>
<td>145</td>
			<td>0.19</td>
			<td></td>
			<td>330</td>
			<td>0,43</td>
		</tr>
<tr>
<td>150</td>
			<td>0.2</td>
			<td></td>
			<td>335</td>
			<td>0.44</td>
		</tr>
<tr>
<td>155</td>
			<td>0.2</td>
			<td></td>
			<td>54v</td>
			<td>0.44</td>
		</tr>
<tr>
<td>160</td>
			<td>0.21</td>
			<td></td>
			<td>345</td>
			<td>0,45</td>
		</tr>
<tr>
<td>165</td>
			<td>0.21</td>
			<td></td>
			<td>350</td>
			<td>0,46</td>
		</tr>
<tr>
<td>170</td>
			<td>0.22</td>
			<td></td>
			<td>355</td>
			<td>0,46</td>
		</tr>
<tr>
<td>175</td>
			<td>0.23</td>
			<td></td>
			<td>360</td>
			<td>0.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>180</td>
			<td>0.23</td>
			<td></td>
			<td>365</td>
			<td>0.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>185</td>
			<td>0,24</td>
			<td></td>
			<td>370</td>
			<td>0,48</td>
		</tr>
<tr>
<td>190</td>
			<td>0,25</td>
			<td></td>
			<td>375</td>
			<td>0,49</td>
		</tr>
<tr>
<td>195</td>
			<td>0,25</td>
			<td></td>
			<td>380</td>
			<td>0,49</td>
		</tr>
<tr>
<td>200</td>
			<td>0.26</td>
			<td></td>
			<td>385</td>
			<td>0,5</td>
		</tr>
<tr>
<td>205</td>
			<td>0.27</td>
			<td></td>
			<td>390</td>
			<td>0.51</td>
		</tr>
<tr>
<td>210</td>
			<td>0.27</td>
			<td></td>
			<td>395</td>
			<td>0.51</td>
		</tr>
<tr>
<td>215</td>
			<td>0.28</td>
			<td></td>
			<td>400</td>
			<td>0.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>220</td>
			<td>0,29</td>
			<td></td>
			<td>410</td>
			<td>0,53</td>
		</tr>
<tr>
<td>225</td>
			<td>0,29</td>
			<td></td>
			<td>420</td>
			<td>0,55</td>
		</tr>
<tr>
<td>230</td>
			<td>0.3</td>
			<td></td>
			<td>430</td>
			<td>0,56</td>
		</tr>
<tr>
<td>235</td>
			<td>0.31</td>
			<td></td>
			<td>440</td>
			<td>0.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>240</td>
			<td>0.31</td>
			<td></td>
			<td>450</td>
			<td>0.59</td>
		</tr>
<tr>
<td>245</td>
			<td>0.32</td>
			<td></td>
			<td>460</td>
			<td>0.6</td>
		</tr>
<tr>
<td>250</td>
			<td>0,33</td>
			<td></td>
			<td>470</td>
			<td>0.61</td>
		</tr>
<tr>
<td>255</td>
			<td>0,33</td>
			<td></td>
			<td>480</td>
			<td>0.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>260</td>
			<td>0.34</td>
			<td></td>
			<td>490</td>
			<td>0.64</td>
		</tr>
<tr>
<td>265</td>
			<td>0.34</td>
			<td></td>
			<td>500</td>
			<td>0.65</td>
		</tr>
<tr>
<td>270</td>
			<td>0.35</td>
			<td></td>
			<td>510</td>
			<td>0,66</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Verdoving dosering grafiek op basis van het gewicht van het individuele dier.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Trainingstijd (min)</td>
			<td>Toerental (cm/s)</td>
			<td>Duur (min)</td>
		</tr>
<tr>
<td>0-1</td>
			<td>6</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>1-2</td>
			<td>8.4</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>2-3</td>
			<td>10,8</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>3-8</td>
			<td>13.2</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>8-13</td>
			<td>10,8</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>13-28</td>
			<td>13.2</td>
			<td>15</td>
		</tr>
<tr>
<td>28-33</td>
			<td>10,8</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>33-38</td>
			<td>6</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>38-43</td>
			<td>8.4</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>43-58</td>
			<td>13.2</td>
			<td>15</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 2: Opleiding regime van instellingen voor afspeelsnelheid die de loopband moet overeenkomen met de tijd doorgebracht bij elk toerental.

Watch this Scientific Journal Video about Activity-based Training on a Treadmill with Spinal Cord Injured Wistar Rats at JoVE.com

Activity-based Training on a Treadmill with Spinal Cord Injured Wistar Rats

Dit protocol toont ons model van activity based locomotor loopband training voor ratten met dwarslaesie (SCI). Inbegrepen is zowel viervoetig en dit is een alleen-voorpoot groepen, naast twee verschillende soorten niet-opgeleide controlegroepen. Onderzoekers kunnen beoordelen opleiding effecten op SCI ratten met behulp van dit protocol.

Activity-based Training op een loopband met ruggenmerg gewond Wistar ratten

Spinal cord injury (SCI) results in lasting deficits that include both mobility and a multitude of autonomic-related dysfunctions. Locomotor training (LT) ...

Oefening en motorische training worden vaak gebruikt in revalidatietherapieën in het ruggenmerg gewonde patiëntenpopulatie. Het belangrijkste voordeel van activity-based training is dat veel functionele voordelen zijn gedocumenteerd, zowel in preklinische dierstudies als in de klinische praktijk. Het aantonen van de procedure zal James Armstrong, en Christine Yarberry, zowel senior onderzoekstechnici, en Jason Gumbel, een afgestudeerde student van mijn laboratorium. Gedurende de week voor de dwarslaesie, behandelen elke rat gedurende vijf tot tien minuten, eenmaal per dag gedurende vijf dagen. Op de dag van de verwonding scheert u het haar van de rug van de eerste rat van 200 tot 225 gram op de plaats van de verwonding en plaatst u het verdoofde dier op een verwarmingskussen bij een lage stand. Toedienen oogsmeermiddel, een langwerkende algemeen antibioticum, een pijnstiller, en vijf milliliter fysiologische zoutoplossing. Schat de locatie van het beoogde laesieniveau, gebaseerd op de werveluitsteeksels, en gebruik een nummer 10 scalpel om een incisie van ongeveer vijf centimeter te maken op de dorsum van het dier, direct boven de middellijnwervels. Met behulp van hemostats, intrekken laterale spieren, met behulp van 4-0 zijde hechting. Voor midden thoracale kneuzingen, gebruik rongeurs om de overlaying T7 wervels lamina te verwijderen, om het T8-T9 niveau van het ruggenmerg bloot te stellen, en gebruik een kneuzingsapparaat om de kneuzingen uit te voeren. Na het leveren van de verwondingen, gebruik 4-0 diameter monofilamenten aan elkaar hechten de spier en fascia over het ruggenmerg. En sluit de huid met negen millimeter chirurgische wondclips. Injecteer nog eens vijf milliliter fysiologische zoutoplossing. Plaats de dieren vervolgens in individuele schone kooien, op verwarmingskussens met een nauwgezette bewaking gedurende de eerste 24-48 uur. Met behulp van de handleiding Cred

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Spinal Cord Elektrofysiologie II: Extracellulaire Suction Elektrode Fabrication

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Cultuur Protocol

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Spinal Cord doorsnijding in het larvale zebravis

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Een<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-induced Spinal Cord Injury Model Mechanismen van axonale degeneratie Beoordeel in real-time

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Een procedure voor het implanteren van een Spinal Kamer voor Longitudinaal<em&gt; In Vivo</em&gt; Beeldvorming van de Muis Spinal Cord

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Investigating Functional Regeneration in Organotypic Spinal Cord Co-cultures Grown on Multi-electrode Arrays

Onderzoek van functionele Regeneratie in Organotypische Spinal Cord Co-culturen Grown on Multi-elektrode arrays

Adult higher vertebrates have a limited potential to recover from spinal cord injury. Recently, evidence emerged that propriospinal connections are a ...

Experimental Strategies to Bridge Large Tissue Gaps in the Injured Spinal Cord after Acute and Chronic Lesion

Experimentele Strategieën om Grote Tissue Hiaten in de Gewonde Spinal Cord brug na Acute en chronische Letsel

After a spinal cord injury (SCI) a scar forms in the lesion core which hinders axonal regeneration. Bridging the site of injury after an insult to the ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging neurale activiteit in de primaire somatosensorische Cortex met behulp van Thy1-GCaMP6s transgene muizen

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

Implantatie van de laminectomie en het ruggenmerg in de muis

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Isolation of Adult Spinal Cord Nuclei for Massively Parallel Single-nucleus RNA Sequencing

Isolatie van volwassen ruggenmerg kernen voor Massively Parallel Single-nucleus RNA Sequencing

Probing an individual cell&#39;s gene expression enables the identification of cell type and cell state. Single-cell RNA sequencing has emerged as a ...