Name: human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

الكتاب ممتنون للدعم من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الصينية الوطنية (رقم 31600820)، وأن الصحة ولجنة تنظيم الأسرة لمقاطعة جيلين (لا 2016Q036)، والعلم والتكنولوجيا تخطيط المشروع من مقاطعة جيلين (رقم 20180520110JH).

هذا الإجراء أقرته "لجنة الأخلاقيات" في جامعة "مستشفى جيلين الأول" وأجرى على المواضيع 1,500 تقريبا.
1-الصبور الالتحاق وجمع عينات الدم
<ol><li>تطبيق الكشف عن معمل المصل مفتش AQP4 المضادة لعيادة المرضى مع رئيس الشكاوى والأعراض المذكورة أدناه. إجراء الفحوص البدنية كذلك. التهاب العص...

<ol>
	<li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance.">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li><li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro.">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).</li><li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders.">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li><li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li><li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica:+A+meta-analysis.">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li><li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay:+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica.">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li><li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service.">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).</li><li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica:+re-testing+study+in+a+large+population+from+China.">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li><li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica:+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity.">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185 (2013).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+testing:+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate.">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).</li><li>Jury&#324;czyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+CNS+inflammatory+diseases:+differentiating+features+of+NMO+and+MS.">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders.">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li><li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF:+Guidance+for+physicians.">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders:+frequency,+origin,+and+diagnostic+relevance.">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).</li><li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).</li><li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+an+international+update.">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+encephalomyelitis:+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing.">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).</li><li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody+disease:+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li><li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody-positive,+benign,+unilateral,+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy.">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).</li><li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab:+A+retrospective+study.">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).</li><li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+A+multicenter+cohort+study.">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li><li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica.">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li><li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan.">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li></ol>

لقد قمنا بوصف طريقة متاحة على نطاق واسع لكشف مفتش مكافحة AQP4 في مصل الدم البشري. مفتش مكافحة AQP4 يرتبط ارتباطاً وثيقا نموسد، وإنشاء أسلوب الكشف عن مفتش AQP4 المضادة موثوق بها أمر حاسم للتشخيص السريري نموسد. أولاً، مفتش مكافحة AQP4 محددة نموسد. التصلب المتعدد هو أيضا مرض المناعة بوساطة من الجهاز ?...

مفتش AQP4 المصل هو العلامات البيولوجية أساسية تشخيص المياليني البصري طيف اضطرابات (نموسد)1. تحليل يستند إلى الخلية (CBA) أسلوب الكشف عن مفتش AQP4 المضادة مستخدمة على نطاق واسع مع حساسية عالية وخصوصية. هنا، هو عرض بروتوكول مفصل لتحليل التكاليف والمنافع.
AQP4، بروتين قناة مياه، ست وحدات تمتد من الغشاء والمجالين حلزونية المحيطة واحد مائي المسامية2. مفتش مكافحة AQP4 تشارك في الآلية المرضية نموسد من خلال الربط إلى هدفها AQP4، التي تقع أساسا في اندفيت أستروسيتيس3. قد تبين أن مفتش مكافحة--AQP4 إيجابية في حوالي ثلثي المرضى نموسد4. في أحدث معايير التشخيص الدولي نموسد، يعتبر مفتش مكافحة AQP4 العلامات البيولوجية تشخيصية أساسية5. وفي هذا الصدد، من الأهمية بمكان وضع بروتوكول يمكن الاعتماد عليها لاكتشاف مصل الدم البشري مفتش مكافحة AQP4 وتيسير التشخيص السريري نموسد.
حاليا مختلف أساليب الكشف مفتش مكافحة AQP4 المتاحة، مثل المصرف المركزي والتحليل القائم على الأنسجة والمرتبط بالانزيم المرتبط بالانزيم والتدفق الخلوي6،7. وتوظف CBA EU90 الخلايا التي يتم transfected مع AQP4 البشرية، للقبض على مفتش مكافحة AQP4. مفتش مكافحة--AQP4 القبض على الكشف عنها بواسطة الأجسام المضادة الثانوية الفلورسنت وتصور بعد ذلك بالفحص المجهري. تتراكم الأدلة أظهرت أن المصرف المركزي أكثر حساسية وتحديداً من الأخرى المضادة AQP4 كشف مفتش أساليب6،7. ووفقا لتحليل تلوي، حساسية وخصوصية CBA قد تبين أن 76 في المائة و 99 في المائة، التي كانت أعلى من النسيج المستندة والمرتبط بالانزيم المرتبط فحوصات6. وعلاوة على ذلك، تمت مقارنة متعددة المراكز لفحوصات تشخيصية لمفتش مكافحة--AQP4 أجرى7. التحق ما مجموعة 193 دراسة المواضيع من مراكز التشخيص الأوروبية 157. واستخدمت أربعة أساليب مختلفة لكشف مفتش مكافحة AQP4 المصل7. وثبت أن المصرف المركزي كان أكثر حساسية وتحديداً من الأساليب الأخرى7. كما يتم التعبير عن AQP4 باثنين من isoforms الرئيسية (AQP4-M1 و AQP4-M23)، هو ترانسفيكتيد AQP4 المضادة مفتش القبض على خلية مع AQP4 M1 أو AQP4-M23. ومع ذلك، هو أي نوع من القبض على خلية أفضل ما زال مثيرا للجدل. ودعمت التحقيق واحد AQP4-M1 على أساس CBA8، بينما قد أشار آخرون إلى أن أساس AQP4-M23 CBA هو أفضل7،،من910. ومع ذلك، قد تسفر عن CBA AQP4-M23-تعتمد نتائج إيجابية كاذبة بسبب مفتش غير محدد ملزم8. Jarius et al. 11 أفادت بأنه لا يوجد اختلاف كبير في معدلات الكشف عن مفتش مكافحة AQP4 بين AQP4-M1 والتحرشات AQP4-M23-تعتمد.
في موجزة، الأمصال المضادة-AQP4 IgG هو العلامات البيولوجية أساسية نموسد. وقد CBA أعلى من خصوصية وحساسية من أساليب الكشف عن مفتش مكافحة AQP4 أخرى. ويبقى المثير للجدل عما إذا كان AQP4-M1-أو AQP4-M23-تعتمد CBA أفضل. في هذه المقالة، بروتوكول مفصل ل CBA AQP4-M1-تعتمد يرد، التي يمكن أن تنطبق على الدراسات نموسد والتشخيص السريري.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:185px;">Anti-aquaporin-4 IIFT</td>
			<td style="width:96px;">Euroimmun</td>
			<td style="width:105px;">FA 1128-2005-50</td>
			<td style="width:167px;">Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellSens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>photograph software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gel &#38; clot activator tube</td>
			<td>Improve medical</td>
			<td>623040202</td>
			<td>From a local Chinese company</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay

غلوبيولين مناعي المضادة-أكوابورين-4 (AQP4) ز (IgG) هو العلامات البيولوجية الأساسية التشخيصية لاضطرابات الطيف البصري المياليني (نموسد). تحليل يستند إلى الخلية (CBA) أسلوب مستخدمة على نطاق واسع لكشف مفتش مكافحة AQP4 في مصل الدم البشري مع حساسية عالية وخصوصية. بإيجاز، المصل مفتش مكافحة AQP4 يتم التقاطها بواسطة الخلية AQP4 transfected ثابتة على biochip ثم الكشف عنها بواسطة جسم ثانوي المسمى فلوريسسين. يستخدم مجهر الأسفار لتصور الأسفار، وشدة الأسفار يتم تقييمها من قبل اثنين على الأقل من الأطباء ذوي الخبرة. يمكن إجراء تشخيص نهائي من نموسد تقوم على المزيج من AQP4 المضادة IgG الكشف عن النتائج والمظاهر السريرية والنتائج نيوروراديولوجيكال. ووفقا للدراسات السابقة، CBA أكثر حساسية وتحديداً من أساليب الكشف عن مفتش مكافحة AQP4 أخرى، وأنه يمكن تطبيقها على كل من التشخيص السريري والدراسات المتعلقة نموسد. يحتوي الأسلوب على القيود؛ على سبيل المثال، لا تزال تفتقر إلى نطاق دولي لتقييم التتر مفتش مكافحة AQP4 المصل. ويرد هنا، بروتوكول مفصل لمصل الدم البشري AQP4 المضادة مفتش الكشف عن استخدام تحليل التكاليف والمنافع.

مفتش مكافحة محددة-AQP4 في مصل الدم باستخدام الإجراء الموضح هنا، قابلاً للاكتشاف. أثناء الإجراء، أضيفت العينات قبل المخفف وعنصر تحكم إيجابية وعنصر تحكم سلبية إلى حقول رد الفعل، التي تحتوي على مناطق ترانسفيكتيد وأونترانسفيكتيد (الشكل 2). أساسا إلى الأسفار ال...

Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

مصل الدم البشري المضادة-أقوابورين-4 غلوبيولين مناعي G الكشف بتحليل يستند إلى الخلية

تحليل يستند إلى الخلية أسلوب مستخدمة على نطاق واسع للكشف عن مصل الغلوبولين المناعي المضادة-أكوابورين-4 غ. ويمكن تطبيق هذا الأسلوب للتشخيص السريري والأبحاث العلمية من اضطرابات الطيف البصري المياليني.

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

وفقا للمعايير التشخيصية الدولية الأخيرة لاضطرابات الطيف التهاب النخاع العصبي، المضادة ل AQP4 IgG يعتبر أن تكون المؤشرات الحيوية التشخيصية الأساسية. يمكن أن يؤدي اكتشاف مضاد AQP4 IgG عن طريق الفحص القائم على الخلايا إلى تسهيل التشخيص السريري. لذلك، فإن الفحص القائم على الخلايا أكثر حساسية وتحديدا من أساليب الكشف الأخرى.ويمكن تطبيقه على كل من التشخيص السريري والدراسات العلمية. أولاً، إحضار عينات مصل المريض، شريحة الـ biochip، مسحوق PBS، و TWEEN 20 من عدة التشخيض المبردة القائمة على الخلايا إلى درجة حرارة الغرفة. ثم، وإعداد أكثر من 200 ملليلتر من برنامج تلفزيوني غسل العازلة التي تحتوي على 0.2 في المئة TWEEN 20 لكل شريحة رقاقة حيوية.استخدام المخزن المؤقت للغسيل لجعل 10 أضعاف التخفيفات التسلسلية لكل عينة مصل. إعداد ضوابط إيجابية وسلبية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. أضف 30 ميكرولترات من 10 أضعاف التخفيفات التسلسلية للعينة، والسيطرة الإيجابية، والسيطرة السلبية، إلى خمسة حقول رد فعل الفردية على علبة الكاشف.أمسك الشريحة الحيوية من خلال شرائحها وأزل غطاءها الواقي دون لمس حقول التفاعل الخاصة به. ضع الشريحة فوق الدرج الكاشف وحضن الإعداد في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. شطف بلطف الشريحة biochip مع العازلة غسل.ثم غمره في منقار 500 ملليلتر مملوء بـ 100 ملليلتر من مخزن الغسيل، واتركه عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. أخرج شريحة الـ biochip من مخزن الغسيل. استخدام منشفة ورقية لمسح بعناية بعيدا أي المخزن المؤقت المتبقية من خارج حقول رد الفعل.اترك الشريحة تجف لمدة دقيقة إلى دقيقتين. في الغرفة المظلمة، أضف 25 ميكرولترات من الأجسام المضادة الثانوية الفلورية لكل مجال تفاعل في علبة الكاشف. ضع الشريحة فوق الدرج الكاشف وحضن الإعداد في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.شطف بلطف الشريحة biochip مع العازلة غسل. ثم غمره في منبر 500 ملليلتر مملوء بـ 100 ملليلتر من عازل الغسيل الطازج، واتركه عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. أخرج شريحة الـ biochip من مخزن الغسيل.استخدام منشفة ورقية لمسح بعناية بعيدا أي المخزن المؤقت المتبقية من خارج حقول رد الفعل. اترك الشريحة تجف لمدة دقيقة إلى دقيقتين. إضافة بعناية قطرة واحدة من الوسط التضمين لكل حقل رد فعل على شريحة الـ biochip.وأخيراً، قم بختم الشريحة الحيوية بزجاج غطاء مع تجنب فقاعات الهواء والمضي قدماً في التصوير. تشير شدة الفلورس الضعيفة للرقابة السلبية التي لوحظت في المنطقة المصابة إلى الربط غير المحدد للجسم المضاد الثانوي. تشير المقارنة بين شدة الفلورس التي تم اكتشافها من المكافحة الإيجابية في المناطق المصابة وغير المصابة إلى الربط المحدد للIgG المضادة AQP4 إلى AQP4M1 في الخلايا المصابة.المصل السلبي المضاد AQP4 IgG يظهر أنماط ملزمة مماثلة للرقابة السلبية في كل من المناطق المصابة وغير المصابة. المصل الإيجابي يظهر أنماط ملزمة مماثلة للرقابة الإيجابية في كل من المناطق المصابة وغير المصابة. وتعتبر العينات المضادة AQP4 IgG إيجابية عندما الفلوريسانس غير متجانسة يزيد في المنطقة المصابة.وترتبط شدة الفلوريسنس إلى AQP4 Titer المضادة للجيل الرابع في المصل. وتعتبر العينات إيجابية على الأرجح عندما لا يظهر سوى عدد قليل من الخلايا في المنطقة المصابة كثافة الفلورس يمكن اكتشافها. وينبغي اعتبار العينة المضادة AQP4 IgG السلبية عندما تكون شدتها في المنطقة المصابة فقط بشكل متجانس أقوى مما كانت عليه في المنطقة غير المصابة.تجنب فقاعات الهواء أمر حيوي وصعب. للقضاء على فقاعات الهواء، استخدم أولا ماصة لتجنب فقاعات الهواء في قطرات. ثانياً، أثناء تطبيق الشريحة الحيوية على الدرج الكاشف، أولاً السماح لأحد جانبي الشريحة بلمس القطرات، ثم قم بتسوية الشريحة ببطء.بالإضافة إلى ذلك، لا تلمس حقول التفاعل طوال التجربة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

تحديد التفاعل وعيار من المصل باستخدام الفحص Haemagglutination

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

الكشف عن الفيروسات المعدية التي جمعت من الحقل عن طريق البعوض فيرو خلية الفحص الثقافة

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

باستخدام الماوس BLT إنساني وساق الموديل خلية مقرها جين ورم العلاج

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

تقييم الفطرية الاستشعار من HIV-1 CD4 المصابة<sup&gt; +</sup&gt; T الخلايا عن طريق الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل باستخدام<em&gt; خارج الحي</em&gt; المشارك ثقافة النظام.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

تقييم بتكوين لHIV-1 مغلف مثلوثي بروتينات سكرية باستخدام خلية القاعدة ELISA الفحص

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

قياس تدفق بسيط على أساس التحليل تحديد في المختبر جسم تعزيز التابعة لفيروس حمى الضنك باستخدام مصل فيروس Zika النقاهة

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

بروتوكول نفطة شفط لدراسة الخلية تي البشرية استدعاء الاستجابات في فيفو

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...