Name: human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Forfatterne er taknemmelig for støtten fra tilskud fra National Science Foundation of China (nr. 31600820), The sundhed og familieplanlægning Kommissionen i Jilin provinsen (Nej 2016Q036), og videnskab og teknologi planlægning projekt af Jilin provinsen (nr. 20180520110JH).

Denne procedure blev vedtaget af den etiske komité i det første Hospital i Jilin Universitet og blev udført på cirka 1.500 emner.
1. patienten tilmelding og blod prøve indsamling
<ol><li>Anvende laboratorium påvisning af serum anti-AQP4 IgG til klinikken patienter med chef klager og symptomer nedenfor. Udføre fysiske undersøgelser så godt. Synsnervebetændelse: patienter lider med visuelle underskud, såsom tab af visuelle felter og reduktion af synsskarphed. Akut myelitis...

<ol>
	<li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance.">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li><li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro.">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).</li><li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders.">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li><li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li><li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica:+A+meta-analysis.">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li><li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay:+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica.">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li><li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service.">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).</li><li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica:+re-testing+study+in+a+large+population+from+China.">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li><li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica:+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity.">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185 (2013).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+testing:+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate.">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).</li><li>Jury&#324;czyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+CNS+inflammatory+diseases:+differentiating+features+of+NMO+and+MS.">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders.">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li><li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF:+Guidance+for+physicians.">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders:+frequency,+origin,+and+diagnostic+relevance.">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).</li><li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).</li><li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+an+international+update.">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+encephalomyelitis:+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing.">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).</li><li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody+disease:+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li><li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody-positive,+benign,+unilateral,+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy.">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).</li><li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab:+A+retrospective+study.">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).</li><li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+A+multicenter+cohort+study.">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li><li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica.">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li><li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan.">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li></ol>

Vi har beskrevet et bredt tilgængelige metode til påvisning af anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG er nært beslægtet med NMOSD, og om oprettelse af en pålidelig anti-AQP4 IgG påvisningsmetode er afgørende for den kliniske diagnose af NMOSD. Første er anti-AQP4 IgG specifikke for NMOSD. Multipel sklerose er også en immun-medieret sygdom i centralnervesystemet og deler mange ligheder med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG er imidlertid kun positive i NMOSD13. Andet, anti...

Serum AQP4 IgG er en core diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser (NMOSD)1. Celle-baserede analysen (CBA) er en udbredt anti-AQP4 IgG påvisningsmetode med høj følsomhed og specificitet. Her, er en detaljeret protokol for CBA indført.
AQP4, en vand kanal protein, har seks membran-spænder enheder og to spiralformet domæner omkring en vandig pore2. Anti-AQP4 IgG er involveret i patogenesen af NMOSD gennem binding til sit mål AQP4, som er hovedsageligt placeret på endfeet af astrocytter3. Det har vist sig at anti-AQP4 IgG er positiv i cirka to tredjedele af NMOSD patienter4. I de seneste internationale diagnostiske kriterier for NMOSD, er anti-AQP4 IgG betragtes som et grundlæggende diagnostisk biomarkør5. I denne forbindelse, det er afgørende at etablere en pålidelig protokol for at opdage humant serum anti-AQP4 IgG og lette kliniske diagnose af NMOSD.
I øjeblikket er forskellige anti-AQP4 IgG påvisningsmetoderne tilgængelige, såsom CBA, væv-baserede assay, enzym-forbundet immunosorbent assay og flow flowcytometri6,7. CBA beskæftiger EU90 celler, som er transfekteret med menneskelige AQP4, til at fange anti-AQP4 IgG. Erobrede anti-AQP4 IgG er opdaget af fluorescerende sekundære antistoffer og efterfølgende visualiseret ved mikroskopi. Akkumulere beviser har vist, at CBA er mere følsom og specifik end andre anti-AQP4 IgG påvisning metoder6,7. Ifølge en meta-analyse, følsomhed og specificitet af CBA viste sig at være 76% og 99%, hvilket var højere end væv-baserede og enzym-forbundet immunosorbent undersøgelser vedrørende6. Derudover blev en multicenter sammenligning af diagnostiske assays af anti-AQP4 IgG gennemført7. Ialt 193 undersøgelse emner fra 15 europæiske diagnostiske Centre var tilmeldt7. Fire forskellige metoder blev udnyttet til at opdage serum anti-AQP4 IgG7. Det blev påvist, at CBA var mere følsom og specifik end andre metoder7. Som AQP4 er udtrykt som to store isoformer (AQP4-M1 og AQP4-M23), transfekteret anti-AQP4 IgG fange celle med enten AQP4-M1 eller AQP4-M23. Hvilken type af fange celle er imidlertid bedre resterne kontroversielle. En undersøgelse har støttet AQP4-M1 baseret CBA8, mens andre har anført, at AQP4-M23 baseret CBA er bedre7,9,10. Dog kan AQP4-M23-baserede CBA give falsk positive resultater på grund af uspecifik IgG bindende8. Jarius al.. 11 rapporterede, at der var ingen signifikant forskel i anti-AQP4 IgG opdagelse takster mellem AQP4-M1 og AQP4-M23-baseret CBAs.
I sammendrag, serum anti-AQP4 IgG er en core biomarkør for NMOSD. CBA har højere specificitet og sensitivitet end andre anti-AQP4 IgG detektionsmetoder. Det er fortsat kontroversielt, om AQP4-M1 - eller AQP4-M23-baserede CBA er bedre. I denne artikel, er en detaljeret protokol for AQP4-M1-baserede CBA beskrevet, som kan anvendes til klinisk diagnose og undersøgelser af NMOSD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:185px;">Anti-aquaporin-4 IIFT</td>
			<td style="width:96px;">Euroimmun</td>
			<td style="width:105px;">FA 1128-2005-50</td>
			<td style="width:167px;">Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellSens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>photograph software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gel &#38; clot activator tube</td>
			<td>Improve medical</td>
			<td>623040202</td>
			<td>From a local Chinese company</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) er den kerne diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser (NMOSD). Celle-baserede analysen (CBA) er en meget anvendt metode til at opdage anti-AQP4 IgG i humant serum med høj følsomhed og specificitet. Kort, serum anti-AQP4 IgG er fanget af AQP4-transfekteret celle, der er fastsat på biochip derefter fundet af en fluorescein-mærket sekundær antistof. Fluorescens mikroskopi er udnyttet til at visualisere fluorescens, og intensiteten af Fluorescens er evalueret af mindst to erfarne klinikere. En endelig diagnose af NMOSD kan gøres baseret på en kombination af anti-AQP4 IgG påvisning resultater, kliniske manifestationer og neuroradiological resultater. Ifølge tidligere undersøgelser, CBA er mere følsom og specifik end andre anti-AQP4 IgG påvisningsmetoder, og det kan anvendes til både klinisk diagnose og undersøgelser af NMOSD. Metoden har begrænsninger; for eksempel, mangler en international skala til at evaluere serum anti-AQP4 IgG titers stadig. Her, er en detaljeret protokol for humant serum anti-AQP4 IgG påvisning ved hjælp af CBA beskrevet.

Ved hjælp af den beskrevne procedure her, specifikke anti-AQP4 IgG serum kan detekteres. Under proceduren, blev forud fortyndede prøver, positiv kontrol og negativ kontrol føjet til felterne reaktion, som indeholder transfekteret og untransfected områder (figur 2). Fluorescens af den negative kontrol i et transfected område er primært angivet uspecifik bindingen af sekundær antistof mod de transfected celler på biochips (figur 3</...

Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

Humant Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G påvisning af celle-baseret analyse

Celle-baserede assay er en meget udbredt metode til at påvise serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. Denne metode kan anvendes til klinisk diagnose og videnskabelige undersøgelser af neuromyelitis optisk spektrum forstyrrelser.

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Ifølge de seneste internationale diagnostiske kriterier for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser, anti-AQP4 IgG anses for at være en kerne diagnostisk biomarkør. Anti-AQP4 IgG detektion ved celle-baseret analyse kan lette klinisk diagnose. Så celle-baseret analyse er mere følsomme og specifikke end andre detektionsmetoder.Og det kan anvendes til både klinisk diagnose og de videnskabelige undersøgelser. Først skal patientens serumprøver, biochipsliden, PBS-pulveret og TWEEN 20 fra det kølecellebaserede analysesæt bringes til rumtemperaturen. Derefter forberedes mere end 200 milliliter PBS vaskebuffer, der indeholder 0,2 procent TWEEN 20 for hver biochip dias.Brug vaskebufferen til at lave 10 gange serielle fortyndinger af hver serumprøve. Forbered positive og negative kontroller i henhold til producentens anvisninger. Der tilsættes 30 mikroliter af 10 gange så seriel fortyndinger af prøven, den positive kontrol og den negative kontrol til fem individuelle reaktionsfelter på reagensbakken.Hold biochipsliden ved hjælp af dens objektglas, og fjern beskyttelsesdækslet uden at røre ved reaktionsfelterne. Sæt slidset oven på reagensbakken og inkuber opsætningen ved stuetemperatur i 30 minutter. Skyl forsigtigt biochipsliden med vaskebufferen.Derefter nedsænkes det i en 500 milliliter bægerglas fyldt med 100 milliliter af vasken buffer, og lad det ved stuetemperatur i 10 minutter. Tag biochipsliden ud fra vaskebufferen. Brug en køkkenrulle til forsigtigt at tørre eventuelle resterende buffer fra uden for reaktionfelter.Lad glide lufttørre i et til to minutter. I det mørke rum tilsættes 25 mikroliter fluorescerende sekundært antistof til hvert reaktionsfelt i reagensbakken. Sæt slidset oven på reagensbakken og inkuber opsætningen ved stuetemperatur i 30 minutter.Skyl forsigtigt biochipsliden med vaskebufferen. Derefter nedsænkes det i en 500 milliliter bægerglas fyldt med 100 milliliter af den friske vask buffer, og lad det ved stuetemperatur i 10 minutter. Tag biochipsliden ud fra vaskebufferen.Brug en køkkenrulle til forsigtigt at tørre eventuelle resterende buffer fra uden for reaktionfelter. Lad glide lufttørre i et til to minutter. Tilføj forsigtigt en dråbe af indlejringsmediet til hvert reaktionsfelt på biochipsliden.Endelig forsegle biochip dias med et dæksel glas og samtidig undgå luftbobler og fortsætte med billeddannelse. Den svage fluorescensintensitet af den negative kontrol, der er observeret i det inficerede område, indikerer den uspecifikke binding af det sekundære antistof. Sammenligningen mellem de påviste fluorescensintensiteter for den positive kontrol i de inficerede og ikke-inficerede områder indikerer den specifikke binding af anti-AQP4 IgG til AQP4M1 i de inficerede celler.Den anti-AQP4 IgG negative serum viser bindende mønstre svarende til den negative kontrol i både inficerede og ikke-inficerede områder. Det positive serum viser bindingsmønstre svarende til den positive kontrol i både inficerede og ikke-inficerede områder. Prøver betragtes som anti-AQP4 IgG positiv, når fluorescens heterogent stiger i det inficerede område.Intensiteten af fluorescens er korreleret med anti-AQP4 IgG titer i serum. Prøver anses for sandsynligvis positive, når kun et lille antal celler i det transficerede område viser påviselige fluorescensintensiteter. En prøve bør betragtes som anti-AQP4 IgG negativ, når dens intensitet i det inficerede område kun er homogent stærkere end i det ikke-inficerede område.Undgå luftbobler er afgørende og vanskeligt. For at eliminere luftbobler skal du først bruge en pipette for at undgå luftbobler i dråber. For det andet, mens du anvender biochip dias til reagens bakken, lad først den ene side af diaset røre dråberne, og derefter niveau diaset langsomt.Rør desuden ikke ved reaktionsfelterne under hele eksperimentet.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Brug af BLT Humaniseret Mouse som en stamcelle baseret genterapi tumormodel

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cell-baserede Flowcytometri Assay til måling cytotoksisk aktivitet

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Vurdering af Innate Sensing af HIV-1 inficerede CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-celler ved plasmacytoide dendritiske celler ved hjælp af en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-dyrkningssystem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Konformationel Evaluering af HIV-1 trimere kappeglycoproteinerne hjælp af en celle-ELISA-assay

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

En simpel flowcytometri baseret analyse for at bestemme In Vitro antistof afhængig af forbedring af Dengue Virus ved hjælp af Zika Virus rekreationshjem Serum

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

En suge Blister protokol at studere Human T-celle hjemkalde svar In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...