Name: human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

De auteurs zijn dankbaar voor de steun van subsidies uit de National Science Foundation of China (nr. 31600820), de gezondheid en gezinsplanning Commissie van provincie Jilin (nr. 2016Q036), en de wetenschap en technologie Planning Project van provincie Jilin (nr. 20180520110JH).

Deze procedure werd goedgekeurd door de ethische commissie van de eerste ziekenhuis van Jilin Universiteit en werd uitgevoerd op ongeveer 1.500 onderwerpen.
1. de patiënt inschrijving en bloed monster collectie
<ol><li>De laboratorium-detectie van serum die anti-AQP4 IgG aan patiënten van de kliniek met de belangrijkste klachten en symptomen onderstaande van toepassing. Verricht lichamelijke onderzoeken ook. Optische neuritis: patiënten lijden met visuele tekorten, zoals verlies va...

<ol>
	<li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance.">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li><li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro.">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).</li><li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders.">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li><li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li><li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica:+A+meta-analysis.">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li><li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay:+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica.">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li><li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service.">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).</li><li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica:+re-testing+study+in+a+large+population+from+China.">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li><li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica:+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity.">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185 (2013).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+testing:+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate.">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).</li><li>Jury&#324;czyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+CNS+inflammatory+diseases:+differentiating+features+of+NMO+and+MS.">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders.">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li><li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF:+Guidance+for+physicians.">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders:+frequency,+origin,+and+diagnostic+relevance.">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).</li><li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).</li><li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+an+international+update.">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+encephalomyelitis:+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing.">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).</li><li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody+disease:+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li><li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody-positive,+benign,+unilateral,+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy.">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).</li><li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab:+A+retrospective+study.">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).</li><li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+A+multicenter+cohort+study.">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li><li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica.">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li><li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan.">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li></ol>

Wij hebben een breed toegankelijke methode voor het detecteren van anti-AQP4 IgG in menselijk serum beschreven. Anti-AQP4 IgG is nauw verwant aan NMOSD, en tot vaststelling van een betrouwbare anti-AQP4 IgG detectiemethode is cruciaal voor de klinische diagnose van NMOSD. Ten eerste, anti-AQP4 IgG is specifiek voor de NMOSD. Multiple sclerose is ook een immuun-gemedieerde ziekte van het centrale zenuwstelsel en deelt veel overeenkomsten met NMOSD12. Anti-AQP4 IgG is echter alleen positieve in NMOS...

Serum AQP4 IgG is een kern van diagnostische biomerker voor neuromyelitis optica spectrum stoornissen (NMOSD)1. De cel-gebaseerde bepaling (CBA) is een veel gebruikte anti-AQP4 IgG detectiemethode met hoge gevoeligheid en specificiteit. Hier, wordt een gedetailleerd protocol voor CBA ingevoerd.
AQP4, een water kanaal eiwit, heeft zes membraan-spanning eenheden en twee spiraalvormige domeinen rondom een waterige poriën2. Anti-AQP4 IgG is betrokken bij de pathogenese van NMOSD door middel van binding aan haar doelstelling van AQP4, die vooral op de endfeet van astrocyten3 ligt. Het is aangetoond dat anti-AQP4 IgG positief in ongeveer tweederde van de NMOSD patiënten4is. In de meest recente internationale diagnostische criteria voor NMOSD, anti-AQP4 IgG wordt beschouwd als een kern diagnostische biomerker5. Het is in dit verband van cruciaal belang om een betrouwbaar protocol voor het detecteren van menselijk serum anti-AQP4 IgG en vergemakkelijken klinische diagnose van NMOSD.
Momenteel zijn de verschillende anti-AQP4 IgG detectiemethoden beschikbaar, zoals CBA, weefsel gebaseerde assay, enzym-verbonden immunosorbent analyse en stroom cytometry6,7. CBA maakt gebruik van EU90 cellen, die zijn transfected met menselijke AQP4, om vast te leggen van de anti-AQP4 IgG. De vastgelegde anti-AQP4-IgG is ontdekt door fluorescente secundaire antilichamen en vervolgens gevisualiseerd door microscopie. Het vergaren van bewijsmateriaal blijkt dat CBA gevoeliger en specifieke dan andere anti-AQP4 IgG detectie methoden6,7. Volgens een meta-analyse, de gevoeligheid en specificiteit van CBA bleken te zijn 76% en 99%, die hoger dan het weefsel gebaseerde waren en enzyme-linked immunosorbent testen6. Bovendien was een multicenter vergelijking van diagnostische tests van anti-AQP4 IgG transiënte7. Een totaal van 193 studie onderwerpen uit 15 Europese diagnostische centra werden ingeschreven7. Vier verschillende methoden werden gebruikt om het detecteren van serum anti-AQP4 IgG7. Het bleek dat CBA gevoeliger en specifieke dan de andere methoden7 was. Als AQP4 wordt uitgedrukt in twee grote isoforms (AQP4-M1 en AQP4-M23), is anti-AQP4 IgG vangen cel met AQP4-M1 of AQP4-M23 transfected. Welk type van capture cel is echter beter blijft controversieel. Een onderzoek heeft steun verleend aan AQP4-M1 gebaseerde CBA8, terwijl anderen hebben aangegeven dat AQP4-M23 gebaseerd CBA is beter7,9,10. AQP4 M23-gebaseerde CBA kan echter vals-positieve resultaten als gevolg van aspecifieke IgG bindende8opleveren. Jarius et al.. 11 gemeld dat er geen significant verschil in anti-AQP4 IgG opsporingstarieven tussen AQP4-M1 en AQP4 M23-gebaseerde CBAs was.
In samenvatting, serum anti-AQP4 IgG is een kern biomerker voor NMOSD. CBA heeft een hogere gevoeligheid dan andere anti-AQP4 IgG detectiemethoden en specificiteit. Het blijft controversieel of AQP4-M1 - of AQP4-M23-gebaseerde CBA beter is. In dit artikel wordt wordt een gedetailleerd protocol voor AQP4-M1 gebaseerde CBA beschreven, die u op de klinische diagnose en onderzoek van NMOSD toepassen kunt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:185px;">Anti-aquaporin-4 IIFT</td>
			<td style="width:96px;">Euroimmun</td>
			<td style="width:105px;">FA 1128-2005-50</td>
			<td style="width:167px;">Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellSens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>photograph software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gel &#38; clot activator tube</td>
			<td>Improve medical</td>
			<td>623040202</td>
			<td>From a local Chinese company</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobuline G (IgG) is de kern van diagnostische biomerker voor neuromyelitis optica spectrum stoornissen (NMOSD). De cel-gebaseerde bepaling (CBA) is een veel gebruikte methode om anti-AQP4 IgG detecteren in menselijk serum met hoge gevoeligheid en specificiteit. Kort, serum anti-AQP4 IgG is gevangen genomen door AQP4-transfected cellen die gefixeerd op de biochip wordt gedetecteerd door een fluoresceïne-gelabeld secundair antilichaam. Fluorescentie microscopie is gebruikt om de fluorescentie te visualiseren, en de intensiteit van de fluorescentie is beoordeeld door ten minste twee ervaren clinici. Een definitieve diagnose van NMOSD kan worden gemaakt op basis van de combinatie van anti-AQP4 IgG detectie resultaten, Klinische manifestaties en neuroradiologische bevindingen. Volgens eerdere studies, CBA is gevoeliger en specifieke dan andere anti-AQP4 IgG detectiemethoden en het kan worden toegepast op zowel de klinische diagnose en de studies van NMOSD. De methode kent beperkingen; bijvoorbeeld, ontbreekt een internationale schaal te evalueren van serum anti-AQP4 IgG titers nog. Hier, wordt een gedetailleerd protocol voor menselijk serum anti-AQP4 IgG detectie met behulp van CBA beschreven.

Gebruik de procedure hier, is specifieke anti-AQP4 IgG in het serum aantoonbaar. Tijdens de procedure werden vooraf verdunde monsters, een positieve controle en een negatieve controle toegevoegd aan de reactie velden, waarin transfected en untransfected gebieden (Figuur 2). Fluorescentie van de negatieve controle op een transfected gebied aangegeven vooral de aspecifieke binding van secundair antilichaam transfected cellen op biochips (Fi...

Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

Menselijk Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G detectie van cel-gebaseerde Assay

Cel-gebaseerde bepaling is een veel gebruikte methode om te detecteren serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. Deze methode kan worden toegepast op de klinische diagnose en wetenschappelijk onderzoek van neuromyelitis optisch spectrum stoornissen.

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Volgens de recente internationale diagnostische criteria voor neuromyelitis optica spectrum stoornissen, anti-AQP4 IgG wordt beschouwd als een kern diagnostische biomarker. Anti-AQP4 IgG detectie door celgebaseerde test kan de klinische diagnose vergemakkelijken. De op cellen gebaseerde test is dus gevoeliger en specifieker dan andere detectiemethoden.En het kan worden toegepast op zowel klinische diagnose als de wetenschappelijke studies. Breng eerst de serummonsters van de patiënt, de biochipdia, het PBS-poeder en de TWEEN 20 van de gekoelde celgebaseerde testkit naar de kamertemperatuur. Bereid vervolgens meer dan 200 milliliter PBS-wasbuffer voor met 0,2 procent TWEEN 20 voor elke biochipdia.Gebruik de wasbuffer om 10-voudige seriële verdunningen van elk serummonster te maken. Bereid positieve en negatieve controles voor volgens de instructies van de fabrikant. Voeg 30 microliter 10-voudige seriële verdunningen van het monster, de positieve controle en de negatieve controle toe aan vijf afzonderlijke reactievelden op de reagenslade.Houd de biochipg door de dia's en verwijder de beschermhoes zonder de reactievelden aan te raken. Leg de schuif bovenop de reagenslade en broed de installatie 30 minuten op kamertemperatuur uit. Spoel de biochipguis voorzichtig af met de wasbuffer.Dan onderdompelen in een 500 milliliter bekerglas gevuld met 100 milliliter van de wasbuffer, en laat het op kamertemperatuur gedurende 10 minuten. Haal de biochipg van de wasbuffer eruit. Gebruik een papieren handdoek om de resterende buffer van buiten de reactievelden zorgvuldig weg te vegen.Laat de glijbaan één tot twee minuten luchtdrogen. Voeg in de donkere kamer 25 microliter fluorescerend secundair antilichaam toe aan elk reactieveld van de reagenslade. Leg de schuif bovenop de reagenslade en broed de installatie 30 minuten op kamertemperatuur uit.Spoel de biochipguis voorzichtig af met de wasbuffer. Dompel het vervolgens onder in een bekerglas van 500 milliliter gevuld met 100 milliliter van de verse wasbuffer en laat het 10 minuten op kamertemperatuur. Haal de biochipg van de wasbuffer eruit.Gebruik een papieren handdoek om de resterende buffer van buiten de reactievelden zorgvuldig weg te vegen. Laat de glijbaan één tot twee minuten luchtdrogen. Voeg voorzichtig een druppel van het inbeddingsmedium toe aan elk reactieveld op de biochipdia.Tot slot, verzegel de biochip glijbaan met een afdekglas terwijl het vermijden van luchtbellen en ga verder met beeldvorming. De zwakke fluorescentieintensiteit van de negatieve controle die in het besmette gebied wordt waargenomen, duidt op de niet-specifieke binding van het secundaire antilichaam. De vergelijking tussen de gedetecteerde fluorescentieintensiteiten van de positieve controle in de geïnfecteerde en niet-geïnfecteerde gebieden geeft de specifieke binding aan van de anti-AQP4 IgG aan AQP4M1 in de geïnfecteerde cellen.Het anti-AQP4 IgG negatieve serum vertoont bindende patronen die vergelijkbaar zijn met de negatieve controle in zowel geïnfecteerde als niet-geïnfecteerde gebieden. Het positieve serum vertoont bindende patronen die vergelijkbaar zijn met de positieve controle in zowel geïnfecteerde als niet-geïnfecteerde gebieden. Monsters worden beschouwd als anti-AQP4 IgG positief wanneer fluorescentie heterogeen toeneemt in het besmette gebied.De intensiteit van fluorescentie is gecorreleerd aan anti-AQP4 IgG titer in het serum. Monsters worden waarschijnlijk als positief beschouwd wanneer slechts een klein aantal cellen in het transfected gebied detecteerbare fluorescentieintensiteiten vertoont. Een monster moet als anti-AQP4 IgG-negatief worden beschouwd wanneer de intensiteit ervan in het besmette gebied slechts homogeen sterker is dan in het niet-besmette gebied.Het vermijden van luchtbellen is van vitaal belang en moeilijk. Om luchtbellen te elimineren, gebruik je eerst een pipet om luchtbellen in druppels te voorkomen. Ten tweede, terwijl het toepassen van de biochip schuif op de reagens lade, eerst laat een kant van de dia raken de druppels, en vervolgens het niveau van de dia langzaam.Raak bovendien de reactievelden tijdens het experiment niet aan.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Het bepalen van de reactiviteit en de titer van Serum met behulp van een hemagglutinatie Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinatie van Adhesive-tape-gebaseerde Sampling en fluorescentie In situ Hybridisatie voor snelle detectie van Salmonella Op Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Detectie van infectieus virus van Field-Muggen verzameld door Vero Cell Culture Assay

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Met behulp van de BLT Gehumaniseerd Muis als een Stem Cell gebaseerde Gene Therapy tumormodel

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Het beoordelen van de Aangeboren Sensing van HIV-1 geïnfecteerde CD4<sup&gt; +</sup&gt; T cellen door plasmacytoïde dendritische cellen gebruiken een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-cultuur systeem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Conformationele Evaluatie van HIV-1 Trimere envelop glycoproteïnen met een cel-gebaseerde ELISA test

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

Een eenvoudige Stroom Cytometry gebaseerd Assay om te bepalen In Vitro antilichaam afhankelijk verbetering van Dengue Virus met behulp van de herstellende Serum Zika-Virus

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Een zuig Blister-Protocol om menselijke T-cel Recall reacties In Vivo te studeren

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...