Name: human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00
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저자는 국립 과학 재단의 중국 (No. 31600820)는 건강 및 가족계획 위원회의 지린 (번호 2016Q036), 그리고 과학 기술 계획 프로젝트의 지린 (No.에서 보조금에서 지원에 대 한 감사 20180520110JH)입니다.

이 절차의 첫 번째 병원 길 림 대학 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 고 약 1500 과목에서 수행 되었다.
1. 환자 등록 및 혈액 샘플 컬렉션
<ol><li>아래 열거 된 수석 불만과 증상 병원 환자에 게 안티 AQP4 IgG 혈 청의 실험실 탐지를 적용 합니다. 또한 검 진을 수행 합니다. 광학 신경 염: 환자 시각 필드의 손실 및 시력의 감소와 같은 시각적인 적자와 고통을. 급성 척 수염: ...

<ol>
	<li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Ho, J. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+A+multicenter+cohort+study.">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li><li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica.">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li><li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan.">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li></ol>

우리는 안티-AQP4 IgG 인간의 혈 청에서 검출 하는 광범위 하 게 액세스할 수 방법을 설명 했습니다. 안티 AQP4 IgG는 밀접 하 게 관련이 NMOSD, 그리고 신뢰할 수 있는 안티-AQP4 IgG 탐지 방법을 구축 하는 것는 NMOSD의 임상 진단에 대 한 중요 한. 첫째, 안티-AQP4 IgG NMOSD에 대 한 특정 이다. 다 발성 경화 증 또한 중앙 신경의 면역 중재 하는 질병 이며, NMOSD12와 많은 유사점을 공유. 그러나, ?...

혈 청 AQP4 IgG neuromyelitis optica 스펙트럼 장애 (NMOSD)1코어 진단 바이오 마커 이다. 세포 기반 분석 결과 (CBA)은 높은 감도와 특이성 널리 안티-AQP4 IgG 감지 방법입니다. 여기, CBA에 대 한 상세한 프로토콜 소개 된다.
AQP4, 물 채널 단백질 막에 걸친 6 단위 있으며 수성 하나를 둘러싼 두 개의 헬리컬 도메인2기 공. 안티 AQP4 IgG를 대상 주로 이다3의 endfeet에 있는 AQP4 바인딩을 통해 NMOSD의 병 인에서 포함 된다. 그것은 안티-AQP4 IgG는 긍정적인 NMOSD 환자4의 약 2/3에 표시 되었습니다. NMOSD에 대 한 가장 최근의 국제 진단 기준, 안티-AQP4 IgG 코어 진단 바이오 마커5간주 됩니다. 이와 관련, 그것은 인간의 혈 청을 감지 하는 신뢰할 수 있는 프로토콜을 설정 하는 중요 한 안티-AQP4 IgG NMOSD의 임상 진단을 용이 하 게 하 고.
현재, 다양 한 안티-AQP4 IgG 탐지 방법 CBA, 조직 기반 분석 결과, 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과, 흐름 cytometry6,7등 사용할 수 있습니다. CBA 안티 AQP4 IgG를 잡으려고 인간의 AQP4와 페 EU90 셀을 사용 합니다. 캡처된 안티-AQP4 IgG 형광 이차 항 체에 의해 감지 하 고 이후에 현미경 검사 법에 의해 시각. 증거를 축적 하는 것은 CBA는 더 과민 하 고 다른 안티 AQP4 IgG 감지 방법6,7보다 구체적인 것을 보이고 있다. 메타 분석에 따르면 민감도 특이성 CBA의 76%와 99%, 조직 기반 보다 높은 표시 했다 하 고 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험6. 또한, 안티 AQP4 IgG의 진단 분석 실험의 되 비교가 했다 실시7. 15 유럽 진단 센터에서 과목은 193 연구 총 등록7. 4 가지 방법은 세럼 안티 AQP4 IgG7검색을 활용 했다. 그것은 CBA는 더 과민 하 고 특정 다른 방법7보다 시연 했다. AQP4 (AQP4-m 1과 AQP4-M23) 두 주요 isoforms로 표현 이다, 안티-AQP4 IgG 캡처 셀 AQP4 M1 또는 AQP4-M23 페입니다. 그러나, 어떤 유형의 캡처 셀 더 남아 논란입니다. 한 조사는 AQP4-M1 기반의 지원 CBA8, 다른 AQP4-M23 CBA를 기반으로 표명 하는 동안은 더 나은7,,910. 그러나, AQP4-M23 기반 CBA 난다 IgG 바인딩8거짓 긍정적인 결과 얻을 수 있습니다. Jarius 외입니다. 11 AQP4-m 1와 AQP4-M23 기반 CBAs 안티 AQP4 IgG 검출 률에 큰 차이 보도 했다.
요약, 세럼 안티-AQP4에 IgG는 NMOSD에 대 한 핵심 바이오 마커. CBA는 높은 특이성 및 다른 안티 AQP4 IgG 탐지 방법 보다 감도 있습니다. AQP4-M1-또는 AQP4-M23-CBA는 더 나은 여부 논란이 남아 있다. 이 문서에서는, CBA AQP4-M1-기반에 대 한 상세한 프로토콜 설명, 임상 진단 및 NMOSD의 연구에 적용할 수 있는 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:185px;">Anti-aquaporin-4 IIFT</td>
			<td style="width:96px;">Euroimmun</td>
			<td style="width:105px;">FA 1128-2005-50</td>
			<td style="width:167px;">Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellSens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>photograph software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gel &#38; clot activator tube</td>
			<td>Improve medical</td>
			<td>623040202</td>
			<td>From a local Chinese company</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay

안티-aquaporin-4 (AQP4) 면역 글로불린 G (IgG) neuromyelitis optica 스펙트럼 장애 (NMOSD)에 대 한 핵심 진단 바이오 마커 이다. 세포 기반 분석 결과 (CBA) 높은 감도와 특이성 인간 혈 청에 안티 AQP4 IgG를 감지 하는 널리 사용 되는 방법 이다. 간단히, 세럼 안티 AQP4 IgG AQP4 페 셀은 바이오 칩에 고정 후 fluorescein 붙인 이차 항 체에 의해 감지에 의해 캡처됩니다. 형광 현미경 검사 법은 형광, 시각화를 활용 하 고 형광의 강도 두 개 이상의 경험이 풍부한 임상에서 평가. NMOSD의 최종 진단 안티 AQP4 IgG 검출 결과, 임상 발현 및 neuroradiological 발견의 조합에 따라 만들 수 있습니다. 이전 연구에 따르면 CBA는 더 과민 하 고 특정 다른 안티 AQP4 IgG 탐지 방법 보다 그리고 임상 진단 및 NMOSD의 연구에 적용할 수 있습니다. 메서드는 제한; 예를 들어 세럼 안티 AQP4 IgG titers를 평가 하는 국제 규모는 여전히 부족 합니다. 여기, 인간 혈 청 안티 AQP4 IgG 감지 CBA를 사용 하 여 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

여기에 설명 된 절차를 사용 하 여, 혈 청 igg가 특정 안티-AQP4 감지입니다. 절차 동안, 미리 희석된 샘플, 긍정적인 통제 및 부정적인 제어 transfected untransfected 영역 (그림 2)를 포함 하는 반응 필드에 추가 되었습니다. Transfected 지역에 부정적인 컨트롤의 형광은 주로 봄에는 (그림 3)에 transfected 세포에 이차 항 체의 불특정 바인딩 ...

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Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

세포 기반 분석 결과 의해 인간의 혈 청 안티-aquaporin-4 면역 글로불린 G 검출

세포 기반 분석 결과 세럼 안티-aquaporin-4 면역 글로불린 g.를 검출 하기 위하여 널리 사용 방법은 이 메서드는 임상 진단 및 neuromyelitis 광학 스펙트럼 장애의 과학적 연구에 적용할 수 있습니다.

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

신경수염 광학 스펙트럼 장애에 대한 최근의 국제 진단 기준에 따르면, 안티 AQP4 IgG는 핵심 진단 바이오마커로 간주됩니다. 세포 기반 분석체에 의한 안티-AQP4 IgG 검출은 임상 진단을 용이하게 할 수 있다. 따라서 세포 기반 분석법은 다른 검출 방법보다 더 민감하고 특이적입니다.그리고 그것은 임상 진단과 과학적 연구 모두에 적용 될 수있다. 먼저, 냉장 된 세포 기반 분석 키트에서 환자의 혈청 샘플, 바이오 칩 슬라이드, PBS 분말 및 TWEEN 20을 실온으로 가져 온다. 그런 다음 각 바이오칩 슬라이드에 대해 0.2% TWEEN 20을 함유한 PBS 워시 버퍼 200밀리리터 이상을 준비합니다.워시 버퍼를 사용하여 각 혈청 샘플의 10배 연속 희석제를 만듭니다. 제조업체의 지침에 따라 양수 및 음수 컨트롤을 준비합니다. 시약 트레이의 5개의 개별 반응 필드에 시료, 양성 제어 및 음의 대조군의 10배 직렬 희석제 30마이크로리터를 추가합니다.슬라이드로 바이오칩 슬라이드를 잡고 반응 필드를 건드리지 않고 보호 커버를 제거합니다. 슬라이드를 시약 트레이 위에 놓고 실온에서 30 분 동안 설정을 배양하십시오. 세척 버퍼로 바이오칩 슬라이드를 부드럽게 헹구십시오.그런 다음 세척 버퍼의 100 밀리리터로 채워진 500 밀리리터 비커에 담그고 10 분 동안 실온에 둡니다. 세척 버퍼에서 바이오 칩 슬라이드를 꺼내. 종이 타월을 사용하여 반응 필드 외부에서 남은 버퍼를 조심스럽게 닦아냅니다.슬라이드를 1~2분 동안 공기 건조시키세요. 어두운 방에서, 시약 트레이의 각 반응 필드에 형광 이차 항체의 25 마이크로 리터를 추가합니다. 슬라이드를 시약 트레이 위에 놓고 실온에서 30 분 동안 설정을 배양하십시오.세척 버퍼로 바이오칩 슬라이드를 부드럽게 헹구십시오. 그런 다음 신선한 세척 버퍼 100 밀리리터로 채워진 500 밀리리터 비커에 담그고 10 분 동안 실온에 둡니다. 세척 버퍼에서 바이오 칩 슬라이드를 꺼내.종이 타월을 사용하여 반응 필드 외부에서 남은 버퍼를 조심스럽게 닦아냅니다. 슬라이드를 1~2분 동안 공기 건조시키세요. 생체 칩 슬라이드의 각 반응 필드에 포함 매체1 방울을 조심스럽게 추가하십시오.마지막으로, 공기 거품을 피하면서 커버 유리로 바이오 칩 슬라이드를 밀봉하고 이미징을 진행합니다. 감염된 부위에서 관찰되는 음수 대조군의 약한 형광 강도는 이차 항체의 특이하지 않은 결합을 나타낸다. 감염된 및 감염되지 않은 영역에서 양성 제어의 검출된 형광 강도 사이의 비교는 감염된 세포에서 AQP4 GG에 대한 항-AQP4 IgG의 특이적 결합을 나타낸다.항 AQP4 IgG 음성 혈청은 감염및 감염되지 않은 영역에서 음의 대조군과 유사한 결합 패턴을 보여줍니다. 양성 혈청은 감염된 부위와 감염되지 않은 영역에서 양성 대조군과 유사한 결합 패턴을 보여줍니다. 샘플은 감염된 지역에서 형광 이질이 증가할 때 안티-AQP4 IgG 양성으로 간주됩니다.형광의 강도는 혈청에서 안티 AQP4 IgG 티터와 상관 관계가 있습니다. 견본은 단지 전염된 지역에 있는 세포의 소수만이 검출가능한 형광 강도를 보여줄 때 아마 긍정적인 것으로 여겨질 것입니다. 샘플은 감염된 부위의 강도가 감염되지 않은 부위보다 균질적으로 더 강할 때 항 AQP4 IgG 음수로 간주되어야 합니다.기포를 피하는 것은 매우 중요하고 어렵습니다. 기포를 제거하려면 먼저 파이펫을 사용하여 물방울의 기포를 피하십시오. 둘째, 시약 트레이에 바이오칩 슬라이드를 적용하는 동안 먼저 슬라이드의 한쪽이 방울을 만지고 슬라이드를 천천히 평평하게 합니다.또한, 실험 전반에 걸쳐 반응 필드를 만지지 마십시오.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Haemagglutination 분석을 사용하여 혈청의 반응성 및 Titre를 결정

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

연구

면역학 및 감염병학

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서</em의 신속한 감지를 위해> 하이브 리다이 제이션 살모넬라균 신선한 농산물에 대한

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

베로 세포 배양 분석하여 필드 수집 모기에서 감염성 바이러스의 검출

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

줄기 세포 기반 유전자 치료 종양 모델로 BLT 인간화 마우스를 사용하여

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

HIV-1 감염 CD4의 타고난 감지 평가<sup&gt; +</sup&gt;를 사용하여 형질 수지상 세포에 의한 T 세포<em&gt; 예 생체 내</em&gt; 공동 문화 시스템.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

셀 기반의 ELISA 분석을 사용하여 HIV-1 삼량 봉투 당 단백질의 구조적 평가

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

간단한 Cytometry 결정 체 외에서 항 체 의존의 향상 뎅기열 바이러스 Zika 바이러스 미리 혈 청을 사용 하 여 분석 결과 기반으로

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...