Name: human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Forfatterne er takknemlig for støtten fra tilskudd fra National Science Foundation i Kina (nr. 31600820), The helse og familieplanlegging kommisjonen i provinsen Jilin (nei 2016Q036), og vitenskap og teknologi planlegging prosjektet i provinsen Jilin (nr. 20180520110JH).

Denne fremgangsmåten ble godkjent av den etiske komiteen ved første sykehuset i Jilin universitetet og ble utført på lag 1500 fag.
1. pasient innmelding og blod prøvetaking
<ol><li>Bruke laboratorium påvisning av serum anti-AQP4 IgG klinikk pasienter med sjef klager og symptomer nedenfor. Utføre fysiske undersøkelser også. Optisk nevritt: pasienter lider med visuelle underskudd, som tap av visuelle felt og reduksjon i synsskarphet. Akutt myelitis: pasienter kan presentere ...

<ol>
	<li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance.">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li><li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro.">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).</li><li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders.">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li><li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li><li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica:+A+meta-analysis.">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li><li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay:+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica.">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li><li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service.">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).</li><li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica:+re-testing+study+in+a+large+population+from+China.">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li><li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica:+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity.">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185 (2013).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+testing:+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate.">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).</li><li>Jury&#324;czyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+CNS+inflammatory+diseases:+differentiating+features+of+NMO+and+MS.">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders.">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li><li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF:+Guidance+for+physicians.">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders:+frequency,+origin,+and+diagnostic+relevance.">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).</li><li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).</li><li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+an+international+update.">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+encephalomyelitis:+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing.">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).</li><li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody+disease:+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li><li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody-positive,+benign,+unilateral,+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy.">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).</li><li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab:+A+retrospective+study.">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).</li><li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+A+multicenter+cohort+study.">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li><li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica.">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li><li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan.">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li></ol>

Vi har beskrevet en allment tilgjengelig metode for å oppdage anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG er nært knyttet til NMOSD, og etablere en pålitelig anti-AQP4 IgG gjenkjennings-metoden er avgjørende for den kliniske diagnosen NMOSD. Første er anti-AQP4 IgG spesifikke for NMOSD. Multippel sklerose er også en immun-mediert sykdom i sentralnervesystemet og deler mange likheter med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG er imidlertid bare positive i NMOSD13. Andre er anti-AQP4 I...

Serum AQP4 IgG er en kjerne diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum lidelser (NMOSD)1. Cellebasert analysen (CBA) er en mye brukt anti-AQP4 IgG gjenkjennings-metoden med høy sensitivitet og spesifisitet. Her er en detaljert protokoll for CBA innført.
AQP4, en vann kanal protein, har seks membran-spenner enheter og to spiralformede domener rundt en vandig pore2. Anti-AQP4 IgG er involvert i patogenesen av NMOSD gjennom binding til målet AQP4, som er hovedsakelig lokalisert på endfeet av astrocyttene3. Det har vist at anti-AQP4 IgG er positive i omtrent to tredjedeler av NMOSD pasienter4. I de siste internasjonale diagnostiske kriteriene for NMOSD anses anti-AQP4 IgG å være en kjerne diagnostiske biomarkør5. I denne forbindelse er det viktig å etablere en protokoll som er pålitelig for å oppdage humant serum anti-AQP4 IgG og tilrettelegge kliniske diagnosen NMOSD.
Foreløpig er ulike anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder tilgjengelige, for eksempel CBA, vev-basert analysen, enzym knyttet immunosorbent analysen og flyt cytometri6,7. CBA benytter EU90 celler, som er transfekterte med menneskelige AQP4, å fange anti-AQP4 IgG. Fanget anti-AQP4 IgG oppdages av fluorescerende sekundære antistoffer og senere visualisert ved mikroskopi. Samler bevis har vist at CBA er mer følsom og spesifikk enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenning metoder6,7. Ifølge en meta-analyse, sensitivitet og spesifisitet av CBA ble vist å være 76% og 99%, noe som var høyere enn vev-basert og enzym knyttet immunosorbent søk6. Videre var en multicenter sammenligning av diagnostiske analyser av anti-AQP4 IgG gjennomført7. Totalt 193 studien fag fra 15 europeiske diagnostiske sentre var registrert7. Fire forskjellige metoder ble benyttet for å oppdage serum anti-AQP4 IgG7. Det ble demonstrert at CBA var mer følsom og spesifikk enn de andre metoder7. Som AQP4 uttrykkes som to store isoformene (AQP4-M1 og AQP4-M23), anti-AQP4 IgG fange cellen er transfekterte med AQP4-M1 eller AQP4-M23. Hvilken type fange cellen er imidlertid bedre fortsatt kontroversielt. En undersøkelse har støttet AQP4-M1 basert CBA8, mens andre har indikert at AQP4-M23 basert CBA er bedre7,9,10. AQP4-M23-baserte CBA kan imidlertid gi falske positive resultater på grunn av uspesifikke IgG bindende8. Jarius et al. 11 rapporterte at det var ingen signifikant forskjell i anti-AQP4 IgG deteksjon priser mellom AQP4-M1 og AQP4-M23-baserte CBAs.
I sammendraget, serum anti-AQP4 IgG er en kjerne biomarkør for NMOSD. CBA har høyere spesifisitet og følsomhet enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder. Det er fortsatt kontroversielt om AQP4-M1 - eller AQP4-M23-baserte CBA er bedre. I denne artikkelen, er en detaljert protokoll for AQP4-M1-baserte CBA beskrevet, som kan gjelde for klinisk diagnose og studier av NMOSD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:185px;">Anti-aquaporin-4 IIFT</td>
			<td style="width:96px;">Euroimmun</td>
			<td style="width:105px;">FA 1128-2005-50</td>
			<td style="width:167px;">Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellSens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>photograph software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gel &#38; clot activator tube</td>
			<td>Improve medical</td>
			<td>623040202</td>
			<td>From a local Chinese company</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunglobulin G (IgG) er kjernen diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum lidelser (NMOSD). Cellebasert analysen (CBA) er en mye brukt til å oppdage anti-AQP4 IgG i humant serum med høy sensitivitet og spesifisitet. Kort, serum anti-AQP4 IgG fanges opp av AQP4-transfekterte cellen som er fast på biochip så oppdaget av et fluorescein-merkede sekundære antistoff. Fluorescens mikroskopi er benyttet for å visualisere fluorescensen og intensiteten av fluorescens vurderes ved minst to erfarne klinikere. NMOSD siste diagnosen kan gjøres basert på en kombinasjon av anti-AQP4 IgG søkeresultatene, kliniske manifestasjoner og neuroradiological funn. Ifølge tidligere studier CBA er mer følsom og spesifikk enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder, og det kan brukes til både klinisk diagnose og studier av NMOSD. Metoden har begrensninger; for eksempel mangler fortsatt internasjonal målestokk å evaluere serum anti-AQP4 IgG titers. Her er en detaljert protokoll for humant serum anti-AQP4 IgG oppdagelsen med CBA beskrevet.

Bruke fremgangsmåten som er beskrevet her, er bestemt anti-AQP4 IgG i serum synlig. Under inngrepet, ble pre fortynnede prøver, en positiv kontroll og en negativ kontroll lagt til feltene reaksjon, som inneholder transfekterte og untransfected områder (figur 2). Fluorescens for negative kontrollen i et transfekterte område angitt hovedsakelig uspesifikke binding av sekundær mot de transfekterte cellene i biochips (Figur 3). ...

Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

Humant Serum Anti-aquaporin-4 immunglobulin G oppdagelsen av cellen-basert analysen

Cellebasert analysen er en brukte metoden å oppdage serum anti-aquaporin-4 immunglobulin G. Denne metoden kan brukes til klinisk diagnose og vitenskapelige undersøkelser av neuromyelitis optisk spektrum lidelser.

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

I henhold til de siste internasjonale diagnostiske kriteriene for neuromyelitt optica spektrum lidelser, anti-AQP4 IgG anses å være en kjerne diagnostisk biomarkør. Anti-AQP4 IgG-deteksjon ved cellebasert analyse kan lette klinisk diagnose. Så, cellebasert analyse er mer følsom og spesifikk enn andre deteksjonsmetoder.Og det kan brukes på både klinisk diagnose og de vitenskapelige studiene. Ta først pasientens serumprøver, biochip-lysbildet, PBS-pulveret og TWEEN 20 fra det nedkjølte cellebaserte analysesettet til romtemperaturen. Deretter forbereder du mer enn 200 milliliter PBS-vaskebuffer som inneholder 0,2 prosent TWEEN 20 for hvert biochip-lysbilde.Bruk vaskebufferen til å lage 10 ganger seriell fortynning av hver serumprøve. Forbered positive og negative kontroller i henhold til produsentens instruksjoner. Tilsett 30 mikroliter med 10 ganger seriell fortynning av prøven, den positive kontrollen og den negative kontrollen, til fem individuelle reaksjonsfelt på reagensbrettet.Hold biochip lysbildet ved lysbildene og fjern beskyttelsesdekselet uten å berøre reaksjonsfeltene. Sett lysbildet oppå reagensbrettet og inkuber oppsettet ved romtemperatur i 30 minutter. Skyll biochiplysbildet forsiktig med vaskebufferen.Dypp den deretter i et 500 milliliter beger fylt med 100 milliliter vaskebuffer, og la det stå ved romtemperaturen i 10 minutter. Ta ut biochip-lysbildet fra vaskebufferen. Bruk et papirhåndkle til å tørke bort eventuell gjenværende buffer fra utsiden av reaksjonsfeltene.La lysbildet tørke i ett til to minutter. I det mørke rommet legger du til 25 mikroliter fluorescerende sekundært antistoff til hvert reaksjonsfelt i reagensbrettet. Sett lysbildet oppå reagensbrettet og inkuber oppsettet ved romtemperatur i 30 minutter.Skyll biochiplysbildet forsiktig med vaskebufferen. Dypp den deretter i et 500 milliliter beger fylt med 100 milliliter av den friske vaskebufferen, og la den stå ved romtemperaturen i 10 minutter. Ta ut biochip-lysbildet fra vaskebufferen.Bruk et papirhåndkle til å tørke bort eventuell gjenværende buffer fra utsiden av reaksjonsfeltene. La lysbildet tørke i ett til to minutter. Legg forsiktig til en dråpe av innebyggingsmediet til hvert reaksjonsfelt på biochip-lysbildet.Til slutt forsegler du biochip-sklien med et dekkglass samtidig som du unngår luftbobler og fortsetter med bildebehandling. Den svake fluorescensintensiteten til den negative kontrollen observert i det infiserte området indikerer den uspesifisiske bindingen av det sekundære antistoffet. Sammenligningen mellom de oppdagede fluorescensintensitetene til den positive kontrollen i de infiserte og uinfiserte områdene indikerer den spesifikke bindingen av anti-AQP4 IgG til AQP4M1 i de infiserte cellene.Anti-AQP4 IgG negativt serum viser bindende mønstre som ligner på den negative kontrollen i både infiserte og uinfiserte områder. Det positive serumet viser bindende mønstre som ligner på den positive kontrollen i både infiserte og uinfiserte områder. Prøver anses anti-AQP4 IgG positive når fluorescens heterogent øker i det infiserte området.Intensiteten av fluorescens er korrelert med anti-AQP4 IgG titer i serumet. Prøver anses sannsynligvis positive når bare et lite antall celler i det trans infiserte området viser påvisbare fluorescensintensiteter. En prøve bør betraktes som anti-AQP4 IgG negativ når intensiteten i det infiserte området bare er homogent sterkere enn i det uinfiserte området.Unngå luftbobler er viktig og vanskelig. For å eliminere luftbobler, bruk først en pipette for å unngå luftbobler i dråper. For det andre, mens du bruker biochip-lysbildet på reagensbrettet, la først den ene siden av lysbildet berøre dråpene, og deretter utjevne lysbildet sakte.I tillegg må du ikke berøre reaksjonsfeltene gjennom hele eksperimentet.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Bruke BLT humanisert Mouse som en stamcelle basert Gene Therapy Tumor Model

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Vurdere Medfødt Sensing av HIV-1 infiserte CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-celler ved Plasmacytoid dendrittiske celler ved hjelp av en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-kultursystem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Conformational Evaluering av HIV-1 Trimeric kappeglykoproteiner Ved hjelp av en Cell-basert ELISA-analysen

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

En enkel flowcytometri basert analyse for å fastslå In Vitro antistoff avhengige forbedring av Dengue Virus benytter Zika Virus rekonvalesent Serum

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

En suge blemme protokoll å studere Human T-celle tilbakekalling svar i Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...