Name: human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Yazarlar için destek hibe Ulusal Bilim Vakfı Çin (No. 31600820), sağlık ve Jilin Province, aile planlaması Komisyonu (Hayır 2016Q036) ve bilim ve teknoloji planlama projesi, Jilin eyaletinde (No dan minnettarız 20180520110JH).

Bu yordamı Jilin ilk hastane Üniversitesi Etik Komitesi tarafından kabul edildi ve yaklaşık 1500 konularda gerçekleştirildi.
1. hasta kayıt ve kan örnek koleksiyonu
<ol><li>Anti-AQP4 IgG Şef şikayet ve belirtiler klinik hastaları için aşağıda listelenen serum laboratuvar tespiti uygulanır. Fiziksel muayene de gerçekleştirmek. Optik nörite: hastaların acı kaybı visual alanlarının ve görme keskinliği azaltma gibi görsel açıkları ile. Akut miyelit: hasta...

<ol>
	<li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance.">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li><li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro.">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).</li><li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders.">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li><li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li><li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica:+A+meta-analysis.">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li><li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay:+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica.">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li><li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service.">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).</li><li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica:+re-testing+study+in+a+large+population+from+China.">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li><li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica:+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity.">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185 (2013).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+testing:+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate.">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).</li><li>Jury&#324;czyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+CNS+inflammatory+diseases:+differentiating+features+of+NMO+and+MS.">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders.">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li><li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF:+Guidance+for+physicians.">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders:+frequency,+origin,+and+diagnostic+relevance.">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).</li><li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).</li><li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+an+international+update.">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li><li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+encephalomyelitis:+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing.">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).</li><li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody+disease:+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder.">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li><li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOG+antibody-positive,+benign,+unilateral,+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy.">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).</li><li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab:+A+retrospective+study.">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).</li><li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder:+A+multicenter+cohort+study.">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li><li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders.">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica.">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li><li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan.">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li></ol>

Anti-AQP4 IgG insan serumu algılamak için yaygın olarak erişilebilir bir yöntemi anlatmıştık. Anti-AQP4 IgG NMOSD için yakından ilgilidir ve güvenilir anti-AQP4 IgG algılama yöntemi kurulması NMOSD klinik tanısı için çok önemlidir. İlk olarak, anti-AQP4 IgG NMOSD için özeldir. Multipl skleroz da bir immün aracılı hastalığı merkezi sinir sisteminin ve NMOSD12ile büyük benzerlikler paylaşmaktadır. Ancak, anti-AQP4 IgG sadece NMOSD13' te pozitif...

AQP4 serum IgG Nöromyelitis optica spektrum bozuklukları (NMOSD)1için bir çekirdek tanılama biyomarker olduğunu. Hücre tabanlı tahlil (CBA) yaygın olarak kullanılan anti-AQP4 IgG algılama yüksek duyarlılık ve özgüllük ile yöntemidir. Burada, CBA için detaylı bir protokol tanıttı.
AQP4, bir su kanalı protein altı membran kapsayan birimler bulunmaktadır ve sulu bir çevreleyen iki Helisel etki alanı2gözenek. Anti-AQP4 IgG NMOSD patogenezinde hedefine AQP4, esas olarak astrocytes3endfeet üzerinde bulunan bağlama ile ilgilenmektedir. Bu anti-AQP4 IgG yaklaşık üçte içinde NMOSD hastalar4olumlu gösterilmiştir. En son uluslararası tanı ölçütlerini içinde NMOSD, anti-AQP4 IgG göbek tanılama biyomarker5olarak kabul edilir. Bu bağlamda, insan serumu algılamak için güvenilir bir protokolü kurmak önemlidir anti-AQP4 IgG ve NMOSD klinik tanı kolaylaştırmak.
Şu anda, çeşitli anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri CBA, doku tabanlı tahlil, enzim bağlı immunosorbent assay ve Akış Sitometresi6,7gibi kullanılabilir. CBA anti-AQP4 IgG yakalamak için insan AQP4 ile transfected EU90 hücreleri kullanır. Yakalanan anti-AQP4 IgG floresan ikincil antikorlar tarafından algılanır ve daha sonra mikroskobu tarafından görüntülenmiştir. Kanıt biriken CBA daha hassas ve diğer anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri6,7' den belirli olduğunu göstermiştir. Bir meta-analiz göre duyarlılık ve özgüllük CBA % 76 ve doku tabanlı daha yüksekti % 99 olarak gösterildi ve enzim bağlı immunosorbent6deneyleri. Ayrıca, tanı testleri anti-AQP4 IgG kadınlarında karşılaştırılması yürütülen7yaşındaydım. Toplam 193 eğitim 15 Avrupa tanı merkezleri bir konu vardı7kayıtlı. Dört farklı yöntem serum anti-AQP4 IgG7algılamak için kullanılmıştır. CBA daha hassas ve belirli diğer yöntemleri7' den gösterilmiştir. AQP4 iki büyük izoformlarının (AQP4-M1 ve AQP4 M23) ifade edildiği gibi anti-AQP4 IgG yakalama hücre AQP4-M1 veya AQP4 M23 ile transfected. Ancak, yakalama hücre hangi tip daha iyi tartışmalı kalır. Bir soruşturma AQP4-M1 dayalı desteklenen iken diğerleri AQP4 M23 CBA dayalı belirttiler CBA8olduğunu, daha iyi7,9,10. Ancak, AQP4 M23 esaslı CBA yanlış pozitif belirsiz IgG bağlama8nedeniyle sonuçlar verebilir. Jarius ve ark. 11 AQP4-M1 ve AQP4 M23 esaslı CBAs arasında anlamlı bir fark anti-AQP4 IgG algılama oranları olduğunu bildirdi.
İçinde Özet, serum anti-AQP4 IgG NMOSD için bir çekirdek biyomarker olduğunu. CBA daha yüksek özgüllük ve diğer anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri daha duyarlılık vardır. AQP4-M1 veya AQP4 M23-tabanlı CBA iyidir tartışmalı kalır. Bu makalede, AQP4 M1-tabanlı CBA için detaylı bir protokol, klinik tanı ve NMOSD çalışmaları için uygulayabileceğiniz açıklanmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:185px;">Anti-aquaporin-4 IIFT</td>
			<td style="width:96px;">Euroimmun</td>
			<td style="width:105px;">FA 1128-2005-50</td>
			<td style="width:167px;">Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellSens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>photograph software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gel &#38; clot activator tube</td>
			<td>Improve medical</td>
			<td>623040202</td>
			<td>From a local Chinese company</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin g detection by cell-based assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immünoglobulin G (IgG) Nöromyelitis optica spektrum bozuklukları (NMOSD) için temel tanılama biyomarker olduğunu. Hücre tabanlı tahlil (CBA) yüksek duyarlılık ve özgüllük ile insan serumu anti-AQP4 IgG algılamak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Kısaca, serum Anti-AQP4 IgG biochip üzerinde sabit o zaman floresein etiketli bir ikincil antikor tarafından tespit AQP4 transfected hücre tarafından ele geçirdi. Floresans mikroskobu Floresans görselleştirmek için kullanılmaktadır ve floresan yoğunluğu en az iki deneyimli klinisyenler tarafından değerlendirilir. NMOSD son tanısı anti-AQP4 IgG algılama sonuçları, klinik bulgular ve neuroradiological bulgular kombinasyonuna göre yapılabilir. Önceki çalışmalara göre daha hassas ve diğer anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri daha belirli CBA ve klinik tanı ve NMOSD çalışmaları için uygulanabilir. Yöntemi sınırlamaları vardır; Örneğin, serum anti-AQP4 IgG titreleri değerlendirmek için uluslararası bir ölçüde hala eksik. Burada, insan serumu anti-AQP4 IgG algılama CBA için detaylı bir protokol açıklanmıştır.

Burada açıklanan yordamı kullanarak, belirli anti-AQP4 IgG Serumda saptanabilir. İşlem sırasında önceden seyreltilmiş örnekleri, olumlu bir kontrol ve bir negatif kontrol transfected ve untransfected alanları (Şekil 2) içeren reaksiyon alanları için eklenmiştir. Floresan transfected bir alanda olumsuz denetiminin esas olarak biochips (şekil 3) transfected hücrelerine ikincil antikor belirsiz bağlama belirtti. H...

Watch this Scientific Journal Video about Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay at JoVE.com

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

İnsan Serum Anti-aquaporin-4 immünoglobulin G algılama hücre tabanlı tahlil tarafından

Hücre tabanlı tahlil serum anti-aquaporin-4 immünglobulin G. algılamak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir Bu yöntem, klinik tanı ve Nöromyelitis optik spektrum bozuklukları, bilimsel araştırmalar için uygulanabilir.

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Nöromiyelit optik spektrum bozuklukları için son uluslararası tanı kriterlerine göre, anti-AQP4 IgG bir çekirdek tanı biyomarker olarak kabul edilir. Hücre bazlı test ile anti-AQP4 IgG tespiti klinik tanıyı kolaylaştırabilir. Yani, hücre tabanlı test daha hassas ve diğer algılama yöntemleri daha spesifiktir.Hem klinik tanıya hem de bilimsel çalışmalara uygulanabilir. İlk olarak, hastanın serum örneklerini, biyoçip slaytını, PBS tozunu ve tween 20'yi soğutulmuş hücre bazlı tahkikat kitini oda sıcaklığına getirin. Daha sonra, her biyoçip slayt için yüzde 0,2 TWEEN 20 içeren 200 mililitreden fazla PBS yıkama tamponu hazırlayın.Her serum örneğinin 10 kat seri seyreltmeyapmak için yıkama tamponu kullanın. Üreticinin talimatlarına göre olumlu ve negatif kontroller hazırlayın. Reaktif tepsisindeki beş ayrı reaksiyon alanına numunenin 10 kat seri seyreltmelerinin 30 mikrolitresini, pozitif kontrolü ve negatif kontrolü ekleyin.Biyoçip slaytını slaytlarının yanında tutun ve reaksiyon alanlarına dokunmadan koruyucu kapağını çıkarın. Slaydın reaktif tepsisinin üstüne koyun ve 30 dakika oda sıcaklığında kurulum kuluçkaya yatırın. Biochip slaytı yıkama tamponuyla hafifçe durulayın.Daha sonra yıkama tampon100 mililitre dolu bir 500 mililitre kabına batırın ve 10 dakika oda sıcaklığında bırakın. Yıkama tamponundan biyoçip kaydıraği çıkar. Reaksiyon alanlarının dışından kalan tamponları dikkatlice silmek için kağıt havlu kullanın.Slaytı 1-2 dakika kurutun. Karanlık odada, reaktif tepsisinin her reaksiyon alanına 25 mikrolitre floresan ikincil antikor ekleyin. Slaydın reaktif tepsisinin üstüne koyun ve 30 dakika oda sıcaklığında kurulum kuluçkaya yatırın.Biochip slaytı yıkama tamponuyla hafifçe durulayın. Daha sonra 100 mililitre taze yıkama tamponu yla dolu 500 mililitrelik bir kabın içine daldırın ve 10 dakika oda sıcaklığında bırakın. Yıkama tamponundan biyoçip kaydıraği çıkar.Reaksiyon alanlarının dışından kalan tamponları dikkatlice silmek için kağıt havlu kullanın. Slaytı 1-2 dakika kurutun. Biyoçip slaytındaki her reaksiyon alanına katıştırma ortamının bir damlasını dikkatlice ekleyin.Son olarak, hava kabarcıkları kaçınarak bir kapak camı ile biyoçip slayt mühür ve görüntüleme ile devam edin. Enfekte bölgede gözlenen negatif kontrolün zayıf floresan yoğunluğu ikincil antikor spesifik olmayan bağlanma gösterir. Enfekte ve enfekte olmayan bölgelerde pozitif kontrolün saptanan floresan yoğunlukları arasındaki karşılaştırma, enfekte hücrelerde anti-AQP4 IgG'nin AQP4M1'e özel bağlanmasını gösterir.Anti-AQP4 IgG negatif serum hem enfekte hem de enfekte olmayan bölgelerde negatif kontrol benzer bağlama desenleri gösterir. Pozitif serum hem enfekte hem de enfekte olmayan bölgelerde ki pozitif kontrole benzer bağlanma desenleri gösterir. Enfekte bölgede floresan heterojen olarak arttığında örnekler anti-AQP4 IgG pozitif olarak kabul edilir.Floresan yoğunluğu serumda anti-AQP4 IgG titretile ilişkilidir. Transfektasyon alanındaki hücrelerin sadece az sayıda tespit edilebilir floresan yoğunlukları gösterdiğinde örnekler muhtemelen pozitif olarak kabul edilir. Enfekte bölgedeki yoğunluğu enfekte olmayan alana göre sadece homojen olarak daha güçlü olduğunda bir örnek anti-AQP4 IgG negatif olarak kabul edilmelidir.Hava kabarcıkları kaçınmak hayati ve zordur. Hava kabarcıkları ortadan kaldırmak için, ilk damlacıkları hava kabarcıkları önlemek için bir pipet kullanın. İkinci olarak, biyoçip slaytını reaktif tepsisine uygularken, önce slaydın bir tarafının damlacıklara dokunmasına izin verin ve ardından slaydın yavaşça düzedeyim.Ayrıca, deney boyunca tepki alanlarına dokunmayın.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Hemaglütinasyon Testi kullanarak Reaktivite ve Serum Titre Belirlenmesi

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Yapışkan bant tabanlı Örnekleme ve Floresans kombinasyonu In situ</emHızlı Algılama> Hibridizasyon Salmonella Taze üretin

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Vero Hücre Kültür Testi ile Alan toplanan Sivrisinekler Enfeksiyon Virüs Algılama

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

HIV-1 Enfekte CD4 Doğuştan Algılama Değerlendirilmesi<sup&gt; +</sup&gt; Bir kullanılması plazmositoid dendritik hücreler tarafından T Hücreleri<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-kültür sistemi.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Bir Hücre temelli bir ELISA testi kullanarak, HIV-1 zarf trimerik Glikoproteinler konformasyonel Değerlendirilmesi

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

Basit Akış Sitometresi Vitro antikor bağımlı Enhancement-in dang virüs Zika virüs nekahat Serum kullanarak belirlemek için tahlil dayalı

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...