Name: a mouse model to assess innate immune response to staphylococcus aureus infection
Uploaded: 2019-02-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי נבחרת מוסדות של בריאות מענקים R01 AI129302 (כדי רפ), את תוכנית האימונים בפרמקולוגיה: מן הספסל אל מיטתה ב UC דייוויס (NIH T32 GM099608 אל L.S.A). מולקולרית של גנומית הדמיה (CMGI) ב אוניברסיטת קליפורניה דיוויס סיפק תמיכה טכנולוגית מעולה.

כל עכבר מחקרים נבחנו, אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים שימוש הוועדה ב- UC דיוויס, בוצעו בהתאם לקווים המנחים של חוק רווחת בעלי חיים, חוק הבריאות מחקר סיומת. הקפד להשתמש בכפפות סטריליות בעת עבודה עם בעלי חיים.
1. עכבר מקור ודיור
<ol><li>שואבים עכברים LysM-eGFP על רקע גנטי C57BL/6J כפי שת?...

<ol>
	<li>Moran, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methicillin-Resistant+S.+aureus+Infections+among+Patients+in+the+Emergency+Department.">Methicillin-Resistant S. aureus Infections among Patients in the Emergency Department.</a> New England Journal of Medicine. 355 (7), 666-674 (2009).</li><li>Suaya, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+cost+of+hospitalizations+associated+with+Staphylococcus+aureus+skin+and+soft+tissue+infections+in+the+United+States+from+2001+through+2009.">Incidence and cost of hospitalizations associated with Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections in the United States from 2001 through 2009.</a> BMC Infectious Diseases. 14 (1), 296 (2014).</li><li>Ventola, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibiotic+resistance+crisis:+part+1:+causes+and+threats.">The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats.</a> P &amp; T : a Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. 40 (4), 277-283 (2015).</li><li>Blaser, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+use+and+its+consequences+for+the+normal+microbiome.">Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome.</a> Science. 352 (6285), 544-545 (2016).</li><li>Hilliard, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-Alpha-Toxin+Monoclonal+Antibody+and+Antibiotic+Combination+Therapy+Improves+Disease+Outcome+and+Accelerates+Healing+in+a+Staphylococcus+aureus+Dermonecrosis+Model.">Anti-Alpha-Toxin Monoclonal Antibody and Antibiotic Combination Therapy Improves Disease Outcome and Accelerates Healing in a Staphylococcus aureus Dermonecrosis Model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (1), 299-309 (2015).</li><li>Proctor, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+for+Staphylococcus+aureus+vaccines:+clinical+and+basic+science+challenges.">Recent developments for Staphylococcus aureus vaccines: clinical and basic science challenges.</a> European Cells &amp; Materials. 30, 315-326 (2015).</li><li>M&#246;lne, L., Verdrengh, M., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neutrophil+Leukocytes+in+Cutaneous+Infection+Caused+by+Staphylococcus+aureus.">Role of Neutrophil Leukocytes in Cutaneous Infection Caused by Staphylococcus aureus.</a> Infection and Immunity. 68 (11), 6162-6167 (2000).</li><li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation.">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).</li><li>Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils,+from+Marrow+to+Microbes.">Neutrophils, from Marrow to Microbes.</a> Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).</li><li>Miller, L. S., Cho, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+against+Staphylococcus+aureus+cutaneous+infections.">Immunity against Staphylococcus aureus cutaneous infections.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (8), 505-518 (2011).</li><li>Hasenberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catchup:+a+mouse+model+for+imaging-based+tracking+and+modulation+of+neutrophil+granulocytes.">Catchup: a mouse model for imaging-based tracking and modulation of neutrophil granulocytes.</a> Nature Methods. 12 (5), 445-452 (2015).</li><li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages.">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li><li>Falahee, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;-Toxin+Regulates+Local+Granulocyte+Expansion+from+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells+in+Staphylococcus+aureus-Infected+Wounds.">&#945;-Toxin Regulates Local Granulocyte Expansion from Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Staphylococcus aureus-Infected Wounds.</a> Journal of immunology. 199 (5), 1772-1782 (2017).</li><li>Kim, M. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Neutrophil+Infiltration+during+Cutaneous+Wound+Healing+and+Infection+Using+Fluorescence+Imaging.">Dynamics of Neutrophil Infiltration during Cutaneous Wound Healing and Infection Using Fluorescence Imaging.</a> Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1812-1820 (2008).</li><li>Liese, J., Rooijakkers, S. H. M., Strijp, J. A. G., Novick, R. P., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+two-photon+microscopy+of+host-pathogen+interactions+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+skin+abscess+formation.">Intravital two-photon microscopy of host-pathogen interactions in a mouse model of Staphylococcus aureus skin abscess formation.</a> Cellular Microbiology. 15 (6), 891-909 (2013).</li><li>Bogoslowski, A., Butcher, E. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+recruited+through+high+endothelial+venules+of+the+lymph+nodes+via+PNAd+intercept+disseminating+Staphylococcus+aureus.">Neutrophils recruited through high endothelial venules of the lymph nodes via PNAd intercept disseminating Staphylococcus aureus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (10), 2449-2454 (2018).</li><li>Takeuchi, O., Hoshino, K., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+TLR2-Deficient+and+MyD88-Deficient+Mice+Are+Highly+Susceptible+to+Staphylococcus+aureus+Infection.">Cutting Edge: TLR2-Deficient and MyD88-Deficient Mice Are Highly Susceptible to Staphylococcus aureus Infection.</a> The Journal of Immunology. 165 (10), 5392-5396 (2000).</li><li>Miller, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+Mediates+Neutrophil+Recruitment+Initiated+by+IL-1R+but+Not+TLR2+Activation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus.">MyD88 Mediates Neutrophil Recruitment Initiated by IL-1R but Not TLR2 Activation in Immunity against Staphylococcus aureus.</a> Immunity. 24 (1), 79-91 (2006).</li><li>Macedo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+is+impaired+in+MyD88-deficient+mice:+a+role+for+MyD88+in+the+regulation+of+wound+healing+by+adenosine+A2A+receptors.">Wound healing is impaired in MyD88-deficient mice: a role for MyD88 in the regulation of wound healing by adenosine A2A receptors.</a> The American Journal of Pathology. 171 (6), 1774-1788 (2007).</li><li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+IL-1&#946;+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice.">Neutrophil-derived IL-1&#946; Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047 (2012).</li><li>Granick, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus+recognition+by+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+via+TLR2/MyD88/PGE2+stimulates+granulopoiesis+in+wounds.">Staphylococcus aureus recognition by hematopoietic stem and progenitor cells via TLR2/MyD88/PGE2 stimulates granulopoiesis in wounds.</a> Blood. 122 (10), 1770-1778 (2013).</li><li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+survival+and+c-kit+-progenitor+proliferation+in+Staphylococcus+aureus-infected+skin+wounds+promote+resolution.">Neutrophil survival and c-kit+-progenitor proliferation in Staphylococcus aureus-infected skin wounds promote resolution.</a> Blood. 117 (12), 3343-3352 (2011).</li><li>Foster, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+evasion+by+staphylococci.">Immune evasion by staphylococci.</a> Nature Reviews Microbiology. 3 (12), 948-958 (2005).</li><li>Gordon, R. J., Lowy, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Methicillin-Resistant+Staphylococcus+aureus+Infection.">Pathogenesis of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Infection.</a> Clinical Infectious Diseases. 46 (Supplement_5), S350-S359 (2008).</li><li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+IL-1&#946;+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice.">Neutrophil-derived IL-1&#946; Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047-e1003020 (2012).</li><li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+post-arthroplasty+Staphylococcus+aureus+joint+infection+to+evaluate+in+vivo+the+efficacy+of+antimicrobial+implant+coatings.">A mouse model of post-arthroplasty Staphylococcus aureus joint infection to evaluate in vivo the efficacy of antimicrobial implant coatings.</a> PLoS ONE. 5 (9), e12580 (2010).</li><li>Plaut, R. D., Mocca, C. P., Prabhakara, R., Merkel, T. J., Stibitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stably+Luminescent+Staphylococcus+aureus+Clinical+Strains+for+Use+in+Bioluminescent+Imaging.">Stably Luminescent Staphylococcus aureus Clinical Strains for Use in Bioluminescent Imaging.</a> PLoS ONE. 8 (3), e59232 (2013).</li><li>Dillen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonally+expanded+&#947;&#948;+T+cells+protect+against+Staphylococcus+aureus+skin+reinfection.">Clonally expanded &#947;&#948; T cells protect against Staphylococcus aureus skin reinfection.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 1026-1042 (2018).</li></ol>

S. aureus זיהום מודלים לנצל ביולומנאסן S. aureus זיהום ב עכבר כתב נויטרופילים פלורסנט בשילוב עם טכניקות מתקדמות של כל חיה דימות אופטי ויוו המתקדמת שלנו ידע מולד התגובה החיסונית לזיהום. מחקרים קודמים באמצעות העכבר LysM-EGFP הראו כי למעלה עונה 1 פרק 107 נויטרופילים לגייס כדי פצע מזוהם S. ...

Staphylococcus aureus (S . aureus) חשבונות עבור הרוב המכריע של העור וזיהומים רקמות רכות (SSTIs) ארצות הברית1. השכיחות של סטפילוקוקוס עמיד methicillin- S. aureus (MRSA) זיהומים גדל בהתמדה על העבר שני עשורים2, עידוד המחקר של המנגנונים של התמדה, הגילוי של אסטרטגיות טיפול חדשות. הטיפול לזיהומים MRSA הוא טיפול אנטיביוטי מערכתית, אבל MRSA הפכה יותר ויותר עמידים בפני אנטיביוטיקה במהלך הזמן3 , תרופות אלו יכולים להפחית microbiome מועיל של המחשב המארח, גרימת השפעות בריאותיות שליליות, בעיקר ילדים4. פרה מחקרים בחנו אסטרטגיות חלופיות לטיפול זיהומים MRSA5, אך בתרגום גישות אלה למרפאה הוכיח מאתגר בשל הופעתה של הגורמים התקפה אלימה לסכל מארח תגובות חיסוניות6. לנתח הדינמיקה פתוגן-מארח את הכונן SSTIs S. aureus , אנו משלבים לא פולשנית, המפרט האורך של המספר של נויטרופילים מגויס מיטת הפצע באמצעים קינטי השפע חיידקי פצע באזור.
הנויטרופילים הם ליקוציט במחזור הנפוץ ביותר בני האדם ואת המגיבים הראשונים זיהום חיידקי7. הנויטרופילים הם מרכיב הכרחי עבור מענה מארח יעיל נגד זיהומים S. aureus עקב מנגנונים אחרים שלהם, כולל הפקה של מינים חמצן תגובתי, פרוטאזות, פפטידים מיקרוביאלית ותגובות פונקציונלי לרבות phagocytosis נויטרופילים מלכודת חוץ-תאי ייצור8,9. בני אדם חולים עם פגמים גנטיים בתפקוד נויטרופילים, כגון מחלה גרגירומת ממושכת, תסמונת Chediak-היגאשי, מראים רגישות. מוגברת לזיהומים S. aureus . בנוסף, חולים עם גנטי (כגון נויטרופניה מולדים), שנרכש (כגון נויטרופניה לראות בחולים כימותרפיה) פגמים מספרים נויטרופילים הם גם רגישים מאוד S. aureus זיהום10. בהתחשב בחשיבות של נויטרופילים ב ניקוי S. aureus זיהומים, שיפור יכולת המערכת החיסונית שלהם או כוונון המספרים שלהם בתוך פצע S. aureus יוכיח אסטרטגיית יעיל בפתרון זיהום.
בעשור האחרון, העכברים הטרנסגניים עם כתבים נויטרופילים פלורסצנטיות פותחו ללמוד שלהם11,סחר12. שילוב כתב נויטרופילים עכברים עם כל החיות טכניקות הדמיה מאפשרת ניתוח זמן-מרחבי של נויטרופילים ב רקמות ואיברים. בשילוב עם זנים ביולומנאסן של S. aureus, ניתן לעקוב אחר ההצטברות של נויטרופילים בתגובה S. aureus שפע, התמדה בהקשר של התקפה אלימה חיידקי גורמים במישרין ובעקיפין perturb מספרים נויטרופילים הרקמה הנגועה13,14,15,16.
עכברים הם רגישים פחות התקפה אלימה S. aureus התחמקות מנגנוני החיסון מאשר בני אדם. ככזה, לא ייתכן פראי-סוג עכברים במודל חיה אידיאלי כדי לחקור את היעילות של בהתחשב טיפולית לטיפול כרוני S. aureus זיהום. MyD88 לקויה עכברים (קרי, MyD88- / - עכברים), זן העכבר immunocompromised חסר קולטן interleukin-1 תפקודית (IL-1R), אגרה דמוי קולטן (TLR) איתות, הצג רגישות גדולה יותר לזיהומים S. aureus בהשוואה פראי-סוג עכברים17 , ליקוי ב סחר נויטרופילים באתר של S. aureus זיהום העור18. התפתחות זן העכבר שמחזיק כתבת נויטרופילים פלורסנט בעכברים- / - MyD88 סיפקה מודל אלטרנטיבי לחקור את היעילות של טיפולים לטיפול זיהום S. aureus בהשוואה נויטרופילים הנוכחי כתב עכברים.
ב פרוטוקול זה, אנו מאפיינים את S. aureus זיהום בעכברים immunocompromised LysM-EGFP × MyD88- / - , להשוות את משך הזמן ואת הרזולוציה של זיהום עם העכברים LysM-EGFP. LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים לפתח דלקת כרונית אינה פותרת, 75% ללקות זיהום לאחר 8 ימים. פגם משמעותי בגיוס נויטרופילים הראשונית מתרחשת מעל 72 h בשלב דלקתיות של זיהום, 50% פחות נויטרופילים לגייס בשלב האחרון של זיהום. הרגישות מוגברת של × LysM-EGFP MyD88 עכברים- / - הופכת את המסוים זן דגם פרה קפדני כדי להעריך את היעילות של טכניקות טיפוליות חדשות מיקוד S. aureus זיהום לעומת הנוכחי מודלים זה לנצל פראי-סוג עכברים, במיוחד טכניקות במטרה לשפר את התגובה החיסונית המולדת מפני זיהום.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1101px;" width="1101">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube</td>
			<td style="width:301px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">352059</td>
			<td style="width:235px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6mm Disposable Biopsy Punch</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>33-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bioluminescent S. aureus</td>
			<td>Lloyd Miller, Johns Hopkins&#160;</td>
			<td>ALC 2906 SH1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Blood Agar, 5%, Hardy Diagnostics</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10118-938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenoprhine hydrochloride injectable</td>
			<td>Western Medical Supply</td>
			<td>7292</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson Labratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloramphenicol (crystalline powder)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP904-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DPBS (1X)</td>
			<td>Gibco&#160;</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringes</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>329461</td>
			<td>.35 mm (28 G) x 12.7 mm (1/2&#39;&#39;)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Living Image Software &#8211; IVIS Spectrum Series</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>128113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LysM-eGFP Mice</td>
			<td>Thomas Graff Albert Einstein College of New York&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microvolume Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>ND-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MyD88 KO Mice</td>
			<td>Jackson Labratory</td>
			<td>009088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-woven sponges</td>
			<td>AMD- Ritmed Inc</td>
			<td>A2101-CH</td>
			<td>5 cm x 5 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone Iodine 10% Solution</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>697731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 7.0</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td>License&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tryptic Soy Broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>211825</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model to assess innate immune response to staphylococcus aureus infection

Staphylococcus aureus זיהומים (S. aureus), לרבות עמיד methicillin כתמים, הם נטל עצום על מערכת הבריאות. עם שיעורי ההיארעות של זיהום S. aureus טיפוס מדי שנה, יש ביקוש נוספים במחקר שלה פתוגניות. מודלים חייתיים של מחלות זיהומיות לקדם את ההבנה שלנו של התגובה פתוגן-פונדקאי ולהוביל להתפתחות של הרפוי יעיל. נויטרופילים לשחק תפקיד ראשי התגובה החיסונית מולדת השולט S. aureus זיהומים על ידי יצירת מורסה קיר את הזיהום, להקל על חיסול חיידקים; המספר של נויטרופילים זה לחדור זיהום עור S. aureus לעיתים קרובות עולה בקנה אחד עם תוצאות המחלה. עכברים LysM-EGFP, אשר מחזיקים את משופרת חלבון פלואורסצנטי ירוק (EGFP) הוכנס האזור יזם ליזוזים מ' (LysM) (לידי ביטוי בעיקר על ידי נויטרופילים), בעת שימוש בשילוב עם ויוו פלורסצנטיות כל חיה הדמיה (כאשר שגיא) לספק אמצעי לכימות הגירה נויטרופילים noninvasively ו longitudinally לתוך העור הפצוע. בשילוב עם ביולומנאסן S. aureus זן והדמיה רציפים ויוו כל בעלי חיים זוהרים (בלי), זה אפשרי לעקוב longitudinally dynamics גיוס נויטרופילים והן נטל חיידקי ויוו באתר של זיהום ומורדמת עכברים מן התחלה של זיהום רזולוציה או מוות. עכברים הם עמידים יותר בפני מספר גורמים התקפה אלימה המיוצר על ידי S. aureus המאפשרים קולוניזציה יעיל ולדלקת בבני אדם. עכברים immunodeficient מספקות מודל בעלי חיים רגיש יותר לבחון מתמשך S. aureus זיהומים ואת היכולת של הרפוי כדי להגביר את תגובות מערכת החיסון המולדת. במסמך זה, נוכל לאפיין תגובות בעכברים LysM-EGFP זה יש כבר וגדל לעכברים MyD88 לקויה (LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים) יחד עם פראי-סוג עכברים LysM-EGFP לחקור זיהום הפצע העור S. aureus . זיהוי סימולטני מולטי ספקטריאליות מחקר של גיוס נויטרופילים dynamics באמצעות ויוו כאשר שגיא, נטל חיידקי באמצעות רבנות בלי ויוו, וההגדרה פצע ריפוי longitudinally, noninvasively לאורך זמן.

LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים רגישים יותר לזיהומים S. aureus מאשר עכברים LysM-EGFP
המתח של S. aureus השתמשו במחקר זה, ALC290618, נבנה עם פלסמיד המכיל הבונה לאקס המייצר אותות ביולומנאסן של חיידקים חיים פעיל חילוף חומרים. כאשר מחו...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

גישה זו מתוארת זיהוי בזמן אמת של התגובה החיסונית מולדת ופצעו עורית, Staphylococcus aureus זיהום של עכברים. מאת LysM בהשוואת-EGFP עכברים (אשר מחזיקים נויטרופילים פלורסנט) עם LysM-EGFP crossbred immunodeficient עכבר זן, נוכל לקדם את ההבנה שלנו של זיהום ופיתוח של גישות כדי להילחם זיהום.

דגם העכבר כדי להעריך מולדת התגובה החיסונית לזיהום Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

טכניקות לפקח על נטל החיידקים נויטרופילים להגיב בו זמנית יכול לספק תובנה לתוך המנגנונים של התמדת Aureus Staph ואת היעילות של אסטרטגיות טיפול. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי פרמטרים מרובים ניתן למדוד אורך במארח חי לאורך כל תקופת הזיהום. זה קריטי כדי להראות איפה למקם את הפצע על דורסום העכבר, איך excise את העור, וכיצד לחסן את הפצע עם Aureus Staph.התחל על ידי הפשרת זן aureus Staph bioluminescence של זן עניין מ 80 מעלות צלזיוס שלילי אחסון על קרח. לפני שפוספסים את התרבות על צלחת אגר דם של 5%. עבור דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס.למחרת בבוקר, להעביר שלוש עד ארבע מושבות בודדות מצלחת aureus Staph לתוך מרק סויה טריפטי, או TSB. בתוספת 10 מיקרוגרם למיליליטר של כלוראמפניקול עבור דגירה רועדת לילה ב 37 מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, לדלל 120 microliters של מדגם תרבות בשישה מיליליטר של TSB.עם 10 מיקרוגרם למיליליטר של כלוראמפניקול, עבור דגירה של שעתיים ב 37 מעלות צלזיוס, ו 200 סיבובים לדקה. כאשר הצפיפות האופטית ב 600 ננומטר מגיע 0.5, להעביר שלושה מיליליטר של השעיה חיידקית לתוך 10 מיליליטר קר כקרח DPBS. לאחר decanting בזהירות את supernatant, להוסיף DPBS מקורר נוסף גלולה, ומערבולת חיידקים מושעה מחדש ביסודיות.לאחר צנטריפוגה שנייה, להשעות מחדש את גלולת חיידקי ב 1.5 מיליליטר של PBS על קרח. כדי לאמת את ריכוז החיידקים, לדלל באופן סדרתי 100 microliters של ההשעיה החיידקית על ידי גורם של 1 x 10 ל 4, ו 1 x 10 עד 5, ב PBS טרי. וצלחת 20 microliters של כל דילול על צלחות אגר בודדים.לאחר דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס, לספור את מספר יחידות להרכיב מושבה על ידי בדיקה ברוטו כדי לחשב את הריכוז החיידקי מהיום הקודם. לפצעי עור כריתה של בעלי החיים המטופלים, אשרו חוסר תגובה לצביטת בוהן, לפני גילוח קטע של אחד על שניים אינץ' בגב העכבר. יש לנגב בעדינות כדי להסיר שערות תועות.ולחטא את העור החשוף, עם יוד רציף של 10% povidone, ו-70% יישומי גזה ספוגים באתנול. נע החוצה ממרכז האזור הכירורגי, בתבנית ספירלית. לאחר מתן אפשרות לעור להתייבש במשך כדקה, לחץ בחוזקה על ביופסיית אגרוף סטרילית של שישה מילימטרים במרכז האזור הכירורגי המוכן.סובב את ביופסיית הפונץ' כדי ליצור קו מתאר מעגלי על העור, החותך באופן מלא דרך רקמת העור, ולפחות חלק אחד של קווי המתאר. דואג לא לחתוך לתוך fascia הבסיסית או רקמה. לאחר מכן השתמש במספריים סטריליים, ומדפים, כדי לחתוך דרך האפידרמיס והדרמיס, בעקבות התבנית המעגלית שהוטבעה על ידי ביופסיית הפונץ '.עבור חיסון Aureus Staph, למלא מזרק אינסולין 28 מד עם 50 microliters של inoculant חיידקי bioluminescent מוכן. ולהשתמש באצבע כדי למשוך את הדרמיס של החיה הפצועה לצד. מחזיק את המזרק כמעט במקביל לרקמה, לאט לאט להכניס את המזרק לתוך הרקמה עד ירידה פתאומית בהתנגדות מורגש.מצביע על פירסינג של fascia. עם המחט להציב במרכז הפצע, לאט לספק את כל נפח של inoculant. ודא כי inoculant יוצר בועה במרכז הפצע, עם דליפה מינימלית או פיזור.ולהסיר את המזרק לאט מהחיה. ואז להחזיר את החיה לכלוב שלה עם חום ומעקב עד החלמה מלאה. לאחר פציעה וזיהום, ויומיום במהלך הניסוי, מניחים את העכבר הרדמה בתמונה bioluminescent ו florescence, עם הפצע שטוח ככל האפשר.בתוכנת הדמיה, בחר זוהר וצילום כ מצבי הדמיה. זמן החשיפה צריך להיות מוגדר מראש לדקה אחת ב binning קטן, F / Stop 1 עבור זוהר, F / Stop 8 לצילום, ופתוח עבור מסנן הפליטה. לאחר מכן לחץ על רכוש, כדי לתעד את התמונה.להדמיית פרואורסצנטיות ב-vivo, בחרו פלואורסצנטיות וצילום, כ מצבי ההדמיה. זמן החשיפה צריך להיות מוגדר מראש לשנייה אחת ב binning קטן, F / Stop 1 עבור פלואורסצנטיות, F / Stop 8 לצילום, ו Excitation וארכי גל פליטה של 465 מעל 30 ננומטר, ו 520 מעל 20 ננומטר, בעוצמת מנורה גבוהה, בהתאמה. לאחר מכן לחץ על רכוש כדי לתעד את התמונה.לאחר קבלת שני סטים של תמונות, להחזיר את החיה לכלוב שלה, עם ניטור, עד החלמה מלאה. לניתוח תמונה, פתחו את התמונה לכמת, בתוכנה מתאימה לניתוח תמונה, והצבו את אזור העניין המעגלי המוגדר כברירת מחדל על כל אזור הפצע כולל העור שמסביב. לחץ על למדוד אזור עניין, ולתזמן את הערכים עבור שטף ממוצע עבור הפצע, כדי לאפשר את שטף הממוצע של כל אות להיות מותווה לעומת הזמן.כדי למדוד את ריפוי הפצע, להתאים אזור מעגלי של עניין על קצה הפצע, ולמדוד את שטח הפצע בסנטימטרים בריבוע, כדי לאפשר התוויית השינוי השבר מקו הבסיס לעומת הזמן. בניסוי מייצג זה, תגובה ראשונית מיאלואידית ביטוי EGFP מותנה 88, או עכברי נוקאאוט MyD88, הפגין רגישות גדולה יותר לחיסון Aureus Staph, מאשר EGFP לא מותנה להביע בעלי חיים. עם 80% קטלניות נצפתה במהלך שמונת הימים הראשונים של זיהום.שני הזנים של עכברים איבדו כ -5% ממשקל גופם מיד לאחר ההדבקה. עם זאת, EGFP מותנה להביע עכברים התאושש המשקולות המקוריות שלהם על ידי היום השני. בעוד עכברי MyD88 לא.סגירת פצעים בנוכחות זיהום Staph aureus לא היה שונה בין שני הזנים. עם זאת, עכברי נוקאאוט MyD88 פצועים באופן סטרילי, היה פגם משמעותי בריפוי פצעים, בהשוואה EGFP מותנה להביע בעלי חיים. הדמיה של בעלי חיים שלמים חשפה נטל חיידקי גבוה יותר, כפי שמץ של אות ביולומינסנט מוגבר בפצעים של חיות נוקאאוט MyD88, בהשוואה ל- EGFP מותנה המבטא בעלי חיים.ירידה של 40% בסחר הראשוני בנויטרופילים לפצעים לא מדביקים של חיות נוקאאוט MyD88, נצפתה גם בהשוואה ל-EGFP מותנה המבטא בעלי חיים. כאשר 1 x 10 למושבה השביעית להרכיב יחידות של Aureus Staph הוצגו מיד לאחר הפציעה, סחר נויטרופילים היה מופחת באופן משמעותי בבעלי נוקאאוט לעומת EGFP מותנה להביע בעלי חיים. לפני חלוקת החיידקים, ודא שאין בועות אוויר במזרק, ושמיקום המחט ממוקם כראוי במרכז הפצע.רקמות בעלי חיים ניתן לקצור בסוף הנקודה כדי למדוד את הביטוי של חלבונים של עניין והפצה חיידקית מהפצע. סטפ אוראוס מדבק לבני אדם. ככזה, ציוד מגן אישי צריך להיות משוחק בעת טיפול בחיידקים, ויש לנקוט זהירות, בעת טיפול מזרק המכיל את הפתוגן.טכניקה זו סייעה לחקור את השימוש בטיפולים ביולוגיים עבור זיהומים Staph aureus המשפרים את המארחים המולדת התגובה החיסונית נגד זיהום.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus MRSA

זיהום תת עורי של סטפילוקוקוס אוראוס עמיד Methicillin (MRSA)

MRSA is a worldwide threat to public health, and MRSA skin and soft-tissue infections now account for more than half of all soft-tissue infections in the ...

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus MRSA in Rat

אנדוקרדיטיס דגם ניסיוני של Methicillin עמיד<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) ב עכברוש

Endovascular infections, including endocarditis, are life-threatening infectious syndromes1-3. Staphylococcus aureus is the most common world-wide cause ...

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

צמיחת סטפילוקוקוס אוראוס באמצעות ההמוגלובין אנושי כמקור ברזל

S. aureus is a pathogenic bacterium that requires iron to  carry out vital metabolic functions and cause disease. The most abundant  reservoir of iron ...

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

כימות תגובת Burst נשימה כאינדיקטור של החיסון מולדת בריאות בדג הזברה

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

באמצעות RNA-התערבות לחקר התגובה החיסונית המולדת בהמקרופאגים עכבר

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

בניתוח חוץ גופייה של תיווך Myd88 הסלולרי תגובה החיסונית לוירוס הנילוס המערבי זיהום הזנים Mutant

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

הדמיה לא פולשנית של התגובה החיסונית המולדת בדגם דג הזברה הזחל של<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; זיהום

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Quantifying the Cytotoxicity of Staphylococcus aureus Against Human Polymorphonuclear Leukocytes

Quantifying the Cytotoxicity of Staphylococcus aureus Against Human Polymorphonuclear Leukocytes

ככמת את רעילות הציטוהילווקיוס האורמית נגד פולימורציטים אנושיות

Staphylococcus aureus is capable of secreting a wide range of leukocidins that target and disrupt the membrane integrity of polymorphonuclear leukocytes ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

בידוד של התאים המוננובית מונמונומנט ללמוד Ex Vivo מולדת תגובות החיסונית ברקמת הלימפה של האדם Mucosal

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...