Name: a mouse model to assess innate immune response to staphylococcus aureus infection
Uploaded: 2019-02-28T14:00:00
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この作品は、国立機関の健康補助金 R01 AI129302 (S.I.S.) と薬理学のトレーニング プログラムによって支持された: に枕元にはカリフォルニア大学デービス校でベンチから (NIH T32 GM099608 L.S.A に)。分子・ ゲノム イメージング (CMGI) カリフォルニア大学デービス校では、優れた技術サポートを提供しました。

すべてのマウスの研究を行った機関動物ケアとカリフォルニア大学デービス校で利用委員会によって承認され、動物福祉法と健康の研究延長行為のガイドラインに従って行われました。必ず動物を操作するときは、滅菌手袋を使用してください。
1. マウスのソースと住宅
<ol><li>派生する LysM eGFP マウス c57bl/6 j の遺伝的背景に12を前述のよう。LysM EGFP ×...

<ol>
	<li>Moran, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methicillin-Resistant+S.+aureus+Infections+among+Patients+in+the+Emergency+Department.">Methicillin-Resistant S. aureus Infections among Patients in the Emergency Department.</a> New England Journal of Medicine. 355 (7), 666-674 (2009).</li><li>Suaya, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+cost+of+hospitalizations+associated+with+Staphylococcus+aureus+skin+and+soft+tissue+infections+in+the+United+States+from+2001+through+2009.">Incidence and cost of hospitalizations associated with Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections in the United States from 2001 through 2009.</a> BMC Infectious Diseases. 14 (1), 296 (2014).</li><li>Ventola, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibiotic+resistance+crisis:+part+1:+causes+and+threats.">The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats.</a> P &amp; T : a Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. 40 (4), 277-283 (2015).</li><li>Blaser, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+use+and+its+consequences+for+the+normal+microbiome.">Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome.</a> Science. 352 (6285), 544-545 (2016).</li><li>Hilliard, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-Alpha-Toxin+Monoclonal+Antibody+and+Antibiotic+Combination+Therapy+Improves+Disease+Outcome+and+Accelerates+Healing+in+a+Staphylococcus+aureus+Dermonecrosis+Model.">Anti-Alpha-Toxin Monoclonal Antibody and Antibiotic Combination Therapy Improves Disease Outcome and Accelerates Healing in a Staphylococcus aureus Dermonecrosis Model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (1), 299-309 (2015).</li><li>Proctor, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+for+Staphylococcus+aureus+vaccines:+clinical+and+basic+science+challenges.">Recent developments for Staphylococcus aureus vaccines: clinical and basic science challenges.</a> European Cells &amp; Materials. 30, 315-326 (2015).</li><li>M&#246;lne, L., Verdrengh, M., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neutrophil+Leukocytes+in+Cutaneous+Infection+Caused+by+Staphylococcus+aureus.">Role of Neutrophil Leukocytes in Cutaneous Infection Caused by Staphylococcus aureus.</a> Infection and Immunity. 68 (11), 6162-6167 (2000).</li><li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation.">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).</li><li>Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils,+from+Marrow+to+Microbes.">Neutrophils, from Marrow to Microbes.</a> Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).</li><li>Miller, L. S., Cho, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+against+Staphylococcus+aureus+cutaneous+infections.">Immunity against Staphylococcus aureus cutaneous infections.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (8), 505-518 (2011).</li><li>Hasenberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catchup:+a+mouse+model+for+imaging-based+tracking+and+modulation+of+neutrophil+granulocytes.">Catchup: a mouse model for imaging-based tracking and modulation of neutrophil granulocytes.</a> Nature Methods. 12 (5), 445-452 (2015).</li><li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages.">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li><li>Falahee, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;-Toxin+Regulates+Local+Granulocyte+Expansion+from+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells+in+Staphylococcus+aureus-Infected+Wounds.">&#945;-Toxin Regulates Local Granulocyte Expansion from Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Staphylococcus aureus-Infected Wounds.</a> Journal of immunology. 199 (5), 1772-1782 (2017).</li><li>Kim, M. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Neutrophil+Infiltration+during+Cutaneous+Wound+Healing+and+Infection+Using+Fluorescence+Imaging.">Dynamics of Neutrophil Infiltration during Cutaneous Wound Healing and Infection Using Fluorescence Imaging.</a> Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1812-1820 (2008).</li><li>Liese, J., Rooijakkers, S. H. M., Strijp, J. A. G., Novick, R. P., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+two-photon+microscopy+of+host-pathogen+interactions+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+skin+abscess+formation.">Intravital two-photon microscopy of host-pathogen interactions in a mouse model of Staphylococcus aureus skin abscess formation.</a> Cellular Microbiology. 15 (6), 891-909 (2013).</li><li>Bogoslowski, A., Butcher, E. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+recruited+through+high+endothelial+venules+of+the+lymph+nodes+via+PNAd+intercept+disseminating+Staphylococcus+aureus.">Neutrophils recruited through high endothelial venules of the lymph nodes via PNAd intercept disseminating Staphylococcus aureus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (10), 2449-2454 (2018).</li><li>Takeuchi, O., Hoshino, K., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+TLR2-Deficient+and+MyD88-Deficient+Mice+Are+Highly+Susceptible+to+Staphylococcus+aureus+Infection.">Cutting Edge: TLR2-Deficient and MyD88-Deficient Mice Are Highly Susceptible to Staphylococcus aureus Infection.</a> The Journal of Immunology. 165 (10), 5392-5396 (2000).</li><li>Miller, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+Mediates+Neutrophil+Recruitment+Initiated+by+IL-1R+but+Not+TLR2+Activation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus.">MyD88 Mediates Neutrophil Recruitment Initiated by IL-1R but Not TLR2 Activation in Immunity against Staphylococcus aureus.</a> Immunity. 24 (1), 79-91 (2006).</li><li>Macedo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+is+impaired+in+MyD88-deficient+mice:+a+role+for+MyD88+in+the+regulation+of+wound+healing+by+adenosine+A2A+receptors.">Wound healing is impaired in MyD88-deficient mice: a role for MyD88 in the regulation of wound healing by adenosine A2A receptors.</a> The American Journal of Pathology. 171 (6), 1774-1788 (2007).</li><li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+IL-1&#946;+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice.">Neutrophil-derived IL-1&#946; Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047 (2012).</li><li>Granick, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus+recognition+by+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+via+TLR2/MyD88/PGE2+stimulates+granulopoiesis+in+wounds.">Staphylococcus aureus recognition by hematopoietic stem and progenitor cells via TLR2/MyD88/PGE2 stimulates granulopoiesis in wounds.</a> Blood. 122 (10), 1770-1778 (2013).</li><li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+survival+and+c-kit+-progenitor+proliferation+in+Staphylococcus+aureus-infected+skin+wounds+promote+resolution.">Neutrophil survival and c-kit+-progenitor proliferation in Staphylococcus aureus-infected skin wounds promote resolution.</a> Blood. 117 (12), 3343-3352 (2011).</li><li>Foster, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+evasion+by+staphylococci.">Immune evasion by staphylococci.</a> Nature Reviews Microbiology. 3 (12), 948-958 (2005).</li><li>Gordon, R. J., Lowy, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Methicillin-Resistant+Staphylococcus+aureus+Infection.">Pathogenesis of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Infection.</a> Clinical Infectious Diseases. 46 (Supplement_5), S350-S359 (2008).</li><li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+IL-1&#946;+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice.">Neutrophil-derived IL-1&#946; Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047-e1003020 (2012).</li><li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+post-arthroplasty+Staphylococcus+aureus+joint+infection+to+evaluate+in+vivo+the+efficacy+of+antimicrobial+implant+coatings.">A mouse model of post-arthroplasty Staphylococcus aureus joint infection to evaluate in vivo the efficacy of antimicrobial implant coatings.</a> PLoS ONE. 5 (9), e12580 (2010).</li><li>Plaut, R. D., Mocca, C. P., Prabhakara, R., Merkel, T. J., Stibitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stably+Luminescent+Staphylococcus+aureus+Clinical+Strains+for+Use+in+Bioluminescent+Imaging.">Stably Luminescent Staphylococcus aureus Clinical Strains for Use in Bioluminescent Imaging.</a> PLoS ONE. 8 (3), e59232 (2013).</li><li>Dillen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonally+expanded+&#947;&#948;+T+cells+protect+against+Staphylococcus+aureus+skin+reinfection.">Clonally expanded &#947;&#948; T cells protect against Staphylococcus aureus skin reinfection.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 1026-1042 (2018).</li></ol>

利用する発光黄色ブドウ球菌黄色ブドウ球菌感染症モデル全体の動物インビボ光イメージング技術の高度な技術と組み合わせて蛍光好中球レポーター マウスの感染が生得の知識を高度な感染に対する免疫応答。LysM EGFP マウスを使った過去の研究はことを感染症の最初の 24 時間の上の黄色ブドウ球菌感染した傷口に 1 x 107好中球リクルートに14、?...

黄色ブドウ球菌(黄色ブドウ球菌)は、皮膚および軟部組織感染症 (SSTIs) アメリカ合衆国1の大半を占めています。発生率のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA) 感染症は、過去二十年以上2、永続化のメカニズムと新しい治療戦略の発見の研究をやる気にさせる着実に増加しました。MRSA 感染症の標準治療は全身抗生物質療法が、MRSA は時間3でますます抗生物質に耐性となっている、これらの薬は、特に否定的な健康への影響を引き起こしているホストの有益なマイクロバイを減らすことができます。子供4。前臨床研究は、MRSA 感染症5を治療するための代替戦略を検討しているが、ホスト免疫反応6を阻止する病原因子の出現のために挑戦を証明している診療所にこれらのアプローチを翻訳します。ドライブ黄色ブドウ球菌SSTIs ホスト病原体のダイナミクスを分析、我々 は非侵襲的結合と好中球数の縦のリードアウト細菌の豊かさの運動対策で傷のベッドに募集し地域を傷します。
好中球は、細菌感染症7の最初の応答と人間の最も豊富な循環白血球です。好中球は、機能的反応抗菌ペプチド、プロテアーゼ活性酸素種の生産を含む彼らの殺菌メカニズムによる黄色ブドウ球菌の感染症に対して有効なホスト応答のために必要なコンポーネント貧食能および好中球細胞外トラップ生産8,9を含みます。慢性肉芽腫症とベイジュ症候群などの好中球機能の遺伝的欠陥の人間の患者は、黄色ブドウ球菌感染に対する感受性の増加を表示します。さらに、患者 (先天性好中球減少症) など遺伝的と (化学療法の患者に見られる好中球減少症) など取得した好中球数の欠陥も非常に受けます黄色ブドウ球菌感染症10。黄色ブドウ球菌感染症をクリアするに好中球の重要性を考えると、免疫能力を高めることや、黄色ブドウ球菌の病変内で自分の番号をチューニングは、感染症を解決する効果的な戦略を証明するかもしれない。
過去 10 年間、人身売買の11,12を勉強するトランスジェニック マウスに蛍光好中球記者が開発されてきました。好中球レポーター マウスの全体の動物のイメージング技術を組み合わせて組織や臓器における好中球の時空間解析を許可します。黄色ブドウ球菌の生物発光菌株と組み合わせると、黄色ブドウ球菌の豊かさへの応答における好中球の集積を追跡することが可能だし、細菌の病原性のコンテキストで永続化および間接的要因影響を受ける組織13,14,,1516で好中球数を混乱させます。
マウスが人間よりも黄色ブドウ球菌の病原性と免疫回避機構を受けないです。野生型マウスが理想的な動物モデルの有効性を調査するためにできない場合がありますなど、慢性的な黄色ブドウ球菌の治療に治療を与えて感染。MyD88 欠損マウス (すなわち、MyD88-/-マウス)、機能的なインターロイキン 1 受容体 (IL-1 r) および Toll 様受容 (TLR) シグナリング、ショー大きい感受性と比較すると黄色ブドウ球菌の感染もない免疫不全マウス緊張野生型マウスの17と18皮膚黄色ブドウ球菌感染症のサイト売買は好中球の機能障害。MyD88-/-マウスの好中球蛍光レポーターを所有しているマウス緊張の開発は、現在好中球に比べて黄色ブドウ球菌感染症を治療する治療法の有効性を調査するための代替モデルを提供してレポーター マウス。
このプロトコルでは、免疫不全 LysM EGFP × MyD88-/-マウスで、黄色ブドウ球菌感染症の特徴し、経過と感染する LysM EGFP マウスの解像度を比較します。LysM EGFP × MyD88-/-マウスの開発が解決しない、慢性的な感染、感染 8 日後に 75% が負けます。初期好中球動員に重要な欠陥が発生する感染症の炎症期の 72 時間以上と 50 パーセントより少数の好中球は感染の後半段階で募集します。-/-マウスは、この特定 MyD88 ひずみ現在に比べて黄色ブドウ球菌感染症をターゲットと新しい治療技術の有効性を評価するための厳格な前臨床モデル LysM EGFP × の感受性の増加モデルします。野生型マウス、特に感染に対する自然免疫応答を高めることを目指し技術を活用します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1101px;" width="1101">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube</td>
			<td style="width:301px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">352059</td>
			<td style="width:235px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6mm Disposable Biopsy Punch</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>33-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bioluminescent S. aureus</td>
			<td>Lloyd Miller, Johns Hopkins&#160;</td>
			<td>ALC 2906 SH1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Blood Agar, 5%, Hardy Diagnostics</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10118-938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenoprhine hydrochloride injectable</td>
			<td>Western Medical Supply</td>
			<td>7292</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson Labratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloramphenicol (crystalline powder)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP904-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DPBS (1X)</td>
			<td>Gibco&#160;</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringes</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>329461</td>
			<td>.35 mm (28 G) x 12.7 mm (1/2&#39;&#39;)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Living Image Software &#8211; IVIS Spectrum Series</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>128113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LysM-eGFP Mice</td>
			<td>Thomas Graff Albert Einstein College of New York&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microvolume Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>ND-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MyD88 KO Mice</td>
			<td>Jackson Labratory</td>
			<td>009088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-woven sponges</td>
			<td>AMD- Ritmed Inc</td>
			<td>A2101-CH</td>
			<td>5 cm x 5 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone Iodine 10% Solution</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>697731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 7.0</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td>License&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tryptic Soy Broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>211825</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model to assess innate immune response to staphylococcus aureus infection

黄色ブドウ球菌(黄色ブドウ球菌) 感染症、メチシリン耐性の汚れを含む、医療システムに大きな負担です。毎年登山黄色ブドウ球菌感染症の罹患率、その病原性の付加的な研究のための要求があります。感染症の動物モデル宿主-病原体反応の理解を進めるし、効果的な治療法の開発に 。好中球は感染を壁し、細菌クリアランスの促進に膿瘍を形成することによって黄色ブドウ球菌感染症を制御する生得の免疫反応の主な役割を果たす黄色ブドウ球菌の皮膚感染症頻繁に潜入する好中球数は病気の結果と関連付けています。強化された緑色蛍光タンパク質 (EGFP) が (主に好中球によって表される) リゾチーム M (LysM) プロモーター領域に挿入を所有する LysM EGFP マウスと組み合わせて使用するとき全体の動物の in vivo 蛍光イメージング (FLI) を提供する、負傷者の肌に非侵襲的縦好中球移住を定量化を意味します。生物発光の黄色ブドウ球菌と組み合わせればひずみと逐次体内全体の動物生物発光イメージング (結合)、縦好中球動員ダイナミクスと体内細菌負荷のサイトの両方を監視することが可能です。解像度や死に感染症の発症から麻酔下マウスでの感染。マウスは、黄色ブドウ球菌によって生成される効果的な植民地化と人への感染を容易にする病原因子の数に優れています。免疫不全マウスは、永続的な黄色ブドウ球菌を調べるより敏感な動物モデルを提供する感染と自然免疫応答を向上させる治療の能力。ここで、黄色ブドウ球菌の皮膚感染を調査する野生型 LysM EGFP マウスと一緒に MyD88 欠損マウス (LysM EGFP × MyD88-/-マウス) に飼育されている LysM EGFP マウスにおける反応を特徴付けます。マルチ スペクトル同時検出体内 FLI、体内のバリを使用して細菌の負荷を使用して好中球動員ダイナミクスの研究を有効に、創傷治癒の長手方向と非侵襲的時間をかけて。

LysM EGFP × MyD88-/-マウスは LysM EGFP マウスよりも黄色ブドウ球菌感染症の影響を受けやすい
黄色ブドウ球菌における ALC290618,使用のひずみは、ライブと積極的に代謝の細菌から発光信号を作り出すルクスコンストラクトを含むプラスミドで構成しました。マウスに接種した?...

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A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

皮膚が負傷したに生得の免疫反応のリアルタイム検出とマウスの黄色ブドウ球菌感染症のためのアプローチを説明します。比較する LysM EGFP でマウス (蛍光好中球を所有) する LysM EGFP と交雑免疫不全マウス緊張、感染と戦うための方法の開発や感染症の理解を進めます。

マウスのモデルを評価する生得の免疫反応黄色ブドウ球菌感染症

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

細菌の負担と好中球の反応を同時に監視する技術は、ステープルオーレウス持続性のメカニズムと治療戦略の有効性に関する洞察を提供することができます。この技術の主な利点は、感染の持続期間を通じて、複数のパラメータを生きている宿主で縦方向に測定できることである。マウスのドーサムに傷をどこに置くか、皮膚を切除する方法、およびステープルアウレウスで創傷を接種する方法を示することが重要です。氷の上の負の80°Cの貯蔵から興味の生物発光ステープルアウレウス株を解凍することから始めます。5%のウシの血寒天プレートに培養物をストリークする前に。摂氏37度で一晩インキュベーションを行う場合。翌朝、ステープルアウレウスプレートからトリプティック大豆スープ(TSB)に3〜4個のコロニーを移す。37°Cで一晩揺れるインキュベーションのためのクロラムフェニコールのミリリットルあたり10マイクログラムを補う。翌朝、120マイクロリットルの培養サンプルをTSBの6ミリリットルで希釈する。クロラムフェニコール1ミリリットル当たり10マイクログラム、摂氏37度で2時間のインキュベーション、毎分200回転。600ナノメートルの光学密度が0.5に達すると、3ミリリットルの細菌懸濁液を10ミリリットルの氷冷DPBSに移します。上清を慎重にデカントした後、ペレットに冷たいDPBSを加え、再懸濁菌を徹底的に渦化させる。2回目の遠心分離後、細菌ペレットを氷上のPBSの1.5ミリリットルで再懸濁する。細菌濃度を確認するために、細菌懸濁液の100マイクロリットルを4thに1×10、5thに1x10の倍で連続的に希釈し、新鮮なPBSで。そして、個々の寒天プレートに各希釈液の20マイクロリットルをプレート。摂氏37度で一晩のインキュベーションの後、総検査でコロニー形成単位の数を数え、前日の細菌濃度を計算する。レシピエント動物の皮膚傷の切除については、マウスの背面に1つずつ2インチのセクションを剃る前に、つま先ピンチに対する応答の欠如を確認する。そっと拭いて、迷子の毛を取り除きます。そして、露出した皮膚を消毒し、逐次10%ポビドネヨウ素、及び70%エタノール浸漬ガーゼ用途を用いた。スパイラルパターンで、外科的領域の中心から外側に移動する。皮膚を約1分間乾燥させた後、準備された外科領域の中心にある無菌6ミリメートルパンチ生検をしっかりと押す。パンチ生検をツイストして、皮膚に円形の輪郭を作り、皮膚組織を完全に切り裂き、輪郭の少なくとも1つの部分を作ります。根底にある筋膜や組織に切り込まないように注意してください。次いで、滅菌ハサミ、および鉗子を使用して、表皮および真皮を切断し、パンチ生検によって刻印された円形パターンに従う。ステープルアウレウス接種の場合、調製された生物発光細菌接種剤の50マイクロリットルで28ゲージのインスリン注射器を充填する。そして、指を使って負傷した動物の真皮を横に引っ張ります。組織に対してほぼ平行にシリンジを保持し、抵抗の急激な低下が感じられるまでゆっくりと組織に注射器を挿入する。筋膜のピアスを示す。針を創傷の中央に置いて、接種剤の全容をゆっくりと送達する。接種剤が傷口の中心に泡を形成し、漏れや分散を最小限に抑えて確認します。そして、動物からゆっくりと注射器を取り除きます。その後、完全な回復まで熱と監視でケージに動物を返します。創傷および感染後、そして実験中に毎日、麻酔薬を生物発光および蛍光画像体に入れ、傷をできるだけ平らにする。イメージャーソフトウェアで、イメージングモードとして発光と写真を選択します。露光時間は、小さなビン分割時に 1 分、発光の場合は F/ストップ 1、写真用の F/Stop 8、および放出フィルタ用に開く必要があります。次に、[取得] をクリックして画像を記録します。in vivo蛍光イメージングでは、蛍光を選択し、画像を撮像モードとして写真を選択します。露光時間は、小さなビンで1秒、蛍光のF/ストップ1、写真用のF/ストップ8、励起波長と発光波長を30ナノメートルで465、20ナノメートルで520、それぞれ高ランプ強度でプリセットする必要があります。次に、[取得] をクリックして画像を記録します。両方の画像を取得した後、完全に回復するまで、監視と一緒にケージに動物を返します。画像解析のために、適切な画像解析ソフトウェアプログラムで、定量化する画像を開き、周囲の皮膚を含む創傷領域全体にデフォルトの円形領域を配置します。対象の測定領域をクリックし、創傷の平均流束の値を記録して、各信号の平均フラックスを時間に対してプロットできるようにします。創傷治癒を測定するには、創傷端の上に関心のある円形領域をフィットさせ、創傷の面積をセンチメートル平方で測定し、ベースラインと時間からの小数変化をプロットできるようにする。本代表的実験では、条件付きEGFP発現骨髄異分化第一応答88、またはMyD88ノックアウトマウスは、非条件付EGFP発現動物よりも、ステープルオーレウス接種に対する感受性が大きいことを示した。感染の最初の8日間に観察された80%の致死性を有する。マウスの両方の株は、感染直後に体重の約5%を失った。しかし、マウスを発現する条件付きEGFPは、2日目までに元の体重を回復した。MyD88マウスはしませんでしたが。ステープルアウレウス感染の存在下での創傷閉鎖は、2つの株間で異ならなかった。しかしながら、無菌傷のMyD88ノックアウトマウスは、動物を発現する条件付きEGFPと比較して、創傷治癒に重大な欠陥を持っていた。全動物イメージングは、MyD88ノックアウト動物の創傷における生物発光シグナルの増加によって証明されるように、動物を発現する条件付きEGFPと比較して、より高い細菌負担を明らかにした。MyD88ノックアウト動物の未感染の創傷に対する初期好中球の人身売買の40%の減少は、動物を発現する条件付きEGFPと比較しても観察された。1 x 10から第7コロニー形成ユニットのステープルオーレウスが創傷直後に導入された場合、ノックアウト動物では、条件付きEGFP発現動物と比較して好中球の密売が有意に減少した。細菌を分配する前に、注射器に気泡がなく、針の位置が創傷の中央に正しく配置されていることを確認してください。動物組織は、目的のタンパク質の発現および創傷からの細菌の播種を測定するために終点で収穫することができる。黄色ブドウ球菌は人間に感染する。そのため、細菌を取り扱う際には個人保護具を着用し、病原体を含む注射器を取り扱う際には注意が必要です。この技術は、感染に対する宿主の自然免疫応答を高めるステープル・アウレウス感染症に対する生物学的治療の使用を探求するのに役立った。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus MRSA

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）の皮下感染

MRSA is a worldwide threat to public health, and MRSA skin and soft-tissue infections now account for more than half of all soft-tissue infections in the ...

免疫・感染学

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus MRSA in Rat

メチシリン耐性の実験的心内膜炎モデル<em&gt;黄色ブドウ球菌</em&gt;（MRSA）ラットにおける

Endovascular infections, including endocarditis, are life-threatening infectious syndromes1-3. Staphylococcus aureus is the most common world-wide cause ...

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

鉄源としてヒトヘモグロビンを用いた黄色ブドウ球菌の成長

S. aureus is a pathogenic bacterium that requires iron to  carry out vital metabolic functions and cause disease. The most abundant  reservoir of iron ...

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

ゼブラフィッシュにおける自然免疫の健康の指標として呼吸バースト応答の定量化

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

マウスマクロファージにおける先天性免疫応答を調査するために、RNA干渉を使用

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

西ナイルウイルス変異株の感染に対するMyD88非介在細胞性免疫応答のインビトロ分析

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

のゼブラフィッシュ幼生モデルにおける先天性免疫応答の非侵襲的イメージング<em&gt;ストレプトコッカスイニエ</em&gt;感染

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

ハチミツガ口腔管理モデル Study Commensal-Induced 自然免疫応答

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Quantifying the Cytotoxicity of Staphylococcus aureus Against Human Polymorphonuclear Leukocytes

Quantifying the Cytotoxicity of Staphylococcus aureus Against Human Polymorphonuclear Leukocytes

ヒト多形核白血球に対する黄色ブドウ球菌の細胞毒性の定量

Staphylococcus aureus is capable of secreting a wide range of leukocidins that target and disrupt the membrane integrity of polymorphonuclear leukocytes ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

ヒト粘膜リンパ組織におけるEx Vivo自然免疫応答を研究する扁桃単核細胞の単核細胞の単離

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...