Name: a mouse model to assess innate immune response to staphylococcus aureus infection
Uploaded: 2019-02-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

Эта работа была поддержана национальными институтами из здравоохранения грантов R01 AI129302 (чтобы S.I.S.) и программу обучения в области фармакологии: от скамьи в постели на UC Дэвис (низ T32 GM099608 до L.S.A). Молекулярная и геномных Imaging (CMGI) на университета Калифорнии Дэвис условии превосходно технологическую поддержку.

Все мыши исследования были рассмотрены и одобрены институциональный уход животных и использования Комитетом на UC Дэвис и были выполнены в соответствии с руководящими принципами закона расширение исследований здоровья и Закон о благосостоянии животных. Убедитесь в том использовать с...

<ol>
	<li>Moran, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methicillin-Resistant+S.+aureus+Infections+among+Patients+in+the+Emergency+Department.">Methicillin-Resistant S. aureus Infections among Patients in the Emergency Department.</a> New England Journal of Medicine. 355 (7), 666-674 (2009).</li><li>Suaya, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+cost+of+hospitalizations+associated+with+Staphylococcus+aureus+skin+and+soft+tissue+infections+in+the+United+States+from+2001+through+2009.">Incidence and cost of hospitalizations associated with Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections in the United States from 2001 through 2009.</a> BMC Infectious Diseases. 14 (1), 296 (2014).</li><li>Ventola, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibiotic+resistance+crisis:+part+1:+causes+and+threats.">The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats.</a> P &amp; T : a Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. 40 (4), 277-283 (2015).</li><li>Blaser, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+use+and+its+consequences+for+the+normal+microbiome.">Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome.</a> Science. 352 (6285), 544-545 (2016).</li><li>Hilliard, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-Alpha-Toxin+Monoclonal+Antibody+and+Antibiotic+Combination+Therapy+Improves+Disease+Outcome+and+Accelerates+Healing+in+a+Staphylococcus+aureus+Dermonecrosis+Model.">Anti-Alpha-Toxin Monoclonal Antibody and Antibiotic Combination Therapy Improves Disease Outcome and Accelerates Healing in a Staphylococcus aureus Dermonecrosis Model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (1), 299-309 (2015).</li><li>Proctor, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+for+Staphylococcus+aureus+vaccines:+clinical+and+basic+science+challenges.">Recent developments for Staphylococcus aureus vaccines: clinical and basic science challenges.</a> European Cells &amp; Materials. 30, 315-326 (2015).</li><li>M&#246;lne, L., Verdrengh, M., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neutrophil+Leukocytes+in+Cutaneous+Infection+Caused+by+Staphylococcus+aureus.">Role of Neutrophil Leukocytes in Cutaneous Infection Caused by Staphylococcus aureus.</a> Infection and Immunity. 68 (11), 6162-6167 (2000).</li><li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation.">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).</li><li>Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils,+from+Marrow+to+Microbes.">Neutrophils, from Marrow to Microbes.</a> Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).</li><li>Miller, L. S., Cho, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+against+Staphylococcus+aureus+cutaneous+infections.">Immunity against Staphylococcus aureus cutaneous infections.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (8), 505-518 (2011).</li><li>Hasenberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catchup:+a+mouse+model+for+imaging-based+tracking+and+modulation+of+neutrophil+granulocytes.">Catchup: a mouse model for imaging-based tracking and modulation of neutrophil granulocytes.</a> Nature Methods. 12 (5), 445-452 (2015).</li><li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages.">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li><li>Falahee, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;-Toxin+Regulates+Local+Granulocyte+Expansion+from+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells+in+Staphylococcus+aureus-Infected+Wounds.">&#945;-Toxin Regulates Local Granulocyte Expansion from Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Staphylococcus aureus-Infected Wounds.</a> Journal of immunology. 199 (5), 1772-1782 (2017).</li><li>Kim, M. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Neutrophil+Infiltration+during+Cutaneous+Wound+Healing+and+Infection+Using+Fluorescence+Imaging.">Dynamics of Neutrophil Infiltration during Cutaneous Wound Healing and Infection Using Fluorescence Imaging.</a> Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1812-1820 (2008).</li><li>Liese, J., Rooijakkers, S. H. M., Strijp, J. A. G., Novick, R. P., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+two-photon+microscopy+of+host-pathogen+interactions+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+skin+abscess+formation.">Intravital two-photon microscopy of host-pathogen interactions in a mouse model of Staphylococcus aureus skin abscess formation.</a> Cellular Microbiology. 15 (6), 891-909 (2013).</li><li>Bogoslowski, A., Butcher, E. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+recruited+through+high+endothelial+venules+of+the+lymph+nodes+via+PNAd+intercept+disseminating+Staphylococcus+aureus.">Neutrophils recruited through high endothelial venules of the lymph nodes via PNAd intercept disseminating Staphylococcus aureus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (10), 2449-2454 (2018).</li><li>Takeuchi, O., Hoshino, K., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+TLR2-Deficient+and+MyD88-Deficient+Mice+Are+Highly+Susceptible+to+Staphylococcus+aureus+Infection.">Cutting Edge: TLR2-Deficient and MyD88-Deficient Mice Are Highly Susceptible to Staphylococcus aureus Infection.</a> The Journal of Immunology. 165 (10), 5392-5396 (2000).</li><li>Miller, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+Mediates+Neutrophil+Recruitment+Initiated+by+IL-1R+but+Not+TLR2+Activation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus.">MyD88 Mediates Neutrophil Recruitment Initiated by IL-1R but Not TLR2 Activation in Immunity against Staphylococcus aureus.</a> Immunity. 24 (1), 79-91 (2006).</li><li>Macedo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+is+impaired+in+MyD88-deficient+mice:+a+role+for+MyD88+in+the+regulation+of+wound+healing+by+adenosine+A2A+receptors.">Wound healing is impaired in MyD88-deficient mice: a role for MyD88 in the regulation of wound healing by adenosine A2A receptors.</a> The American Journal of Pathology. 171 (6), 1774-1788 (2007).</li><li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+IL-1&#946;+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice.">Neutrophil-derived IL-1&#946; Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047 (2012).</li><li>Granick, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus+recognition+by+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+via+TLR2/MyD88/PGE2+stimulates+granulopoiesis+in+wounds.">Staphylococcus aureus recognition by hematopoietic stem and progenitor cells via TLR2/MyD88/PGE2 stimulates granulopoiesis in wounds.</a> Blood. 122 (10), 1770-1778 (2013).</li><li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+survival+and+c-kit+-progenitor+proliferation+in+Staphylococcus+aureus-infected+skin+wounds+promote+resolution.">Neutrophil survival and c-kit+-progenitor proliferation in Staphylococcus aureus-infected skin wounds promote resolution.</a> Blood. 117 (12), 3343-3352 (2011).</li><li>Foster, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+evasion+by+staphylococci.">Immune evasion by staphylococci.</a> Nature Reviews Microbiology. 3 (12), 948-958 (2005).</li><li>Gordon, R. J., Lowy, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Methicillin-Resistant+Staphylococcus+aureus+Infection.">Pathogenesis of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Infection.</a> Clinical Infectious Diseases. 46 (Supplement_5), S350-S359 (2008).</li><li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+IL-1&#946;+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice.">Neutrophil-derived IL-1&#946; Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047-e1003020 (2012).</li><li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+post-arthroplasty+Staphylococcus+aureus+joint+infection+to+evaluate+in+vivo+the+efficacy+of+antimicrobial+implant+coatings.">A mouse model of post-arthroplasty Staphylococcus aureus joint infection to evaluate in vivo the efficacy of antimicrobial implant coatings.</a> PLoS ONE. 5 (9), e12580 (2010).</li><li>Plaut, R. D., Mocca, C. P., Prabhakara, R., Merkel, T. J., Stibitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stably+Luminescent+Staphylococcus+aureus+Clinical+Strains+for+Use+in+Bioluminescent+Imaging.">Stably Luminescent Staphylococcus aureus Clinical Strains for Use in Bioluminescent Imaging.</a> PLoS ONE. 8 (3), e59232 (2013).</li><li>Dillen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonally+expanded+&#947;&#948;+T+cells+protect+against+Staphylococcus+aureus+skin+reinfection.">Clonally expanded &#947;&#948; T cells protect against Staphylococcus aureus skin reinfection.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 1026-1042 (2018).</li></ol>

S. aureus инфекции модели, которые используют биолюминесцентных S. aureus инфекции в флуоресцентные нейтрофилов репортер мыши в сочетании с передовыми методами всего животных в естественных условиях оптических изображений выдвинули наши знания о врожденной иммунного ответа на инф...

Золотистый стафилококк (S. aureus) приходится большинство инфекции кожи и мягких тканей (ИКМТ) в Соединенных Штатах1. Распространенность метициллин резистентный S. aureus (MRSA) за последние два десятилетия2, мотивации изучения механизмов сохранения и открытия новых стратегий лечения инфекций неуклонно растет. Стандарт медицинской помощи для MRSA инфекций является системной антибактериальной терапии, но MRSA становится все более устойчивыми к антибиотикам за время3 и эти препараты могут уменьшить пользу микрофлора хозяина, вызывая негативных последствий для здоровья, особенно в 4детей. Доклинические исследования изучили альтернативные стратегии для лечения MRSA инфекции5, но перевод этих подходов к клинике оказался сложным из-за появления факторов вирулентности, которые сорвать хост иммунных ответов6. Анализировать динамику хост возбудитель диска S. aureus ИКМТ, мы сочетаем неинвазивной и продольных индикация числа нейтрофилов набранных на раны кровать с кинетической мер бактериальной изобилия и ранение области.
Нейтрофилы являются наиболее распространенными циркулирующих лейкоцитов в организме человека и первый responders бактериальной инфекции7. Нейтрофилы являются необходимым компонентом для эффективного пребывания ответ против инфекции S. aureus вследствие их бактерицидные механизмов, включая производство реактивнооксигенных видов, протеаз, антимикробных пептидов и функциональных реакций включая фагоцитоза и нейтрофилов внеклеточного ловушку производства8,9. Человека пациентов с генетическими дефектами в нейтрофильные функции, такие как хроническая гранулематозная болезнь и Синдром Чедиака-Хигаси, показывают, повышенной восприимчивости к инфекции S. aureus . Кроме того, пациенты с генетическими (например врожденные нейтропении) и приобретенные (например, нейтропения, видели в химиотерапии больных) дефекты в нейтрофильные чисел также очень восприимчивы к инфекции S. aureus 10. Учитывая важность нейтрофилов в очистке инфекции S. aureus , укрепления их иммунной или настройки их число в пределах S. aureus поражения может оказаться эффективной стратегии в решении инфекции.
За последнее десятилетие трансгенных мышей с флуоресцентным нейтрофилов журналистами были разработаны для изучения их людьми11,12. Сочетая нейтрофилов репортер мышей с целом животных методы визуализации позволяет пространственно-временных анализ нейтрофилов в органах и тканях. При сочетании с биолюминесцентных штаммов S. aureus, это позволяет отслеживать накопление нейтрофилов в ответ на S. aureus изобилия и упорство в контексте бактериальной вирулентности факторов, которые прямо и косвенно возмущают нейтрофилов чисел в пораженной ткани13,14,,1516.
Мышей менее подвержены механизмов уклонения вирулентности и иммунной S. aureus , чем люди. Таким образом, мышах одичал типа не может быть идеальной моделью животных для изучения эффективности с учетом терапевтического лечения хронических S. aureus инфекции. MyD88-недостаточным мышей (т.е., MyD88- / - мышей), ослабленным мыши штамм, который не хватает функциональной интерлейкина-1 рецепторов (IL-1R) и Толл подобный рецептор (TLR) сигнализации, шоу подверженности заражению S. aureus , по сравнению с мышах одичал тип17 и ухудшение оборота нейтрофилов к сайту S. aureus инфекции кожи18. Разработка мыши штамм, который обладает репортером флуоресцентный нейтрофилов в MyD88- / - мышей предоставляет альтернативную модель для исследования эффективности терапии для лечения инфекции S. aureus , по сравнению с текущей нейтрофилов Репортер мышей.
В этом протоколе мы характеризуют инфекции Стафилококк золотистый в ослабленным мышей- / - × MyD88 LysM-EGFP и сравнить время курс и резолюции инфекции с LysM-EGFP мышей. LysM-EGFP × MyD88 мышей- / - развитие хронической инфекции, которые не удалось решить, и 75% поддаваться инфекции после 8 дней. Значительный дефект в первоначальном наборе нейтрофилов происходит более 72 ч воспалительной стадии инфекции, и 50% меньшее количество нейтрофилов набирать на последней стадии инфекции. Повышенная восприимчивость × LysM-EGFP, MyD88- / - мышей делает это особое напряжение строгий доклинических модель для оценки эффективности новых терапевтических методов таргетинга инфекции S. aureus , по сравнению с текущей модели Используйте мышь одичал типа, особенно техники, стремясь повысить врожденный иммунный ответ против инфекции.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1101px;" width="1101">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube</td>
			<td style="width:301px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">352059</td>
			<td style="width:235px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6mm Disposable Biopsy Punch</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>33-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bioluminescent S. aureus</td>
			<td>Lloyd Miller, Johns Hopkins&#160;</td>
			<td>ALC 2906 SH1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Blood Agar, 5%, Hardy Diagnostics</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10118-938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenoprhine hydrochloride injectable</td>
			<td>Western Medical Supply</td>
			<td>7292</td>
			<td>0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson Labratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloramphenicol (crystalline powder)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP904-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DPBS (1X)</td>
			<td>Gibco&#160;</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringes</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>329461</td>
			<td>.35 mm (28 G) x 12.7 mm (1/2&#39;&#39;)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Living Image Software &#8211; IVIS Spectrum Series</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>128113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LysM-eGFP Mice</td>
			<td>Thomas Graff Albert Einstein College of New York&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microvolume Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>ND-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MyD88 KO Mice</td>
			<td>Jackson Labratory</td>
			<td>009088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-woven sponges</td>
			<td>AMD- Ritmed Inc</td>
			<td>A2101-CH</td>
			<td>5 cm x 5 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone Iodine 10% Solution</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>697731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 7.0</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td>License&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tryptic Soy Broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>211825</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model to assess innate immune response to staphylococcus aureus infection

Золотистый стафилококк Инфекции (S. aureus), в том числе метициллин резистентный пятна, являются огромным бременем на систему здравоохранения. С показатели заболеваемости S. aureus инфекции восхождение ежегодно есть спрос на дополнительные исследования в его патогенности. Животные модели инфекционных заболеваний углублению нашего понимания ответа хост возбудителя и привести к развитию эффективной терапии. Нейтрофилы играть главную роль в врожденный иммунный ответ, который управляет инфекции S. aureus , формируя абсцесс стены от инфекции и содействия бактериальных разминирования; количество нейтрофилов, которые проникнуть инфекция кожи S. aureus часто коррелирует с исход заболевания. LysM-EGFP мышей, которые обладают расширенной Зеленый флуоресцентный белок (EGFP) вставлен в регионе промоутер лизоцима М (LysM) (выражается главным образом нейтрофилами), когда используется в сочетании с целом животных в естественных условиях флуоресценции изображений (FLI) обеспечивают средства количественного нейтрофилов эмиграция неинвазивно и продольно в раненых кожи. При сочетании с биолюминесцентных S. aureus штамм и последовательным в естественных условиях весь животных биолюминесцентных изображений (BLI), это возможность продольно контролировать как динамика нейтрофилов найма, так и в естественных условиях бактериальной нагрузки на сайте инфекции в наркотизированных мышей от начала инфекции резолюции или смерти. Мышей более устойчивы к воздействию ряда факторов вирулентности производимые S. aureus , способствующих эффективному колонизации и инфекции в организме человека. Иммунодефицитных мышей предоставляют более чувствительных животных модель для изучения стойких S. aureus инфекций и терапии способность повысить innate иммунных реакций. Здесь мы характеризуют ответы в LysM-EGFP мышей, которые были выведены в MyD88-недостаточным мышей (LysM-EGFP × MyD88- / - мышей) наряду с одичал тип LysM-EGFP мышей расследовать S. aureus кожа раневой инфекции. Многоспектральный одновременного обнаружения включено исследование динамики нейтрофилов набора с помощью в естественных условиях FLI, бактериальной нагрузки с помощью BLI в естественных условиях и ранозаживляющие продольно и неинвазивно со временем.

LysM-EGFP × MyD88- / - мышей более восприимчивы к инфекции S. aureus , чем LysM-EGFP мышей
Штамма S. aureus , используемые в данном исследовании, ALC290618, был построен с плазмида, содержащий люкс конструкцию, которая производ...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection at JoVE.com

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Для реального времени обнаружения врожденной иммунной реакции на кожный ранения и инфекции стафилококк мышей описан подход. Путем сравнения LysM-EGFP мышей (которые обладают флуоресцентные нейтрофилов) с LysM-EGFP гибридных иммунодефицитных мыши штамм, мы заранее нашего понимания инфекции и разработки подходов к борьбе с инфекцией.

Мыши модель для оценки врожденный иммунный ответ инфекции стафилококк

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

Методы, которые контролируют бремя бактерий и нейтрофил реагировать одновременно может обеспечить понимание механизмов стойкости золотистого стафилококка и эффективность стратегий лечения. Основным преимуществом этого метода является то, что несколько параметров могут быть измерены продольно в живом хозяине на протяжении всей инфекции. Очень важно показать, где разместить рану на мышеловку, как подакцизировать кожу, и как привить рану золотом стафилококка.Начните с оттаивания биолюминесценции золотистого стафилококка штамм интереса от отрицательных 80 градусов по Цельсию хранения на льду. Перед полосами культуры на 5%бычьей крови агар пластины. Для ночной инкубации при 37 градусах по Цельсию.На следующее утро перенесите три-четыре отдельные колонии из тарелки золотистого стафилококка в триптический соевый бульон, или TSB. Дополняется 10 микрограммами на миллилитр хлорамфеникол для ночного встряхивания инкубации при 37 градусах по Цельсию. На следующее утро разбавляют 120 микролитров образца культуры в шести миллилитров TSB.С 10 микрограммами на миллилитр хлорамфеникол, в течение двух часов инкубации при 37 градусах по Цельсию и 200 вращений в минуту. Когда оптическая плотность на 600 нанометров достигает 0,5, перенесите три миллилитров бактериальной суспензии в 10 миллилитров ледяного DPBS. После тщательного декантирования супернатанта, добавить дополнительные охлажденные DPBS к грануле, и вихрь повторно приостановленных бактерий тщательно.После второй центрифугации, повторно приостановить бактериальные гранулы в 1,5 миллилитров PBS на льду. Для проверки концентрации бактерий, последовательно разбавляют 100 микролитров бактериальной суспензии в 1 х 10 до 4, и 1 х 10 до 5, в свежем PBS. И пластины 20 микролитров каждого разбавления на отдельных агарных пластинах.После ночной инкубации при 37 градусах по Цельсию подсчитайте количество колонийообразующих единиц путем валового обследования для расчета бактериальной концентрации по отношению к предыдущему дню. Для excisional кожи ранив животных-реципиентов, подтвердить отсутствие реакции на щепотку ноша, прежде чем бритье один на два дюйма раздел на задней части мыши. Аккуратно протрите, чтобы удалить любые бродячие волосы.И дезинфицировать открытые кожи, с последовательными 10%povidone йода, и 70% этанола пропитанной марли приложений. Перемещение наружу из центра хирургической области, по спиральной схеме. После того, как кожа высохнет в течение одной минуты, твердо нажмите стерильные шесть миллиметров пунш биопсии в центре подготовленной хирургической области.Твист пунш биопсии, чтобы создать круговой контур на коже, что полностью прорезает ткани кожи, и по крайней мере один раздел контура. Забота, чтобы не нарезать в основной фасции или ткани. Затем используйте стерильные ножницы и типсы, чтобы прорезать эпидермис и дерму, следуя круговой схеме, запечатленной биопсией пунша.Для прививки золотистого стафилококка заполните 28-м калибровочным инсулиновым шприцем с 50 микролитров подготовленного биолюминесцентного бактериального инокуланта. И используйте палец, чтобы вытащить дерму раненого животного в сторону. Удерживая шприц почти параллельно ткани, медленно вставьте шприц в ткань до тех пор, пока не будет ощущаться внезапное снижение резистентности.Указывает на пирсинг фасции. С иглой, помещенной в центр раны, медленно доставить весь объем инокулента. Подтвердите, что инокулент образует пузырь в центре раны, с минимальной утечкой или дисперсией.И медленно снимите шприц с животного. Затем верните животное в клетку с теплом и мониторингом до полного выздоровления. После раны и инфекции, и ежедневно во время эксперимента, поместите анестезировализованную мышь в биолюминесцентных и флоресца изображения, с раной как можно более плоским.В программном обеспечении изображения выберите люминесценцию и фотографию в качестве режимов визуализации. Время экспозиции должно быть задано до одной минуты при небольшом биннинге, F/Stop 1 для люминесценции, F/Stop 8 для фотографии и открыто для фильтра выбросов. Затем нажмите приобрести, чтобы записать изображение.Для визуализации флуоресценции in vivo выберите флуоресценцию и фотографию в качестве режимов визуализации. Время экспозиции должно быть задано до одной секунды при небольшом биннинге, F/Stop 1 для флуоресценции, F/Stop 8 для фотографии, и Возбуждение и Выброс длин волн 465 более 30 нанометров, и 520 более 20 нанометров, с высокой интенсивностью лампы, соответственно. Затем нажмите приобрести, чтобы записать изображение.После получения обоих наборов изображений, вернуть животное в клетку, с мониторингом, до полного выздоровления. Для анализа изображений откройте изображение для количественной оценки в соответствующей программе анализа изображений и поместите круговую область интереса по умолчанию по всей области раны, включая окружающую кожу. Нажмите измерить область интереса, и записывать значения для среднего потока для раны, чтобы средний поток каждого сигнала, которые будут построены по сравнению со временем.Для измерения заживления раны, подходят круговой области интереса над краем раны, и измерить площадь раны в сантиметрах в квадрате, чтобы заговор дробных изменения от базового по сравнению со временем. В этом репрезентативном эксперименте, условное выражение EGFP миелоидной дифференциации первичного ответа 88, или MyD88 нокаут мышей, продемонстрировали большую восприимчивость к прививке золотистого стафилококка, чем сделал неусловный EGFP выражения животных. При 80%летальности наблюдается в течение первых восьми дней инфекции.Оба штамма мышей потеряли около 5% веса тела сразу после заражения. Тем не менее, условный EGFP выражая мышей восстановили свои первоначальные веса на второй день. В то время как myD88 мышей нет.Закрытие раны в присутствии инфекции золотистого стафилококка не отличалось между двумя штаммами. Тем не менее, стерильно ранены MyD88 нокаутом мышей, был значительный дефект в заживлении ран, по сравнению с условными EGFP выражения животных. Целая визуализация животных выявила более высокую бактериальную нагрузку, о чем свидетельствует повышенный биолюминесцентный сигнал в ранах нокаутирующих животных MyD88, по сравнению с условным EGFP, выражают животных.40%снижение первоначального оборота нейтрофилов для неинфицированных ран MyD88 нокаут животных, также наблюдается по сравнению с условным EGFP выражения животных. Когда 1 х 10 до 7-й колонии формирования единиц стафилококка золотия были введены сразу после ранения, нейтрофил торговли был значительно затуманен в нокаут животных по сравнению с условным EGFP выражения животных. Прежде чем обойтись без бактерий, убедитесь, что в шприце нет пузырьков воздуха, и что расположение иглы правильно расположено в центре раны.Ткани животных могут быть собраны в конечной точке для измерения экспрессии белков, представляющих интерес и бактериального распространения из раны. Золота стафилококка заразна для человека. Таким образом, средства индивидуальной защиты следует носить при обращении с бактериями, и осторожность должна проявляться, при обработке шприца, содержащего патоген.Этот метод помог изучить использование биологических методов лечения стафилококковых инфекций золотистого происхождения, которые повышают хозяев врожденный иммунный ответ против инфекции.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus MRSA

Подкожный Заражение метициллину Staphylococcus Aureus устойчивы (MRSA)

MRSA is a worldwide threat to public health, and MRSA skin and soft-tissue infections now account for more than half of all soft-tissue infections in the ...

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus MRSA in Rat

Экспериментальная модель Эндокардит метициллин устойчивый<em&gt; Золотистый стафилококк</em&gt; (MRSA) у крыс

Endovascular infections, including endocarditis, are life-threatening infectious syndromes1-3. Staphylococcus aureus is the most common world-wide cause ...

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Золотистый стафилококк рост использования человеческого гемоглобина в качестве источника железа

S. aureus is a pathogenic bacterium that requires iron to  carry out vital metabolic functions and cause disease. The most abundant  reservoir of iron ...

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

Количественная оценка респираторный взрыв ответ как показатель врожденной иммунной здравоохранения в данио рерио

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Использование РНК-интерференции по расследованию врожденного иммунного ответа у мышей макрофагов

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro анализ MyD88-опосредованной клеточного иммунного ответа на вирус Западного Нила мутантный штамм инфекции

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Неинвазивная Визуализация врожденного иммунного ответа в данио рерио личинок модели<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Инфекция

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Модель администрирования Galleria mellonella устные Innate иммунных реакций Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Quantifying the Cytotoxicity of Staphylococcus aureus Against Human Polymorphonuclear Leukocytes

Quantifying the Cytotoxicity of Staphylococcus aureus Against Human Polymorphonuclear Leukocytes

Количественная оценка цитотоксичности золотистого стафилококка против полиморфонеклеарных лейкоцитов человека

Staphylococcus aureus is capable of secreting a wide range of leukocidins that target and disrupt the membrane integrity of polymorphonuclear leukocytes ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

Изоляция миндалевидных моноядерных клеток для изучения Ex Vivo Врожденные иммунные реакции в человеческой мукозальной лимфоидной ткани

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...