Name: spontaneous and evoked measures of pain in murine models of monoarticular knee pain
Uploaded: 2019-02-22T14:00:00
Duration: 8 min 3 s
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Financiado por el premio del Departamento de veteranos asuntos mérito 2 I01 RX000379-05.

Todos los protocolos y procedimientos animales fueron aprobados por el cuidado de Animal institucional Minneapolis veteranos asuntos salud sistema (VAHCS) y uso y conformados la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio" (el nacional académico Press, USA) 12.
1. elección de los animales
Nota: Ratones C57Bl6 se utilizan para los tres modelos de artritis.
<ol><li>Utilizar ratones ya sea hombres o mujeres, pero tenga en cuenta que la respuesta al dolor de la artritis puede variar según el género y la patogenesia del modelo sometido a prueba.</li>
	<li>Seleccione los ratones que han alcanzado la madurez sexual, ya no están creciendo rápidamente y no son edad suficiente para haber desarrollado artritis espontánea que podría confundir las medidas de dolor. Nota: Doce semanas es una edad ideal para la medición del dolor en los modelos descritos, pero esto depende del diseño de estudio. Edad al inicio de la artritis depende de la duración de tiempo que toma el modelo a desarrollar. Artritis inflamatoria aguda (modelo de carragenina) requiere 3 h para desarrollar, por lo tanto los animales son 12 semanas de edad en el momento de la inducción. Artritis inflamatoria crónica (modelo CFA) requiere 3 semanas para desarrollar, por lo tanto los animales son 9 semanas de edad en el momento de la inducción. Artritis degenerativa crónica (modelo de colagenasa) requiere 4 semanas para desarrollar, por lo tanto los animales son 8 semanas en el momento de la inducción. Un modelo más crónico de la artritis degenerativa puede utilizarse mediante la inducción de artritis a las 6 semanas de edad. Esto permite que 6 semanas de desarrollo de daño articular. Sin embargo, la artritis degenerativa crónica en ratones no produce gran dolor evocado.</li>
	<li>Obtener animales de un origen nacional criador comercial.</li>
	<li>Animales en grupos de 8 animales en jaulas estándar de policarbonato con agua y dieta ad libitum de roedor en casa.</li>
	<li>Mantener las condiciones ambientales a 72 ° C ± de 1 ° C y 33% ± 1% humedad con ciclos de 12 h luz/oscuridad.</li>
</ol>2. inyecciones intra-articulares en la rodilla
<ol><li>Para crear un 30 G 2,5 mm estéril que cubre la longitud de una aguja de 0,5 pulgadas con funda de polietileno tubo interior diámetro de 0,38 mm y diámetro exterior de 1,09 mm, dejando sólo 2,5 mm de la aguja que sobresale. Esto evitará insertar la aguja demasiado profundo y salir posteriormente de la articulación.</li>
	<li>Elija una sola rodilla a inyectar, afeitarse con cualquier cortador de pelo facial eléctrico disponible en el mercado y esterilizar con exfoliante providone-yodo.</li>
	<li>Anestesiar el ratón con el 3% de isoflurano en 100% O2 en 1 L/min por 3 minutos ± 1 minuto mantener anestesia usando una espiga durante el procedimiento. Profundidad de la anestesia para confirmar pellizco del dedo del pie. Tenga cuidado de vigilar el estado respiratorio y minimizar la exposición de la anestesia para mantener la respiración adecuada.</li>
	<li>Introduzca la Junta a la línea media a través del tendón rotuliano justo inferior al borde inferior de la rótula con la aguja forrada una vez que el ratón está totalmente anestesiado. Este enfoque de la línea media anterior maximiza la precisión para entrar en la articulación e inyectar la sustancia de interés.</li>
	<li>Utilice el mismo método para inyectar sustancias induce artritis y sustancias analgésicas. Controles del impostor se producen mediante la inserción de la aguja como la anterior pero sin inyectar ninguna sustancia.</li>
</ol>3. producción de la artritis
<ol><li>Anestesiar el animal como en el paso 2.3 por encima.</li>
	<li>Pesar las cantidades apropiadas (véase abajo) de carragenina, adyuvante completo de Freund y colagenasa de tipo IV y diluir a la concentración adecuada con solución salina normal en una campana de flujo laminar para la seguridad y esterilidad.</li>
	<li>Inyectar 10 μl de 2.5% de carragenina diluido en solución salina estéril 0,9% en la rodilla como utilizando una jeringa Hamilton para producir artritis inflamatoria aguda. Artritis picos 3 h después de la inyección.</li>
	<li>Inyectar, 30 μl (30 μg) de completo de Freund adyuvante (CFA) en la rodilla para producir artritis inflamatoria crónica. Hay una primera fase inflamatoria aguda que los picos en 1 semana luego de una fase crónica que alcanza a las 3 semanas después de la inyección.</li>
	<li>Inyectar 10 μl conteniendo 10 IU colagenasa de tipo IV para producir artritis crónica degenerativa. Dolor de la artritis picos 4 semanas después de la inyección.</li>
</ol>4. medición del dolor evocado
<ol><li>Siempre examine la rodilla normal comparador para minimizar la respuesta al dolor cruzado (windup) de la rodilla dolorosa13.</li>
	<li>Tren el examinador al aplicar presión constante y firme de 700 gf/cm2 = 10 psi usando un Palpometer nivel 4; el dispositivo emitirá 4 pitidos cuando se aplica este nivel de presión. Esta cantidad de presión constantemente elicite una mayor respuesta al dolor de una artritis común que de una articulación normal. Nota: El dispositivo está calibrado en la fábrica para obtener 4 pitidos cuando se aplica el nivel de presión adecuado. Utilice el aparato para entrenamiento No utilice en los animales, pero al examinar los animales, aplicar la cantidad de presión que aprendió a través de la formación.</li>
	<li>Refrenar el ratón firmemente bastante para prevenir el movimiento casual manteniendo al pescuezo del cuello con el dedo índice y el pulgar y usando el 4to y 5to dedos para sujetar la cola. El ratón debe ser capaz de hacer movimientos discretos, breve, con esfuerzo y al ser estimulados, pero no debe poder moverse libremente o de forma continuada.</li>
	<li>Administrar al mismo tiempo repetida firma palpamientos de (Palpometer nivel 4) a los lados laterales y mediales de cada rodilla en aproximadamente la línea de empalme con el pulgar y el dedo índice de la mano libre una vez por segundo durante un minuto mientras el ratón. No use el Palpometer para el examen de ratón; se utiliza sólo para el entrenamiento.</li>
	<li>Tienen un segundo observador contar el número de veces que el animal vocaliza y lucha para escapar de la contención durante este período de tiempo de un minuto. La suma de luchas y de vocalizaciones es el puntaje de dolor evocado.</li>
	<li>Siempre nos el mismo examinador durante todo el estudio y confirmar el examinador y el observador están cegados en cuanto a la condición experimental.</li>
</ol>5. medición de dolor espontáneo.
Nota: El dispositivo avanzado dinámico peso del cojinete (ADWB) calcula el porcentaje de tiempo total que el animal gasta en cada extremidad y el porcentaje de peso total soportado en cada extremidad.
<ol><li>Llene un vaso de plástico con 2 L de agua. Coloque la almohadilla de espuma y fibra de densidad media que se incluyen con el equipo junto con el vaso lleno a escala de laboratorio y registrar el peso.</li>
	<li>Abrir el programa ADWB y seleccionar el tipo de sensor de ratones .</li>
	<li>Calibrar el sistema antes de cada experimento:<ol>
<li>Seleccione calibración completa en el menú de calibración . Ingrese 0.00 como un valor de la Tara y el peso de la almohadilla de espuma, fibra de densidad media, vaso de plástico y agua como el peso de calibración, luego seleccione siguiente.</li>
		<li>Seleccione Tara antes de colocar cualquier cosa en el sensor. Antes de seleccionar obtener vista previa, cubierta de la almohadilla del detector con la almohadilla de espuma provista, fibra de densidad media y vaso de plástico con 2 litros de agua, en ese orden. Seleccione obtener vista previa una vez que el peso de calibración en el sensor.</li>
		<li>Ajuste el peso de calibración para que se distribuya uniformemente a través de los sensores individuales y cuando el valor del indicador calibración es superior a 95, seleccione obtener definición. Este proceso produce una media normalizada para los sensores individuales y confirma la integridad de los sensores individuales. Por último, seleccione siguiente.</li>
		<li>Guarde el archivo de calibración en la carpeta de calibración.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Seleccione nuevo y cuando ingrese el nombre del proyecto y el nombre de Animal para el primer ratón que se probará.</li>
	<li>Seleccione examinar y abra el archivo de calibración que se creó para el proyecto. Seleccione siguiente, asegúrese de Habilitar captura de vídeo está seleccionada y elija OK.</li>
	<li>Pesar el animal seleccione capturary registrar el peso en el software. Seleccione OK.</li>
	<li>No adapte ratones a la cámara antes de la recolección de datos debido a que este dispositivo mide comportamiento espontáneo.</li>
	<li>Colocar el ratón en la cámara durante un período de 5 minutos de la prueba. Cuando el animal está en la cámara, seleccione iniciar. El software registran la actividad del animal durante este tiempo, capturar un vídeo y sincronizar con los datos del sensor y automáticamente la partición este vídeo en segmentos analizables y no analizable. Nota: El software considera segmentos analizable cuando se detecta al menos una zona estable. Se crea una zona estable cuando los sensores detectan ≥ 2 g en un sensor con un mínimo de un adyacente sensor detección de ≥1 g y cuando la distribución del peso de una zona es estable por más de 0.38 s.</li>
	<li>Antes el primer análisis de una serie Seleccione anotar fácil y que independientes patas de posición. Nota: Puntuación fácil permite validación de iteración de los segmentos donde no cambia la zona estable basado en la validación de la primera zona estable de ese segmento. Patas independientes ajuste proporciona al observador con el acceso a los atajos de teclado que permiten la identificación individual de cada pata. Activan el observador asigna zonas que cumplan criterios mínimos como trasera derecha, izquierda trasera, derecha delantera, izquierda delantera, patas delanteras, otra parte del cuerpo o ignoran la zona mediante el uso de los atajos de teclado manteniendo el cursor sobre el segmento por el mapa video y escalado de sensores.</li>
	<li>Seleccione >> para mover al primer segmento analizable. Si una zona estable no tiene la pata correcta identificada luego mantenga el cursor sobre esa zona y presione el método abreviado (hind, strasero izquierda, un; derecho a la derecha delantera, w; izquierda delantera, q; ambas patas delanteras, e; otra sección del cuerpo, z, ignorar la zona, x) que corresponde con la parte del cuerpo correcta. Nota: Un mínimo de 1,5 min de tiempo analizable es necesaria para cumplir con los límites de análisis. Segmentos analizados se agregan y promedió automáticamente de salida por paw(s) por el software.</li>
	<li>El software ADWB entonces calcula automáticamente el porcentaje de tiempo analizado y el porcentaje de peso corporal (g) a cada una de las opciones de cuatro extremidades. Exportar estos valores en una nueva hoja de cálculo seleccionando resultados, exportar, seleccionar Yes a la pregunta pronto pidiendo si sólo las cinco primeras líneas Resumen deben exportarse, y la ubicación de la salida.</li>
	<li>Eutanasia a los animales por inhalación de CO2 seguida de toracotomía en el final del período de estudio.</li>
	<li>Por cada animal adicional en el mismo grupo, seleccione nuevo y escriba un nombre único animal pero no cambie el nombre del proyecto. Seleccione siguiente, asegúrese de Habilitar captura de vídeo está seleccionada y elija OK. Siga los pasos 5.5 a 5.12 en cuanto el primer animal.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Neggi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+and+impact+of+pain+in+osteoarthritis.">The epidemiology and impact of pain in osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 21, 1145-1153 (2013).</li><li>Center for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+doctor-diagnosed+arthritis+and+arthritis-attributable+activity+limitation+-+United+States,+2007-2009.">Prevalence of doctor-diagnosed arthritis and arthritis-attributable activity limitation - United States, 2007-2009.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 1261-1265 (2010).</li><li>Kaye, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prescription+Opioid+Abuse+in+Chronic+Pain:+An+Updated+Review+of+Opioid+Abuse+Predictors+and+Strategies+to+Curb+Opioid+Abuse:+Part+1.">Prescription Opioid Abuse in Chronic Pain: An Updated Review of Opioid Abuse Predictors and Strategies to Curb Opioid Abuse: Part 1.</a> Pain Physician. 20, 93-109 (2017).</li><li>Maheu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+we+should+definitely+include+intra-articular+hyaluronic+acid+as+a+therapeutic+option+in+the+management+of+knee+osteoarthritis:+Results+of+an+extensive+critical+literature+review.">Why we should definitely include intra-articular hyaluronic acid as a therapeutic option in the management of knee osteoarthritis: Results of an extensive critical literature review.</a> Seminars in Arthritis and Rheumatism. , (2018).</li><li>Malfait, A. -. 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T., Kuner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+ongoing+and+spontaneous+pain+in+rodents+-+challenges+and+opportunities.">Studying ongoing and spontaneous pain in rodents - challenges and opportunities.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 1881-1890 (2014).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).</li><li>Kuner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+mechanisms+of+pathological+pain.">Central mechanisms of pathological pain.</a> Nature Medicine. 16, 1258-1266 (2010).</li><li>Banik, R., Woo, Y., Park, S., Brennan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+and+Sex+Influence+on+Pain+Sensitivity+after+Plantar+Incision+in+the+Mouse.">Strain and Sex Influence on Pain Sensitivity after Plantar Incision in the Mouse.</a> Anesthesiology. 105, 1246-1252 (2006).</li><li>Mogil, J. 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M., Aubert, L., Wietrzych, M., Krezel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+effects+on+behavior+of+C57BL/6J+and+BALB/cByJ+female+mice:+implications+for+phenotyping+strategies.">Estrous cycle effects on behavior of C57BL/6J and BALB/cByJ female mice: implications for phenotyping strategies.</a> Genes, Brain, and Behavior. 6, 192-200 (2007).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Medición del dolor en las articulaciones en modelos preclínicos de artritis inflamatoria y enfermedad articular degenerativa es una herramienta cada vez más valiosa para evaluar nuevos tratamientos para el dolor de la artritis y para restaurar la función articular9,10. Es difícil medir conductas de dolor en ratones con enfermedad de articulación degenerativa crónica. Como cuadrúpedos, pueden descarga de un miembro doloroso a cualquier combinación de las otras tres extremidades o la cola. Disminución de la función en un miembro no puede mostrarse como obviamente en los bípedos humanos. Como presas animales, ratones tienen un beneficio de supervivencia para minimizar conductas de dolor.
Este informe demuestra que dolor en las articulaciones de diferentes mecanismos patológicos puede medirse en ratones con métodos sencillos y relativamente baratos. Dolor inflamatorio de las articulaciones provoca cambios más grandes en tiempo y distribución de soporte de peso y por lo tanto puede ser un modelo más sensible para la detección de la analgesia. Sin embargo, otros modelos de dolor en las articulaciones será importantes al evaluar nuevos potenciales analgésicos ya que están probable que los mecanismos de iniciación del dolor y mantenimiento diferentes con diferente patología. Se encontraron diferencias en los patrones de descarga entre machos y hembras y entre los diferentes modelos de dolor de la artritis.
Es importante reconocer que puede ser tensión como género las diferencias en el comportamiento del dolor en ratones14,15,16. Se conoce también que existen diferencias de cepa distinta en los umbrales de dolor. Se encontró que en ratones C57/Bl6, hembras demostraron significativamente más espontáneas conductas de dolor (aumento de peso y tiempo en miembros anteriores) que los ratones macho con dolor articular degenerativo crónica (figura 2 y figura 3). No determinamos la fase de estro de estos ratones hembra, así que no podemos decir si esto tenía algún efecto en los resultados, pero otros han determinado esa fase de estro no explicó las diferencias sexuales observadas en de ratones C57/Bl617.
Comportamiento del dolor evocado es sensible a todo tipo de dolor en las articulaciones probado y tiene buena reproducibilidad. Es crucial que el examinador está entrenado para administrar la presión de la palpación consistentes y estandarizados y utilizar métodos de sujeción consistente que permite a la gama del comportamiento del dolor para detectar dolor y analgesia. Es importante examinar siempre la rodilla normal para minimizar la respuesta al dolor en la rodilla normal debido a un efecto de transición y maximizar la diferencia en respuesta al dolor la rodilla normal y dolorosa. Usando un segundo observador para la cuenta de las respuestas de dolor que la EPS es necesario para que el examinador se centra en la palpación consistente y que vocalizaciones y peleas siempre son contabilizadas. Puede ser necesario practicar el método de retención en particular para asegurar el animal puede reaccionar al dolor adecuadamente pero no reacciona fácilmente con el fin de diluir la respuesta al dolor. Una ventaja de la medición de la EPS es que es análogo a la medición de la sensibilidad común en pacientes humanos.
Creemos que estos métodos son superiores a los métodos existentes que miden directamente el dolor de las articulaciones de la rodilla de los ratones, pueden ser utilizados en diferentes modelos de dolor Monoartritis, incluyen tanto las respuestas de dolor espontáneo y evocado y son relativamente barato pero fiable y reproducible. Desarrollo de terapias para tratar más eficazmente la artritis, estos métodos servirán para confirmar si los tratamientos son realmente eficaces para el resultado más incapacitante de artritis, dolor.
Nuestros métodos tienen algunas limitaciones. Sobre todo, la medida EPS está limitada por la exigencia de un solo examinador y observadores y la necesidad de técnica muy consistente. Las medidas de dolor evocado más automatizadas y no están sujetos como a las diferencias interobservador. Otro refinamiento de la medida de la EPS puede incluir métodos automatizados para el recuento de vocalizaciones en respuesta a la palpación, como el uso de un detector ultrasónico bat contar vocalizaciones. Este método tendría que ser comparado con nuestro actual método para confirmar la sensibilidad y especificidad antes de que podría aplicarse ampliamente.
En Resumen, Describimos dos medidas de comportamiento de dolor diferentes para cuantificar el dolor articular en ratones. Las diferencias de género y la tensión se deben considerar antes de elegir un modelo experimental. Medidas del dolor evocado requieren entrenamiento cuidadoso y la aplicación consistente del examinador. Ambos comportamientos de dolor espontáneo y evocado se recomiendan para evaluar la severidad del dolor y limitación funcional y deben utilizarse para evaluar completamente los efectos de nuevos analgésicos posibles.

El dolor es la principal causa de discapacidad de la artritis1,2. Actualmente analgésicos disponibles son a menudo ineficaces, tóxicas y potencialmente contribuyan al problema de narcóticos en todo el país3. La cirugía no es siempre una opción para la artritis de la fase final, particularmente en los ancianos, que pueden tener múltiples comorbilidades. Viscosupplementation y esteroides intraarticulares pueden ser eficaces en la enfermedad temprana pero normalmente pierden su efectividad en la última etapa la enfermedad4. Hay una gran necesidad no satisfecha de analgésicos efectivos para el dolor de la artritis que no se puede tratar con los tratamientos actualmente disponibles.
Modelos preclínicos son útiles para comprender el mecanismo de acción de las terapias del dolor y para la predicción de toxicidad limitante y medición del dolor en los animales es un reto5. Medidas de dolor pueden ser espontáneo y directo (estática o dinámica cojinete de peso, postura, análisis de la marcha, movimiento espontáneo y sensibilidad térmica o mecánica del pie) o indirecta/evocado (prueba de retiro de extremidades, fuerza de compresión de la rodilla o proyección de imagen de cerebro) 6. para las formas leves de Monoartritis, análisis de la marcha es insensible y carece de consistencia7. Cojinete de peso estático es útil para medir el dolor en los miembros posteriores de rata pero puede ser difícil en los ratones. Medidas de sensibilidad mecánica como la prueba de von Frey indirectamente detectan la sensibilización de la almohadilla del pie en el escenario de la artritis de rodilla, pero no medir directamente el dolor de la rodilla y son engorrosas para llevar a cabo. Fuerza de compresión de la rodilla medido con el dispositivo de P.A.M.. (medición de la aplicación de presión) puede ser utilizado en ratas, pero el dispositivo grande es difícil de usar en los ratones sin producir comportamientos negativos que no necesariamente reflejan dolor8.
Hemos desarrollado métodos para medir dolor espontáneo y evocado en tres diferentes modelos de artritis murina que son sensibles y reproducibles para medir la severidad del dolor y los efectos analgésicos de terapias intraarticulares9, 10. también podemos correlacionamos el alivio del dolor con otros marcadores histologic de dolor y pantalla de fármacos en investigación que no sería posibles en los seres humanos. Podemos evaluar sinergias de analgésicos moderadamente eficaces para identificar terapias de combinación más eficaces. Utilizando métodos de probada eficacia para el dolor evocado y espontáneo, evitar el escollo de no identificar el dolor que se refleja en un tipo de comportamiento del dolor pero no el otro y más medición de dolor de espejo en los seres humanos11. Al limitar la evaluación de dolor a las dos metodologías, minimizar el estrés en los animales, que pueden afectar el comportamiento del dolor y maximizar la productividad del laboratorio.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:821px;" width="820">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:183px;">Advanced Dynamic Weightbearing Device</td>
			<td style="width:221px;">Bioseb In Vivo Research Instruments, Vitrolles, France</td>
			<td style="width:203px;">Model: BIO-DWB-M - For mice</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:183px;">C57/Bl6 mice (male and female)</td>
			<td style="width:221px;">Jackson Labs, Bar Harbor ME</td>
			<td style="width:203px;">Stock No:&#160;000664&#160;|&#160;Black 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:183px;">Carrageenan</td>
			<td style="width:221px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td style="width:203px;">22049-5G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:183px;">Complete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td style="width:221px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td style="width:203px;">F5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:183px;">Palpometer</td>
			<td style="width:221px;">Palpometer Systems, Inc. Victoria, B.C</td>
			<td style="width:203px;">Not available - no longer in business</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:183px;">Type IV Collagenase</td>
			<td style="width:221px;">Worthington Biomedical Corp, Lakeville, NJ</td>
			<td style="width:203px;">LS004210</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spontaneous and evoked measures of pain in murine models of monoarticular knee pain

El dolor es la principal causa de discapacidad de la artritis. Actualmente es una necesidad para los tratamientos adecuados para el dolor de la artritis. Modelos preclínicos son necesarios y útiles para el estudio de los mecanismos del dolor y para evaluar la eficacia de los tratamientos de la artritis. Medir el dolor en modelos animales de artritis es un reto. Hemos desarrollado métodos para medir el dolor espontáneo y evocado en tres modelos de artritis murina. Nos cuantificar las respuestas de dolor evocado de ratones sometidos a la palpación firme de una rodilla dolorosa. También evaluamos el dolor espontáneo por la proporción de peso y la cantidad de tiempo en cada una de sus 4 extremidades después de la inducción del dolor de artritis en una rodilla. Dolor en las articulaciones en estos modelos de ratón produce un aumento significativo en las respuestas evocadas del dolor y una alteración en el peso. Puesto que los ratones son cuadrúpedos, descarga de la extremidad dolorosa a la extremidad contralateral, a los miembros anteriores, o alguna combinación. Estos métodos son simples, requieren mínimo equipamiento y son reproducibles y sensibles para la detección de dolor. Son útiles para el estudio de tratamientos modificadores de la enfermedad de artritis y analgésicos en ratones.

Dolor agudo y crónico inflamatorio y crónico degenerativo conjunto fue producido por inyección de IA en la rodilla izquierda de ratones machos y hembras C57BL/6J antes de la evaluación de dolor utilizando el protocolo descrito anteriormente. Dolor articular se midió como puntuaciones de dolor evocado (EPS) y conductas de dolor espontáneo medición con un dispositivo de peso dinámico avanzado (ADWB) del cojinete. A los efectos de este informe, se hicieron comparaciones individuales mediante pruebas de t de Student. Experimentos donde se se compararon dosis analgésicas, ANOVA puede ser una comparación estadística más apropiada.
EPS (la suma de luchas contadas más vocalizaciones) aumentó con los tres tipos de dolor en las articulaciones (figura 1). Medidas ADWB de porcentaje peso sobre las extremidades izquierda en comparación con ratones ingenuos se redujeron en dolor articular inflamatorio agudo y crónico. Las hembras pero no los machos con crónico degenerativos articulación dolor (COL) mostrada reducciones similares en medidas ADWB (figura 2A). Varones con dolor articular inflamatorio agudo transfieren más peso a los miembros anteriores de animales ingenuos. Cojinete en miembros anteriores de peso aumentó en ratones hembra en comparación con el ingenuo pero no en varones con dolor articular degenerativo crónica (COL) (figura 2B). Medidas ADWB de porcentaje de tiempo en la extremidad afectada de trasero izquierda disminuida que ingenuo en ratones con dolor articular inflamatorio agudo y crónico, pero esto no fue estadísticamente significativa. Estos animales gastan significativamente menos tiempo en las extremidades izquierda que en las extremidades derecha. En machos y hembras con dolor articular degenerativa crónica, no hubo diferencias en tiempo en los miembros posteriores izquierdos comparados con el ingenuo. Hembras con dolor articular degenerativa crónica pasado más tiempo en la nonarthritic extremidades derecho comparado con el ingenuo (figura 3A). Ratones con aguda inflamatorias articulación dolor y hembras con dolor articular degenerativo crónica pasado significativamente más tiempo en los miembros anteriores que ingenuos animales (figura 3B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59024/59024fig1.jpg"> Figura 1 . Evocó las puntuaciones de dolor para la izquierda (columna azul) y miembros posteriores de derecha (columna roja). Extremidades traseras derecha sirvió como controles internos y no se someten a cualquier inyecciones IA. Las mediciones se realizaron en las siguientes condiciones: uninjected ingenuo (masculino y femenino), artritis inflamatoria aguda inducida por carragenina (coche), completa inflamatoria crónica artritis inducida por adyuvante de Freund (CFA) y crónica no inflamatoria Artritis inducida por la colagenasa (COL - masculino y femenino). En animales de ingenuo la EPS de la rodilla trasera izquierda no fue estadísticamente diferente a la derecha en los machos y sólo mínimamente diferente en las mujeres (**P = 0.038) probablemente debido a algunos mayor respuesta al dolor en la rodilla examinada (la izquierda) en segundo lugar debido al dolor de crossover respuesta. En todos los grupos de artritis la artritis rodilla izquierda EPS fue significativamente mayor que la rodilla derecha contralateral nonarthritic. Al comparar la EPS de la rodilla izquierda de los grupos de artritis a los ingenuos animales, todos los grupos de artritis tuvieron puntuaciones significativamente mayores de EPS en la artritis rodilla izquierda comparada con rodillas izquierda ingenua. Esto era cierto en machos y hembras. P < 0.05 en comparación con el hombre ingenuo, #P < 0.05 comparado con mujer ingenua. Todas las barras de error son SEM en todas las figuras. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59024/59024fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59024/59024fig2.jpg"> Figura 2 : Comportamiento del dolor espontáneo medido por porcentaje de peso soportado en los miembros. Comportamiento de dolor espontáneo (A) medido por peso total por ciento a la izquierda (columna azul) y miembros posteriores de derecha (columna roja). En ambos animales masculinos y femeninos ingenuos, no había ninguna diferencia significativa entre porcentaje peso soportado en las extremidades traseras izquierdas y derecha. Ratones machos con coche y CFA inducida por dolor en las articulaciones y las hembras con COL inducida por dolor en las articulaciones diámetro significativamente menos peso en las extremidades izquierda comparado con el ingenuo. P < 0.05 en comparación con el hombre ingenuo, #P < 0.05 comparado con mujer ingenua. (B) comportamiento de dolor espontáneo medido por peso total del cuerpo por ciento a los miembros anteriores. En varones con dolor articular agudo auto inducida y las hembras con dolor articular crónico COL inducida, hubo un aumento significativo en la cantidad de peso soportado en los miembros anteriores. Esto no fue visto en varones con CFA o COL inducida por dolor en las articulaciones. Ingenua las hembras tienden a soportar más peso en los miembros anteriores que en los hombres naïve (P = 0,02). Peso adicional puede tenerse por otras partes del cuerpo como la cola o la grupa. Éstos eran generalmente mínimos y no contribuyó significativamente a la comprensión de la respuesta al dolor y por lo tanto no se muestra. P < 0.05 en comparación con el hombre ingenuo, #P < 0.05 comparado con mujer ingenua y masculina semana 4 COL en miembro anterior weightbearing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59024/59024fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59024/59024fig3.jpg"> Figura 3: comportamiento de dolor espontáneo medido por porcentaje tiempo gastado en extremidades. Comportamiento de dolor espontáneo (A) medido por el tiempo total por ciento a la izquierda (columna azul) y miembros posteriores de derecha (columna roja). No hubo diferencias significativas entre extremidades traseras derecha e izquierdas en ratones masculinos y femeninos ingenuos con respecto al tiempo dedicado a la extremidad. Ratones machos con coche y CFA inducida por la artritis apareció para pasar menos tiempo en peso con la artritis extremidades izquierda comparado con el ingenuo, pero esto no fue estadísticamente significativa y probablemente debido a mayor variabilidad en esta medida en estos ratones. Hubo una diferencia significativa en estos animales comparación de derecha a izquierda como la derecha extremidades pasó más tiempo total peso de la izquierda. En las mujeres con artritis inducida de la COL, las extremidades derecha fue weightbearing una mayor proporción de tiempo que en las hembras de ingenuo. P < 0.05 comparación de derecha a izquierda, #P < 0.05 comparado con mujer ingenua y masculina semana 4 COL tiempo gastado en miembros anteriores. (B) comportamiento de dolor espontáneo medido por la cantidad total de tiempo gastado en los miembros anteriores. En varones con artritis inducida por coche y mujeres con artritis inducida COL los ratones pasaron significativamente más tiempo peso en las extremidades delanteras de los animales naïve. Ratones hembra ingenuo pasaron más tiempo en los miembros anteriores de animales hombre ingenuo. P < 0.05 en comparación con el hombre ingenuo, #P < 0.05 comparado con mujer ingenua. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59024/59024fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

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Spontaneous and Evoked Measures of Pain in Murine Models of Monoarticular Knee Pain

Hemos desarrollado una medida evocada de dolor de la artritis y junto con un método estandarizado para medir el dolor espontáneo en diferentes modelos murinos de artritis inducida químicamente. Estas medidas son sensibles y reproducibles para diferentes tipos de dolor en las articulaciones.

Medidas espontáneas y evocadas de dolor en modelos murinos de dolor Monoarticular de la rodilla

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are ...

La medición del dolor en modelos preclínicos de artritis es difícil, pero es esencial para la evaluación de tratamientos regenerativos y analgésicos. Nuestro protocolo es sensible y reproducible para la medición de comportamientos de dolor evocados y espontáneos. Y es simple y relativamente barato.La artritis es el mayor contribuyente a la discapacidad, y el dolor es la principal causa de discapacidad. El tratamiento de la artritis es actualmente inadecuado. Los modelos preclínicos son una parte importante del desarrollo del tratamiento.Demostrando este procedimiento estarán Christopher Dorman, un técnico, y Sandra Frizelle, una científica de mi laboratorio. Para evitar que la aguja se inserte demasiado profundamente y salga de la articulación posteriormente, cubra una aguja de punto 5 pulgadas con una vaina de tubo de polietileno hasta que sólo 2,5 milímetros de la aguja sobresalga de la vaina. A continuación, afeitar el pelaje de la rodilla del ratón anestesiado para ser inyectado, y esterilizar la piel expuesta con exfoliación de yodo povidona.A continuación, inserte la aguja enreda en la articulación en la línea media a través del tendón rotulista justo inferior al borde inferior de la rótula, e inyecte la sustancia de interés. Antes de evaluar el dolor articular evocado, utilice un altímetro de nivel 4 para practicar la aplicación de fuerzas de sietecientos gramos por centímetro al cuadrado de presión constante y firme. El dispositivo emitirá 4 pitidos cuando se aplique el nivel adecuado de presión.Cuando se puede aplicar de forma fiable la presión adecuada, reveste el ratón en el cuello con el dedo índice y el pulgar lo suficientemente apretados como para evitar el movimiento casual. Y usa el cuarto y quinto dedos para contener la cola. El ratón debe ser capaz de hacer movimientos discretos y breves con esfuerzo y cuando se estimula, pero no debe ser capaz de moverse libre o continuamente.Administrar palpas repetidas de firme simultáneamente a los lados lateral y medial de cada rodilla con el pulgar y el dedo índice de la mano libre aproximadamente la línea de la articulación una vez por segundo durante 1 minuto. Y pida a un observador que cuente el número de veces que el animal vocaliza y lucha para escapar de la restricción durante este período de aplicación de presión de 1 minuto. La suma de las mordeduras y vocalizaciones se considera la Puntuación de Dolor Evocado.Abra el programa de software de rodamientos de peso dinámico avanzado y seleccione Mice"como tipo de sensor. Antes de cada experimento, seleccione la calibración completa"en el menú de calibración. Y escriba cero"para el valor de tara.Y el peso de la almohadilla de espuma, tablero de fibra de densidad media, vaso de precipitados de plástico y agua como el peso de calibración. Seleccione next"y tare"Y cubra la almohadilla del sensor con la almohadilla de espuma, la placa de fibra de densidad media y el vaso de plástico de agua. Cuando todos los materiales se han colocado en la almohadilla del sensor, seleccione la vista previa de ganancia"Y ajuste el peso de calibración hasta que se distribuya uniformemente entre los sensores individuales.Cuando el valor del indicador de calibración es superior a noventa y cinco, seleccione la definición de ganancia"para producir una media normalizada para los sensores individuales y para confirmar la integridad de los sensores. A continuación, seleccione siguiente" y guarde el archivo de calibración en la carpeta de calibración. Seleccione new" e introduzca el proyecto y los nombres de los animales para el primer ratón que se va a probar.Seleccione examinar" y abra el archivo de calibración que se creó para el proyecto. A continuación, seleccione siguiente"confirmar que habilitar la captura de vídeo" está seleccionado, y seleccione ok"Siguiente, pesar el animal. Seleccione capture" y registre el peso en el software.Después de seleccionar ok"coloque el ratón en la cámara durante 5 minutos. Y seleccione launch"El software grabará la actividad del animal, capturará un video y sincronizará con los datos del sensor, y dividirá automáticamente el video en segmentos analizables y no analizables. Al final del período de ensayo, seleccione la puntuación fácil"y el ajuste de pausa independiente"Y seleccione avance rápido"para pasar al primer segmento analizable.Si una zona estable no tiene la pata correcta identificada, mantenga el cursor sobre esa zona y presione la tecla de método abreviado adecuada correspondiente a la parte del cuerpo correcta. El software avanzado de cojinete de peso dinámico calculará automáticamente el porcentaje de tiempo analizado invertido y el porcentaje de peso corporal colocado en cada una de las 4 extremidades. A continuación, seleccione results"export"and yes" para exportar las primeras 5 líneas de resumen de datos al programa de hoja de cálculo adecuado.Para cada animal adicional en el mismo grupo, seleccione new"e introduzca un nombre de animal único sin cambiar el nombre del proyecto. A continuación, capture la actividad de cada animal en la cámara como se acaba de demostrar. Puntuaciones de dolor evocadas para el cuidado inflamatorio agudo-a-gen-a artritis inducida, f-roy-nes completo inflamatorio crónico add-jav-ent artritis inducida, y crónica no inflamatoria cole-ag-in-a inducido aumento sobre los observados para animales ingenuos sin inyectar para los tres tipos de dolor articular.Las hembras, pero no los hombres con dolor articular crónico degenerativo, demuestran reducciones similares en las medidas de peso dinámico por adelantado en comparación con los ratones ingenuos en el dolor articular inflamatorio agudo y crónico. Los machos con dolor articular inflamatorio agudo transfieren más peso a las 4 extremidades que los animales ingenuos. El peso que afecta a las 4 extremidades aumenta en ratones hembra en comparación con los animales ingenuos, pero no en los machos con dolor articular crónico degenerativo.Tanto en machos como en hembras con dolor articular crónico degenerativo, no hay diferencia en el tiempo que pasa en las extremidades traseras izquierdas en comparación con los animales ingenuos. Y las hembras con dolor articular crónico degenerativo pasan más tiempo en la extremidad posterior derecha no artrítica en comparación con los ratones no inyectados. Finalmente, los ratones macho con dolor articular inflamatorio agudo, y las hembras con dolor articular crónico degenerativo, pasan significativamente más tiempo en sus 4 extremidades que los animales ingenuos.La correcta identificación de la parte posterior de los pies del animal en relación con su cuerpo es muy importante. Concéntrese en la parte posterior del animal en lugar de en su cabeza. Con este método, somos capaces de probar la afectividad de nuevos analgésicos interarticulares nuevos.

Research

JoVE Journal

Medicine

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