Name: an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay
Uploaded: 2019-01-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke alle de involverede deltagere. Vi anerkender den victorianske regering operationelle infrastruktur Support Program. PVL er en NHMRC karriere udvikling Fellowship modtager.

Bemærk: Alle trin skal udføres på et BSL2 hood st├Ñr forskelligt. Viral titrering er nødvendig før en PRN analysen til at fastslå den optimale RSV koncentration til PRN assay. Det anbefales at prøve viruslagrene i en lille mængde, der vil blive optøet når og anvendes til hver NAb assay. Ved hjælp af den samme viral bestand for alle NAb assays udføres for alle prøver fra én undersøgelse anbefales også. Sørg for dyrkningsmedier og fosfatbufferet saltopløsning (PBS) er opvarmet ved 37 ?...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Modjarrad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+Vaccine+Development+Report+from+a+World+Health+Organization+Meeting+held+on+23-24+March+2015.">WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus Vaccine Development Report from a World Health Organization Meeting held on 23-24 March 2015.</a> Vaccine. 34 (2), 190-197 (2016).</li><li>Giersing, B. K., Karron, R. A., Vekemans, J., Kaslow, D. C., Moorthy, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meeting+report:+WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+(RSV)+vaccine+development,+Geneva,+25-26+April+2016.">Meeting report: WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus (RSV) vaccine development, Geneva, 25-26 April 2016.</a> Vaccine. , (2017).</li><li>Mazur, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+respiratory+syncytial+virus+vaccine+landscape:+lessons+from+the+graveyard+and+promising+candidates.">The respiratory syncytial virus vaccine landscape: lessons from the graveyard and promising candidates.</a> Lancet Infect Diseases. 18 (10), e295-e311 (2018).</li><li>Hosken, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multi-laboratory+study+of+diverse+RSV+neutralization+assays+indicates+feasibility+for+harmonization+with+an+international+standard.">A multi-laboratory study of diverse RSV neutralization assays indicates feasibility for harmonization with an international standard.</a> Vaccine. 35 (23), 3082-3088 (2017).</li><li>Zielinska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+improved+microneutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+by+automated+plaque+counting+using+imaging+analysis.">Development of an improved microneutralization assay for respiratory syncytial virus by automated plaque counting using imaging analysis.</a> Virology Journal. 2, 84 (2005).</li><li>van Remmerden, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+respiratory+syncytial+virus+neutralization+assay+based+on+the+detection+of+green+fluorescent+protein+expression+and+automated+plaque+counting.">An improved respiratory syncytial virus neutralization assay based on the detection of green fluorescent protein expression and automated plaque counting.</a> Virology Journal. 9, 253 (2012).</li><li>Varada, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+using+a+quantitative+PCR-based+endpoint+assessment.">A neutralization assay for respiratory syncytial virus using a quantitative PCR-based endpoint assessment.</a> Virology Journal. 10, 195 (2013).</li><li>Tripp, R. A., Jorquera, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human respiratory syncytial virus: methods and protocols. , (2016).</li><li>Suara, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+neutralizing+antibody+to+respiratory+syncytial+virus+in+sera+from+mothers+and+newborns+residing+in+the+Gambia+and+in+The+United+States.">Prevalence of neutralizing antibody to respiratory syncytial virus in sera from mothers and newborns residing in the Gambia and in The United States.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 3 (4), 477-479 (1996).</li><li>Wang, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+neutralizing+serum+antibodies+of+patients+vaccinated+with+human+papillomavirus+L1+or+L2-based+immunogens+using+furin-cleaved+HPV+Pseudovirions.">Measurement of neutralizing serum antibodies of patients vaccinated with human papillomavirus L1 or L2-based immunogens using furin-cleaved HPV Pseudovirions.</a> PLoS One. 9 (7), e101576 (2014).</li><li>Magnus, C., Reh, L., Trkola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+resistance+to+neutralizing+antibodies:+Determination+of+antibody+concentrations+leading+to+escape+mutant+evolution.">HIV-1 resistance to neutralizing antibodies: Determination of antibody concentrations leading to escape mutant evolution.</a> Virus Research. 218, 57-70 (2016).</li></ol>

Vi har udviklet og optimeret en enkel og effektiv RSV mikro-neutralisering assay, der let kan tilpasses de fleste laboratorier. Denne analyse er købedygtig opmåle virusinfektion evne samt måle hæmning af viral infektion af NAb på cellulært niveau ved hjælp af edb billedscanning. Brugen af en imaging-baseret platform og specifikke antistof-baserede systemer har øget specificitet og spot påvisningsfølsomhed sammenlignet med traditionelle plaque påvisning metoder6,<sup class="xr...

Respiratorisk syncytialvirus (RSV) er den hyppigste årsag til nedre luftvejsinfektioner i den pædiatriske befolkning på verdensplan1. Trods sin høje byrde findes der stadig ingen vaccine eller behandling. Siden 2013, har World Health Organization (WHO) erklæret RSV vaccine udvikling prioriteres større forskning med årlige WHO høring møder2,3. WHO har godkendt ved hjælp af RSV neutraliserende antistof (NAb) måling til at overvåge vaccine immunogenicitet, da dette er anerkendt som den store serologisk markør for beskyttelse4. Nimb har vist sig at beskytte mod alvorlige RSV infektion i en række undersøgelser samt kliniske forsøg med anti-RSV monoklonalt antistof palivizumab, i øjeblikket den kun forebyggende strategi tilgængelige4.
Der er flere NAb assay formater, der bruges af laboratorier verden over, herunder celle- og molekylært-baserede assays, der har gjort standardisering bestræbelser udfordrende5,6,7,8. Konventionelle plaque-reduktion neutralisering (PRN) analysen, der måler antallet af reducerede plak danner enheder (PFU) af en RSV-specifikke antistof er imidlertid stadig guldstandarden9. Her rapporterer vi en forbedret, forenklet og høj overførselshastighed PRN-protokol, der kan bruges på mange cellelinjer, for forskellige RSV stammer og med øget assay overførselshastighed. Denne protokol er blevet testet ved hjælp af kliniske prøver fra forskellige indstillinger samt på prøver fra dyremodel eksperimenter.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-185</td>
			<td>provided by Dr Keith Chappell, University of Queensland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viral strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSV A2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>VR-1540</td>
			<td>lot number 60430286</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1000142511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-Fluor donkey anti-goat IgG (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMC sodium salt powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5678-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (no serum, 3.7 g/L NaHC, P/S) (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal calf Serum (stored in 50ml aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat X RSV antibody</td>
			<td>Merck</td>
			<td>AB1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human polyclonal antiserum to respiratory syncytial virus (RSV) (stored in 45 &#181;L aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>BEI Resources</td>
			<td>NR-4022</td>
			<td>Free order through BEI Resources upon registration. This serum belong to a panel of human antiserum and immune globulin to RSV (NR-32832)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 powder</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31100035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk diluent blocking solution (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Australian Biosearch</td>
			<td>50-82-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (stored in 6mL aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>s.d.H2O from Milli-Q dispenser</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>In-house dispensation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1X PBS for culture (stored at 4&#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20 polysorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Invitro Technologies</td>
			<td>FAL352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter unit 0.22um (500 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NAL5660020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Eppendorf tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Australia PL</td>
			<td>AM12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile flat-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>655180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile U-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>650180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4487-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipette</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4251-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-200 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-200-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 5-20 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-20-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 100-1000 &#181;LClear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1000</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-1000-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-10 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1001</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TXLF-10-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments and softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISpot reader system</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AID ELISpot software version 5.0</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel 2007</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay

Respiratorisk syncytial virus-specifikke neutraliserende antistoffer (RSV NAbs) er en vigtig markør for beskyttelse mod RSV. En række forskellige assay formater er i øjeblikket i brug over hele verden, så der er behov for en nøjagtig og høj overførselshastighed metode til måling af RSV Nimb. Vi beskriver her en imaging-baseret mikro-neutralisering assay, der er blevet testet på RSV undergruppe A og kan også tilpasses til RSV undergruppe B og forskellige prøve typer. Denne metode er meget reproducerbar, med Inter assay variationer for reference antiserum mindre end 10%. Vi mener, at denne analyse umiddelbart kan fastslås i mange laboratorier verden over til en relativt lav pris. Udvikling af en forbedret, høj overførselshastighed assay, der måler RSV NAbs repræsenterer et stort skridt fremad for standardisering af denne metode internationalt samt at være kritisk til evaluering af roman RSV vaccine kandidater i fremtiden.

Titrering af en virus bestand blev udført fra 1:10 1:108 fortynding til at bestemme den virus stock koncentration før PRN assay (repræsentative resultater vist i figur 5). Fra figur 5, PFU kan tælles pålideligt på fortyndinger på 1:104 og 1:105. Det gennemsnitlige antal PFU fra tredobbelt brønde på den samme fortynding blev beregnet. Siden det gennemsnitlige antal steder på 1:105</s...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay at JoVE.com

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay

Denne undersøgelse beskriver en høj produktivitet, imaging-baseret mikro-neutralisering assay til at bestemme titer af neutraliserende antistoffer specifikke for respiratorisk syncytialvirus (RSV). Dette assay format er blevet testet på forskellige prøve typer.

En forbedret og høj overførselshastighed respiratorisk syncytialvirus (RSV) mikro-neutralisering Assay

Respiratory syncytial virus-specific neutralizing antibodies (RSV NAbs) are an important marker of protection against RSV. A number of different assay ...

Der er behov for en præcis og høj gennemløbsmetode til måling af RSV-neutraliserende antistoffer, som en vigtig markør for beskyttelse mod respiratorisk syncytial virus. Denne metode er meget reproducerbar med inter-assay variationer for reference antiserum er mindre end 10%Vi mener, at denne analyse let kan etableres i mange laboratorier over hele verden til relativt lave omkostninger. Vi beskriver her en billedbehandlingsbaseret mikroneutralisationsanalyse, der er testet på RSV undergruppe A, og som også kan tilpasses til RSV-undergruppe B og forskellige prøvetyper.Demonstration af proceduren vil være Reuben Tse, et medlem af forskerholdet på MCRI. Til frøplader på dag ét, første resuspend A549 celler i DMEM medier, med 10% FCS og 1, 000 enheder Penicillin-Streptomycin blanding i en koncentration på 400, 000 celler pr milliliter. Derefter frø 96-godt flad bund sterile plader med 40, 000 A459 celler på en tæthed på 100 mikroliter per brønd.Inkuber pladen ved 37 grader Celsius i 5% kuldioxid miljø natten over. For at forberede serumfortyndingen på dag to skal den første optø de humane RSV-referenceserum og serumtestprøver ved stuetemperatur. Derefter placere dem i et vandbad ved 56 grader Celsius i 30 minutter for at opvarme og aktivere dem.Dernæst forberedes mere end 110 mikroliter af en 1-100 fortynding af referenceserrummet ved at blande 1,5 mikroliter af referenceserrummet med FCS-frie DMEM-medier med Penicillin-Streptomycin-blanding til et endeligt volumen på 150 mikroliter. Pipette 110 mikroliter af denne fortynding i godt A12 af en 96-godt U-bund steril plade. For at gøre serie en til to fortyndinger ned pladen, først tilføje 55 mikroliter af FCS-fri DMEM medier med Penicillin-Streptomycin blanding til brønde B12 til H12.Så med en ny tip overførsel 55 mikroliter fra godt A12 til godt B12. Pipette op og ned fem gange for at blande opløsningen, og fortsætte, indtil du når godt H12. Pipette af de overskydende 55 mikroliter af opløsningen fra brønden H12.Dernæst forberede en en til 100 fortynding af serum testprøver, og tilsæt 110 mikroliter af hver fortynding til tilsvarende brønde A1 til A9 og E1 til E9 af 96-godt steril plade. Derefter tilsættes 55 mikroliter AF FCS-fri DMEM medier med Penicillin-Streptomycin blanding til brønde i kolonner en til ni. Gør seriel en til to fortyndinger af række A til række D og fra række E til række H som tidligere beskrevet.Tilføj 55 mikroliter af FCS-fri DMEM medier med Penicillin-Streptomycin blanding til brønde i kolonne 10 og 11. For at forberede virus bestanden, først sætte en frossen hætteglas af RSV i en 37 grader Celsius vandbad til at tø det hurtigt, derefter placere hætteglasset på is. Dernæst tilsættes virus til DMEM medier, der indeholder Penicillin-Streptomycin blanding på ca 200 PFU per brønd til at gøre et samlet volumen på 55 milliliter for 100 brønde.For at forberede virus serum blandingen, først tilføje 55 mikroliter af den fortyndede virus til alle brønde af kolonner en gennem ni og brønde i række E gennem H i kolonne 10 og 11. Derefter tilsættes 55 mikroliter AF FCS-fri DMEM medier med Penicillin-Streptomycin blanding til alle brønde af række A til D af kolonner 10 og 11, og inkubere pladen ved 37 grader Celsius i 5% kuldioxid miljø i en time. Før inokulering af A549 celler med RSV, undersøges cellepladen under et let mikroskop for at bekræfte, at A549 cellemonstudatorer er 80% sammenløb.Derefter vendes pladen forsigtigt at kassere medierne, og let skamplet pladen på en steril absorberende køkkenrulle. Efter hver, vask med filtreret steril PBS. Dernæst tilsættes 100 mikroliter pr. brønd af virusserumblandingen til de tilsvarende brønde på A549-cellepladen i henhold til pladeskabelonen i manuskriptet, og pladen inkuberes ved 37 grader Celsius i 5 % kuldioxid i en time.Ved slutningen af inkubationen skal du bruge en pipette til at fjerne 90 mikroliter pr. brønd og tilsætte 100 mikroliter af mediet, der indeholder 1XM199, 1,5 % CMC og 2% FCS i Penicillin-Streptomycin-blandingen. Inkuber pladen ved 37 grader Celsius i 5% kuldioxid i tre dage. For at fastsætte og udvikle en analyseplade skal du først vende den RSV-inficerede A549-celleplade forsigtigt kassere mediet, der indeholder M199, CMC, 2% FCS, og Penicillin-Streptomycin blandingen.Derefter langsomt tilføje 200 mikroliter af fiksering Buffer til hver brønd. Inkuber pladen ved minus 20 grader Celsius i 20 minutter. Kassér derefter fikseringsbufferen og forsigtigt skamplet på en absorberende køkkenrulle.Lad pladen med forsiden være tørre i 10 minutter. Lav derefter 5% mælkeblokeringsopløsning med filtreret PBS-buffer indeholdende 05 polysorbat 20. Der tilsættes 200 mikroliter af blokeringsopløsningen til hver brønd, og pladen inkuberes ved stuetemperatur i 30 minutter.Ved slutningen af inkubationen vendes pladen forsigtigt for at kassere opløsningen og skamplet på en absorberende køkkenrulle. For at gøre det primære antistof, fortyndes en til 500 ged XRSV antistof i blokerende opløsning. Tilsæt 50 mikroliter til hver brønd og inkuber pladen ved 37 grader Celsius i en time.Pladen vaskes tre gange med filtreret PBS-polysorbat. Dernæst gør det sekundære antistof ved at fortynde en til 5, 000 Alexa Fluor æsel anti-ged immunglobulin G i blokeringsopløsningen. Tilføj 50 mikroliter til hver brønd og inkubere ved 37 grader Celsius i en time.Pladen vaskes fem gange med filtreret PBS-polysorbat. Hvis du vil tælle plaques med en automatisk spotslæser, skal du først bruge en ubrugt 96-brønds kulturplade til at samarbejde med instrumentet ved at indtaste optællingsindstillingerne i FITC-kanalen. Læs derefter cellepladen, pak den ind i folie, og opbevar den ved fire grader Celsius.Dernæst skal du kontrollere billederne af brønde for artefaktiske plaques eller forstyrrede cellemonstudere og udelukke brønde med forstyrrede cellemonstratorer. Det gennemsnitlige antal plaques af no-serum kontrol brønde blev beregnet og anvendes til at bestemme 50% neutralisering cut-off, der ville resultere i 50% hæmning af virusaktivitet. Den gensidige serumfortynding blev afbildet på x-aksen og antallet af plaques på y-aksen af en semi-log graf fra en streg tegnet mellem de to punkter.Testserumtrenes 50 % neutralisering titrer var røde, og serumfortyndinger med tal umiddelbart over eller under 50%-værdien af no-serum-kontrolbæterne blev identificeret. RSVAPRN assays i to forskellige voksne kohorter fra Gambia og raske frivillige i Melbourne resulterede i den gambiske voksne har en lavere gennemsnitlig NAB titer i forhold til Melbourne voksne. Det viste humane RSV-referenceserum viser meget lav variation med variationskoefficienten på 6,82 %Denne forbedrede RSV-plaquereduktionsneutraliseringsanalyse med høj kapacitet kan let implementeres i mange laboratorier og vil understøtte WHO's internationale harmoniseringsindsats for RSV-neutraliserende antistofanalyser.Dette vil være afgørende for evalueringen af nye RSV vaccine kandidater i fremtiden.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus (RSV) Micro-neutralization Assay

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

High Throughput Sekventiel ELISA for Validering af biomarkører for akut graft-versus-host-sygdom

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

High-throughput Flowcytometri cellebaseret assay til påvisning af antistoffer til N-methyl-D-aspartat-receptor eller dopamin-2-receptoren i humant serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

Sublingual immunterapi som et alternativ til at yde beskyttelse mod akutte luftvejsinfektioner

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

En Organotypiske High Throughput System til karakterisering af Drug følsomhed Primære myelomatoseceller

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

En forbedret fremgangsmåde til hurtig intubation af trachea i mus

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

En højt gennemløb, Multipleksede og målrettet proteomiske CSF Assay at kvantificere neurodegenerative Biomarkører og apolipoprotein E Isoformer status

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Muse Venstre Anterior Faldende (LAD) kranspulsåreombinding: En forbedret og forenklet model for myokardieinfarkt

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...