Name: an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay
Uploaded: 2019-01-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay at JoVE.com

Les auteurs remercient tous les participants impliqués. Nous reconnaissons programme du gouvernement de Victoria de soutien opérationnel Infrastructure. PVL est une NHMRC carrière développement bourse bene.

Remarque : Toutes les mesures doivent être effectuées sous une hotte BSL2 à moins d’indication contraire. Titrage viral est requis avant un test PRN pour déterminer la concentration optimale de RSV, utilisée dans l’essai de PRN. Il est recommandé de la partie aliquote les stocks de virus dans un petit volume qui sera décongelé une fois et utilisés pour chaque dosage NAb. À l’aide de la même souche virale pour toutes les analyses de NAb exécutées pour tous les échantillons provenant d...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Modjarrad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+Vaccine+Development+Report+from+a+World+Health+Organization+Meeting+held+on+23-24+March+2015.">WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus Vaccine Development Report from a World Health Organization Meeting held on 23-24 March 2015.</a> Vaccine. 34 (2), 190-197 (2016).</li><li>Giersing, B. K., Karron, R. A., Vekemans, J., Kaslow, D. C., Moorthy, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meeting+report:+WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+(RSV)+vaccine+development,+Geneva,+25-26+April+2016.">Meeting report: WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus (RSV) vaccine development, Geneva, 25-26 April 2016.</a> Vaccine. , (2017).</li><li>Mazur, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+respiratory+syncytial+virus+vaccine+landscape:+lessons+from+the+graveyard+and+promising+candidates.">The respiratory syncytial virus vaccine landscape: lessons from the graveyard and promising candidates.</a> Lancet Infect Diseases. 18 (10), e295-e311 (2018).</li><li>Hosken, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multi-laboratory+study+of+diverse+RSV+neutralization+assays+indicates+feasibility+for+harmonization+with+an+international+standard.">A multi-laboratory study of diverse RSV neutralization assays indicates feasibility for harmonization with an international standard.</a> Vaccine. 35 (23), 3082-3088 (2017).</li><li>Zielinska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+improved+microneutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+by+automated+plaque+counting+using+imaging+analysis.">Development of an improved microneutralization assay for respiratory syncytial virus by automated plaque counting using imaging analysis.</a> Virology Journal. 2, 84 (2005).</li><li>van Remmerden, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+respiratory+syncytial+virus+neutralization+assay+based+on+the+detection+of+green+fluorescent+protein+expression+and+automated+plaque+counting.">An improved respiratory syncytial virus neutralization assay based on the detection of green fluorescent protein expression and automated plaque counting.</a> Virology Journal. 9, 253 (2012).</li><li>Varada, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+using+a+quantitative+PCR-based+endpoint+assessment.">A neutralization assay for respiratory syncytial virus using a quantitative PCR-based endpoint assessment.</a> Virology Journal. 10, 195 (2013).</li><li>Tripp, R. A., Jorquera, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human respiratory syncytial virus: methods and protocols. , (2016).</li><li>Suara, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+neutralizing+antibody+to+respiratory+syncytial+virus+in+sera+from+mothers+and+newborns+residing+in+the+Gambia+and+in+The+United+States.">Prevalence of neutralizing antibody to respiratory syncytial virus in sera from mothers and newborns residing in the Gambia and in The United States.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 3 (4), 477-479 (1996).</li><li>Wang, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+neutralizing+serum+antibodies+of+patients+vaccinated+with+human+papillomavirus+L1+or+L2-based+immunogens+using+furin-cleaved+HPV+Pseudovirions.">Measurement of neutralizing serum antibodies of patients vaccinated with human papillomavirus L1 or L2-based immunogens using furin-cleaved HPV Pseudovirions.</a> PLoS One. 9 (7), e101576 (2014).</li><li>Magnus, C., Reh, L., Trkola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+resistance+to+neutralizing+antibodies:+Determination+of+antibody+concentrations+leading+to+escape+mutant+evolution.">HIV-1 resistance to neutralizing antibodies: Determination of antibody concentrations leading to escape mutant evolution.</a> Virus Research. 218, 57-70 (2016).</li></ol>

Nous avons développé et optimisé un test de micro-neutralisation de la RSV simple et efficace qui peut être facilement adapté à la plupart des laboratoires. Ce test est capable de mesurer la capacité d’infection virale ainsi que l’inhibition de l’infection virale par NAb au niveau cellulaire à l’aide de balayage d’image informatisée de mesure. L’utilisation d’une plateforme d’imagerie et systèmes de base d’anticorps spécifiques a augmenté la spécificité et la sensibilité de détection tac...

Virus respiratoire syncytial (VRS) est la principale cause des infections des voies respiratoires basses dans la population pédiatrique dans le monde1. Malgré son poids élevé, il n’existe encore aucun vaccin ou traitement. Depuis 2013, l’organisation mondiale de la santé (OMS) a déclaré au point de vaccins RSV comme une priorité de recherche majeur, avec des réunions de la consultation de WHO annuel2,3. L’OMS a convenu sur l’utilisation de RSV neutralisant la mesure des anticorps (NAb) pour surveiller l’immunogénicité des vaccins, comme cela est reconnu comme le marqueur sérologique majeur de protection4. NAbs auraient dû être divulgués pour se protéger contre l’infection à VRS grave dans un certain nombre d’études ainsi que des essais cliniques de l’anticorps monoclonal anti-VRS palivizumab, actuellement la stratégie prophylactique uniquement disponible4.
Il existe plusieurs formats de dosage de NAb utilisées par les laboratoires dans le monde entier, y compris des analyses cellulaires et moléculaires, qui ont fait des efforts de normalisation difficile5,6,7,8. Cependant, le test de neutralisation (PRN) de plaque-réduction conventionnels qui mesure le nombre de plaque réduite formant des unités (PFU) par la présence d’un anticorps spécifique au RSV demeure l' étalon-or9. Nous rapportons ici un protocole PRN amélioré, simplifié et haut débit qui peut être utilisé sur nombreuses lignées cellulaires, pour différentes souches de RSV et avec un débit accru de dosage. Ce protocole a été testé à l’aide d’échantillons cliniques de différents paramètres, ainsi que sur des échantillons provenant des expériences de modèle animal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-185</td>
			<td>provided by Dr Keith Chappell, University of Queensland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viral strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSV A2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>VR-1540</td>
			<td>lot number 60430286</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1000142511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-Fluor donkey anti-goat IgG (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMC sodium salt powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5678-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (no serum, 3.7 g/L NaHC, P/S) (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal calf Serum (stored in 50ml aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat X RSV antibody</td>
			<td>Merck</td>
			<td>AB1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human polyclonal antiserum to respiratory syncytial virus (RSV) (stored in 45 &#181;L aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>BEI Resources</td>
			<td>NR-4022</td>
			<td>Free order through BEI Resources upon registration. This serum belong to a panel of human antiserum and immune globulin to RSV (NR-32832)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 powder</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31100035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk diluent blocking solution (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Australian Biosearch</td>
			<td>50-82-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (stored in 6mL aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>s.d.H2O from Milli-Q dispenser</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>In-house dispensation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1X PBS for culture (stored at 4&#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20 polysorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Invitro Technologies</td>
			<td>FAL352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter unit 0.22um (500 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NAL5660020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Eppendorf tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Australia PL</td>
			<td>AM12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile flat-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>655180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile U-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>650180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4487-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipette</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4251-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-200 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-200-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 5-20 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-20-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 100-1000 &#181;LClear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1000</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-1000-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-10 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1001</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TXLF-10-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments and softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISpot reader system</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AID ELISpot software version 5.0</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel 2007</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay

Respiratoires syncytiales virus spécifique des anticorps neutralisants (RSV NAbs) sont un marqueur important de protection contre la RSV. Un certain nombre de formats différents test est actuellement utilisées dans le monde y a donc un besoin d’une méthode précise et haut-débit pour mesurer la RSV NAbs. Nous décrivons ici une analyse micro-neutralisation axée sur l’imagerie qui a été testée sur le sous-groupe RSV A et peut également être adaptée pour la RSV sous-groupe B et types d’échantillons différents. Cette méthode est très reproductible, avec des variations entre dosages pour l’antisérum de référence est inférieur à 10 %. Nous croyons que ce dosage peut être facilement établi dans de nombreux laboratoires dans le monde entier à un coût relativement faible. Développement d’un test amélioré et à haut débit qui mesure RSV NAbs représente une avancée significative pour la normalisation de cette méthode au niveau international comme étant critiques pour l’évaluation des nouveaux vaccins RSV à l’avenir.

Le titrage d’un stock de virus a été réalisé à partir de 01:10 à 01:108 dilution pour déterminer la concentration de virus stock avant l’essai PRN (résultats représentatifs illustrés à la Figure 5). De la Figure 5, PFU peut compter sûrement à des dilutions de 01:104 et 01:105. Le nombre moyen de PFU de puits en triple à la même dilution a été calculé. Depuis le nombre moyen d...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay at JoVE.com

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay

Cette étude décrit un haut débit, essai micro-neutralisation d’imagerie afin de déterminer le titre des anticorps neutralisants spécifiques pour le virus respiratoire syncytial (VRS). Ce format de test a été testé sur les types d’échantillons différents.

Un test de Micro-neutralisation du Virus respiratoire Syncytial (VRS) amélioré et haut débit

Respiratory syncytial virus-specific neutralizing antibodies (RSV NAbs) are an important marker of protection against RSV. A number of different assay ...

Il est nécessaire d’avoir une méthode de débit précis et élevé pour mesurer les anticorps neutralisant le VRS, comme un marqueur important de protection contre le virus respiratoire syncytial. Cette méthode est hautement reproductible avec des variations inter-analyse pour l’antiséum de référence étant inférieur à 10%Nous croyons que cet essai peut être facilement établi dans de nombreux laboratoires dans le monde entier à un coût relativement faible. Nous décrivons ici un test de micro-neutralisation basé sur l’imagerie qui a été testé sur le sous-groupe A du VRS, et qui peut également être adapté pour le sous-groupe B du VRS et différents types d’échantillons.Reuben Tse, membre de l’équipe de recherche du MCRI, démontrera la procédure. Pour semer des plaques le premier jour, résidé d’abord les cellules A549 dans les médias du DMEM, avec 10% de FCS et 1000 unités de mélange pénicilline-streptomycine à une concentration de 400 000 cellules par millilitre. Puis grainez 96 plaques stériles à fond plat avec 40 000 cellules A459 à une densité de 100 microlitres par puits.Incuber la plaque à 37 degrés Celsius dans un environnement de dioxyde de carbone de 5 % pendant la nuit. Pour préparer la dilution sérique le deuxième jour, décongelez d’abord les échantillons humains de sérum de référence et d’essai de sérum de RSV à température ambiante. Ensuite, placez-les dans un bain d’eau à 56 degrés Celsius pendant 30 minutes pour les chauffer et les activer.Ensuite, préparez plus de 110 microlitres d’une à 100 dilution du sérum de référence en mélangeant 1,5 microlitres du sérum de référence avec des supports DMEM sans FCS avec le mélange Penicillin-Streptomycine à un volume final de 150 microlitres. Pipette 110 microlitres de cette dilution dans le puits A12 d’une plaque stérile à fond U de 96 puits. Pour faire une à deux dilutions en série dans la plaque, ajoutez d’abord 55 microlitres de supports DMEM sans FCS avec le mélange pénicilline-streptomycine aux puits B12 à H12.Puis avec un nouveau transfert de pointe 55 microlitres du puits A12 au puits B12. Pipette de haut en bas cinq fois pour mélanger la solution, et continuer jusqu’à ce que vous atteignez bien H12. Pipette sur l’excès de 55 microlitres de la solution du puits H12.Ensuite, préparez une à 100 dilutions d’échantillons d’essais sériques et ajoutez 110 microlitres de chaque dilution aux puits correspondants A1 à A9 et E1 à E9 de la plaque stérile de 96 puits. Ajouter ensuite 55 microlitres de supports DMEM sans FCS avec le mélange pénicilline-streptomycine aux puits dans les colonnes un à neuf. Faire série une à deux dilutions de la rangée A à la rangée D et de la rangée E à la rangée H comme décrit précédemment.Ajouter 55 microlitres de supports DMEM sans FCS avec le mélange pénicilline-streptomycine aux puits dans les colonnes 10 et 11. Pour préparer le stock de virus, mettez d’abord un flacon congelé de VRS dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius pour le décongeler rapidement, puis placez le flacon sur la glace. Ensuite, ajoutez le virus au média DMEM contenant du mélange pénicilline-streptomycine à environ 200 PFU par puits pour faire un volume total de 55 millilitres pour 100 puits.Pour préparer le mélange de sérum de virus, ajoutez d’abord 55 microlitres du virus dilué à tous les puits de colonnes un à neuf et des puits des rangées E à H des colonnes 10 et 11. Ajoutez ensuite 55 microlitres de supports DMEM exempts de FCS avec mélange pénicilline-streptomycine à tous les puits des rangées A à D des colonnes 10 et 11, et incubez la plaque à 37 degrés Celsius dans un environnement de dioxyde de carbone de 5 % pendant une heure. Avant l’inoculation des cellules A549 avec RSV, examinez la plaque cellulaire sous un microscope léger pour confirmer que les monocouches cellulaires A549 sont confluentes à 80 %.Puis inverser délicatement la plaque pour jeter le média, et éponger légèrement la plaque sur une serviette en papier absorbante stérile. Après chacun, laver avec pbs stérile filtré. Ajouter ensuite 100 microlitres par puits du mélange de sérum de virus aux puits correspondants sur la plaque cellulaire A549 selon le modèle de plaque fourni dans le manuscrit, et incuber la plaque à 37 degrés Celsius en dioxyde de carbone de 5% pendant une heure.À la fin de l’incubation, utiliser une pipette pour enlever 90 microlitres par puits, et ajouter 100 microlitres des supports contenant 1XM199, 1,5% CMC, et 2%FCS dans le mélange pénicilline-streptomycine. Incuber la plaque à 37 degrés Celsius en dioxyde de carbone de 5 % pendant trois jours. Pour fixer et développer une plaque d’essai, inversez d’abord doucement la plaque cellulaire A549 infectée par le VRS pour jeter les supports contenant le mélange M199, CMC, 2 %FCS et Penicillin-Streptomycine.Ajouter ensuite lentement 200 microlitres de fixation tampon à chaque puits. Incuber la plaque à moins 20 degrés Celsius pendant 20 minutes. Jetez ensuite le tampon de fixation et épongez doucement sur une serviette en papier absorbante.Laisser sécher la plaque face contre terre pendant 10 minutes. Ensuite, avec le tampon PBS filtré contenant 05 polysorbate 20, faire 5% solution de blocage du lait. Ajouter 200 microlitres de la solution de blocage à chaque puits et incuber la plaque à température ambiante pendant 30 minutes.À la fin de l’incubation, inverser délicatement la plaque pour jeter la solution et éponger sur une serviette en papier absorbante. Pour fabriquer l’anticorps primaire, diluer un à 500 anticorps XRSV de chèvre dans la solution de blocage. Ajouter 50 microlitres à chaque puits et incuber la plaque à 37 degrés Celsius pendant une heure.Lavez la plaque trois fois avec du PBS-polysorbate filtré. Ensuite, faire l’anticorps secondaire en diluant un à 5000 Alexa Fluor âne anti-chèvre immunoglobuline G dans la solution de blocage. Ajouter 50 microlitres à chaque puits et incuber à 37 degrés Celsius pendant une heure.Lavez la plaque cinq fois avec du PBS-polysorbate filtré. Pour compter les plaques avec un lecteur de spots automatisé, utilisez d’abord une plaque de culture inutilisée de 96 puits pour collaborer à l’instrument en entrant les paramètres de comptage dans le canal FITC. Lisez ensuite la plaque cellulaire, enveloppez-la dans du papier d’aluminium et rangez-la à quatre degrés Celsius.Ensuite, vérifiez les images des puits à la recherche de plaques artifactual ou de monocouches cellulaires perturbées, et excluez les puits avec des monocouches cellulaires perturbées. Le nombre moyen de plaques des puits de contrôle sans sérum a été calculé et utilisé pour déterminer la coupure de neutralisation de 50 % qui entraînerait une inhibition de 50 % de l’activité virale. La dilution réciproque du sérum a été tracée sur l’axe x et le nombre de plaques sur l’axe y d’un graphique semi-log à partir d’une ligne tracée entre les deux points.Les titres de neutralisation de 50 % des échantillons de sérum d’essai étaient des dilutions rouges et sériques dont le dénombrement était immédiatement supérieur ou inférieur à la valeur de 50 % des puits de contrôle sans sérum. Les analyses de RSVAPRN dans deux cohortes adultes différentes de Gambie et les volontaires en bonne santé à Melbourne ont eu comme conséquence les adultes gambiens ayant un titre moyen inférieur de NAB comparé aux adultes de Melbourne. Le sérum humain de référence RSV montré démontre une très faible variabilité avec le coefficient de variation de 6,82%Cet essai amélioré de neutralisation de la neutralisation de la réduction de la plaque RSV à haut débit peut être facilement mis en œuvre dans de nombreux laboratoires, et soutiendra l’effort international d’harmonisation de l’OMS pour neutraliser les analyses d’anticorps RSV.Ce sera essentiel pour l’évaluation des nouveaux candidats vaccins contre le VRS à l’avenir.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus (RSV) Micro-neutralization Assay

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

L&#39;énucléation des yeux de souris à distance pour le phénotypage à haut débit

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Recherche

Médecine

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Haut débit séquentiel ELISA pour la validation des biomarqueurs de réaction aiguë du greffon contre l&#39;hôte

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Haut-débit cytométrie en flux test cellulaire pour détecter les anticorps de la N-méthyl-D-aspartate Receptor ou récepteur de la dopamine-2 dans le sérum humain

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

L&#39;immunothérapie sublinguale comme une alternative à induire une protection contre les infections respiratoires aiguës

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

Un système organotypiques à haut débit pour la caractérisation de la sensibilité des médicaments cellules du myélome multiple primaire

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Une méthode améliorée pour Rapid intubation de la trachée chez la souris

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

A High Throughput, multiplexée et ciblée protéomique CSF Assay à Quantifier neurodégénératifs Biomarqueurs et apolipoprotéine E isoformes Status

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine gauche interventriculaire antérieure (LAD) Coronary Artery Ligature: un modèle amélioré et simplifié pour Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

A Component-resolved Diagnostic Approach for a Study on Grass Pollen Allergens in Chinese Southerners with Allergic Rhinitis and/or Asthma

Une approche de diagnostic résolue par un composant pour une étude sur les allergènes au pollen dans les ressortissants chinois avec la rhinite allergique et / ou l&#39;asthme