Name: an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay
Uploaded: 2019-01-26T14:30:00
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저자는 모든 참가자를 참여 감사합니다. 우리는 빅토리아 정부의 운영 인프라 지원 프로그램을 인정합니다. PVL은 NHMRC 경력 개발 장학금 받는 사람입니다.

참고: 모든 단계는 다르게 명시 하지 않는 한 BSL2 후드에서 수행 해야 합니다. 바이러스 성 적정이 PRN 분석 결과에 사용 되는 최적의 RSV 농도 결정 하는 PRN 분석 결과 사전 필요 합니다. 약 수를 한 번 해 동 되 고 각 NAb 분석 결과 대 한 사용 되는 작은 볼륨에서 바이러스 주식 추천 된다. 모든 NAb 분석 한 연구에서 모든 샘플에 대 한 수행에 대 한 같은 바이러스 성 주식을 사용 하 여 또?...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Modjarrad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+Vaccine+Development+Report+from+a+World+Health+Organization+Meeting+held+on+23-24+March+2015.">WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus Vaccine Development Report from a World Health Organization Meeting held on 23-24 March 2015.</a> Vaccine. 34 (2), 190-197 (2016).</li><li>Giersing, B. K., Karron, R. A., Vekemans, J., Kaslow, D. C., Moorthy, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meeting+report:+WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+(RSV)+vaccine+development,+Geneva,+25-26+April+2016.">Meeting report: WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus (RSV) vaccine development, Geneva, 25-26 April 2016.</a> Vaccine. , (2017).</li><li>Mazur, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+respiratory+syncytial+virus+vaccine+landscape:+lessons+from+the+graveyard+and+promising+candidates.">The respiratory syncytial virus vaccine landscape: lessons from the graveyard and promising candidates.</a> Lancet Infect Diseases. 18 (10), e295-e311 (2018).</li><li>Hosken, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multi-laboratory+study+of+diverse+RSV+neutralization+assays+indicates+feasibility+for+harmonization+with+an+international+standard.">A multi-laboratory study of diverse RSV neutralization assays indicates feasibility for harmonization with an international standard.</a> Vaccine. 35 (23), 3082-3088 (2017).</li><li>Zielinska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+improved+microneutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+by+automated+plaque+counting+using+imaging+analysis.">Development of an improved microneutralization assay for respiratory syncytial virus by automated plaque counting using imaging analysis.</a> Virology Journal. 2, 84 (2005).</li><li>van Remmerden, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+respiratory+syncytial+virus+neutralization+assay+based+on+the+detection+of+green+fluorescent+protein+expression+and+automated+plaque+counting.">An improved respiratory syncytial virus neutralization assay based on the detection of green fluorescent protein expression and automated plaque counting.</a> Virology Journal. 9, 253 (2012).</li><li>Varada, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+using+a+quantitative+PCR-based+endpoint+assessment.">A neutralization assay for respiratory syncytial virus using a quantitative PCR-based endpoint assessment.</a> Virology Journal. 10, 195 (2013).</li><li>Tripp, R. A., Jorquera, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human respiratory syncytial virus: methods and protocols. , (2016).</li><li>Suara, R. 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W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+neutralizing+serum+antibodies+of+patients+vaccinated+with+human+papillomavirus+L1+or+L2-based+immunogens+using+furin-cleaved+HPV+Pseudovirions.">Measurement of neutralizing serum antibodies of patients vaccinated with human papillomavirus L1 or L2-based immunogens using furin-cleaved HPV Pseudovirions.</a> PLoS One. 9 (7), e101576 (2014).</li><li>Magnus, C., Reh, L., Trkola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+resistance+to+neutralizing+antibodies:+Determination+of+antibody+concentrations+leading+to+escape+mutant+evolution.">HIV-1 resistance to neutralizing antibodies: Determination of antibody concentrations leading to escape mutant evolution.</a> Virus Research. 218, 57-70 (2016).</li></ol>

우리가 개발 하 고 최적화는 간단 하 고 효율적인 RSV 마이크로 중화 분석 결과 대부분 실험실에서 쉽게 적용할 수 있습니다. 이 분석 결과 컴퓨터 이미지 검색을 사용 하 여 세포 수준에서 NAb 바이러스 성 감염의 억제를 측정 뿐만 아니라 바이러스 감염 능력을 측정할 수 있다. 이미징 기반 플랫폼 및 특정 항 체 기반 시스템을 사용 하 여 특이성 및 전통적인 패 감지 방법6,</sup...

호흡 syncytial 바이러스 (RSV) 소아 인구 세계1에 더 낮은 호흡 기관 감염의 주요 원인입니다. 그것의 높은 부담에도 불구 하 고 아직 아무 백신 이나 치료 가능한 있다. 2013 년 이후 세계 보건 기구 (WHO)는 주요 연구 우선 순위, 연간 WHO 상담 회의2,3로 RSV 백신 개발을 선언 했다. WHO는 RSV 중화 항 체 (NAb) 측정 모니터를 사용 하 백신 immunogenicity로 보호4의 주요 혈 청 학적인 감 적으로 인식 되 고이에 동의 했다. NAbs 안티-RSV 단일 클론 항 체 palivizumab, 현재만 예방 전략 사용 가능한4의 임상 시험 연구의 숫자에 가혹한 RSV 감염 으로부터 보호 하기 위해 표시 되었습니다.
5,6,,78도전 표준화 노력 만든 세포 및 분자 기반 분석을 포함 한 전세계 실험실에 의해 사용 되는 여러 NAb 분석 결과 형식을 확인 하 고 있습니다. 그러나, RSV 특정 항 체의 존재에 의해 감소 된 플 라크 형성 단위 (PFU)의 수를 측정 하는 기존의 플 라크 감소 중화 (PRN) 분석 결과 금9아직도 남아 있다. 여기, 우리는 향상 된, 단순화, 및 높은 처리량 PRN 프로토콜 다른 RSV 긴장 증가 분석 결과 처리량과 수많은 셀 라인에 사용할 수 있는 보고 합니다. 이 프로토콜은 임상 샘플 다른 설정에서 뿐만 아니라 동물 모델 실험에서 샘플을 사용 하 여 테스트 되었습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-185</td>
			<td>provided by Dr Keith Chappell, University of Queensland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viral strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSV A2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>VR-1540</td>
			<td>lot number 60430286</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1000142511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-Fluor donkey anti-goat IgG (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMC sodium salt powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5678-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (no serum, 3.7 g/L NaHC, P/S) (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal calf Serum (stored in 50ml aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat X RSV antibody</td>
			<td>Merck</td>
			<td>AB1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human polyclonal antiserum to respiratory syncytial virus (RSV) (stored in 45 &#181;L aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>BEI Resources</td>
			<td>NR-4022</td>
			<td>Free order through BEI Resources upon registration. This serum belong to a panel of human antiserum and immune globulin to RSV (NR-32832)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 powder</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31100035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk diluent blocking solution (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Australian Biosearch</td>
			<td>50-82-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (stored in 6mL aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>s.d.H2O from Milli-Q dispenser</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>In-house dispensation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1X PBS for culture (stored at 4&#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20 polysorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Invitro Technologies</td>
			<td>FAL352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter unit 0.22um (500 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NAL5660020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Eppendorf tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Australia PL</td>
			<td>AM12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile flat-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>655180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile U-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>650180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4487-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipette</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4251-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-200 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-200-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 5-20 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-20-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 100-1000 &#181;LClear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1000</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-1000-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-10 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1001</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TXLF-10-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments and softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISpot reader system</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AID ELISpot software version 5.0</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel 2007</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay

호흡 syncytial 바이러스는 특정 중화 항 체 (RSV NAbs)는 RSV에 대 한 보호의 중요 한 표식. 다른 분석 결과 형식의 번호에에서는 현재 전세계 사용 이므로 RSV NAbs 측정 하기 위한 정확 하 고 높은 처리 방법에 대 한 필요. 여기는 영상 기반 마이크로 중화 분석 결과 RSV 하위 그룹 A에서 테스트 되었습니다와 RSV 하위 그룹 B 및 서로 다른 샘플에 대 한 또한 적응 수 있습니다 설명 합니다. 이 방법은 매우 재현성, 참조 원으로 10% 미만 대 한 상호 분석 결과 유사 합니다. 우리는이 분석 결과 많은 실험실에서 상대적으로 저렴 한 비용으로 전세계에 쉽게 설치 될 수 있다 믿습니다. RSV NAbs 측정 개선, 높은 처리량 분석 결과의 개발 뿐만 아니라 소설 RSV 백신 후보자의 평가 미래에 대 한 중요 한 되 고 국제적으로이 방법의 표준화에 대 한 중요 한 단계를 앞으로 나타냅니다.

바이러스 주식의 적정 1:10 1시 10분에서 수행한 PRN 분석 결과 (대표 결과 그림5) 전에 바이러스 재고 농도 결정 하기 위해8 희석. 그림 5, PFU 계산 될 수 있는 안정적으로 1:10 희석에4 와 1시 10분5. PFU에서 같은 희석 triplicate 우물에서의 평균 수를 계산 했다. 1 105 희석은 14에 관광 명소의 평균 수, 이?...

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An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay

높은 처리량,이 연구에 설명 합니다 호흡 syncytial 바이러스 (RSV)에 대 한 특정 중화 항 체 titer를 확인 하려면 이미징 기반 마이크로 중화 분석 결과. 이 분석 결과 형식은 다른 샘플 형식에 대해 테스트 되었습니다.

향상 된 높은 처리량 호흡 Syncytial 바이러스 (RSV) 마이크로 중화 분석 결과

Respiratory syncytial virus-specific neutralizing antibodies (RSV NAbs) are an important marker of protection against RSV. A number of different assay ...

호흡기 싱크로바이러스에 대한 보호의 중요한 마커로서 RSV 중화 항체를 측정하기 위한 정확하고 높은 처리량 방법이 필요합니다. 이 방법은 10% 미만인 기준 항세럼에 대한 분석 간 변형으로 매우 재현가능한 이 분석법이 상대적으로 저렴한 비용으로 전 세계 많은 실험실에서 쉽게 확립될 수 있다고 믿습니다. 여기에서 RSV 하위 그룹 A에서 테스트되었으며 RSV 하위 그룹 B 및 다른 샘플 유형에 맞게 조정할 수 있는 이미징 기반 미세 중화 분석이 여기에 설명되어 있습니다.절차를 시연하는 것은 MCRI의 연구 팀의 일원인 르우벤 Tse입니다. 첫날 에 시드 플레이트, 먼저 DMEM 매체에서 A549 세포를 다시 중단, 와 10%FCS와 1, 000 단위 페니실린-연쇄상 구균 혼합물 의 농도400, 밀리 리터 당 000 세포. 그런 다음 잘 당 100 마이크로 리터의 밀도에 40, 000 A459 세포와 96 잘 평평한 바닥 멸균 플레이트를 시드.하룻밤 사이에 5%의 이산화탄소 환경에서 37도의 플레이트를 배양합니다. 둘째 날에 혈청 희석을 준비하기 위해 먼저 실온에서 인간 RSV 기준 혈청 및 혈청 검사 샘플을 해동하십시오. 그런 다음 56°C의 수조에 넣고 30분 동안 가열하여 활성화합니다.다음으로, 150 마이크로리터의 최종 부피에 페니실린-스트렙토마이신 혼합물과 FCS 프리 DMEM 미디어와 참조 혈청의 1.5 마이크로리터를 혼합하여 기준 세럼의 1~100희석의 110마이크로리터 이상을 준비한다. 96웰 U-바닥 멸균 플레이트의 잘 A12로 이 희석의 파이펫 110 마이크로리터. 플레이트 아래로 1~2개의 희석제를 연속하여 먼저 페니실린-스트렙토마이신 혼합물을 사용하여 FcS가 없는 DMEM 미디어 55마이크로리터를 H12에서 H12에 웰즈B12에 추가합니다.그런 다음 새로운 팁 전송 55 마이크로 리터 잘 A12에서 잘 B12. 파이펫을 5회 위아래로 사용하여 용액을 혼합하고 H12에 도달할 때까지 계속합니다. 잘 H12에서 용액의 초과 55 마이크로 리터떨어져 파이펫.다음으로, 혈청 시험 시료의 1~100희석을 준비하고, 96웰멸균 플레이트의 A9 및 E1에 대응하는 웰 A1에 각 희석제 110마이크로리터를 첨가한다. 그런 다음 페니실린-연쇄상 구균 혼합물을 갖춘 FCS 가 없는 DMEM 미디어 55마이크로리터를 1~9개의 기둥의 우물에 추가합니다. 이전에 설명한 대로 행 A에서 행 D행 및 행 E에서 행 H로 연속 1~2회 희석을 만듭니다.페니실린-스트렙토마이신 혼합물을 10과 11의 우물에 첨가하여 FCS 가 없는 DMEM 미디어 55마이크로리터를 첨가합니다. 바이러스 육수를 준비하기 위해 먼저 RSV의 냉동 유리병을 37도 의 수조에 넣고 빠르게 해동한 다음 유리병을 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 페니실린-스트렙토마이신 혼합물을 함유한 DMEM 미디어에 바이러스를 추가하여 100개의 우물에 대해 총 55밀리리터를 만들기 위해 우물당 약 200PFU를 함유하고 있다.바이러스 혈청 혼합물을 준비하기 위해 먼저 10 및 11의 H를 통해 1~9개의 열과 우물을 통해 모든 컬럼에 희석된 바이러스의 55마이크로리터를 첨가한다. 그런 다음 페니실린-스트렙토마이신 혼합물로 FCS가 없는 DMEM 미디어 55마이크로리터를 열 10과 11의 D를 통과하는 모든 우물에 추가하고, 1시간 동안 5%의 이산화탄소 환경에서 37°C의 플레이트를 배양합니다. RSV를 가진 A549 세포의 접종에 앞서, A549 세포 단층이 80%의 컨실루인지 확인하기 위하여 광 현미경의 밑에 세포 판을 검사합니다.그런 다음 접시를 부드럽게 뒤집어 미디어를 버리고, 가볍게 멸균 흡수성 종이 타월에 접시를 블롯. 각 후 여과 된 멸균 PBS로 씻어 주세요. 다음으로 원고에 제공된 플레이트 템플릿에 따라 A549 세포판에 해당하는 우물에 바이러스 혈청 혼합물 100마이크로리터를 추가하고, 1시간 동안 5%의 이산화탄소로 37도에서 플레이트를 배양한다.인큐베이션의 끝에서, 파이펫을 사용하여 우물당 90 마이크로리터를 제거하고 페니실린-스트렙토마이신 혼합물에 1XM199, 1.5%CMC 및 2%FCS를 함유한 미디어의 마이크로리터 100을 추가한다. 3일 동안 이산화탄소 5%에서 37도의 플레이트를 배양합니다. 분석판을 고치고 개발하기 위해 먼저 RSV에 감염된 A549 세포판을 부드럽게 반전시켜 M199, CMC, 2%FCS 및 페니실린-스트렙토마이신 혼합물을 포함하는 매체를 폐기한다.그런 다음 고정 버퍼 200 마이크로리터를 각 웰에 천천히 추가합니다. 20 분 동안 영하 20도에서 접시를 배양하십시오. 그런 다음 고정 버퍼를 버리고 흡수성 종이 타월에 부드럽게 얼룩이 있습니다.접시를 아래로 내려 놓고 10 분 동안 건조시십시오. 그런 다음 05 폴리소르바트 20을 포함하는 필터링 된 PBS 버퍼를 사용하면 5 %의 우유 차단 용액을 만듭니다. 블로킹 용액 200마이크로리터를 각 웰에 추가하고 실온에서 30분 동안 플레이트를 배양합니다.인큐베이션이 끝나면 접시를 부드럽게 반전하여 용액을 버리고 흡수성 종이 타월에 얼룩을 놓습니다. 1차 항체를 만들기 위해 블로킹 용액에서 염소 XRSV 항체를 1~500개 희석한다. 각 우물에 50 마이크로리터를 추가하고 1 시간 동안 섭씨 37도에서 접시를 배양합니다.여과 된 PBS-폴리소르베이트로 접시를 세 번 씻으시다. 다음으로, 블로킹 용액에서 알렉사 플루오르 당나귀 당나귀 면역 글로불린 G를 희석하여 이차 항체를 만든다. 각 우물에 50 마이크로리터를 추가하고 1시간 동안 섭씨 37도에서 배양합니다.여과 된 PBS-폴리소르베이트로 접시를 5번 세척합니다. 자동 스팟 판독기가 있는 플라크를 계산하려면 먼저 사용하지 않은 96웰 컬쳐 플레이트를 사용하여 FITC 채널의 카운트 설정을 입력하여 계측기를 공동 작업합니다. 그런 다음 셀 플레이트를 읽고 호일로 감싸고 섭씨 4도에 보관하십시오.다음으로, 우물의 이미지를 확인하여 실제 플라크 또는 세포 단층이 중단된 경우, 세포 단층이 중단된 우물을 제외합니다. 무혈제 대조유의 평균 플라크 수는 계산되어 바이러스 활성의 50% 억제를 초래할 50%의 중화 컷오프를 결정하는 데 사용되었다. 상호 혈청 희석은 x 축과 두 점 사이에 그려진 선에서 세미 로그 그래프의 y 축에 있는 플라크 수를 플롯했습니다.시험 혈청 샘플의 50% 중화 titres는 무혈청 대조공 우물의 50% 값 의 위 또는 그 이하의 카운트를 가진 빨간색 및 혈청 희석제가 확인되었다. 감비아에서 두 개의 다른 성인 코호트와 멜버른에서 건강 한 자원 봉사자에 RSVAPRN assays 멜버른 성인에 비해 낮은 평균 NAB titre를 가진 감비아 성인 결과. 표시된 인간 RSV-참조 혈청은 6.82%의 변이계와 매우 낮은 가변성을 보여 주며, 이러한 개선된 높은 처리량 RSV 플라크 감소 중화 분석은 많은 실험실에서 용이하게 구현될 수 있으며, RSV 중화 항체 분석에 대한 WHO의 국제 조화 노력을 지원할 것이다.이것은 미래에 새로운 RSV 백신 후보의 평가에 중요 할 것입니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus (RSV) Micro-neutralization Assay

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

원격 높은 처리량 Phenotyping에 마우스 눈 핵의 제거

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

연구

의학

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

급성 이식 - 대 - 호스트 질병의 생체의 유효성을 검사에 대한 높은 처리량 순차적 엘리사

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

인간 혈청에있는 N-메틸-D-아스파 라진 산염 수용체 또는 도파민 2 수용체에 대한 항체를 검출하는 높은 처리량 유동 세포 계측법 세포 기반 분석

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

대안으로 설하 면역 요법은 급성 호흡기 감염에 대한 보호를 유도하기 위해

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

차 다발성 골수종 세포의 약물 민감도의 특성에 대한의 Organotypic 높은 처리량 시스템

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

높은 처리량, 멀티 플렉스 및 대상 단백체 CSF 분석은 퇴행성 신경 바이오 마커 및 아포 지단백 E 이소 상태를 정량화하기

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

쥐 왼쪽 앞쪽에 내림차순 (LAD) 관상 동맥 결찰 : 심근 경색에 대한 개선 및 단순화 된 모델

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...