Name: an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay
Uploaded: 2019-01-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay at JoVE.com

Forfatterne takker alle deltakerne er involvert. Vi erkjenner den viktorianske regjeringen operative infrastruktur støtteprogrammet. PVL er en NHMRC karriere utvikling Fellowship-mottaker.

Merk: Alle trinn må utføres i en BSL2 hette med mindre annet opplyses. Viral titrering er nødvendig før en PRN-analysen for å bestemme optimale RSV konsentrasjonen i PRN analysen. Det anbefales å aliquot virus aksjer i et lite volum som blir tint gang og brukt for hver NAb analysen. Det anbefales også å bruke den samme viral for alle NAb analyser utført for alle prøver fra en studie. Kontroller at kultur medier og fosfat-bufret saltvann (PBS) er varmet på 37 ° C før du legger til celle plate...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Modjarrad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+Vaccine+Development+Report+from+a+World+Health+Organization+Meeting+held+on+23-24+March+2015.">WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus Vaccine Development Report from a World Health Organization Meeting held on 23-24 March 2015.</a> Vaccine. 34 (2), 190-197 (2016).</li><li>Giersing, B. K., Karron, R. A., Vekemans, J., Kaslow, D. C., Moorthy, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meeting+report:+WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+(RSV)+vaccine+development,+Geneva,+25-26+April+2016.">Meeting report: WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus (RSV) vaccine development, Geneva, 25-26 April 2016.</a> Vaccine. , (2017).</li><li>Mazur, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+respiratory+syncytial+virus+vaccine+landscape:+lessons+from+the+graveyard+and+promising+candidates.">The respiratory syncytial virus vaccine landscape: lessons from the graveyard and promising candidates.</a> Lancet Infect Diseases. 18 (10), e295-e311 (2018).</li><li>Hosken, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multi-laboratory+study+of+diverse+RSV+neutralization+assays+indicates+feasibility+for+harmonization+with+an+international+standard.">A multi-laboratory study of diverse RSV neutralization assays indicates feasibility for harmonization with an international standard.</a> Vaccine. 35 (23), 3082-3088 (2017).</li><li>Zielinska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+improved+microneutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+by+automated+plaque+counting+using+imaging+analysis.">Development of an improved microneutralization assay for respiratory syncytial virus by automated plaque counting using imaging analysis.</a> Virology Journal. 2, 84 (2005).</li><li>van Remmerden, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+respiratory+syncytial+virus+neutralization+assay+based+on+the+detection+of+green+fluorescent+protein+expression+and+automated+plaque+counting.">An improved respiratory syncytial virus neutralization assay based on the detection of green fluorescent protein expression and automated plaque counting.</a> Virology Journal. 9, 253 (2012).</li><li>Varada, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+using+a+quantitative+PCR-based+endpoint+assessment.">A neutralization assay for respiratory syncytial virus using a quantitative PCR-based endpoint assessment.</a> Virology Journal. 10, 195 (2013).</li><li>Tripp, R. A., Jorquera, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human respiratory syncytial virus: methods and protocols. , (2016).</li><li>Suara, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+neutralizing+antibody+to+respiratory+syncytial+virus+in+sera+from+mothers+and+newborns+residing+in+the+Gambia+and+in+The+United+States.">Prevalence of neutralizing antibody to respiratory syncytial virus in sera from mothers and newborns residing in the Gambia and in The United States.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 3 (4), 477-479 (1996).</li><li>Wang, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+neutralizing+serum+antibodies+of+patients+vaccinated+with+human+papillomavirus+L1+or+L2-based+immunogens+using+furin-cleaved+HPV+Pseudovirions.">Measurement of neutralizing serum antibodies of patients vaccinated with human papillomavirus L1 or L2-based immunogens using furin-cleaved HPV Pseudovirions.</a> PLoS One. 9 (7), e101576 (2014).</li><li>Magnus, C., Reh, L., Trkola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+resistance+to+neutralizing+antibodies:+Determination+of+antibody+concentrations+leading+to+escape+mutant+evolution.">HIV-1 resistance to neutralizing antibodies: Determination of antibody concentrations leading to escape mutant evolution.</a> Virus Research. 218, 57-70 (2016).</li></ol>

Vi har utviklet og optimalisert en enkel og effektiv RSV mikro-nøytralisering analysen som lett kan tilpasses i de fleste laboratorier. Denne analysen er kjøpedyktig mål virusinfeksjon evne samt måle hemming av viral infeksjon av NAb på cellenivå ved hjelp av datastyrt bildeskanning. Bruk av en imaging-basert plattform og spesifikke antistoffer-baserte systemer har økt spesifisitet og følsomhet av spot sammenlignet med tradisjonelle plakk gjenkjenning metoder6,...

Respiratorisk syncytial virus (RSV) er den ledende årsaken til nedre luftveisinfeksjoner i pediatric befolkningen verden1. Til tross for sin høye byrden er det fortsatt ingen vaksine eller behandling tilgjengelig. Siden 2013, har World Health Organization (WHO) erklært RSV vaksineutvikling som en stor forskning prioritet, med årlige WHO samråd møter2,3. WHO har avtalt med RSV nøytralisere antistoff (NAb) måling overvåke vaksine immunogenisitet, som dette er anerkjent som den store serologisk markøren beskyttelse4. NAbs har vist seg å beskytte mot alvorlig RSV infeksjon i en rekke studier som kliniske studier av anti-RSV monoklonalt antistoff palivizumab, er det bare forebyggende strategi tilgjengelig4.
Det er flere NAb analysen formater som brukes av laboratorier over hele verden, inkludert celle- og molekylær-baserte analyser, som har gjort standardisering innsats utfordrende5,6,7,8. Konvensjonelle plakk-reduksjon nøytralisering (PRN) analysen som måler antallet redusert plakk danner enheter (PFU) av tilstedeværelsen av en RSV-spesifikke antistoffer er imidlertid fortsatt gullstandarden9. Her rapporterer vi en forbedret, forenklet og høy gjennomstrømming PRN-protokoll som kan brukes på flere linjer, for forskjellige RSV stammer og økte analysen gjennomstrømming. Denne protokollen er testet klinisk utvalg fra forskjellige innstillinger og prøver fra dyremodell eksperimenter.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-185</td>
			<td>provided by Dr Keith Chappell, University of Queensland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viral strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSV A2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>VR-1540</td>
			<td>lot number 60430286</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1000142511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-Fluor donkey anti-goat IgG (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMC sodium salt powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5678-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (no serum, 3.7 g/L NaHC, P/S) (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal calf Serum (stored in 50ml aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat X RSV antibody</td>
			<td>Merck</td>
			<td>AB1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human polyclonal antiserum to respiratory syncytial virus (RSV) (stored in 45 &#181;L aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>BEI Resources</td>
			<td>NR-4022</td>
			<td>Free order through BEI Resources upon registration. This serum belong to a panel of human antiserum and immune globulin to RSV (NR-32832)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 powder</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31100035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk diluent blocking solution (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Australian Biosearch</td>
			<td>50-82-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (stored in 6mL aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>s.d.H2O from Milli-Q dispenser</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>In-house dispensation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1X PBS for culture (stored at 4&#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20 polysorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Invitro Technologies</td>
			<td>FAL352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter unit 0.22um (500 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NAL5660020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Eppendorf tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Australia PL</td>
			<td>AM12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile flat-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>655180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile U-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>650180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4487-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipette</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4251-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-200 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-200-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 5-20 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-20-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 100-1000 &#181;LClear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1000</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-1000-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-10 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1001</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TXLF-10-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments and softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISpot reader system</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AID ELISpot software version 5.0</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel 2007</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay

Respiratory syncytial virus-spesifikke nøytraliserende antistoffer (RSV NAbs) er en viktig indikator for beskyttelse mot RSV. En rekke forskjellige analysen formater er i bruk over hele verden så er det behov for en nøyaktig og høy gjennomstrømming metode for å måle RSV NAbs. Her beskriver vi imaging-baserte mikro-nøytralisering analysen som er testet på RSV undergruppe A og kan også tilpasses for RSV undergruppe B og forskjellige utvalg. Denne metoden er svært reproduserbare, med Inter analysen varianter for referansen antiserum blir mindre enn 10%. Vi tror denne analysen kan lett bli etablert i mange laboratorier over hele verden til relativt lav kostnad. Utvikling av forbedret, høy gjennomstrømming analysen som måler RSV NAbs representerer et betydelig skritt fremover for standardisering av denne metoden internasjonalt samt å være kritisk for vurdering av romanen RSV vaksine kandidater i fremtiden.

Et virus lager Serine var utføres fra 1:10 til 1:108 fortynning å bestemme virus lager konsentrasjonen før PRN analysen (representant resultater som vist i figur 5). Figur 5, PFU kan telles pålitelig på fortynninger av 1:104 og 1:105. Gjennomsnittlig antall PFU fra tre eksemplarer brønner på samme fortynning ble beregnet. Siden gjennomsnittlig antall flekker på 1:105 fortynning ...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay at JoVE.com

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay

Denne studien beskriver en høy gjennomstrømning, imaging-baserte mikro-nøytralisering analysen å bestemme titer av nøytraliserende antistoffer spesifikke for respiratorisk syncytial virus (RSV). Denne analysen format har blitt testet på ulike utvalg typer.

En forbedret og høy gjennomstrømning respiratorisk Syncytial Virus (RSV) mikro-nøytralisering analysen

Respiratory syncytial virus-specific neutralizing antibodies (RSV NAbs) are an important marker of protection against RSV. A number of different assay ...

Det er behov for en nøyaktig og høy gjennomstrømningsmetode for måling av RSV nøytraliserende antistoffer, som en viktig markør for beskyttelse mot respiratorisk syncytial virus. Denne metoden er svært reproduserbar med interanalysevariasjoner for referanseantiserumet er mindre enn 10%Vi tror denne analysen lett kan etableres i mange laboratorier over hele verden til relativt lave kostnader. Vi beskriver her en bildebasert mikronøytraliseringsanalyse som er testet på RSV-undergruppe A, og som også kan tilpasses RSV-undergruppe B og ulike utvalgstyper.Viser prosedyren vil være Reuben Tse, medlem av forskningsteamet ved MCRI. Til frøplater på dag én, først resuspend A549 celler i DMEM media, med 10% FCS og 1000 enheter Penicillin-Streptomycin blanding med en konsentrasjon på 400,000 celler per milliliter. Deretter frø 96-godt flat-bunn sterile plater med 40,000 A459 celler med en tetthet på 100 mikroliter per brønn.Inkuber platen ved 37 grader Celsius i 5% karbondioksidmiljø over natten. For å forberede serumfortynningen på dag to, tin først det menneskelige RSV-referanseserumet og serumtestprøvene ved romtemperatur. Legg dem deretter i et vannbad ved 56 grader Celsius i 30 minutter for å varme og aktivere dem.Deretter forbereder du mer enn 110 mikroliter av en 1 til 100 fortynning av referanseserumet ved å blande 1,5 mikroliter av referanseserumet med FCS-frie DMEM-medier med Penicillin-Streptomycin-blandingen til et endelig volum på 150 mikroliter. Pipette 110 mikroliter av denne fortynningen i brønn A12 av en 96-brønns U-bunnsteril plate. For å lage seriell en til to fortynninger ned platen, først legge til 55 mikroliter av FCS-frie DMEM media med Penicillin-Streptomycin blanding til brønner B12 til H12.Deretter med en ny tipsoverføring 55 mikroliter fra brønn A12 til godt B12. Pipetten opp og ned fem ganger for å blande løsningen, og fortsett til du kommer godt H12. Pipette av overflødige 55 mikroliter av løsningen fra brønn H12.Deretter forbereder du en 1 til 100 fortynning av serumtestprøver, og tilsett 110 mikroliter av hver fortynning til tilsvarende brønner A1 til A9 og E1 til E9 av den 96-brønns sterile platen. Tilsett deretter 55 mikroliter FCS-frie DMEM-medier med Penicillin-Streptomycin-blandingen til brønner i kolonne en til ni. Lag seriell én til to fortynninger av rad A til rad D og fra rad E til rad H som tidligere beskrevet.Tilsett 55 mikroliter fcs-frie DMEM-medier med Penicillin-Streptomycin-blandingen til brønner i kolonne 10 og 11. For å forberede virusbestanden, legg først et frosset hetteglass med RSV i et 37 graders Celsius vannbad for å tine det raskt, og legg deretter hetteglasset på is. Deretter legger viruset til DMEM-mediet som inneholder Penicillin-Streptomycinblandingen ved ca. 200 PFU per brønn for å lage et totalt volum på 55 milliliter for 100 brønner.For å forberede virusserumblandingen, legg først til 55 mikroliter av det fortynnede viruset til alle brønner av kolonner en til ni og brønner av rader E til H av kolonne 10 og 11. Tilsett deretter 55 mikroliter FCS-frie DMEM-medier med Penicillin-Streptomycinblanding til alle brønner av rader A til D av kolonne 10 og 11, og inkuber platen ved 37 grader Celsius i 5% karbondioksidmiljø i en time. Før inokulasjonen av A549-celler med RSV, må du undersøke celleplaten under et lett mikroskop for å bekrefte at A549-cellemonolag er 80 % samløpet.Snu deretter platen forsiktig for å kaste mediene, og tørk lett platen på et sterilt absorberende papirhåndkle. Etter hver, vask med filtrert steril PBS. Deretter legger du til 100 mikroliter per brønn av virusserumblandingen til de tilsvarende brønnene på A549-celleplaten i henhold til platemalen som er angitt i manuskriptet, og inkuber platen ved 37 grader Celsius i 5% karbondioksid i en time.På slutten av inkubasjonen, bruk en pipette til å fjerne 90 mikroliter per brønn, og tilsett 100 mikroliter av mediet som inneholder 1XM199, 1,5% CMC og 2% FCS i Penicillin-Streptomycin blanding. Inkuber platen ved 37 grader Celsius i 5% karbondioksid i tre dager. For å fikse og utvikle en analyseplate, først invertere RSV-infisert A549 celleplate forsiktig for å kaste media som inneholder M199, CMC, 2% FCS, og Penicillin-Streptomycin blanding.Deretter legger du sakte til 200 mikroliter fikseringsbuffer til hver brønn. Inkuber platen ved minus 20 grader Celsius i 20 minutter. Kast deretter fikseringsbufferen og tørk forsiktig på et absorberende papirhåndkle.La platen med forsiden ned tørke i 10 minutter. Deretter med filtrert PBS buffer som inneholder 05 polysorbat 20, gjør 5% melk blokkering løsning. Tilsett 200 mikroliter av blokkeringsløsningen til hver brønn og inkuber platen ved romtemperatur i 30 minutter.På slutten av inkubasjon inverter platen forsiktig for å kaste oppløsningen og blot på et absorberende papirhåndkle. For å lage det primære antistoffet, fortynne ett til 500 geit XRSV antistoff i blokkeringsløsningen. Tilsett 50 mikroliter til hver brønn og inkuber platen ved 37 grader Celsius i en time.Vask platen tre ganger med filtrert PBS-polysorbat. Deretter lager du det sekundære antistoffet ved å fortynne ett til 5 000 Alexa Fluor esel anti-geit immunoglobulin G i blokkeringsløsningen. Tilsett 50 mikroliter til hver brønn og inkuber ved 37 grader Celsius i en time.Vask platen fem ganger med filtrert PBS-polysorbat. Hvis du vil telle plaketter med en automatisert flekkleser, må du først bruke en ubrukt 96-brønns kulturplate til å samarbeide med instrumentet ved å angi telleinnstillingene i FITC-kanalen. Les deretter celleplaten, pakk den i folie, og lagre den på fire grader Celsius.Deretter sjekker du bildene av brønner for artefaktmessige plakk eller forstyrrede cellemonolag, og utelukker brønner med forstyrrede cellemonolag. Gjennomsnittlig antall plakk av no-serum kontroll brønner ble beregnet og brukt til å bestemme 50% nøytralisering cut-off som ville resultere i 50% hemming av virusaktivitet. Den gjensidige serumfortynningen ble plottet på x-aksen og antall plaketter på y-aksen til en halvlogggraf fra en linje trukket mellom de to punktene.De 50 % nøytraliseringstitrene av testserumprøvene var røde og serumfortynninger med tellinger rett over eller under 50 % av kontrollbrønnene som ikke ble identifisert. RSVAPRN-analyser i to forskjellige voksne kohorter fra Gambia og friske frivillige i Melbourne resulterte i at gambiske voksne hadde en lavere gjennomsnittlig NAB-titer sammenlignet med Melbourne-voksne. Det viste humane RSV-referanseserumet viser svært lav variasjon med variasjonskoeffisienten på 6,82%Denne forbedrede RSV-plakkreduksjonsanalysen med høy gjennomstrømning kan enkelt implementeres i mange laboratorier, og vil støtte den internasjonale harmoniseringsinnsatsen til WHO for RSV-nøytraliserende antistoffanalyser.Dette vil være avgjørende for evalueringen av nye RSV-vaksinekandidater i fremtiden.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus (RSV) Micro-neutralization Assay

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Høy gjennomstrømning Sekvensiell ELISA for validering av biomarkører for akutt transplantat-mot-vert-sykdom

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

High-throughput Flow Cytometry cellebasert analyse for å påvise antistoffer mot N-metyl-D-aspartat-reseptoren, eller dopamin-2-reseptor i Human Serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

Sublingual Immunterapi som et alternativ til å indusere beskyttelse mot akutte luftveisinfeksjoner

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

En organotypiske høy gjennomstrømning System for Karakterisering av Drug Sensitivity of Primary myelomatose Cells

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

En forbedret fremgangsmåte for Rapid intubering av trakea hos mus

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

En høy gjennomstrømning, multiplekset og målrettet proteomikk CSF-analyse for å kvantifisere nevrodegenerative Biomarkører og apolipoprotein E-isoformer Status

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine venstre fremre synkende (LAD) koronar Binding: en forbedret og forenklet modell for hjerteinfarkt

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...