Name: an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay
Uploaded: 2019-01-26T14:30:00
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Os autores agradecer todos os participantes envolvidos. Reconhecemos o programa de apoio de infra-estrutura operacional do governo vitoriano. LPC é um destinatário NHMRC Fellowship de desenvolvimento de carreira.

Nota: Todos os passos tem que ser executada em uma capa de BSL2, a menos que indicado de forma diferente. Titulação viral é necessária com antecedência um ensaio PRN para determinar a concentração ideal de RSV utilizada no ensaio de PRN. Recomenda-se alíquota as reservas de vírus em um pequeno volume que será descongelado uma vez e usado para cada ensaio de NAb. Também é recomendável utilizar o mesmo estoque viral para todos os ensaios de NAb realizados para todas as amostras de um estudo. C...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Modjarrad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+Vaccine+Development+Report+from+a+World+Health+Organization+Meeting+held+on+23-24+March+2015.">WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus Vaccine Development Report from a World Health Organization Meeting held on 23-24 March 2015.</a> Vaccine. 34 (2), 190-197 (2016).</li><li>Giersing, B. K., Karron, R. A., Vekemans, J., Kaslow, D. C., Moorthy, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meeting+report:+WHO+consultation+on+Respiratory+Syncytial+Virus+(RSV)+vaccine+development,+Geneva,+25-26+April+2016.">Meeting report: WHO consultation on Respiratory Syncytial Virus (RSV) vaccine development, Geneva, 25-26 April 2016.</a> Vaccine. , (2017).</li><li>Mazur, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+respiratory+syncytial+virus+vaccine+landscape:+lessons+from+the+graveyard+and+promising+candidates.">The respiratory syncytial virus vaccine landscape: lessons from the graveyard and promising candidates.</a> Lancet Infect Diseases. 18 (10), e295-e311 (2018).</li><li>Hosken, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multi-laboratory+study+of+diverse+RSV+neutralization+assays+indicates+feasibility+for+harmonization+with+an+international+standard.">A multi-laboratory study of diverse RSV neutralization assays indicates feasibility for harmonization with an international standard.</a> Vaccine. 35 (23), 3082-3088 (2017).</li><li>Zielinska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+improved+microneutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+by+automated+plaque+counting+using+imaging+analysis.">Development of an improved microneutralization assay for respiratory syncytial virus by automated plaque counting using imaging analysis.</a> Virology Journal. 2, 84 (2005).</li><li>van Remmerden, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+respiratory+syncytial+virus+neutralization+assay+based+on+the+detection+of+green+fluorescent+protein+expression+and+automated+plaque+counting.">An improved respiratory syncytial virus neutralization assay based on the detection of green fluorescent protein expression and automated plaque counting.</a> Virology Journal. 9, 253 (2012).</li><li>Varada, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neutralization+assay+for+respiratory+syncytial+virus+using+a+quantitative+PCR-based+endpoint+assessment.">A neutralization assay for respiratory syncytial virus using a quantitative PCR-based endpoint assessment.</a> Virology Journal. 10, 195 (2013).</li><li>Tripp, R. A., Jorquera, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human respiratory syncytial virus: methods and protocols. , (2016).</li><li>Suara, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+neutralizing+antibody+to+respiratory+syncytial+virus+in+sera+from+mothers+and+newborns+residing+in+the+Gambia+and+in+The+United+States.">Prevalence of neutralizing antibody to respiratory syncytial virus in sera from mothers and newborns residing in the Gambia and in The United States.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 3 (4), 477-479 (1996).</li><li>Wang, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+neutralizing+serum+antibodies+of+patients+vaccinated+with+human+papillomavirus+L1+or+L2-based+immunogens+using+furin-cleaved+HPV+Pseudovirions.">Measurement of neutralizing serum antibodies of patients vaccinated with human papillomavirus L1 or L2-based immunogens using furin-cleaved HPV Pseudovirions.</a> PLoS One. 9 (7), e101576 (2014).</li><li>Magnus, C., Reh, L., Trkola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+resistance+to+neutralizing+antibodies:+Determination+of+antibody+concentrations+leading+to+escape+mutant+evolution.">HIV-1 resistance to neutralizing antibodies: Determination of antibody concentrations leading to escape mutant evolution.</a> Virus Research. 218, 57-70 (2016).</li></ol>

Temos desenvolvido e aperfeiçoado um ensaio de microneutralização RSV simples e eficiente que pode ser facilmente adaptado na maioria dos laboratórios. Este ensaio é capaz de medir a capacidade de infecção viral, bem como a inibição da infecção viral por NAb a nível celular, usando a varredura de imagem computadorizada de medição. A utilização de uma plataforma baseada em imagem latente e sistemas baseados em anticorpos específicos aumentou a especificidade e a sensibilidade da deteção ponto comparada ...

Vírus sincicial respiratório (VSR) é a principal causa de infecções do trato respiratório inferior na população pediátrica em todo o mundo1. Apesar de sua alta carga, não há ainda nenhuma vacina ou tratamento disponível. Desde 2013, a Organização Mundial de saúde (OMS) declarou-se desenvolvimento de vacina RSV como uma prioridade de pesquisa principais, com anual WHO consulta reuniões2,3. A OMS chegou a acordo sobre uso de RSV neutralizando a medição de anticorpo (NAb) para monitorar a imunogenicidade da vacina, como isto é reconhecido como o principal marcador serológico de proteção4. NAbs foram mostrados para proteger contra uma grave infecção pelo VSR em um número de estudos, bem como ensaios clínicos do palivizumab anti-VRS monoclonal anticorpo, atualmente a estratégia profilática apenas disponível4.
Existem vários formatos de ensaio NAb usados pelos laboratórios em todo o mundo, incluindo ensaios baseados em molecular e celular, que têm feito esforços de padronização desafiando5,6,7,8. No entanto, o ensaio de neutralização (PRN) placa convencional-redução que mede o número de placa reduzida, formando unidades (PFU) pela presença de um anticorpo específico RSV continua a ser o padrão-ouro9. Aqui, nós relatamos um protocolo PRN melhorado, simplificado e alta produtividade que pode ser usado em inúmeras linhas de célula, por diferentes cepas de RSV e com taxa de transferência maior do ensaio. Este protocolo foi testado usando amostras clínicas de diferentes configurações, bem como em amostras de experiências modelo animal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-185</td>
			<td>provided by Dr Keith Chappell, University of Queensland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viral strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RSV A2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>VR-1540</td>
			<td>lot number 60430286</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1000142511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-Fluor donkey anti-goat IgG (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMC sodium salt powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5678-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (no serum, 3.7 g/L NaHC, P/S) (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal calf Serum (stored in 50ml aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat X RSV antibody</td>
			<td>Merck</td>
			<td>AB1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human polyclonal antiserum to respiratory syncytial virus (RSV) (stored in 45 &#181;L aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>BEI Resources</td>
			<td>NR-4022</td>
			<td>Free order through BEI Resources upon registration. This serum belong to a panel of human antiserum and immune globulin to RSV (NR-32832)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 powder</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31100035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk diluent blocking solution (stored at 4 &#176;C)</td>
			<td>Australian Biosearch</td>
			<td>50-82-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (stored in 6mL aliquots at -20 &#176;C)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>s.d.H2O from Milli-Q dispenser</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>In-house dispensation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1X PBS for culture (stored at 4&#176;C)</td>
			<td>Scientific Services &#8211; Tissue Culture</td>
			<td></td>
			<td>MCRI in house supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20 polysorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Invitro Technologies</td>
			<td>FAL352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter unit 0.22um (500 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NAL5660020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Eppendorf tubes (1.5 mL)</td>
			<td>Australia PL</td>
			<td>AM12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile flat-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>655180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile U-bottom plates (96-well with lid)</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>650180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4487-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipette</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS4251-200EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-200 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-200-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 5-20 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 96TIPS PKG960</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-20-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 100-1000 &#181;LClear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1000</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TF-1000-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Pipette 1-10 &#181;L Clear Maxymum Recovery Racked Pre-sterilized 10RACKS x 100TIPS PKG1001</td>
			<td>Fisher Biotec</td>
			<td>TXLF-10-L-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments and softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISpot reader system</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AID ELISpot software version 5.0</td>
			<td>AID iSpot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strasburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel 2007</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved and high throughput respiratory syncytial virus (rsv) micro-neutralization assay

Respiratórios sincicial vírus específicos anticorpos neutralizantes (RSV NAbs) são um importante marcador de proteção contra RSV. Um número de formatos diferentes de ensaio está atualmente em uso em todo o mundo para que haja a necessidade de um método de precisão e alta produtividade para medir RSV NAbs. Descrevemos aqui um ensaio de microneutralização com base em imagem que foi testado no subgrupo RSV A e também pode ser adaptado para o subgrupo RSV B e tipos de amostras diferentes. Este método é altamente reprodutível, com variações inter-ensaio para o soro de referência, sendo menos de 10%. Acreditamos que este ensaio pode ser prontamente estabelecido em muitos laboratórios em todo o mundo a um custo relativamente baixo. Desenvolvimento de um ensaio melhorado, elevado-throughput que mede RSV NAbs representa um significativo passo em frente para a padronização deste método internacionalmente, bem como sendo fundamental para a avaliação dos candidatos de vacina RSV romance no futuro.

A titulação de um estoque de vírus foi realizada de 01:10 para 01:108 diluição para determinar a concentração de vírus estoque antes do ensaio do PRN (representante resultados mostrados na Figura 5). Da Figura 5, PFU pode ser contada de forma confiável em diluições de 01:104 e 01:105. Foi calculado o número médio de PFU de três vias poços na mesma diluição. Desde o número médio ...

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An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus RSV Micro-neutralization Assay

Este estudo descreve um alto throughput, com base em imagens de ensaio de microneutralização para determinar o título de anticorpos neutralizantes específicos para o vírus sincicial respiratório (VSR). Este formato de ensaio foi testado em tipos diferentes de amostra.

Um ensaio de Microneutralização do vírus sincicial respiratório (VSR) melhorada e alta taxa de transferência

Respiratory syncytial virus-specific neutralizing antibodies (RSV NAbs) are an important marker of protection against RSV. A number of different assay ...

Há necessidade de um método preciso e de alto rendimento para medir anticorpos neutralizantes RSV, como um importante marcador de proteção contra vírus sincicial respiratório. Este método é altamente reproduzível com variações entre ensaios para o antiserum de referência sendo inferior a 10% Acreditamos que este ensaio pode ser facilmente estabelecido em muitos laboratórios em todo o mundo a um custo relativamente baixo. Descrevemos aqui um ensaio de micro-neutralização baseado em imagem que foi testado no subgrupo A do RSV, e também pode ser adaptado para o subgrupo B RSV e diferentes tipos de amostras.O procedimento será Reuben Tse, membro da equipe de pesquisa do MCRI. Para as placas de sementes no primeiro dia, primeiro resuspende células A549 em mídia DMEM, com 10% FCS e 1.000 unidades Mistura penicilina-estreptomicina a uma concentração de 400.000 células por mililitro. Em seguida, sementes 96-bem flat-bottom placas estéreis com 40.000 células A459 a uma densidade de 100 microliters por poço.Incubar a placa a 37 graus Celsius em ambiente de dióxido de carbono de 5% durante a noite. Para preparar a diluição do soro no segundo dia, descongele primeiro as amostras de soro de referência e soro humanos a temperatura ambiente. Em seguida, coloque-os em um banho de água a 56 graus Celsius por 30 minutos para aquecê-los e ativá-los.Em seguida, prepare mais de 110 microliters de uma diluição de um a 100 do soro de referência misturando 1,5 microliters do soro de referência com mídia DMEM livre de FCS com mistura penicilina-estreptomicina a um volume final de 150 microliters. Pipeta 110 microliters desta diluição em bem A12 de uma placa estéril de fundo U de 96 poços. Para fazer diluições de série de um a duas na placa, adicione primeiro 55 microliters de mídia DMEM livre de FCS com mistura penicilina-estreptomicina aos poços B12 a H12.Em seguida, com uma nova transferência de ponta 55 microliters de bem A12 para bem B12. Pipeta para cima e para baixo cinco vezes para misturar a solução, e continuar até chegar bem H12. Pipeta fora do excesso de 55 microliters da solução do poço H12.Em seguida, prepare uma diluição de 1 a 100 amostras de teste de soro e adicione 110 microliters de cada diluição aos poços correspondentes A1 a A9 e E1 a E9 da placa estéril de 96 poços. Em seguida, adicione 55 microliters de mídia DMEM livre de FCS com mistura penicilina-estreptomicina a poços nas colunas de um a nove. Faça diluições de série de um a dois da linha A para a linha D e da linha E para a linha H como descrito anteriormente.Adicione 55 microliters de mídia DMEM livre de FCS com mistura penicilina-estreptomicina a poços nas colunas 10 e 11. Para preparar o estoque do vírus, primeiro coloque um frasco congelado de RSV em um banho de água de 37 graus Celsius para descongelá-lo rapidamente, em seguida, coloque o frasco no gelo. Em seguida, adicione o vírus à mídia DMEM contendo mistura penicilina-estreptomicina a aproximadamente 200 PFU por poço para fazer um volume total de 55 mililitros para 100 poços.Para preparar a mistura de soro do vírus, adicione primeiro 55 microliters do vírus diluído a todos os poços de colunas de uma a nove e poços de linhas E a H das colunas 10 e 11. Em seguida, adicione 55 microliters de mídia DMEM livre de FCS com mistura penicilina-estreptomicina a todos os poços das linhas A a D das colunas 10 e 11, e incubar a placa a 37 graus Celsius em ambiente de dióxido de carbono de 5% por uma hora. Antes da inoculação de células A549 com RSV, examine a placa celular sob um microscópio leve para confirmar que as monocamadas celulares A549 são 80% confluentes.Em seguida, inverta a placa suavemente para descartar a mídia, e levemente borrar a placa em uma toalha de papel absorvente estéril. Depois de cada um, lave com PBS estéril filtrado. Em seguida, adicione 100 microliters por poço da mistura de soro do vírus aos poços correspondentes na placa celular A549 de acordo com o modelo de placa fornecido no manuscrito, e incubar a placa a 37 graus Celsius em 5% de dióxido de carbono por uma hora.Ao final da incubação, use uma pipeta para remover 90 microliters por poço, e adicione 100 microliters da mídia contendo 1XM199, 1,5% CMC e 2% FCS na mistura Penicilina-Estreptomicina. Incubar a placa a 37 graus Celsius em 5% de dióxido de carbono por três dias. Para corrigir e desenvolver uma placa de ensaio, primeiro inverta a placa celular A549 infectada pelo RSV suavemente para descartar a mídia que contém M199, CMC, 2%FCS e penicilina-estreptomicina.Em seguida, adicione lentamente 200 microliters de Buffer de Fixação a cada poço. Incubar a placa a menos 20 graus Celsius por 20 minutos. Em seguida, descarte o tampão de fixação e limpe suavemente uma toalha de papel absorvente.Deixe a placa de frente para baixo para secar por 10 minutos. Em seguida, com tampão PBS filtrado contendo 05 polisorbato 20, faça 5% de solução de bloqueio de leite. Adicione 200 microliters da solução de bloqueio a cada poço e incubar a placa em temperatura ambiente por 30 minutos.No final da incubação inverta a placa suavemente para descartar a solução e borrar em uma toalha de papel absorvente. Para fazer o anticorpo primário, diluir um a 500 anticorpos XRSV de cabra na solução de bloqueio. Adicione 50 microliters a cada poço e incubar a placa a 37 graus Celsius por uma hora.Lave a placa três vezes com PBS-polisorbate filtrado. Em seguida, faça o anticorpo secundário diluindo de um a 5.000 Alexa Fluor anti-cabra imunoglobulina G na solução de bloqueio. Adicione 50 microliters a cada poço e incubar a 37 graus Celsius por uma hora.Lave a placa cinco vezes com PBS-polisorbate filtrado. Para contar placas com um leitor de pontos automatizado, primeiro use uma placa de cultura de 96 poços não utilizado para colaborar com o instrumento inserindo as configurações de contagem no canal FITC. Em seguida, leia a placa celular, enrole-a em papel alumínio, e armazene-a a quatro graus Celsius.Em seguida, verifique as imagens de poços para placas artefatosas ou monocamadas celulares rompidas, e exclua poços com monocamadas de células rompidas. O número médio de placas dos poços de controle sem soro foi calculado e utilizado para determinar o corte de neutralização de 50% que resultaria em 50% de inibição da atividade do vírus. A diluição recíproca do soro foi traçada no eixo x e o número de placas no eixo y de um gráfico semi-log de uma linha traçada entre os dois pontos.Os títulos de neutralização de 50% das amostras de soro de teste foram diluições vermelhas e séricos com contagens imediatamente acima ou abaixo do valor de 50% dos poços de controle sem soro foram identificados. Ensaios da RSVAPRN em duas coortes adultas diferentes da Gâmbia e voluntários saudáveis em Melbourne resultaram em adultos gambianos com uma média menor de 100 medíois em comparação com os adultos de Melbourne. O soro de referência rsv humano mostrado demonstra uma variabilidade muito baixa com o coeficiente de variação de 6,82%Este ensaio de neutralização de redução de placa RSV de alto rendimento pode ser facilmente implementado em muitos laboratórios, e apoiará o esforço internacional de harmonização da OMS para ensaios de anticorpos neutralizantes RSV.Isso será fundamental para a avaliação dos novos candidatos à vacina RSV no futuro.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Medicina

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High-throughput Citometria de Fluxo Ensaio Celular para detectar anticorpos em N-metil-D-aspartato ou dopamina-2 Receptor em Soro Humano

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