Name: low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00
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Ce travail a été soutenu par KAKENHI JSPS (société japonaise pour la Promotion des sciences) (subvention pour la recherche scientifique C), accorder le numéro 18K 07373 (H.S.) et des subventions pour les universités privées.

Toutes les expériences sur des animaux ont été menées de manière humaine. Les institutionnels Animal Experiment Comité de Jichi Medical University a approuvé l’étude. L’étude a été menée conformément au règlement institutionnel pour l’expérimentation animale et les fondamentaux de la directive pour bonne conduite of Animal Experiment et des activités connexes dans les établissements de recherche universitaires sous la juridiction du MEXT japonais. Les souris utilisées dans le présent protocole on...

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L’analyse de l’empreinte et la boîte de pendaison d’essai sont simples et peu coûteux des tests comportementaux pour la fonction motrice des souris. Les phénotypes neurocomportementales dans plusieurs modèles de souris ont été correctement détectés par ces tests. Par exemple, raccourcir la longueur de foulée dans la sclérose latérale amyotrophique24, augmentation de la longueur de foulée asymétrique à l’ataxie-télangiectasie25, accroissement de la dur...

Troubles de la motricité sont définies comme les perturbations du système nerveux montrant un excès ou un manque de mouvements volontaires ou automatique1. En particulier, trouble de la démarche est souvent documenté chez les patients atteints de troubles de circulation pour2,3,4. Analyse de la démarche est donc un test comportemental adapté pour la validation des modèles animaux de dyskinésies. Chez les souris, les allures automatisé analyses ont été réalisées pour la marche à vitesse naturelle5 et à une vitesse réglable par tapis roulant6,7. Ces analyses fournissent automatiquement les résultats quantitatifs de la démarche. Une autre méthode pour détecter le trouble de la démarche est appelée analyse de l’empreinte. Après marquage le fond des pieds avec de l’encre, souris marchent sur papier, et les empreintes sont analysés. Au départ, Vaseline et en poudre de charbon de bois ont été utilisées pour visualiser l' empreinte8et puis ont été remplacés par l’encre le polygraphe papier9 et révélateurs photographiques sur papier photographique10. Une méthode moins coûteuse et moins toxique à l’aide d’encre et papier que les autres méthodes reste à ce jour11. Analyse de l’empreinte est moins cher par rapport à l’analyse automatisée5,6,7 et serait utile pour évaluer les troubles du mouvement chez les modèles murins pour les chercheurs sans fonds de recherche abondante .
La pendaison épreuve de boîte est une sorte de quatre tests de pendaison de branche à l’aide de fil cage couvercle12 et wire mesh écran13. La boîte est un appareil avec couvercle pivotant treillis sur le dessus de la boîte le long d’une barre centrale. En plus de l’analyse de la démarche, le test est peu coûteuse et facilement possible. Par conséquent, nous avons effectué la pendaison boîte test pour évaluer la force de préhension et l’équilibre, de plus à l’analyse d’empreinte de pas dans le présent protocole.
Stress induit des symptômes de troubles de circulation14,15. Déficits moteurs sont souvent induites par plusieurs stress chroniques, même quand aucun phénotype moteur spontanée n’est observée dans les modèles murins d’un mouvement trouble16,17,18. Retenue est l’une des méthodes couramment utilisées pour le chargement chez la souris, parce que l’animal n’est pas physiquement endommagé19 et le coût est inférieur comparé avec d’autres méthodes telles que l’électrocution avec des appareils dédiés de stress et forcé en cours d’exécution avec l’utilisation d’un tapis roulant. Retenue par un tube, qui est effectué par une souris dans un tube conique troués 50 mL de confinement, est plus facile que d’autres méthodes telles que fil mesh passoire, branche enregistrée et habillage d’animaux avec de la gaze (révisé20). Dans cet article, nous résumons les protocoles de l’empreinte de l’analyse et la boîte de la pendaison d’essai après retenue par un tube. Ce protocole permettrait d’utiliser des modèles de souris de dyskinésies sans phénotype moteur spontané.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hanging box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking pen</td>
			<td>ZEBRA</td>
			<td>MO-120-MC-BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goal box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td>
			<td>Accessory for apparatus of balanced beam test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boxes</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Side wall of runway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black ink</td>
			<td>Shin-asahi</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red ink</td>
			<td>Maruyamakogyo</td>
			<td>BC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351008</td>
			<td>Petri dishe (35 mm in diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Askul Multipaper Super White J Monochrome A3</td>
			<td>Askul</td>
			<td>701-712</td>
			<td>White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square drill</td>
			<td>KAKURI Corporation</td>
			<td>DIY FACTORY (K32-0313)</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress

Trouble de la démarche est fréquemment observée chez les patients atteints de troubles de la motricité. Dans les modèles de souris utilisées pour les troubles du mouvement, analyse de la démarche est un test comportemental important pour déterminer si les souris imitent les symptômes des patients. Déficits moteurs sont souvent induites par le stress, quand aucun phénotype moteur spontanée n’est observée dans les modèles murins. Par conséquent, analyse de démarche suivie par le stress de chargement serait une méthode sensible pour évaluer le phénotype moteur dans des modèles murins. Toutefois, les chercheurs font face à l’exigence d’un appareil coûteux pour obtenir automatiquement les résultats quantitatifs de l’analyse de la démarche. Pour le stress, stress par des méthodes simples de chargement sans appareils coûteux requis pour un choc électrique et forcé en cours d’exécution est souhaitable. Par conséquent, nous introduisons un protocole simple et peu coûteux consistant en analyse d’empreinte avec du papier et d’encre, pendaison boîte test pour évaluer la fonction motrice, et chargement de stress défini par retenue avec un tube conique. Les déficits moteurs de souris ont été détectés avec succès par le présent protocole.

Les souris mâles hétérozygotes de Atp1a3 (Atp1a3+ / −) qui sont le modèle murin pour l’apparition rapide de dystonie parkinsonisme et type sauvage ont été utilisés dans le présent protocole. Atp1a3+ / − a montré nettement plus courtes longueurs de foulée des membres antérieurs et postérieurs que ceux du type sauvage à 4 semaines d’âge (Figure 5 a et 5 b Figure</strong...

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Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

Low-cost protocole d’analyse de l’empreinte et la pendaison de zone Test pour souris appliqué le Stress chronique retenue

Le protocole de bas prix consistant en analyse de l’empreinte et la pendaison boîte test après que retenue pour le stress est utile pour évaluer les troubles du mouvement du modèle murin.

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

Notre protocole utilisant l’analyse de démarche est très utile en déterminant si les moteurs de souris des désordres de mouvement imitent le symptôme du patient présentant la perturbation de démarche. Ainsi, l’analyse de la démarche dans le test de charge de stress peut être effectuée facilement, et sans équipement coûteux, pour détecter certains phénotypes moteurs chez la souris, sans effets spontanés. Avant d’entreprendre le test comportemental, enregistrez le poids de chaque souris et utilisez un stylo de marquage pour étiqueter chaque queue.Lorsque tous les animaux ont été pesés et marqués, placez les souris dans la salle expérimentale pendant au moins 30 minutes, et placez une boîte suspendue claire, 25 par 25 par 40 centimètres, avec un couvercle en maille rotatable, sur le banc du laboratoire. Lorsque les souris se sont acclimatées, placez une souris au centre du couvercle en maille et tournez soigneusement le couvercle à l’envers. Ensuite, mesurez la latence d’automne de la souris à partir du couvercle en maille, avant de retourner la souris à sa cage d’origine.Lorsque toutes les souris ont été testées, placez un morceau de papier blanc de 9,9 par 42 centimètres sur le banc du laboratoire et placez une boîte à but sombre à l’extrémité distale du papier. Placez d’autres boîtes, à peu près de la même longueur que le papier, des deux côtés de la piste pour éviter de s’échapper. Et ajouter de l’encre noire et rouge pour séparer les boîtes de Petri de 35 millilitres.Pour former les souris à l’analyse, placez une souris à l’extrémité proximale du papier, face à la boîte d’objectif, et laissez la souris marcher de l’extrémité proximale du papier à la boîte de but. Lorsque la souris atteint la boîte, frottez doucement l’animal, en repliant le dos et la queue entre la boule du pouce et les autres doigts, pour limiter le mouvement des membres postérieurs. Et plonger le fond des membres antérieurs à l’encre rouge, et le fond des membres postérieurs à l’encre noire.Ensuite, placez immédiatement la souris sur l’extrémité proximale du papier, face à la boîte de but, et laissez la souris marcher de l’extrémité proximale à la boîte de but. Après avoir assécher à l’air le papier imprimé du pied, utilisez une règle pour obtenir trois mesures de la longueur de foulée, en mesurant les distances entre les mêmes parties des empreintes de pattes. De la largeur de base avant, en dessinant une ligne entre les empreintes avant consécutives, de même face, et en mesurant la longueur de la ligne verticale de la garniture de l’empreinte avant, à la ligne tracée entre les empreintes.Et de la largeur de base postérieur, en dessinant une ligne entre les empreintes postérieures droites consécutives, et en mesurant la longueur de la ligne verticale de la garniture de l’empreinte arrière gauche, à la ligne tracée entre les autres empreintes droites. Pour le chevauchement, mesurez la distance entre les coussinets de l’avant et de l’arrière. Pour préparer un tube de retenue, utilisez une perceuse carrée pour faire 16 trous de deux millimètres dans un tube de 50 millilitres le long des marques d’échelle, et l’arrière de chaque marque d’échelle.Couper la pointe du tube pour faire un trou de cinq millimètres, pour respirer, et faire un trou de quatre millimètres dans le bouchon du tube, pour la queue. Pour le test de chargement du stress, débrailler une souris, et placer l’animal dans la tête du tube de retenue en premier, avec les membres antérieurs doucement confinés. Passer la queue à travers le trou dans le bouchon avant de plafonner le tube.Et placez la souris sur le dessus du banc pendant deux heures à température ambiante. À la fin de la période de chargement du stress, retirez la souris du tube et retournez l’animal dans sa cage d’origine. Comme on l’a observé dans ces figures représentatives, les souris modèles de dystonie de dystonie à début rapide hétérozygotes, démontrent des longueurs de foulée avant et arrière significativement plus courtes que leurs compagnons de litière de type sauvage à l’âge de quatre semaines.Le stress hétérozygote dystonie rapide-début souris modèle parkinsonisme, montrent également des longueurs de foulée significativement plus courtes des deux membres que ceux des compagnons de litière stressés de type sauvage à huit semaines d’âge. Les asymétries des longueurs de foulée des deux membres ne sont pas significativement différentes, dans n’importe quel groupe de souris, à n’importe quel âge. La base avant et les chevauchements des deux membres sont également similaires, dans tous les groupes, à tous les âges.La base postérieur est significativement plus large chez ces souris modèles de dystonie de dystonie à début rapide stressées, que chez les animaux de type sauvage stress à l’âge de 10 semaines, ce qui indique que le stress provoque des déficits moteurs chez les souris modèles de dystonie à début rapide hétérozygotes. Aucune différence significative dans le temps de pendaison, entre le type sauvage et le mutant, n’est observée chez les animaux âgés de quatre à 10 semaines. À l’âge de 12 semaines, cependant, le temps suspendu des souris sauvages de stress est sensiblement plus long que celui des autres animaux, suggérant que le déficit moteur chez les souris modèles de parkinsonisme de dystonie à début rapide hétérozygotes, se distingue des souris de type sauvage par un test de contention chez les animaux plus âgés.Placez la souris sur le papier immédiatement après que la souris accroche le fond des membres à l’encre pour éviter le séchage de l’encre avant le test de marche. Des tests supplémentaires pour les caractéristiques émotionnelles, telles que le champ ouvert, surélevé plus-labyrinthe, et l’essai entier de natation, peuvent être exécutés pour répondre si l’anomalie de démarche résultent seulement du déficit moteur. Notre protocole peut être utilisé pour explorer la susceptibilité au stress, en changeant le nombre et la durée de la charge de stress, et en comparant les phénotypes moteurs entre diverses conditions de chargement.Notre protocole peut être utilisé pour explorer la susceptibilité au stress en changeant le nombre et la durée des charges de stress, et en comparant les phénotypes moteurs entre diverses conditions de chargement.

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