Name: low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00
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इस काम JSPS (जापान सोसायटी विज्ञान के संवर्धन के लिए) KAKENHI (अनुदान में वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए सहायता सी), अनुदान संख्या 18K07373 (H.S.) और निजी विश्वविद्यालयों के लिए सब्सिडी द्वारा समर्थित किया गया था ।

सभी पशु प्रयोग एक मानवीय तरीके से आयोजित किया गया । जीची चिकित्सा विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु प्रयोग समिति ने अध्ययन को मंजूरी दे दी । अध्ययन में पशु प्रयोग के लिए संस्थागत विनियमन और जापान के MEXT के क...

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	<li>Warner, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+disorders.">Movement disorders.</a> Practical Guide to Neurogenetics. , (2008).</li><li>Brashear, A., DeLeon, D., Bressman, S. B., Thyagarajan, D., Farlow, M. R., Dobyns, W. 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A., Charbonneau, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+stress+disrupts+risk+assessment+behavior+in+mice.">Acute stress disrupts risk assessment behavior in mice.</a> Physiology and Behavior. 59 (4-5), 937-940 (1996).</li><li>Bannon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Behavioural effects of stress and aluminum toxicity on a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis Parkinsonism-dementia complex. , 1-186 (2015).</li></ol>

पदचिह्न विश्लेषण और फांसी बॉक्स परीक्षण चूहों की मोटर समारोह के लिए सरल और सस्ती व्यवहार परीक्षण कर रहे हैं । इन परीक्षणों के द्वारा कई माउस मॉडलों में neurobehavioral phenotypes सफलतापूर्वक पाया गया है । उदाहरण के लि?...

आंदोलन विकारों तंत्रिका तंत्र की गड़बड़ी के रूप में परिभाषित कर रहे है एक अतिरिक्त या स्वैच्छिक या स्वचालित आंदोलनों की धनाभाव1दिखा । विशेष रूप से, चाल अशांति अक्सर आंदोलन विकारों2,3,4के साथ रोगियों के बीच प्रलेखित है । इसलिए, चाल विश्लेषण आंदोलन विकारों के पशु मॉडलों के सत्यापन के लिए एक उपयुक्त व्यवहार परीक्षण है । चूहों में, स्वचालित चाल विश्लेषण6,7ट्रेडमिल से प्राकृतिक गति5 और समायोज्य गति पर चलने के लिए प्रदर्शन किया गया है । ये विश्लेषण स्वचालित रूप से चाल के मात्रात्मक परिणाम प्रदान करते हैं । एक वैकल्पिक विधि चाल अशांति का पता लगाने के लिए पदचिह्न विश्लेषण कहा जाता है । स्याही के साथ पैर के नीचे के लेबल के बाद, चूहों कागज पर चलते हैं, और पैरों के निशान विश्लेषण कर रहे हैं । शुरू में, वैसलीन और पाउडर चारकोल के पदचिह्न8कल्पना करते थे, और फिर polygraph कागज9 पर स्याही से बदल रहे थे और फोटो कागज10पर फोटो डेवलपर । एक सस्ता और कम विषाक्त अंय तरीकों से स्याही और कागज का उपयोग विधि11तारीख को रहता है । पदचिह्न विश्लेषण कम स्वचालित विश्लेषण5,6,7 के साथ तुलना में महंगा है और प्रचुर मात्रा में अनुसंधान कोष के बिना शोधकर्ताओं के लिए माउस मॉडलों में आंदोलन विकारों का मूल्यांकन करने के लिए उपयोगी होगा .
फांसी बॉक्स परीक्षण चार पैर तार पिंजरे ढक्कन12 और तार मेष स्क्रीन13का उपयोग कर परीक्षण फांसी का एक प्रकार है । बॉक्स एक केंद्र पट्टी के साथ बॉक्स के शीर्ष पर घूर्णन योग्य मेष ढक्कन के साथ एक उपकरण है । चाल विश्लेषण के अलावा, परीक्षण महंगा और आसानी से किया जा सकता है । इसलिए, हम फांसी बॉक्स परीक्षण आयोजित की पकड़ शक्ति और संतुलन का मूल्यांकन करने के लिए, इस प्रोटोकॉल में पदचिह्न विश्लेषण के अलावा ।
तनाव आंदोलन विकारों14,15के लक्षण लाती है । मोटर घाटे अक्सर कई पुरानी तनाव से प्रेरित भी जब कोई सहज मोटर phenotype एक आंदोलन विकार के माउस मॉडल में मनाया जाता है16,17,18। संयम चूहों में तनाव लदान के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया तरीकों में से एक है, क्योंकि पशु शारीरिक रूप से19 नुकसान नहीं है और लागत कम समर्पित तंत्र के साथ बिजली के झटके के रूप में अंय तरीकों के साथ तुलना में है और एक ट्रेडमिल के उपयोग के साथ चलने को मजबूर । एक ट्यूब, जो एक छिद्रित ५० मिलीलीटर शंकु ट्यूब में एक माउस को परिष्कृत द्वारा किया जाता है द्वारा संयम, तार जाल छलनी, टेप अंग के रूप में अंय तरीकों की तुलना में आसान है, और धुंध के साथ जानवर के लपेटकर (20की समीक्षा की) । इस पत्र में, हम पदचिह्न विश्लेषण और एक ट्यूब द्वारा संयम के बाद फांसी बॉक्स परीक्षण के प्रोटोकॉल संक्षेप । इस प्रोटोकॉल हमें सहज मोटर phenotype बिना आंदोलन विकारों के माउस मॉडल का उपयोग करने में मदद मिलेगी ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hanging box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking pen</td>
			<td>ZEBRA</td>
			<td>MO-120-MC-BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goal box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td>
			<td>Accessory for apparatus of balanced beam test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boxes</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Side wall of runway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black ink</td>
			<td>Shin-asahi</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red ink</td>
			<td>Maruyamakogyo</td>
			<td>BC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351008</td>
			<td>Petri dishe (35 mm in diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Askul Multipaper Super White J Monochrome A3</td>
			<td>Askul</td>
			<td>701-712</td>
			<td>White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square drill</td>
			<td>KAKURI Corporation</td>
			<td>DIY FACTORY (K32-0313)</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress

चाल अशांति अक्सर आंदोलन विकारों के साथ रोगियों में मनाया जाता है । माउस को आंदोलन विकारों के लिए इस्तेमाल किया मॉडल में, चाल विश्लेषण महत्वपूर्ण व्यवहार परीक्षण के लिए निर्धारित है कि क्या चूहों रोगियों के लक्षणों की नकल है । मोटर घाटे अक्सर तनाव से प्रेरित कर रहे है जब कोई सहज मोटर phenotype माउस मॉडल में मनाया जाता है । इसलिए, चाल विश्लेषण तनाव लदान के बाद माउस मॉडल में मोटर phenotype मूल्यांकन के लिए एक संवेदनशील तरीका होगा । हालांकि, शोधकर्ताओं ने एक महंगी उपकरण की आवश्यकता का सामना करने के लिए मात्रात्मक परिणाम स्वचालित रूप से चाल विश्लेषण से प्राप्त । तनाव के लिए, बिजली के झटके और जबरिया चलने के लिए आवश्यक उपकरणों के बिना सरल तरीके से लोड तनाव वांछनीय है । इसलिए, हम एक सरल और कम लागत कागज और स्याही के साथ पदचिह्न विश्लेषण से मिलकर प्रोटोकॉल परिचय, हैंगिंग बॉक्स परीक्षण मोटर समारोह का मूल्यांकन करने के लिए, और तनाव एक शंकु ट्यूब के साथ संयम से परिभाषित लोड हो रहा है । इस प्रोटोकॉल द्वारा चूहों के मोटर घाटे का सफलतापूर्वक पता लगाया गया ।

Atp1a3 (Atp1a3+/−) के heterozygous नर चूहे जो तेजी से शुरुआत दुस्तानता पार्किंसंस और वाइल्ड-टाइप littermates के लिए माउस मॉडल हैं, इस प्रोटोकॉल में उपयोग किए गए थे । Atp1a3+/− उम्र के 4 हफ्तों में जंगली प?...

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Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

कम लागत प्रोटोकॉल पदचिह्न विश्लेषण और चूहों के लिए फांसी बॉक्स परीक्षण के पुराने संयम तनाव लागू

कम लागत पदचिह्न विश्लेषण और फांसी बॉक्स परीक्षण के बाद संयम तनाव से मिलकर प्रोटोकॉल माउस मॉडल के आंदोलन विकारों के मूल्यांकन के लिए उपयोगी है ।

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

चाल विश्लेषण का उपयोग करने वाला हमारा प्रोटोकॉल यह निर्धारित करने में बहुत उपयोगी है कि आंदोलन विकारों का माउस मोटर्स चाल अशांति के साथ रोगी के लक्षण की नकल करता है या नहीं। इसलिए, तनाव लोडिंग परीक्षण में चाल विश्लेषण आसानी से किया जा सकता है, और महंगे उपकरणों के बिना, चूहों में कुछ मोटर फेनोटाइप का पता लगाने के लिए, कोई सहज प्रभाव नहीं होता है। व्यवहार परीक्षण शुरू करने से पहले, प्रत्येक माउस का वजन रिकॉर्ड करें, और प्रत्येक पूंछ को लेबल करने के लिए एक अंकन कलम का उपयोग करें।जब जानवरों के सभी तौला और चिह्नित किया गया है, कम से 30 मिनट के लिए प्रयोगात्मक कमरे में चूहों जगह है, और एक स्पष्ट सेट, 25 से 25 द्वारा ४० सेंटीमीटर फांसी बॉक्स, एक घूर्णन जाल ढक्कन के साथ, प्रयोगशाला बेंच पर । जब चूहों को आदत हो जाती है, तो एक माउस को जाल के ढक्कन के केंद्र में रखें, और ध्यान से ढक्कन को उल्टा कर दें। फिर, यह घर पिंजरे के लिए माउस लौटने से पहले, जाल ढक्कन से माउस के पतन विलंबता उपाय ।जब चूहों के सभी परीक्षण किया गया है, प्रयोगशाला बेंच पर सफेद कागज के एक ९.९ से ४२ सेंटीमीटर टुकड़ा जगह है, और कागज के डिस्टल अंत में एक अंधेरे गोल बॉक्स जगह है । अन्य बक्से रखें, लगभग कागज के समान लंबाई, रनवे के दोनों किनारों पर भागने से रोकने के लिए। और 35 मिलीलीटर पेट्री व्यंजनों को अलग करने के लिए काले और लाल स्याही जोड़ें।विश्लेषण के लिए चूहों को प्रशिक्षित करने के लिए, गोल बॉक्स का सामना करते हुए कागज के समीपस्थ छोर पर एक माउस रखें, और माउस को पेपर के समीपस्थ छोर से गोल बॉक्स तक चलने दें। जब माउस बॉक्स तक पहुंचता है, तो धीरे-धीरे जानवर को स्क्रफ करें, अंगूठे और अन्य उंगलियों की गेंद के बीच पीछे और पूंछ को लपेटने के लिए, हिंद अंगों के आंदोलन को सीमित करने के लिए। और लाल स्याही में अग्रअंगों के नीचे विसर्जित करें, और काले स्याही में पिछले अंगों के नीचे।फिर, तुरंत माउस को कागज के समीपस्थ अंत पर वापस रखें, गोल बॉक्स का सामना करना पड़ रहा है, और माउस को समीपस्थ अंत से गोल बॉक्स तक चलने दें। पैर मुद्रित कागज को हवा में सुखाने के बाद, पंजा प्रिंट के समान हिस्सों के बीच की दूरी को मापकर, प्रगति की लंबाई के तीन माप प्राप्त करने के लिए एक शासक का उपयोग करें। सामने के आधार-चौड़ाई में से, लगातार, एक ही तरफ, सामने के पैरों के निशान के बीच एक रेखा खींचकर, और पैरों के निशान के बीच खींची गई रेखा के लिए सामने के पदचिह्न के पैड से ऊर्ध्वाधर रेखा की लंबाई को मापने के द्वारा।और हिंद आधार-चौड़ाई, लगातार दाएं हिंद पैरों के निशान के बीच एक रेखा खींचकर, और बाएं हिंद पदचिह्न के पैड से ऊर्ध्वाधर रेखा की लंबाई को मापने के द्वारा, अन्य दाहिने पैरों के निशान के बीच खींची गई रेखा तक। ओवरलैप के लिए, सामने के पैड और हिंद पैरों के निशान के बीच की दूरी को मापें। एक संयम ट्यूब तैयार करने के लिए, पैमाने के निशान के साथ एक ५० मिलीलीटर ट्यूब में १६ दो मिलीमीटर छेद बनाने के लिए एक वर्ग ड्रिल का उपयोग करें, और प्रत्येक पैमाने के निशान की पीठ ।सांस लेने के लिए पांच मिलीमीटर छेद बनाने के लिए ट्यूब की नोक को काट लें, और पूंछ के लिए ट्यूब कैप में चार मिलीमीटर छेद करें। तनाव-लोडिंग परीक्षण के लिए, एक माउस को स्क्रफ करें, और जानवर को पहले निरोधक ट्यूब हेड में रखें, जिसमें अग्रअंग धीरे-धीरे सीमित हो जाते हैं। ट्यूब कैपिंग से पहले कैप में छेद के माध्यम से पूंछ पास करें।और कमरे के तापमान पर दो घंटे के लिए बेंच टॉप पर माउस रखें। तनाव-लोडिंग अवधि के अंत में, माउस को ट्यूब से हटा दें, और जानवर को अपने घर के पिंजरे में वापस कर दें। जैसा कि इन प्रतिनिधि आंकड़ों में देखा गया है, विषम तेजी से शुरुआत करने वाले डिस्टोनिया पार्किंसंसिज्म मॉडल चूहों, उम्र के चार सप्ताह में अपने जंगली प्रकार के कूड़े के साथियों की तुलना में काफी कम सामने और हिंडलिम्ब स्ट्रगल लंबाई प्रदर्शित करते हैं।तनाव विषम तेजी से शुरू डिस्टोनिया पार्किंसंसिज्म मॉडल चूहों, यह भी उम्र के आठ सप्ताह में जोर दिया जंगली प्रकार कूड़े साथियों की तुलना में दोनों अंगों की काफी कम प्रगति लंबाई प्रदर्शन । दोनों अंगों की प्रगति लंबाई की विषमताएं किसी भी उम्र में चूहों के किसी भी समूह में काफी अलग नहीं हैं। दोनों अंगों के सामने का आधार और ओवरलैप सभी समूहों में, सभी उम्र में भी समान हैं।हिंद आधार इन तनावग्रस्त विषम तेजी से शुरुआत डिस्स्टोनिया पार्किंसंस मॉडल चूहों में काफी व्यापक है, जो 10 सप्ताह की उम्र में तनाव जंगली प्रकार के जानवरों में मनाया गया था, यह दर्शाता है कि तनाव विषम तेजी से शुरुआत डिस्स्टोनिया पार्किंसंसिज्म मॉडल चूहों में मोटर घाटे का कारण बनता है। जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती के बीच फांसी के समय में कोई महत्वपूर्ण अंतर, चार से 10 सप्ताह पुराने जानवरों में मनाया जाता है। उम्र के 12 हफ्तों में, हालांकि, तनाव जंगली प्रकार के चूहों का फांसी का समय अन्य जानवरों की तुलना में काफी लंबा है, यह सुझाव देता है कि विषम तेजी से शुरुआत वाले डिस्स्टोनिया पार्किंसंस मॉडल चूहों में मोटर घाटा, पुराने जानवरों में संयम परीक्षण द्वारा जंगली प्रकार के चूहों से अलग है।माउस को चलने के परीक्षण से पहले स्याही सूखने से बचने के लिए स्याही में अंगों के नीचे लटकने के तुरंत बाद माउस को कागज पर रखें। इस तरह के खुले क्षेत्र, ऊंचा प्लस भूलभुलैया, और पूरे तैरना परीक्षण के रूप में भावनात्मक विशेषताओं के लिए अतिरिक्त परीक्षण, जवाब देने के लिए किया जा सकता है कि क्या चाल असामान्यता केवल मोटर घाटे से परिणाम है । हमारे प्रोटोकॉल का उपयोग तनाव की संवेदनशीलता का पता लगाने के लिए, तनाव लोडिंग की संख्या और अवधि को बदलकर, और विभिन्न लोडिंग स्थितियों के बीच मोटर फेनोटाइप की तुलना करके किया जा सकता है।हमारे प्रोटोकॉल का उपयोग तनाव लोडिंग की संख्या और अवधि को बदलकर तनाव की संवेदनशीलता का पता लगाने और विभिन्न लोडिंग स्थितियों के बीच मोटर फेनोटाइप की तुलना करके किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Behavior

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निवास-घुसपैठिया प्रतिमान: आक्रामकता, हिंसा और सामाजिक तनाव के लिए एक मानकीकृत परीक्षण

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चूहों में एक वीडियो विश्लेषण प्रणाली का प्रयोग प्रासंगिक और cued डर कंडीशनिंग टेस्ट

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इसके विपरीत-एन्हांस्ड रिकॉर्डिंग (PrAnCER) का पंजा-प्रिंट विश्लेषण: मोटर घाटे का आकलन करने के लिए एक कम लागत, ओपन-एक्सेस स्वचालित गैट विश्लेषण प्रणाली

Gait analysis is used to quantify changes in motor function in many rodent models of disease. Despite the importance of assessing gait and motor function ...