Name: low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00
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Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in maniera umana. Istituzionali animale esperimento Comitato di Jichi Università medica approvato lo studio. Lo studio è stato condotto in conformità con il regolamento istituzionale per esperimento animale e linea guida fondamentale per condotta corretta di esperimento di animali e attività connesse nelle istituzioni accademiche di ricerca sotto la giurisdizione del MEXT del Giappone. Topi usati in questo protocollo sono state descritte in precedenza<sup class=...

<ol>
	<li>Warner, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+disorders.">Movement disorders.</a> Practical Guide to Neurogenetics. , (2008).</li><li>Brashear, A., DeLeon, D., Bressman, S. B., Thyagarajan, D., Farlow, M. R., Dobyns, W. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulatory+effects+of+norepinephrine,+acting+on+alpha1+receptors+in+the+central+nucleus+of+the+amygdala,+on+behavioral+and+neuroendocrine+responses+to+acute+immobilization+stress.">Modulatory effects of norepinephrine, acting on alpha1 receptors in the central nucleus of the amygdala, on behavioral and neuroendocrine responses to acute immobilization stress.</a> Neuropharmacology. 43 (7), 1139-1147 (2002).</li><li>Chu, X., Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=24-hour-restraint+stress+induces+long-term+depressive-likephenotypes+in+mice.">24-hour-restraint stress induces long-term depressive-likephenotypes in mice.</a> Scientific Reports. 6, 32935 (2016).</li><li>Freeman, M. L., Sheridan, B. S., Bonneau, R. H., Hendricks, R. 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L'analisi dell'impronta e il riquadro sporgente di test sono test comportamentali semplici e poco onerose per la funzione motoria dei topi. I fenotipi di neurobehavioral in diversi modelli di mouse sono stati rilevati con successo da queste prove. Ad esempio, accorciato la lunghezza della falcata nella sclerosi laterale amiotrofica24, maggiore lunghezza della falcata asimmetrica all'atassia-telangiectasia25, maggiore lunghezza di sovrapposizione nella malattia di Huntington...

Disordini di movimento sono definiti come disturbi del sistema nervoso mostrando un eccesso o scarsità di movimenti volontari o automatico1. In particolare, disturbi dell'andatura sono frequentemente documentato tra i pazienti con i disordini di movimento2,3,4. Pertanto, l'analisi del passo è un idoneo test comportamento per la validazione di modelli animali di disordini di movimento. Nei topi, sono state effettuate analisi automatizzata di andatura per camminare a velocità naturale5 ed a velocità regolabile da tapis roulant6,7. Queste analisi forniscono risultati quantitativi di andatura automaticamente. Un metodo alternativo per rilevare la dispersione di andatura è chiamato analisi dell'impronta. Dopo l'etichettatura le parti inferiori dei piedi con inchiostro, topi cammino sulla carta, e le impronte vengono analizzate. Inizialmente, vaselina e polvere di carbone sono stati utilizzati per visualizzare l' impronta8e quindi sono stati sostituiti da inchiostro il poligrafo carta9 e dello sviluppatore fotografico su carta fotografica10. Un metodo più economico e meno tossico utilizzando inchiostro e carta rispetto agli altri metodi rimane ad oggi11. Analisi dell'impronta sono meno costoso rispetto con analisi automatica5,6,7 e sarebbero utile per valutare i disordini di movimento in modelli murini per i ricercatori senza fondi di ricerca abbondante .
L'impiccagione prova box è una sorta di quattro test di attaccatura degli arti mediante filo gabbia coperchio12 e rete metallica schermata13. La scatola è un apparato con coperchio girevole maglia sulla parte superiore del riquadro lungo una barra centrale. Oltre alle analisi del passo, il test può essere a buon mercato e facilmente eseguito. Di conseguenza, abbiamo condotto l'impiccagione test box per valutare la forza prensile ed equilibrio, inoltre per l'analisi dell'impronta in questo protocollo.
Lo stress induce i sintomi di disturbi di movimento14,15. I deficit del motore sono spesso indotte da diversi stress cronico anche quando nessun fenotipo motore spontaneo è osservato nei modelli del mouse di un disordine di movimento16,17,18. Moderazione è uno dei metodi comunemente usati per lo sforzo di caricamento nei topi, perché l'animale non è fisicamente danneggiato19 e il costo è inferiore rispetto ad altri metodi come scosse elettriche con apparecchio dedicato e costretto in esecuzione con l'uso di un tapis roulant. Ritenuta da un tubo, che è eseguito da confinare un topo in una provetta conica forata 50 mL, è più facile di altri metodi come filo maglia colino, arto nastrata e avvolgimento di animale con garza (Recensito il20). In questa carta, riassumiamo i protocolli dell'impronta analisi e il riquadro sporgente test dopo ritenuta da un tubo. Questo protocollo ci aiuterebbe ad utilizzare modelli murini di disordini di movimento senza fenotipo motore spontanea.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hanging box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking pen</td>
			<td>ZEBRA</td>
			<td>MO-120-MC-BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goal box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td>
			<td>Accessory for apparatus of balanced beam test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boxes</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Side wall of runway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black ink</td>
			<td>Shin-asahi</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red ink</td>
			<td>Maruyamakogyo</td>
			<td>BC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351008</td>
			<td>Petri dishe (35 mm in diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Askul Multipaper Super White J Monochrome A3</td>
			<td>Askul</td>
			<td>701-712</td>
			<td>White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square drill</td>
			<td>KAKURI Corporation</td>
			<td>DIY FACTORY (K32-0313)</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress

Dispersione di andatura è osservata frequentemente in pazienti con disordini del movimento. In modelli murini utilizzati per disturbi del movimento, analisi del passo è importante test comportamentali per determinare se i topi imitano i sintomi dei pazienti. Deficit motori sono spesso indotte da stress quando nessun fenotipo motore spontaneo è osservato nei modelli del mouse. Pertanto, analisi del cammino seguito da carico sarebbe un metodo sensibile per la valutazione del fenotipo motore in modelli murini. Tuttavia, i ricercatori devono affrontare il requisito di un apparecchio costoso per ottenere risultati quantitativi automaticamente da analisi del passo. Per lo stress, lo sforzo di caricamento con metodi semplici senza costosi apparati necessari per scosse elettriche e costretto in esecuzione è auspicabile. Di conseguenza, introduciamo un protocollo semplice e a basso costo, costituito da analisi dell'impronta con carta e inchiostro, appeso test box per valutare la funzione di motore e carico di stress definiti da fermo con un tubo conico. Il deficit del motore dei topi sono stati correttamente rilevati dal presente protocollo.

I topi eterozigoti maschi di Atp1a3 (Atp1a3+ / −) che sono il modello di topo per la rapida insorgenza distonia parkinsonismo e littermates selvaggio-tipo sono stati utilizzati in questo protocollo. Atp1a3+ / − ha mostrato significativamente più brevi lunghezze di falcata della zampa anteriore e hindlimb rispetto a quelli di tipo selvatico a 4 settimane di età (Figura 5A e 5B figura<...

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Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

Basso costo protocollo di analisi dell'impronta e appendere casella Test per topi applicato lo Stress cronico ritenuta

Il protocollo di basso costo consistente di analisi dell'impronta e appeso prova box dopo lo sforzo del fermo è utile per valutare i disordini di movimento di modello del topo.

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

Il nostro protocollo che utilizza l'analisi dell'andatura è molto utile per determinare se i motori del mouse dei disturbi del movimento imitano il sintomo del paziente con disturbo dell'andatura. Quindi, l'analisi dell'andatura nella prova di carico dello stress può essere eseguita facilmente e senza attrezzature costose, per rilevare alcuni fenotipi motori nei topi, senza effetti spontanei. Prima di iniziare il test comportamentale, registrare il peso di ogni mouse e utilizzare una penna di marcatura per etichettare ogni coda.Quando tutti gli animali sono stati pesati e contrassegnati, posizionare i topi nella stanza sperimentale per almeno 30 minuti e impostare una scatola sospesa chiara, 25 per 25 per 40 centimetri, con un coperchio in rete girevole, sulla panchina del laboratorio. Quando i topi si sono acclimatati, posizionare un mouse al centro del coperchio della rete e capovolgere accuratamente il coperchio. Quindi, misura la latenza di caduta del mouse dal coperchio della rete, prima di riportare il mouse nella sua gabbia domestica.Una volta che tutti i topi sono stati testati, posizionare un pezzo di carta bianca da 9,9 per 42 centimetri sul banco di laboratorio e posizionare una scatola di obiettivi scuri all'estremità distale della carta. Posizionare altre scatole, approssimativamente della stessa lunghezza della carta, su entrambi i lati della pista per evitare la fuga. E aggiungere inchiostro nero e rosso per separare 35 millilitri piastre di Petri.Per addestrare i topi per l'analisi, posizionare un mouse all'estremità prossimale della carta, rivolto verso la scatola degli obiettivi, e lasciare che il mouse cammini dall'estremità prossimale della carta alla scatola degli obiettivi. Quando il mouse raggiunge la scatola, scruffare delicatamente l'animale, infilando la schiena e la coda tra la palla del pollice e le altre dita, per limitare il movimento degli arti posteriori. E immergere i fondi degli arti anteriori in inchiostro rosso, e la parte inferiore degli arti posteriori in inchiostro nero.Quindi, riposizionare immediatamente il mouse sull'estremità prossimale della carta, rivolto verso la scatola degli obiettivi, e lasciare che il mouse cammini dall'estremità prossimale alla scatola degli obiettivi. Dopo aver asciugato ad aria la carta stampata a piedi, utilizzare un righello per ottenere tre misurazioni della lunghezza della falcata, misurando le distanze tra le stesse parti delle impronte delle zampe. Della larghezza della base anteriore, disegnando una linea tra impronte anteriori consecutive, uguali e misurando la lunghezza della linea verticale dal pad dell'ingombro anteriore, alla linea tracciata tra le impronte.E della larghezza della base posteriore, disegnando una linea tra impronte posteriori destra consecutive e misurando la lunghezza della linea verticale dal pad dell'ingombro posteriore sinistro, alla linea tracciata tra le altre impronte destra. Per la sovrapposizione, misurare la distanza tra i cuscinetti delle impronte anteriori e posteriori. Per preparare un tubo di ritenuta, utilizzare un trapano quadrato per realizzare fori di 16 due millimetri in un tubo da 50 millilitri lungo i segni di scala e sul retro di ogni segno di scala.Tagliare la punta del tubo per fare un foro di cinque millimetri, per respirare, e fare un foro di quattro millimetri nel tappo del tubo, per la coda. Per la prova di carico dello stress, scruffare un topo e posizionare prima l'animale nella testa del tubo di contenimento, con gli arti anteriori delicatamente confinati. Passare la coda attraverso il foro nel cappuccio prima di tappare il tubo.E posizionare il mouse sulla parte superiore della panca per due ore a temperatura ambiente. Alla fine del periodo di carico dello stress, rimuovere il mouse dal tubo e riportare l'animale nella sua gabbia di casa. Come osservato in queste figure rappresentative, eterozigoti topi modello di distonia a esordio rapido Parkinsonismo, dimostrano lunghezze del passo della parte posteriore e posteriore significativamente più corte, rispetto ai loro compagni di lettiera di tipo selvaggio a quattro settimane di età.Stress eterozigote distonia ad esordio rapido Parkinsonismo modello topi, mostrano anche lunghezze del passo significativamente più brevi di entrambi gli arti rispetto a quelle dei compagni di lettiera stressati di tipo selvatico a otto settimane di età. Le asimmetrie delle lunghezze del passo di entrambi gli arti non sono significativamente diverse, in nessun gruppo di topi, a qualsiasi età. Anche la base anteriore e le sovrapposizioni di entrambi gli arti sono simili, in tutti i gruppi, a tutte le età.La base posteriore è significativamente più ampia in questi topi modello di distonia a esordio rapido eterozigote stressati, rispetto a quella osservata negli animali di tipo selvatico a 10 settimane di età, indicando che lo stress causa deficit motori nei topi modello di distonia a esordio rapido eterozigote. Non si osservano differenze significative nel tempo di sospensione, tra tipo selvaggio e mutante, negli animali di quattro o 10 settimane. A 12 settimane di età, tuttavia, il tempo di sospensione dei topi di tipo selvatico da stress è significativamente più lungo di quello degli altri animali, suggerendo che il deficit motorio nei topi modello di distonia a esordio rapido eterozigote, è distinguibile dai topi di tipo selvatico mediante test di ritenuta negli animali più anziani.Posizionare il mouse sulla carta immediatamente dopo che il mouse appende i fondi degli arti nell'inchiostro per evitare che l'inchiostro si asciughi prima del test di camminata. Ulteriori test per le caratteristiche emotive, come campo aperto, plus-laze elevato e test di nuoto intero, possono essere eseguiti per rispondere se l'anomalia dell'andatura deriva solo da deficit motorio. Il nostro protocollo può essere utilizzato per esplorare la suscettibilità allo stress, modificando il numero e la durata del carico di stress e confrontando i fenotipi del motore tra le varie condizioni di carico.Il nostro protocollo può essere utilizzato per esplorare la suscettibilità allo stress modificando il numero e la durata dei carichi di sollecitazione e confrontando i fenotipi del motore tra le varie condizioni di carico.

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