Name: low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00
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この作品は、(学術振興会) 日本学術振興会科研費 (費補助金科学研究 C)、によって支えられた番号 18 K 07373 (継手) と私立大学への補助金を付与します。

すべての動物実験は、人道的な方法で行われました。制度的動物実験委員会の自治医科大学は、研究を承認しました。研究を行った機関の規則に従って動物実験の基本的なガイドライン動物実験の適切な実施や学術研究機関で関連活動のため日本の文部科学省の管轄下にあります。マウスをこのプロトコルで使用されている前述の21。
1. ぶら下げボック?...

<ol>
	<li>Warner, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+disorders.">Movement disorders.</a> Practical Guide to Neurogenetics. , (2008).</li><li>Brashear, A., DeLeon, D., Bressman, S. B., Thyagarajan, D., Farlow, M. R., Dobyns, W. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gait+analysis+in+normal+and+spinal+contused+mice+using+the+TreadScan+system.">Gait analysis in normal and spinal contused mice using the TreadScan system.</a> Journal of Neurotrauma. 26 (11), 2045-2056 (2009).</li><li>Rushton, R., Steinberg, H., Tinson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+single+experience+on+subsequent+reactions+to+drugs.">Effects of a single experience on subsequent reactions to drugs.</a> British Journal of Pharmacology and Chemotherapy. 20, 99-105 (1963).</li><li>Lee, C. C., Peters, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+and+behavioral+effects+of+thiram+in+rats.">Neurotoxicity and behavioral effects of thiram in rats.</a> Environmental health perspectives. 17, 35-43 (1976).</li><li>van der Zee, C. E., Schuurman, T., Traber, J., Gispen, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+administration+of+nimodipine+accelerates+functional+recovery+following+peripheral+nerve+damage+in+the+rat.">Oral administration of nimodipine accelerates functional recovery following peripheral nerve damage in the rat.</a> Neuroscience Letters. 83 (1-2), 143-148 (1987).</li><li>Leroy, T., Stroobants, S., Aerts, J. -. 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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phenotypic+spectrum+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism+(RDP)+and+mutations+in+the+ATP1A3.">The phenotypic spectrum of rapid-onset dystonia-parkinsonism (RDP) and mutations in the ATP1A3.</a> Brain. 130 (Pt 3), 828-835 (2007).</li><li>Kirshenbaum, G. S., Saltzman, K., Rose, B., Petersen, J., Vilsen, B., Roder, J. 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H., Tallaksen-Greene, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurological+abnormalities+in+a+knock-in+mouse+model+of+Huntington's+disease.">Neurological abnormalities in a knock-in mouse model of Huntington's disease.</a> Human Molecular Genetics. 10 (2), 137-144 (2001).</li><li>Dang, M. T., Yokoi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+characterization+of+Dyt1+&#916;GAG+knock-in+mouse+as+a+model+for+early-onset+dystonia.">Generation and characterization of Dyt1 &#916;GAG knock-in mouse as a model for early-onset dystonia.</a> Experimental Neurology. 196 (2), 452-463 (2005).</li><li>Glynn, D., Drew, C. J., Reim, K., Brose, N., Morton, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+ataxia+in+complexin+I+knockout+mice+masks+a+complex+phenotype+that+includes+exploratory+and+habituation+deficits.">Profound ataxia in complexin I knockout mice masks a complex phenotype that includes exploratory and habituation deficits.</a> Human Molecular Genetics. 14 (16), 2369-2385 (2005).</li><li>Becker, E. B. E., Oliver, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+point+mutation+in+TRPC3+causes+abnormal+Purkinje+cell+development+and+cerebellar+ataxia+in+moonwalker+mice.">A point mutation in TRPC3 causes abnormal Purkinje cell development and cerebellar ataxia in moonwalker mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (16), 6706-6711 (2009).</li><li>Heck, D. H., Zhao, Y., Roy, S., LeDoux, M. S., Reiter, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cerebellar+function+in+Ube3a-deficient+mice+reveals+novel+genotype-specific+behaviors.">Analysis of cerebellar function in Ube3a-deficient mice reveals novel genotype-specific behaviors.</a> Human Molecular Genetics. 17 (14), 2181-2189 (2008).</li><li>Kirshenbaum, G. S., Dawson, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternating+hemiplegia+of+childhood-related+neural+and+behavioural+phenotypes+in+Na+,K+-ATPase+&#945;3+missense+mutant+mice.">Alternating hemiplegia of childhood-related neural and behavioural phenotypes in Na+,K+-ATPase &#945;3 missense mutant mice.</a> PLoS ONE. 8 (3), e60141 (2013).</li><li>Klein, A., Wessolleck, J., Papazoglou, A., Metz, G. A., Nikkhah, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Walking+pattern+analysis+after+unilateral+6-OHDA+lesion+and+transplantation+of+foetal+dopaminergic+progenitor+cells+in+rats.">Walking pattern analysis after unilateral 6-OHDA lesion and transplantation of foetal dopaminergic progenitor cells in rats.</a> Behavioral Brain Research. 199 (2), 317-325 (2009).</li><li>Geldenhuys, W. J., Guseman, T. L., Pienaar, I. S., Dluzen, D. E., Young, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+biomechanical+analysis+of+gait+changes+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson's+disease.">A novel biomechanical analysis of gait changes in the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> PeerJ. 3 (Pt 7), e1175 (2015).</li><li>Cecchi, M., Khoshbouei, H., Morilak, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulatory+effects+of+norepinephrine,+acting+on+alpha1+receptors+in+the+central+nucleus+of+the+amygdala,+on+behavioral+and+neuroendocrine+responses+to+acute+immobilization+stress.">Modulatory effects of norepinephrine, acting on alpha1 receptors in the central nucleus of the amygdala, on behavioral and neuroendocrine responses to acute immobilization stress.</a> Neuropharmacology. 43 (7), 1139-1147 (2002).</li><li>Chu, X., Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=24-hour-restraint+stress+induces+long-term+depressive-likephenotypes+in+mice.">24-hour-restraint stress induces long-term depressive-likephenotypes in mice.</a> Scientific Reports. 6, 32935 (2016).</li><li>Freeman, M. L., Sheridan, B. S., Bonneau, R. H., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+Stress+Compromises+CD8++T+cell+control+of+latent+herpes+simplex+virus+type+1+infections.">Psychological Stress Compromises CD8+ T cell control of latent herpes simplex virus type 1 infections.</a> The Journal of Immunology. 179 (1), 322-328 (2007).</li><li>Lauretti, E., Di Meco, A., Merali, S., Pratic&#242;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+behavioral+stress+exaggerates+motor+deficit+and+neuroinflammation+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson's+disease.">Chronic behavioral stress exaggerates motor deficit and neuroinflammation in the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Translational Psychiatry. 6, e733 (2016).</li><li>Quartermain, D., Stone, E. A., Charbonneau, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+stress+disrupts+risk+assessment+behavior+in+mice.">Acute stress disrupts risk assessment behavior in mice.</a> Physiology and Behavior. 59 (4-5), 937-940 (1996).</li><li>Bannon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Behavioural effects of stress and aluminum toxicity on a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis Parkinsonism-dementia complex. , 1-186 (2015).</li></ol>

・ フット プリント分析とテストぶら下げボックス マウスの運動機能のシンプルで安価な行動テストです。いくつかのマウス モデルにおける神経行動学的表現型は、これらのテストによって正常に検出されています。たとえば、筋萎縮性側索硬化症24、毛細血管拡張性運動失調25ハンチントン病26とジストニア27重複の高?...

運動障害は、過剰または自発的または自動の動き1の少なさを示す中枢神経系の障害として定義されます。特に、歩行障害頻繁運動障害2,3,4と患者の間で記載されています。したがって、歩行解析は運動障害の動物モデルの検証のための適切な行動のテストです。マウスで、トレッドミル6,7自然なスピード5と調整可能な速度での歩行の自動歩行行った。これらの解析では、歩行の定量的な結果を自動的に提供します。歩行障害を検出するための代替メソッドは、フット プリント分析と呼ばれます。インクと足の底をラベリングした後マウスを紙の上歩くし、足跡を分析します。当初は、ワセリンと粉末炭8フット プリントを視覚化するために使用され、ポリグラフ紙9インクと現像印画紙10によって取り替えられました。日付11インクと他の方法よりも紙を使用して安く、毒性の少ない方法が残っています。・ フット プリント分析は自動解析5,6,7と比較して安価と豊富な研究資金もなく研究者のためのマウス モデルにおける運動障害の評価に有用であります。.
吊りワイヤ ケージ蓋12を使用して 4 つの手足吊りテストの一種であり、ワイヤー メッシュ スクリーン13ボックス テスト。ボックスは、センター バーに沿ってボックスの上部にある回転メッシュふた付け装置です。歩行分析に加え、テスト安価かつ容易に実行できます。したがって、絞首刑を行ったボックスこのプロトコルのウォーターフット プリント分析にさらに握力とバランスを評価するテスト。
ストレスは運動障害14,15の症状を誘発します。運動障害は、運動障害16,17,18のマウス ・ モデルにおける自発運動表現型が観測されない場合でも多くの場合いくつかの慢性的なストレスによって誘導されます。拘束は、ストレス動物が物理的に無傷19ではなく、コストは専用装置による電気ショックなど他の方法と比較して少ないために、マウスで負荷の一般的に使用される方法の 1 つし、を搭載したトレッドミルの使用を強制します。封孔 50 mL の円錐管にマウスで行いますが、管による拘束は、ワイヤーなど他の方法メッシュ ストレーナ、録音された手足とガーゼ (見直し20) を持つ動物の折り返しより簡単です。本稿で我々 はフット プリントのプロトコルを要約分析およびぶら下げボックス拘束後チューブでのテストします。このプロトコルでは、自発的な運動表現なし運動障害疾患のマウスモデルを使用してくれます。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hanging box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking pen</td>
			<td>ZEBRA</td>
			<td>MO-120-MC-BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goal box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td>
			<td>Accessory for apparatus of balanced beam test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boxes</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Side wall of runway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black ink</td>
			<td>Shin-asahi</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red ink</td>
			<td>Maruyamakogyo</td>
			<td>BC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351008</td>
			<td>Petri dishe (35 mm in diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Askul Multipaper Super White J Monochrome A3</td>
			<td>Askul</td>
			<td>701-712</td>
			<td>White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square drill</td>
			<td>KAKURI Corporation</td>
			<td>DIY FACTORY (K32-0313)</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress

歩行障害は運動障害の患者によく見られます。運動障害のため使用するマウス モデル、歩行分析はマウスが患者の症状を模倣するかどうかを判断する重要な行動テスト。運動障害は多くの場合ストレスによって誘導されるマウス モデルにおける自発運動表現型を認められなかったとき。したがって、ストレス負荷による歩行分析はマウスモデルのモーターの表現型を評価するため機密性の高いメソッドになります。しかし、研究者は歩行分析から自動的に量的な結果を取得する高価な装置の要件に直面します。ストレスは、高価な器具電気ショックを必要し、実行を強制することがなく簡単な方法で読み込みストレスが望ましいです。したがって、運動機能を評価するテストをボックスをぶら下げ、紙と墨、フット プリント解析から成るシンプルかつ低コストのプロトコルを紹介、応力が円錐管と拘束によって定義されます。マウスの運動障害は、このプロトコルが正常に検出されました。

Atp1a3のヘテロ接合体の男性マウス (Atp1a3+/−) マウス モデルである急速な発症性ジストニアに対するパーキンソニズムと野生型同腹子をこのプロトコルで使用されました。Atp1a3+/− の 4 週齢 (図 5 aと図 5 b円と正方形を開く) の野生型よりも前肢と後肢の大幅に短いストライドの長さを示?...

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Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

・ フット プリント分析とマウスのテスト ボックスをぶら下げの低コスト プロトコル適用慢性拘束応力

・ フット プリント分析から成ると拘束ストレスがマウス モデルの運動障害の評価に有用テスト ボックスをぶら下げの低コストのプロトコル。

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

歩行分析を用いたプロトコルは、運動障害のマウスモーターが歩行障害を有する患者の症状を模倣しているかどうかを判断するのに非常に有用である。したがって、ストレスローディング試験における歩行解析は、マウスの特定の運動型を検出するために、簡単に、かつ高価な機器なしで、自発的な効果を伴わずに行うことができます。動作テストを開始する前に、各マウスのウェイトを記録し、マーキング ペンを使用して各尾にラベルを付けます。すべての動物の体重を量ってマークしたら、マウスを実験室に少なくとも30分間置き、回転可能なメッシュ蓋付きの25%40センチメートルの吊り下げボックスをラボベンチにクリアに設定します。マウスが順応したら、マウスをメッシュ蓋の中央に置き、蓋を慎重に逆さまにします。次に、マウスをホームケージに戻す前に、メッシュ蓋からマウスの落下遅延を測定します。すべてのマウスをテストしたら、9.9から42センチメートルの白い紙をラボベンチに置き、紙の遠位端に暗いゴールボックスを置きます。他のボックスは、紙とほぼ同じ長さで、滑走路の両側に置き、脱出を防ぎます。そして、35ミリリットルのペトリ料理を分離するために黒と赤のインクを追加します。分析のためにマウスをトレーニングするには、マウスを用紙の近位端に置き、ゴールボックスに面し、マウスを用紙の近位端からゴールボックスまで歩きます。マウスが箱に届くと、親指のボールと他の指の間に背中と尾を挟んで後肢の動きを制限し、動物をそっと擦り傷します。そして、前肢の底を赤いインクに浸し、後肢の底を黒いインクに浸します。次に、マウスを用紙の近位端に戻し、ゴールボックスに面し、マウスを近位端からゴールボックスまで歩かせる。足を印刷した用紙を空気乾燥させた後、足のプリントの同じ部分間の距離を測定することによって、ストライド長さの3つの測定値を得るために定規を使用します。前方ベース幅のうち、連続した、同一面、前部フットプリント間の線を描き、前部フットプリントのパッドから垂直線の長さを測定することにより、フットプリント間に引かれた線にする。後部のベース幅の、連続した右後方フットプリント間に線を引くことによって、左後ろ足のパッドから垂直線の長さを測定して、他の右フットプリント間に引かれた線にする。オーバーラップの場合は、前面と後ろのフットプリントのパッド間の距離を測定します。拘束管を準備するには、正方形のドリルを使用して、スケールマークに沿って50ミリリットルのチューブに16の2ミリメートルの穴を作り、各スケールマークの裏側を作ります。チューブの先端を切り取って5ミリメートルの穴を作り、呼吸のために、尾のためにチューブキャップに4ミリメートルの穴を作ります。ストレスローディングテストでは、マウスを擦りかけ、前肢を軽く閉じ込めて、動物を最初に拘束チューブヘッドに入れる。チューブをキャップする前に、キャップの穴を通して尾を通します。そして、室温で2時間ベンチトップにマウスを置きます。ストレスローディング期間の終わりに、チューブからマウスを取り出し、動物を自宅のケージに戻します。これらの代表的な数字で観察されるように、ヘテロ接合急速発症ジストニアパーキンソニズムモデルマウスは、生後4週で野生型のごみの仲間を行うよりも、有意に短い前部および後肢ストライドの長さを示す。ストレスヘテロ接合急速発症ジストニアパーキンソニズムモデルマウスは、また、生後8週でストレスを受けた野生型のごみの仲間のものよりも両肢の歩幅が有意に短いストライド長を示す。両肢の歩幅の長さの非対称性は、マウスのどのグループにおいても、どの年齢でも有意に異なっていない。両肢の前部および重なりは、すべての年齢層において、すべての年齢層において類似している。後方ベースは、これらのストレスを受けたヘテロ接合性急速発症ジストニアモデルマウスにおいて有意に広く、生後10週のストレス野生型動物で観察されたものよりも、ストレスがヘテロ接合急速発症ジストニアモデルマウスの運動障害を引き起こすことを示している。4~10週齢の動物では、野生型と変異型の間に、吊り時間に有意な差は認められない。しかし、12週齢で、ストレス野生型マウスの吊り時間は他の動物よりも著しく長く、ヘテロ接合急速発症ジストニアパーキンソニズムモデルマウスにおける運動障害は、古い動物における拘束試験によって野生型マウスと区別できることを示唆している。マウスがインクの手足の底を垂れ下がった直後に紙の上に置き、歩行テストの前にインクが乾燥するのを避けます。オープンフィールド、上昇したプラス迷路、全体の水泳テストなどの感情的な特性のための追加のテストは、歩行異常が運動障害のみから生じるかどうかを答えるために行うことができます。このプロトコルは、応力負荷の数と持続時間を変更し、さまざまな負荷条件間でモーターのフェノタイプを比較することによって、ストレスに対する感受性を探るために使用することができます。このプロトコルは、応力荷重の数と持続時間を変更し、さまざまな負荷条件間でモーターのフェノタイプを比較することによって、応力に対する感受性を探るために使用できます。

Research

JoVE Journal

Behavior

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げっ歯類精神運動警戒試験（rPVT）：ラットとマウスの神経行動のパフォーマンスを評価するための方法

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Paw-Print Analysis of Contrast-Enhanced Recordings (PrAnCER): A Low-Cost, Open-Access Automated Gait Analysis System for Assessing Motor Deficits

Paw-Print Analysis of Contrast-Enhanced Recordings PrAnCER: A Low-Cost, Open-Access Automated Gait Analysis System for Assessing Motor Deficits

コントラスト強化録音(PrAnCER)の足プリント解析:運動不足を評価するための低コストでオープンアクセスの自動歩行解析システム

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・ フット プリント分析とマウスのテスト ボックスをぶら下げの低コスト プロトコル適用慢性拘束応力

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