Name: low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00
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Este trabalho foi financiado pelo KAKENHI JSPS (sociedade de Japão para a promoção da ciência) (subsídio para C de investigação científica), conceder número 18K 07373 (HS) e subsídios para as universidades privadas.

Todos os experimentos com animais foram conduzidos de uma forma humana. O institucional Animal experimento Comité de Jichi universidade médica aprovado o estudo. O estudo foi realizado em conformidade com o Regulamento institucional para experimento Animal e diretriz Fundamental para a boa conduta do Animal experimento e actividades conexas em instituições acadêmicas de pesquisa sob a jurisdição do MEXT do Japão. Os ratos utilizados neste protocolo tem sido descrito anteriormente21.
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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phenotypic+spectrum+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism+(RDP)+and+mutations+in+the+ATP1A3.">The phenotypic spectrum of rapid-onset dystonia-parkinsonism (RDP) and mutations in the ATP1A3.</a> Brain. 130 (Pt 3), 828-835 (2007).</li><li>Kirshenbaum, G. S., Saltzman, K., Rose, B., Petersen, J., Vilsen, B., Roder, J. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulatory+effects+of+norepinephrine,+acting+on+alpha1+receptors+in+the+central+nucleus+of+the+amygdala,+on+behavioral+and+neuroendocrine+responses+to+acute+immobilization+stress.">Modulatory effects of norepinephrine, acting on alpha1 receptors in the central nucleus of the amygdala, on behavioral and neuroendocrine responses to acute immobilization stress.</a> Neuropharmacology. 43 (7), 1139-1147 (2002).</li><li>Chu, X., Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=24-hour-restraint+stress+induces+long-term+depressive-likephenotypes+in+mice.">24-hour-restraint stress induces long-term depressive-likephenotypes in mice.</a> Scientific Reports. 6, 32935 (2016).</li><li>Freeman, M. L., Sheridan, B. S., Bonneau, R. H., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+Stress+Compromises+CD8++T+cell+control+of+latent+herpes+simplex+virus+type+1+infections.">Psychological Stress Compromises CD8+ T cell control of latent herpes simplex virus type 1 infections.</a> The Journal of Immunology. 179 (1), 322-328 (2007).</li><li>Lauretti, E., Di Meco, A., Merali, S., Pratic&#242;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+behavioral+stress+exaggerates+motor+deficit+and+neuroinflammation+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson's+disease.">Chronic behavioral stress exaggerates motor deficit and neuroinflammation in the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Translational Psychiatry. 6, e733 (2016).</li><li>Quartermain, D., Stone, E. 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A análise de pegada e a caixa de suspensão de teste são simples e pouco dispendiosos testes comportamentais para a função motora dos ratos. Os fenótipos neurocomportamentais em vários modelos de mouse foram detectados com êxito por esses testes. Por exemplo, encurtou o comprimento do passo em esclerose lateral amiotrófica24, aumento do comprimento do passo assimétrico em ataxia-telangiectasia25, aumento do comprimento de sobreposição na doença de Huntington dis...

Distúrbios do movimento são definidos como distúrbios do sistema nervoso, mostrando um excesso ou escassez de movimentos voluntários ou automática1. Em particular, distúrbio da marcha é frequentemente documentado entre os pacientes com distúrbios de movimento2,3,4. Portanto, a análise da marcha é um teste comportamental adequado para a validação de modelos animais de distúrbios do movimento. Em camundongos, análises automatizadas da marcha foram realizadas para andar em velocidade natural5 e em velocidades ajustáveis por esteira6,7. Essas análises fornecem resultados quantitativos de marcha automaticamente. Um método alternativo para detectar o distúrbio da marcha é chamado análise da pegada. Depois rotulando as solas dos pés com tinta, ratos andar no papel, e as pegadas são analisadas. Inicialmente, vaselina e carvão em pó foram utilizados para visualizar a pegada8e então foram substituídos por tinta sobre papel de polígrafo9 e colaborador fotográfico em papel fotográfico10. Um método mais barato e menos tóxico, usando a tinta e o papel do que os outros métodos permanece até à data de11. Análise de pegada é menos caro em comparação com a análise automatizada de5,6,7 e seria útil para avaliar os distúrbios do movimento em modelos do rato para os pesquisadores sem fundos de pesquisa abundante .
O enforcamento teste de caixa é uma espécie de quatro testes de suspensão de membro usando fio gaiola tampa12 e malha de arame de tela13. A caixa é um aparelho com malha rotatable tampa no topo da caixa ao longo de um bar do centro. Além de análise de marcha, o teste pode ser barata e facilmente executado. Portanto, foi realizado o enforcamento teste de caixa para avaliar a força de preensão e equilíbrio, além para a análise de pegada no presente protocolo.
Estresse induz os sintomas de distúrbios de movimento14,15. Déficit motor muitas vezes é induzida por vários estresses crônicas mesmo quando nenhum fenótipo motor espontâneo é observado nos modelos do rato de um movimento transtorno16,17,18. Moderação é um dos métodos comumente usados para o stress, porque o animal não é fisicamente prejudicado19 e custo é menos em comparação com outros métodos, como choque elétrico com aparelhos dedicados a carregar em camundongos e forçado a correr com o uso de uma escada rolante. Contenção por um tubo, que é interpretada por confinar um rato em um tubo cônico de 50ml furada, é mais fácil do que outros métodos, como fio de malha coador, membro gravado e envoltura de animal com gaze (revista20). Neste artigo, resumimos os protocolos do espaço de análise e a caixa de suspensão teste após a contenção por um tubo. Este protocolo nos ajudaria a usar modelos de rato de distúrbios do movimento sem fenótipo motor espontâneo.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Hanging box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking pen</td>
			<td>ZEBRA</td>
			<td>MO-120-MC-BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goal box</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td>
			<td>Accessory for apparatus of balanced beam test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boxes</td>
			<td>O&#8217;hara &#38; Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Side wall of runway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black ink</td>
			<td>Shin-asahi</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red ink</td>
			<td>Maruyamakogyo</td>
			<td>BC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351008</td>
			<td>Petri dishe (35 mm in diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Askul Multipaper Super White J Monochrome A3</td>
			<td>Askul</td>
			<td>701-712</td>
			<td>White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square drill</td>
			<td>KAKURI Corporation</td>
			<td>DIY FACTORY (K32-0313)</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress

Perturbação da marcha é frequentemente observada em pacientes com distúrbios do movimento. Em modelos do rato usados para distúrbios de movimento, análise da marcha é importante teste comportamental para determinar se os ratos imitam os sintomas dos pacientes. Déficit motor muitas vezes é induzida por estresse quando não fenótipo motor espontâneo é observado em modelos do rato. Portanto, a análise da marcha, seguido de estresse de carregamento seria um método sensível para avaliar o fenótipo motor em modelos do rato. No entanto, os pesquisadores enfrentam a exigência de um aparelho caro para obter resultados quantitativos automaticamente a partir da análise da marcha. Para estresse, estresse por métodos simples de carregamento sem aparelhos caros necessários para choque elétrico e forçado a correr é desejável. Portanto, apresentamos um protocolo simples e de baixo custo, consistindo em análise de pegada com papel e tinta, teste de caixa para avaliar a função motora de suspensão, e carga de estresse definido pela moderação com um tubo cónico. O déficit motor de ratos com êxito foram detectado pelo presente protocolo.

Os camundongos machos heterozigotos de Atp1a3 (Atp1a3+ −) que são o modelo do rato para início rápido distonia parkinsonismo e selvagem-tipo littermates foram utilizados no presente protocolo. Atp1a3+ − mostrou significativamente menor comprimento dos passos do membro anterior e membro posterior do que aqueles do tipo selvagem em 4 semanas de idade (Figura 5A e Figura 5B, a...

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Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

Protocolo de baixo custo de análise da pegada e caixa de teste de suspensão para ratos aplicada o retenção crônica de estresse

O protocolo de baixo custo, composto por análise de pegada e teste de caixa de suspensão após estresse de contenção é útil para avaliar os distúrbios do movimento do modelo do rato.

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

Nosso protocolo usando a análise da marcha é muito útil para determinar se motores de motores de rato de distúrbios de movimento imitam o sintoma do paciente com perturbação da marcha. Assim, a análise da marcha no teste de carregamento de estresse pode ser realizada facilmente, e sem equipamentos caros, para detectar certos fenótipos motores em camundongos, sem efeitos espontâneos. Antes de iniciar o teste comportamental, regisse o peso de cada mouse e use uma caneta de marcação para rotular cada cauda.Quando todos os animais tiverem sido pesados e marcados, coloque os ratos na sala experimental por pelo menos 30 minutos, e coloque uma caixa de suspensão clara, 25 por 25 por 40 centímetros, com uma tampa de malha rotativa, no banco do laboratório. Quando os ratos tiverem se aclimatado, coloque um rato no centro da tampa da malha e vire cuidadosamente a tampa de cabeça para baixo. Em seguida, meça a latência de queda do mouse da tampa da malha, antes de devolver o mouse para sua gaiola doméstica.Quando todos os ratos tiverem sido testados, coloque um pedaço de papel branco de 9,9 por 42 centímetros no banco do laboratório, e coloque uma caixa de gol escura na extremidade distal do papel. Coloque outras caixas, aproximadamente o mesmo comprimento do papel, em ambos os lados da pista para evitar a fuga. E adicione tinta preta e vermelha para separar 35 pratos de Petri mililitros.Para treinar os ratos para a análise, coloque um mouse na extremidade proximal do papel, de frente para a caixa de gol, e deixe o mouse andar da extremidade proximal do papel até a caixa de gol. Quando o rato chega à caixa, esmague suavemente o animal, enfiando as costas e a cauda entre a bola do polegar e os outros dedos, para limitar o movimento dos membros traseiros. E mergulhe os fundos dos membros dianteiros em tinta vermelha, e a parte inferior dos membros traseiros em tinta preta.Em seguida, coloque imediatamente o mouse de volta na extremidade proximal do papel, de frente para a caixa de gol, e deixe o mouse andar da extremidade proximal para a caixa de gol. Após a secagem do ar do papel impresso do pé, use uma régua para obter três medidas do comprimento do passo, medindo as distâncias entre as mesmas partes das impressões da pata. Da largura da base dianteira, desenhando uma linha entre pegadas consecutivas, do mesmo lado, dianteiras, e medindo o comprimento da linha vertical da almofada da pegada frontal, até a linha traçada entre as pegadas.E da largura da base traseira, desenhando uma linha entre pegadas traseiras direitas consecutivas, e medindo o comprimento da linha vertical da almofada da pegada traseira esquerda, até a linha traçada entre as outras pegadas direitas. Para se sobrepor, meça a distância entre as almofadas das pegadas dianteira e traseira. Para preparar um tubo de contenção, use uma broca quadrada para fazer 16 buracos de dois milímetros em um tubo de 50 mililitros ao longo das marcas de escala, e na parte traseira de cada marca de escala.Corte a ponta do tubo para fazer um furo de cinco milímetros, para respirar, e faça um furo de quatro milímetros na tampa do tubo, para a cauda. Para o teste de carregamento de estresse, escrogue um rato e coloque o animal na cabeça do tubo de contenção primeiro, com os membros dianteiros suavemente confinados. Passe a cauda através do orifício na tampa antes de tampar o tubo.E coloque o rato no banco por duas horas em temperatura ambiente. No final do período de carga de estresse, remova o rato do tubo e devolva o animal para sua gaiola doméstica. Como observado nessas figuras representativas, ratos modelo de parkinsonismo de distonia de início rápido heterozigous, demonstram comprimentos de passo dianteiros e passos traseiros significativamente mais curtos, do que seus companheiros de ninhada do tipo selvagem com quatro semanas de idade.Os camundongos modelo de parkinsonismo de início rápido heterozigoso de estresse também exibem comprimentos de passo significativamente mais curtos de ambos os membros do que os de companheiros de ninhada do tipo selvagem estressados com oito semanas de idade. Assimetrias dos comprimentos de passo de ambos os membros não são significativamente diferentes, em qualquer grupo de camundongos, em qualquer idade. A base frontal e as sobreposições de ambos os membros também são semelhantes, em todos os grupos, em todas as idades.A base traseira é significativamente mais ampla nestes camundongos modelo de parkinsonismo heterozigoso de início rápido estressados, do que o observado nos animais do tipo selvagem de estresse com 10 semanas de idade, indicando que o estresse causa déficits motores em camundongos modelo de parkinsonismo heterozigoso de início rápido. Não há diferenças significativas no tempo de enforcamento, entre o tipo selvagem e o mutante, são observadas em animais de quatro a 10 semanas de idade. Aos 12 semanas de idade, no entanto, o tempo de enforcamento de camundongos do tipo selvagem de estresse é significativamente maior do que o dos outros animais, sugerindo que o déficit motor em camundongos modelo de parkinsonismo heterozigoso de início rápido, é distinguido de ratos do tipo selvagem por teste de contenção em animais mais velhos.Coloque o mouse sobre o papel imediatamente após o mouse pendurar as partes inferiores dos membros na tinta para evitar a secagem da tinta antes do teste de caminhada. Testes adicionais para características emocionais, como campo aberto, plus-maze elevado e teste de natação inteiro, podem ser realizados para responder se a anormalidade da marcha resulta apenas de déficit motor. Nosso protocolo pode ser usado para explorar a suscetibilidade ao estresse, alterando o número e a duração do carregamento de estresse, e comparando fenótipos motores entre várias condições de carregamento.Nosso protocolo pode ser usado para explorar a suscetibilidade ao estresse alterando o número e a duração dos carregamentos de estresse, e comparando fenótipos motores entre várias condições de carregamento.

Research

JoVE Journal

Behavior

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Comportamento

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