Name: measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry
Uploaded: 2020-03-14T12:00:00
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Die Autoren danken Mario Nomura, M.D. und Rodolfo D'az für ihre Hilfe bei der Histologie, und Pierrick Fournier, Ph.D. für seine wertvollen Kommentare zur Verbesserung der Qualität des Papiers.

Alle Mäuse, die in diesen Assays verwendet wurden, wurden aus BALB/c-Mäusestämmen gewonnen, bei der männliche und weibliche Mäuse wahllos verwendet wurden. Frühere Kulturexperimente wurden auch mit anderen Stämmen durchgeführt, wie FVB, Schweizer Mäuse, CD-1 und CsA Mäuse11,12,14. Alle Mäuse wurden gemäß den Richtlinien der National Institutes of Health (NIH), Anhang Q, untergebracht. Verfahren, die tierische Themen...

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	<li>Boyce, B., Coleman, R. E., Abrahamsson, P. A., Hadji, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+biology+and+pathology.">Bone biology and pathology.</a> Handbook of Cancer-Related Bone Disease. , 3-21 (2012).</li><li>Clark, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anatomy and Physiology: Understanding the Human Body. 474, (2005).</li><li>Fournier, P. G. J., Ju&#225;rez, P., Guise, T. 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H., Ralston, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+bone+formation+using+mouse+calvarial+organ+cultures.">Assessing bone formation using mouse calvarial organ cultures.</a> Bone Research Protocols. , 183-198 (2003).</li><li>Mohammad, K. S., Chirgwin, J. M., Guise, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+new+bone+formation+in+neonatal+calvarial+organ+cultures.">Assessing new bone formation in neonatal calvarial organ cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 455 (1), 37-50 (2008).</li></ol>

Hier beschreiben wir das Protokoll für ein kalvariales Ex-vivo-Modell zur Bewertung der Knochenbildung oder -resorption und zur Untersuchung der Wechselwirkungen von Krebszellen mit kalvarialen Mausknochen. Die entscheidenden Schritte dieser Technik sind die Zerlegung, Kultur, Einbettung und histomorphometrische Analyse der Calvarias. Während der Zerlegung der Calvarien ist es entscheidend, die Hemi-Calvarien in ein Trapez zu schneiden, da es die Orientierung während der Paraffinaufnahme stark erleichtert. Be...

Knochen ist ein dynamisches Bindegewebe, das mehrere Funktionen hat, einschließlich der Unterstützung der Muskeln, Schutz der inneren Organe und Knochenmark, und Speicherung und Freisetzung von Kalzium und Wachstumsfaktoren1,2. Um seine Integrität und die ordnungsgemäße Funktion zu erhalten, wird Knochengewebe kontinuierlich umgebaut. Im Allgemeinen kann ein Zyklus der Knochenumgestaltung in Knochenresorption und Knochenbildung1unterteilt werden. Ein Ungleichgewicht zwischen diesen beiden Phasen des Knochenumbaus kann zur Entwicklung von Knochenpathologien führen. Auch Krankheiten wie Brustkrebs beeinflussen oft die Knochenintegrität; etwa 70% der Patienten im fortgeschrittenen Stadium haben oder werden Knochenmetastasen haben. Wenn Brustkrebszellen in die Knochen gelangen, beeinflussen sie den Knochenstoffwechsel, was zu einer übermäßigen Resorption (osteoklastische Läsionen) und/oder Bildung (osteoblastische Läsionen)3führt.
Um die Biologie von Knochenerkrankungen zu verstehen und neue Behandlungen zu entwickeln, ist es notwendig, die Mechanismen zu verstehen, die mit dem Umbau von Knochen verbunden sind. In der Krebsforschung ist es wichtig, den Knochenmetastasierungsprozess und seine Beziehung zur metastasierenden Mikroumgebung zu untersuchen. Im Jahre 1889 vermutete Stephen Paget, dass Metastasen auftreten, wenn es Kompatibilität zwischen den Tumorzellen und dem Zielgewebe gibt, und schlug vor, dass die metastasierende Stelle von der Affinität des Tumors für die Mikroumgebung abhängt4. 1997 führten Mundy und Guise das Konzept des "bösartigen Zyklus von Knochenmetastasen" ein, um zu erklären, wie Tumorzellen die Mikroumgebung des Knochens verändern, um ihr Überleben und Wachstum zu erreichen, und wie die Knochenmikroumgebung ihr Wachstum fördert, indem sie Kalzium und Wachstumsfaktoren5,6,7zur Verfügung stellt.
Um die Mechanismen der Knochenumgestaltung und Knochenmetastasierung zu charakterisieren und Moleküle mit möglichem therapeutischen Potenzial zu bewerten, war es notwendig, In-vitro- und In-vivo-Modelle zu entwickeln. Diese Modelle stellen jedoch derzeit viele Einschränkungen dar, wie z. B. die vereinfachte Darstellung der Knochenmikroumgebung und deren Kosten8,9. Die Kultur der Knochenexplantationen ex vivo hat den Vorteil, dass die dreidimensionale Organisation sowie die Vielfalt der Knochenzellen erhalten bleiben. Darüber hinaus können experimentelle Bedingungen kontrolliert werden. Die Explant-Modelle umfassen die Kultur der metatarsalen Knochen, Femoralköpfe, Calvarias und Unterkiefer- oder Trabekulularkerne10. Die Vorteile der ex vivo-Modelle wurden in verschiedenen Studien nachgewiesen. Im Jahr 2009 berichteten Nordstrand und Mitarbeiter über die Einrichtung eines Cokulturmodells, das auf den Wechselwirkungen zwischen Knochen- und Prostatakrebszellen basiert11. Auch im Jahr 2012 berichteten Curtin und Mitarbeiter über die Entwicklung eines dreidimensionalen Modells mit Ex-vivo-Kokulturen 12. Der Zweck solcher Ex-vivo-Modelle ist es, die Bedingungen der Knochenmikroumgebung so genau wie möglich neu zu erstellen, um die Mechanismen zu charakterisieren, die bei der normalen oder pathologischen Knochenumgestaltung beteiligt sind, und die Wirksamkeit neuer therapeutischer Wirkstoffe zu bewerten.
Das vorliegende Protokoll basiert auf den von Garrett13 und Mohammad et al.14veröffentlichten Verfahren. Neonatale Maus-Calvaria-Kulturen wurden als experimentelles Modell verwendet, da sie die dreidimensionale Architektur des Knochens in Entwicklung und Knochenzellen beibehalten, einschließlich Zellen in allen Stadien der Differenzierung (d.h. Osteoblasten, Osteoklasten, Osteozyten, Stromalzellen), die zu reifen Osteoklasten und Osteoblasten führen, sowie die mineralisierte Matrix14. Das ex vivo-Modell stellt den pathologischen Prozess von Knochenerkrankungen nicht vollständig dar. Die Auswirkungen auf den Knochenumbau oder die krebsinduzierte Knochenosteolyse können jedoch genau gemessen werden.
Kurz gesagt, besteht dieses Protokoll aus den folgenden Schritten: die Zerlegung von Calvarias von 5-7 Tage alten Mäusen, Calvaria-Präkultur, Calvaria-Kulturanwendungen (z. B. Kultur in Gegenwart von Insulin, Krebszellen oder konditioniertem Medium, und sogar Wirkstoffe mit therapeutisches Potenzial, entsprechend dem Ziel der Untersuchung), Knochenfixierung und Calvaria-Entkalkung, Gewebeverarbeitung, histologische Analyse und Ergebnisinterpretation.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well cell culture</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well non tissue culture</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>15705-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL cryovial</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-S0S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics-Antimycotic</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>P6154-100GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugue</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22628188</td>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2935-24X50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal resin</td>
			<td>Richard Allen</td>
			<td>8310-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td></td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modification of Eagles Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-017-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS (10X)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ebedding Cassettes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z672122-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Golden</td>
			<td>26400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Workstation</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A81000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Golden</td>
			<td>60600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>JALMEK</td>
			<td>E5325-17P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>BIO-S1650-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and scissors</td>
			<td>LANCETA HG</td>
			<td>74165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin buffered 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides 25 x 75 mm</td>
			<td>Premiere</td>
			<td>9105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris&#39;s Hematoxylin</td>
			<td>Jalmek</td>
			<td>SH025-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High profile blades</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1001259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoquinet</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>813150</td>
			<td>STP 120</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio Scope.A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>905200</td>
			<td>MICROM HM 355S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse food, 18% prot, 2018S</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>T.2018S.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orange G</td>
			<td>Biobasic</td>
			<td>OB0674-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Paraplast</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Section Flotation Bath</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8517X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Probiotek</td>
			<td>166-02072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax dispenser</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8523BX1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Golden</td>
			<td>534056-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry

Knochen ist ein Bindegewebe aus Osteoblasten, Osteozyten und Osteoklasten und einer mineralisierten extrazellulären Matrix, die ihm seine Stärke und Flexibilität verleiht und es ihm ermöglicht, seine Funktionen zu erfüllen. Knochen sind kontinuierlich einer Vielzahl von Reizen ausgesetzt, die unter pathologischen Bedingungen den Knochenumbau deregulieren können. Um Knochenbiologie und Krankheiten zu untersuchen und potenzielle therapeutische Wirkstoffe zu bewerten, war es notwendig, In-vitro- und In-vivo-Modelle zu entwickeln.
Dieses Manuskript beschreibt den Sezierensprozess und die Kulturbedingungen von Calvarias, die von neonatalen Mäusen isoliert wurden, um die Knochenbildung und die Mikroumgebung des Knochentumors zu untersuchen. Im Gegensatz zu In-vitro- und In-vivo-Modellen ermöglicht dieses Ex-vivo-Modell die Erhaltung der dreidimensionalen Umgebung des Gewebes sowie der zellulären Vielfalt des Knochens während der Kultivierung unter definierten Bedingungen, um die gewünschte Mikroumgebung zu simulieren. Daher ist es möglich, Knochen-Remodeling und seine Mechanismen zu untersuchen, sowie die Wechselwirkungen mit anderen Zelltypen, wie die Wechselwirkungen zwischen Krebszellen und Knochen.
Die hier berichteten Assays verwenden Calvarien von 5-7 Tage alten BALB/C-Mäusen. Die erhaltenen Hemi-Calvarien werden in Gegenwart von Insulin, Brustkrebszellen (MDA-MB-231) oder konditionierten Medien aus Brustkrebszellkulturen kultiviert. Nach der Analyse wurde festgestellt, dass Insulin eine neue Knochenbildung induzierte, während Krebszellen und ihre konditionierte mittelinduzierte Knochenresorption. Das kalvariale Modell wurde erfolgreich in der Grundlagen- und angewandten Forschung eingesetzt, um knochenentwicklung und krebsinduzierte Knochenerkrankungen zu untersuchen. Insgesamt ist es eine ausgezeichnete Option für einen einfachen, informativen und kostengünstigen Assay.

Um die Knochenbildung im kalvarialen Modell zu bewerten, kultivierten wir die Hemi-Calvarien in Medien mit oder ohne 50 g/ml Insulin. Gewebeabschnitte wurden mit H&E vorbereitet und befleckt. Unter diesen Bedingungen zeigte die Histologie, dass die strukturelle Integrität des Kalbknochens erhalten blieb, was die Identifizierung seiner verschiedenen Komponenten ermöglichte (Abbildung 1). Die mit Insulin behandelten Calvarien zeigten eine Zunahme der Knocheng...

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Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

Die Ex-vivo-Kultur von Knochenexplanten kann ein wertvolles Werkzeug für die Erforschung der Knochenphysiologie und die mögliche Bewertung von Medikamenten bei Knochenremodellierung und Knochenerkrankungen sein. Das vorgestellte Protokoll beschreibt die Vorbereitung und Kultur von Calvarias, die aus neugeborenen Mäuseschädeln isoliert sind, sowie deren Anwendungen.

Messung der Knochenumgestaltung und Nachbildung der Tumor-Knochen-Mikroumgebung mit Calvaria-Kokultur und Histomorphometrie

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Der Zweck dieses Verfahrens ist es, ein Ex-vivo-Modell zu haben, um Knochen-Remodeling zu bewerten und die Tumor-Knochen-Mikroumgebung mit Calvaria-Kultur oder Kokultur mit Krebszellen neu zu erstellen. Die meisten Calvaria-Techniken sind ein Organkultursystem, das Calvaria-Knochen von neonatalen Mäusen verwendet, um die Knochenumgestaltung zu bewerten. Sie können das therapeutische Potenzial verschiedener Moleküle testen oder sogar die Knochen-Tumor-Mikroumgebung nachbilden, wenn Sie Kokulturen mit Krebszellen verwenden.All dies in einem einfachen und einfachen Test in kurzer Zeit und zu niedrigen Kosten. Das Ziel dieser Technik ist es, ein Werkzeug zu haben, um die Knochenregeneration in der Krebsknochen-Mikroumgebung zu bewerten, mit einem ex-vivo-Modell der Maus-Kalvari-Organkultur. Wählen Sie zuerst einen Mauswelpen aus und legen Sie ihn unter die Haube.Wir verwenden Calvaria von fünf- bis sieben Tage alten Mauswelpen. Nehmen Sie den Kopf mit der Spritze, schneiden Sie die Haut, und löschen Sie die Kopfhaut genug, um die Calvaria zu sezieren. Identifizieren Sie die Nähte des Schädels, sagittal, koronal, und Lambdoiden.Machen Sie einen geraden Schnitt entlang der Lambdoid Nähte, um etwa das Niveau des Auges. Schneiden Sie auf jeder Seite, von den Lambdoid Nähte in Richtung der koronaren Naht. Machen Sie in 45 Winkel einen weiteren Schnitt, um das Ende des Schnitts mit dem Schnitt des vorderen Fontanels zu verbinden.Es ist äußerst wichtig, die Schädelnähte, sagittale, frontale, koronare, lambdoide zu definieren, um die richtige Gewebeaufnahme und Histologieanalyse zu gewährleisten. Mit feinen Spitzenzange, entfernen Sie die Calvaria, und legen Sie es auf eine Petri schale Abdeckung. Mit einem Skalpell, machen Sie einen geraden Schnitt aus dem hinteren Fontanel entlang der sagittalen Naht durch die koronare Naht.Es werden zwei Hemicalvarien erhalten. Nehmen Sie jede Calvaria mit den Zangen auf und legen Sie sie in eine neue Petrischale mit PBS. Für Kultur, legen Sie die Hemavaria in eine 24-Well-Gewebekulturplatte, die einen Milliliter Medien enthält, und inkubieren für 24 Stunden bei 37 Grad.Wir können auch primäre Kalvarialkulturen verwenden, um die Tumor-Knochen-Mikroumgebung für die Knochenresorption zu reproduzieren. Dazu kokulturieren wir Calvarien mit Krebszellen oder mit konditionierten Medien aus Krebszellen. Entfernen Sie 24 Stunden später das Medium und ersetzen Sie es durch Medien, die die Behandlung enthalten, die Sie testen möchten.Wenn Sie Krebszellen und Knochenwechselwirkungen bewerten oder die Tumor-Knochen-Mikroumgebung nachbilden möchten, übergeben Sie die Calvaria an eine niedrige zelluläre Anbauplatte, um die Anhaftung der Krebszellen an die Platte zu vermeiden. Versuchen Sie die Krebszellen, zählen Sie sie, und legen Sie sie sorgfältig an der Spitze der Hämicalvaria. Sie können auch bedingte Medien aus Krebszellen verwenden und es verwenden, um die Hämicalvaria zu inkubieren.Sechs bis sieben Tage bei 37 Grad bei fünf Prozent CO2 inkubieren. Wechseln Sie am dritten Tag die Medien und brüten Sie weiter. Die Anzahl der Zellen, die in der Kokultur verwendet werden, hängt von der Krebszelllinie ab.Sie müssen zunächst die Anzahl der Zellen optimieren, die benötigt werden, um eine Antwort in der ersten zu induzieren. Nach der Kultur durchlaufen die Calvarien einen Prozess der Fixierung, Entkalkung und Paraffin-eingebettet. Darüber hinaus werden die Gewebe in einem Mikrotom geschnitten, gebeizt, und histomorphometrische Analysen werden durchgeführt.Die Einbeziehung der Calvaria kann schwierig sein. Um sicherzustellen, dass das Gewebe während der Aufnahme geschützt ist, können Sie das Gewebe zwischen Schwämme legen oder ein Tissuepapier oder anderes absorbierendes Papier verwenden, bevor Sie es in die Kassette legen. Für die Gewebeverarbeitung die Hämicalvaria in Tissuepapier wickeln.Legen Sie es dann in eine Einbettkassette und fixieren Sie sie in einem neutralen Puffer in Formalin für 24 Stunden bei vier Grad. Um die Calvaria zu entkalken, legen Sie die Kassette 48 Stunden lang bei vier Grad in eine 10%EDTA. Verarbeiten Sie die Gewebekassetten mit der Hämicalvaria in einem automatischen Gewebeprozessor.Folgen Sie einem regelmäßigen Tag Rotationszyklus, dann in Paraffin enthalten. Zum Schneiden vier mikrotische Abschnitte mit einem Mikrotom schneiden, die Abschnitte auf Glasmikroskop-Dias montieren und mit Hämatoxylin, Eosin, färben. Die Histologie-Analyse wurde verwendet, um die Knochenoberfläche und die Knochenumgestaltungsbereiche quantitativ zu analysieren.Die Bilder der Calvaria an den sieben Tagen wurden mit der Bildgebungssoftware analysiert. Definieren Sie für die quantitative Bewertung zunächst den Bereich für die Analyse. Schauen Sie in den Abschnitten auf der Telopa, wo vier X, um die Ausrichtung und die Nähte zu identifizieren.Definieren Sie die koronare Naht, und identifizieren Sie die lange Knochenoberfläche auf der einen Seite und dann die kurze Oberfläche auf der anderen Seite. Unter der 40X Vergrößerung, identifizieren Sie die koronare Naht und bewegen Sie zwei oder drei optische Felder weg von der Naht, entlang der langen Oberfläche. Erfassen Sie das Bild dieses Bereichs zur Analyse.Sie können Bilder-Software verwenden, um die strukturelle Integrität des Knochens zu analysieren. Quantitative histomorphometrische Analysen für die Dicke und den Knochenbereich der Hämicalvaria können durchgeführt werden. Die richtige Calvaria-Analyse hängt von einer guten Einbettung und der richtigen Ausrichtung für konsistente histologische Ergebnisse ab.Achten Sie darauf, mindestens drei Calvaria pro experimenteller Bedingung zu verwenden. Hier können wir die Struktur des Knochens sehen. In Orange wird der Knochen beobachtet.Wir können auch das Vorhandensein des Periost, Ostozyten, Endosteums und anderer Teile des Knochens sehen. In unserem Fall verwenden wir Insulin, um die Knochenumgestaltung zu erhöhen. Im Vergleich zu einer Kontrolle können wir eine signifikante Zunahme des Knochenbereichs feststellen.Hier können wir den Effekt der MDA-MB-231-Zelllinie auf Modell-Calvaria sehen. Wir können im Vergleich zur Kontrolle sehen, dass das Vorhandensein von Krebszellen osteolytische Faktoren induzieren, die die Knochenzerstörung stimulieren. Wir verwendeten Calvaria-Modell, um Knochenregeneration und Krebszell-Knochen-Wechselwirkungen durch Kokulturen mit Krebszellen und Histologie zu messen.Wir validieren unsere Daten auch nach quantitativer Echtzeit-PCR. Dieses Ex-vivo-Modell hat viele Vorteile, wie die dreidimensionale Organisation und die zelluläre Vielfalt des Knochens erhalten bleiben, und die experimentellen Bedingungen können kontrolliert werden. Außerdem ist das Modell einfach, Sie können Ergebnisse in kurzer Zeit sehen, und es ist kostengünstig.Und es kann mit anderen Techniken kombiniert werden, wie quantitative Echtzeit-PCR, Mikroskopie und Mikro-CT.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

Umfassendes Protokoll zur Probe und Prozess des Knochenmarks zur Messung von messbaren Resterkrankung und leukämischen Stammzellen in der akuten myeloischen Leukämie

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

Forschung

Krebsforschung

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymale Stammzellen isoliert von Pulpagewebe und Kokultur mit Krebszellen ihre Interaktionen zu untersuchen

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Studying the Effects of Tumor-Secreted Paracrine Ligands on Macrophage Activation using Co-Culture with Permeable Membrane Supports

Untersuchung der Auswirkungen von tumorgeheimen Parakrinliganden auf die Makrophagenaktivierung mit Co-Culture mit permeableMembranen unterstützt

Tumor-derived paracrine signaling is an overlooked component of local immunosuppression and can lead to a permissive environment for continued cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Analyse der Seitenpopulation in soliden Tumorzelllinien

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Modellierung von primären Knochentumoren und Knochenmetastasen mit Implantation eines soliden Tumortransplantats in den Knochen

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Isolierung proximaler Flüssigkeiten zur Untersuchung der Tumormikroumgebung des Pankreas-Adenokarzinoms

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Co-Kultur von Glioblastom-Stammzellen auf gemusterten Neuronen zur Untersuchung von Migration und zellulären Interaktionen

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Co-culture of Glutamatergic Neurons and Pediatric High-Grade Glioma Cells Into Microfluidic Devices to Assess Electrical Interactions

Kokultur von glutamatergen Neuronen und pädiatrischen hochgradigen Gliomzellen in mikrofluidische Geräte zur Beurteilung elektrischer Wechselwirkungen

Pediatric high-grade gliomas (pHGG) represent childhood and adolescent brain cancers that carry a rapid dismal prognosis. Since there is a need to ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Erweiterung des Verständnisses der Tumormikroumgebung mittels massenspektrometrischer Bildgebung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeproben

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Industrialized, Artificial Intelligence-guided Laser Microdissection for Microscaled Proteomic Analysis of the Tumor Microenvironment

Industrialisierte, von künstlicher Intelligenz gesteuerte Laser-Mikrodissektion zur mikroskaligen proteomischen Analyse der Tumormikroumgebung

The tumor microenvironment (TME) represents a complex ecosystem comprised of dozens of distinct cell types, including tumor, stroma, and immune cell ...