Name: measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry
Uploaded: 2020-03-14T12:00:00
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Os autores agradecem a Mario Nomura, M.D. e Rodolfo Díaz pela ajuda com a histologia, e Pierrick Fournier, Ph.D. por seus valiosos comentários para melhorar a qualidade do artigo.

Todos os camundongos utilizados nesses ensaios foram obtidos de cepas de camundongos BALB/C, utilizando camundongos machos e fêmeas indiscriminadamente. Experimentos culturais anteriores também foram realizados utilizando outras cepas, como FVB, camundongos suíços, CD-1 e csA mice11,12,14. Todos os camundongos foram alojados de acordo com as diretrizes do Instituto Nacional de Saúde (NIH), o apêndice Q. Os procedimentos en...

<ol>
	<li>Boyce, B., Coleman, R. E., Abrahamsson, P. A., Hadji, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+biology+and+pathology.">Bone biology and pathology.</a> Handbook of Cancer-Related Bone Disease. , 3-21 (2012).</li><li>Clark, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anatomy and Physiology: Understanding the Human Body. 474, (2005).</li><li>Fournier, P. G. J., Ju&#225;rez, P., Guise, T. 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A., Adamczyk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+ex+vivo+explant+cultures:+applications+in+bone+research.">Models of ex vivo explant cultures: applications in bone research.</a> BoneKEY Reports. 5, 818 (2016).</li><li>Nordstrand, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+validation+of+an+in+vitro+coculture+model+to+study+the+interactions+between+bone+and+prostate+cancer+cells.">Establishment and validation of an in vitro coculture model to study the interactions between bone and prostate cancer cells.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 26 (8), 945-953 (2009).</li><li>Curtin, P., Youm, H., Salih, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cancer-bone+metastasis+model+using+ex+vivo+cocultures+of+live+calvaria+bones+and+cancer+cells.">Three-dimensional cancer-bone metastasis model using ex vivo cocultures of live calvaria bones and cancer cells.</a> Biomaterials. 33 (4), 1065-1078 (2012).</li><li>Garret, R., Helfrich, M. H., Ralston, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+bone+formation+using+mouse+calvarial+organ+cultures.">Assessing bone formation using mouse calvarial organ cultures.</a> Bone Research Protocols. , 183-198 (2003).</li><li>Mohammad, K. S., Chirgwin, J. M., Guise, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+new+bone+formation+in+neonatal+calvarial+organ+cultures.">Assessing new bone formation in neonatal calvarial organ cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 455 (1), 37-50 (2008).</li></ol>

Aqui, descrevemos o protocolo para um modelo calvarial ex vivo para avaliar a formação ou reabsorção óssea e estudar as interações das células cancerígenas com osso do rato calvarial. Os passos críticos dessa técnica são a dissecção, cultura, incorporação e análise histomorfométrica das calvarias. Durante a dissecção das calvarias, é crucial cortar a hemi-calvarias em um trapézio, pois facilitará fortemente a orientação durante a inclusão da parafina. Ao estudar as interações das cél...

O osso é um tecido conjuntivo dinâmico que possui várias funções, incluindo apoiar os músculos, proteger os órgãos internos e a medula óssea, e armazenar e liberar fatores de cálcio e crescimento1,2. Para manter sua integridade e função adequada, o tecido ósseo está continuamente o processo de remodelação. Em termos gerais, um ciclo de remodelagem óssea pode ser dividido em reabsorção óssea e formação óssea1. Um desequilíbrio entre essas duas fases de remodelagem óssea pode levar ao desenvolvimento de patologias ósseas. Além disso, doenças como o câncer de mama geralmente afetam a integridade óssea; aproximadamente mais de 70% dos pacientes em estágio avançado têm ou terão metástases ósseas. Quando as células cancerígenas de mama entram nos ossos, elas afetam o metabolismo ósseo, resultando em reabsorção excessiva (lesões osteoclásticas) e/ou formação (lesões osteoblásticas)3.
Para entender a biologia das doenças ósseas e desenvolver novos tratamentos, é necessário compreender os mecanismos envolvidos na remodelagem óssea. Na pesquisa do câncer, é essencial investigar o processo de metástase óssea e sua relação com o microambiente metastático. Em 1889, Stephen Paget supôs que as metástases ocorrem quando há compatibilidade entre as células tumorais e o tecido alvo, e sugeriu que o local metastático depende da afinidade do tumor para o microambiente4. Em 1997, Mundy e Guise introduziram o conceito de "ciclo vicioso de metástases ósseas" para explicar como as células tumorais modificam o microambiente ósseo para alcançar sua sobrevivência e crescimento, e como o microambiente ósseo promove seu crescimento fornecendo cálcio e fatores de crescimento5,6,7.
Para caracterizar os mecanismos envolvidos na remodelagem óssea e na metástase óssea e avaliar moléculas com potencial terapêutico possível, é necessário desenvolver modelos in vitro e in vivo. No entanto, esses modelos apresentam atualmente muitas limitações, como a representação simplificada do microambiente ósseo, e seu custo8,9. A cultura das explantas ósseas ex vivo tem a vantagem de manter a organização tridimensional, bem como a diversidade de células ósseas. Além disso, as condições experimentais podem ser controladas. Os modelos de explante incluem a cultura de ossos metatarsos, cabeças femorais, calvarias e núcleos mandibulares ou trabeculares10. As vantagens dos modelos ex vivo têm sido demonstradas em diversos estudos. Em 2009, Nordstrand e colaboradores relataram o estabelecimento de um modelo de cocultura baseado nas interações entre células cancerígenas ósseas e de próstata11. Além disso, em 2012, Curtin e colaboradores relataram o desenvolvimento de um modelo tridimensional utilizando coculturas ex vivo 12. O objetivo desses modelos ex vivo é recriar as condições do microambiente ósseo com a maior precisão possível para poder caracterizar os mecanismos envolvidos na remodelagem óssea normal ou patológica e avaliar a eficácia de novos agentes terapêuticos.
O presente protocolo baseia-se nos procedimentos publicados por Garrett13 e Mohammad et al.14. Culturas de calvaria neonatal do rato têm sido utilizadas como modelo experimental, pois mantêm a arquitetura tridimensional do osso em desenvolvimento e células ósseas, incluindo células em todos os estágios de diferenciação (ou seja, osteoblastos, osteoclastos, osteócitos, osteócitos, células estrômicas) que levam a osteoclastos maduros e osteoblastos, bem como a matriz mineralizada14. O modelo ex vivo não representa totalmente o processo patológico das doenças ósseas. No entanto, os efeitos na remodelagem óssea ou na osteólise óssea induzida pelo câncer podem ser medidos com precisão.
Resumidamente, este protocolo consiste nas seguintes etapas: dissecção de calvarias de camundongos de 5 a 7 dias de idade, pré-cultura calvariada, aplicações de cultura calvariada (por exemplo, cultura na presença de insulina, células cancerosas ou meio condicionado, e até mesmo agentes com potencial terapêutico, segundo o objetivo da investigação), fixação óssea e decalcificação da calvaria, processamento de tecidos, análise histológica e interpretação de resultados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well cell culture</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well non tissue culture</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>15705-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL cryovial</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-S0S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics-Antimycotic</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>P6154-100GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugue</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22628188</td>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2935-24X50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal resin</td>
			<td>Richard Allen</td>
			<td>8310-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td></td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modification of Eagles Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-017-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS (10X)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ebedding Cassettes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z672122-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Golden</td>
			<td>26400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Workstation</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A81000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Golden</td>
			<td>60600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>JALMEK</td>
			<td>E5325-17P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>BIO-S1650-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and scissors</td>
			<td>LANCETA HG</td>
			<td>74165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin buffered 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides 25 x 75 mm</td>
			<td>Premiere</td>
			<td>9105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris&#39;s Hematoxylin</td>
			<td>Jalmek</td>
			<td>SH025-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High profile blades</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1001259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoquinet</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>813150</td>
			<td>STP 120</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio Scope.A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>905200</td>
			<td>MICROM HM 355S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse food, 18% prot, 2018S</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>T.2018S.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orange G</td>
			<td>Biobasic</td>
			<td>OB0674-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Paraplast</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Section Flotation Bath</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8517X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Probiotek</td>
			<td>166-02072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax dispenser</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8523BX1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Golden</td>
			<td>534056-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry

Osso é um tecido conjuntivo constituído de osteoblastos, osteócitos e osteoclastos e uma matriz extracelular mineralizada, o que lhe dá sua força e flexibilidade e permite que ele cumpra suas funções. O osso é continuamente exposto a uma variedade de estímulos, que em condições patológicas podem desregulamentar a remodelagem óssea. Para estudar biologia óssea e doenças e avaliar potenciais agentes terapêuticos, é necessário desenvolver modelos in vitro e in vivo.
Este manuscrito descreve o processo de dissecção e as condições de cultura das calvarias isoladas dos camundongos neonatais para estudar a formação óssea e o microambiente do tumor ósseo. Em contraste com os modelos in vitro e in vivo, este modelo ex vivo permite a preservação do ambiente tridimensional do tecido, bem como a diversidade celular do osso enquanto cultura condições definidas para simular o microambiente desejado. Assim, é possível investigar a remodelagem óssea e seus mecanismos, bem como as interações com outros tipos de células, como as interações entre células cancerígenas e osso.
Os ensaios aqui relatados usam calvarias de ratos BALB/C de 5 a 7 dias de idade. As hemi-calvarias obtidas são cultivadas na presença de insulina, células cancerígenas de mama (MDA-MB-231), ou meio condicionado a partir de culturas de células cancerígenas de mama. Após análise, foi estabelecido que a insulina induziu nova formação óssea, enquanto as células cancerosas e sua reabsorção óssea média condicionada. O modelo calvarial tem sido usado com sucesso em pesquisas básicas e aplicadas para estudar o desenvolvimento ósseo e doenças ósseas induzidas pelo câncer. No geral, é uma excelente opção para um ensaio fácil, informativo e de baixo custo.

Para avaliar a formação óssea no modelo calvarial, cultivamos as hemi-calvarias em mídia com ou sem 50 μg/mL de insulina. As seções teciduais foram preparadas e manchadas com H&E. Nessas condições, a histologia mostrou que a integridade estrutural do osso calvarial foi mantida, permitindo a identificação de seus diferentes componentes (Figura 1). As calvarias tratadas com insulina apresentaram aumento na quantidade de tecido ósseo em relação ao ...

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Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

A cultura ex vivo de explantas ósseas pode ser uma ferramenta valiosa para o estudo da fisiologia óssea e a avaliação potencial de medicamentos na remodelagem óssea e doenças ósseas. O protocolo apresentado descreve a preparação e a cultura de calvarias isoladas de crânios de camundongos recém-nascidos, bem como suas aplicações.

Medição da remodelagem óssea e recriação do microambiente tumor-osso usando a cocultura da Calvaria e a histomormormetria

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

O objetivo deste procedimento é ter um modelo ex vivo para avaliar a remodelagem óssea e recriar o microambiente tumor-ósseo utilizando cultura calvária ou co-cultura com células cancerosas. A maior parte da técnica de calvária é um sistema de cultura de órgãos que utiliza ossos de calvaria de camundongos neonatais para avaliar a remodelagem óssea. Você pode testar o potencial terapêutico de moléculas diversas, ou até mesmo recriar o microambiente tumoral ósseo quando você usa co-culturas com células cancerosas.Tudo isso em um ensaio simples e fácil em pouco tempo e baixo custo. O objetivo desta técnica é ter uma ferramenta para avaliar a regeneração óssea no microambiente ósseo do câncer, utilizando um modelo ex vivo de cultura de órgãos calvariais de camundongos. Primeiro, selecione um filhote de rato e coloque-o sob o capô.Usamos calvaria de filhotes de rato de cinco a sete dias. Pegue a cabeça com a seringa, corte a pele e limpe a área do couro cabeludo o suficiente para dissecar a calvaria. Identifique as suturas do crânio, sagital, coronal e lambdoides.Faça um corte reto ao longo das suturas lambdoid, para cerca do nível do olho. Corte de cada lado, das suturas lambdoid em direção à sutura coronal. No ângulo de 45, faça outro corte para conectar a extremidade do corte feito com o corte do fontanel anterior.É extremamente importante definir as suturas do crânio, sagital, frontal, coronal, lambdoide, para garantir a inclusão correta do tecido e análise histologia. Com boas pontas fórceps, retire a calvaria e coloque-a em uma tampa de placa de Petri. Com um bisturi, faça um corte reto do fontanel posterior ao longo da sutura sagital através da sutura coronal.Duas hemicalvarias são obtidas. Pegue cada calvaria com os fórceps, e coloque-os em uma nova placa de Petri com PBS. Para a cultura, coloque a hemicalvaria em uma placa de cultura tecidual de 24 poços, contendo um mililitro de mídia, e incubar por 24 horas a 37 graus.Também podemos usar culturas primárias de calvária para reproduzir o microambiente tumor-ósseo para resorção óssea. Para isso, co-cultura calvarias com células cancerosas, ou com mídia condicionada de células cancerosas. 24 horas depois, remova a mídia e substitua-a por mídia contendo o tratamento que você gostaria de testar.Se você deseja avaliar as células cancerígenas e as interações ósseas, ou recriar o microambiente tumor-ósseo, passe a calvaria para uma placa de apego celular baixa, para evitar a fixação das células cancerosas à placa. Tentepsinizar as células cancerígenas, contá-las, e colocá-las cuidadosamente no topo da hemicalvaria. Você também pode usar mídia condicional de células cancerosas, e usá-la para incubar a hemicalvaria.Incubar por seis a sete dias a 37 graus, com 5% de CO2. No terceiro dia, mude a mídia e continue incubando. O número de células que usam na cocultura depende da linha celular do câncer.Você precisa, primeiro, otimizar o número de células que é necessário para induzir uma resposta em uma. Após a cultura, a calvária passa por um processo de fixação, descalcificação e parafina incorporada. Além disso, os tecidos são seccionados em um microtome, manchados, e a análise histomorfométrica é realizada.A inclusão da calvaria pode ser complicada. Para garantir que o tecido esteja protegido durante a inclusão, você pode colocar o tecido entre esponjas ou usar um papel de tecido ou outro papel absorvente antes de colocá-lo no. Para o processamento de tecidos, enrole a hemicalvaria em papel de tecido.Em seguida, coloque-o em um de incorporação, e fixe em tampão neutro em formalina, por 24 horas a quatro graus. Para decalcificar a calvaria, coloque o em um EDTA de 10% por 48 horas a quatro graus. Processe as fitas de tecido com a hemicalvaria em um processador automático de tecido.Siga um ciclo regular de rotação do dia, então, inclua em parafina. Para secção, corte quatro seções micromáticas com um microtome, monte as seções em lâminas de microscópio de vidro e manche com hematoxilina, eosina. A análise histologia foi utilizada para a realização de análise quantitativa da superfície óssea e das áreas de remodelação óssea.As imagens da calvária nos sete dias foram analisadas utilizando-se o software de imagem. Para avaliação quantitativa, primeiro, defina a área para a análise. Procure nas seções no telopa onde quatro X para identificar a orientação e as suturas.Defina a sutura coronal e identifique a superfície óssea longa de um lado e, em seguida, a superfície curta do outro. Sob a ampliação de 40X, identifique a sutura coronal e mova dois ou três campos ópticos para longe da sutura, ao longo da superfície longa. Capture a imagem desta área para análise.Você pode usar o software de imagens para analisar a integridade estrutural do osso. Pode ser feita análise histomorfométrica quantitativa para a espessura e a área óssea da hemicalvaria. A análise correta da calvária depende de uma boa incorporação e orientação adequada para resultados histológicos consistentes.Certifique-se de usar pelo menos três calvaria por condição experimental. Aqui, podemos ver a estrutura do osso. Em laranja, o osso é observado.Também podemos ver a presença do periósteo, ostocito, endosteum e outras partes do osso. No nosso caso, usamos insulina para aumentar a remodelagem óssea. Comparado com um controle, podemos ver um aumento significativo na área óssea.Aqui, podemos ver o efeito da linha celular MDA-MB-231 no modelo calvaria. Podemos ver, em comparação com o controle, que a presença de células cancerígenas induz fatores osteolíticos que estimulam a destruição óssea. Utilizamos o modelo calvaria para medir a regeneração óssea e as interações células-ósseas cancerígenas por co-culturas com células cancerosas e histologia.Também validamos nossos dados por PCR quantitativo em tempo real. Este modelo ex vivo tem muitas vantagens, como a organização tridimensional e a diversidade celular do osso são preservadas, e as condições experimentais podem ser controladas. Além disso, o modelo é simples, você pode ver resultados em um curto período de tempo, e é de baixo custo.E pode ser combinado com outras técnicas, como PCR quantitativo em tempo real, microscopia e micro-CT.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

Protocolo abrangente de amostra e da medula óssea do processo de medição de doença Residual mensurável e células leucêmicas em leucemia mieloide aguda

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

Pesquisa do câncer

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Isolamento de células-tronco mesenquimais de tecido pulpar e co-cultura com células cancerosas para estudar suas interações

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Studying the Effects of Tumor-Secreted Paracrine Ligands on Macrophage Activation using Co-Culture with Permeable Membrane Supports

Estudando os efeitos dos ligantes paracrinos tumorais na ativação do macrófago usando a co-cultura com suportes permeáveis da membrana

Tumor-derived paracrine signaling is an overlooked component of local immunosuppression and can lead to a permissive environment for continued cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Análise da população lateral em linhas celulares tumorais sólidas

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Modelagem de Tumores Ósseos Primários e Metástases Ósseas com Implante de Enxerto Sólido de Tumor em Osso

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Isolamento de Fluidos Proximais para Investigar o Microambiente Tumoral do Adenocarcinoma Pancreático

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Co-cultura de células-tronco semelhantes ao Glioblastoma em neurônios padronizados para estudar migração e interações celulares

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Co-culture of Glutamatergic Neurons and Pediatric High-Grade Glioma Cells Into Microfluidic Devices to Assess Electrical Interactions

Co-cultura de neurônios glutamatergicos e células glioma pediátricas de alto grau em dispositivos microfluidos para avaliar interações elétricas

Pediatric high-grade gliomas (pHGG) represent childhood and adolescent brain cancers that carry a rapid dismal prognosis. Since there is a need to ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Expandindo a compreensão do microambiente tumoral usando imagens de espectrometria de massa de amostras de tecido fixo e parafina

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Industrialized, Artificial Intelligence-guided Laser Microdissection for Microscaled Proteomic Analysis of the Tumor Microenvironment

Microdisseção laser industrializada e guiada por inteligência artificial para análise proteômica microescalada do Microambiente tumoral

The tumor microenvironment (TME) represents a complex ecosystem comprised of dozens of distinct cell types, including tumor, stroma, and immune cell ...