Name: measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry
Uploaded: 2020-03-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry at JoVE.com

Авторы благодарят Марио Номура, доктор медицинских наук и Родольфо Диас а также Пьеррик Фурнье, доктор философии, за его ценные комментарии для улучшения качества работы.

Все мыши, используемые в этих анализов были получены из BALB/c штаммов мышей, используя мужчин и женщин мышей без разбора. Предыдущие эксперименты культуры также были выполнены с использованием других штаммов, таких как FVB, швейцарских мышей, CD-1, и CSA мышей11,12...

<ol>
	<li>Boyce, B., Coleman, R. E., Abrahamsson, P. A., Hadji, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+biology+and+pathology.">Bone biology and pathology.</a> Handbook of Cancer-Related Bone Disease. , 3-21 (2012).</li><li>Clark, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anatomy and Physiology: Understanding the Human Body. 474, (2005).</li><li>Fournier, P. G. J., Ju&#225;rez, P., Guise, T. A., Heymann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-bone+interactions:+there+is+no+place+like+bone.">Tumor-bone interactions: there is no place like bone.</a> Bone Cancer: Primary Bone Cancers and Bone Metastases. , 13-28 (2014).</li><li>Ribatti, D., Mangialardi, G., Vacca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stephen+Paget+and+the+"seed+and+soil"+theory+of+metastatic+dissemination.">Stephen Paget and the "seed and soil" theory of metastatic dissemination.</a> Clinical and Experimental Medicine. 6 (4), 145-149 (2006).</li><li>Guise, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vicious+cycle+of+bone+metastases.">The vicious cycle of bone metastases.</a> Journal of Musculoskeletal &amp; Neuronal Interactions. 2 (6), 570-572 (2002).</li><li>Mundy, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+bone+metastasis.">Mechanisms of bone metastasis.</a> Cancer. 80 (8), 1546-1556 (1997).</li><li>Mundy, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastasis+to+bone:+causes,+consequences+and+therapeutic+opportunities.">Metastasis to bone: causes, consequences and therapeutic opportunities.</a> Nature Reviews Cancer. 2 (8), 584-593 (2002).</li><li>Chong, S. K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+bone+metastasis:+Opportunities+for+the+study+of+cancer+dormancy.">Experimental models of bone metastasis: Opportunities for the study of cancer dormancy.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 94 (1), 141-150 (2015).</li><li>Deguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+bone+to+facilitate+measurement+of+adhesion+forces+and+super-resolution+imaging+of+osteoclasts.">In vitro model of bone to facilitate measurement of adhesion forces and super-resolution imaging of osteoclasts.</a> Scientific Reports. 6 (22585), 1-13 (2016).</li><li>Marino, S., Staines, K. A., Brown, G., Howard-Jones, R. A., Adamczyk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+ex+vivo+explant+cultures:+applications+in+bone+research.">Models of ex vivo explant cultures: applications in bone research.</a> BoneKEY Reports. 5, 818 (2016).</li><li>Nordstrand, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+validation+of+an+in+vitro+coculture+model+to+study+the+interactions+between+bone+and+prostate+cancer+cells.">Establishment and validation of an in vitro coculture model to study the interactions between bone and prostate cancer cells.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 26 (8), 945-953 (2009).</li><li>Curtin, P., Youm, H., Salih, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cancer-bone+metastasis+model+using+ex+vivo+cocultures+of+live+calvaria+bones+and+cancer+cells.">Three-dimensional cancer-bone metastasis model using ex vivo cocultures of live calvaria bones and cancer cells.</a> Biomaterials. 33 (4), 1065-1078 (2012).</li><li>Garret, R., Helfrich, M. H., Ralston, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+bone+formation+using+mouse+calvarial+organ+cultures.">Assessing bone formation using mouse calvarial organ cultures.</a> Bone Research Protocols. , 183-198 (2003).</li><li>Mohammad, K. S., Chirgwin, J. M., Guise, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+new+bone+formation+in+neonatal+calvarial+organ+cultures.">Assessing new bone formation in neonatal calvarial organ cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 455 (1), 37-50 (2008).</li></ol>

Здесь мы описываем протокол для модели calvarial ex vivo для оценки формирования или резорбции костей и изучения взаимодействия раковых клеток с костью калвариальной мыши. Критическими шагами этой методики являются вскрытие, культура, встраивание и гистоморфеметрический анализ кальвар...

Кость является динамической соединительной ткани, которая имеет несколько функций, в том числе поддержку мышц, защиты внутренних органов и костного мозга, а также хранения и высвобождения кальция и факторов роста1,2. Для поддержания целостности и правильной функции костная ткань постоянно находится в процессе ремоделирования. В общих чертах цикл ремоделирования костей можно разделить на костную резорбцию и формирование костей1. Дисбаланс между этими двумя фазами ремоделирования костей может привести к развитию костных патологий. Кроме того, такие заболевания, как рак молочной железы, часто влияют на целостность костей; примерно более 70% пациентов на поздних стадиях имеют или будут иметь метастазы в кости. Когда раковые клетки молочной железы попадают в кости, они влияют на метаболизм костей, что приводит к чрезмерной резорбции (остеокластические поражения) и/или образованию (остеобластные поражения)3.
Чтобы понять биологию костных заболеваний и разработать новые методы лечения, необходимо понять механизмы, связанные с ремоделированием костей. В исследованиях рака, важно исследовать процесс метастазировать костей и его отношение к метастатической микросреды. В 1889 году Стивен Пэджет предположил, что метастазы возникают, когда есть совместимость между опухолевыми клетками и целевой ткани, и предположил, что метастатический сайт зависит от сродни опухоли для микросреды4. В 1997 году и Гиз ввели концепцию порочного цикла метастаз костей, чтобы объяснить, как опухолевые клетки модифицируют микроокружение костей для достижения их выживания и роста, и как микроокружение кости способствует их росту, предоставляя кальций и факторы роста5,6,7.
Для характеристики механизмов, связанных с ремоделированием костей и метастазами костей, и для оценки молекул с возможным терапевтическим потенциалом, необходимо разработать модели in vitro и in vivo. Тем не менее, эти модели в настоящее время представляют собой множество ограничений, таких как упрощенное представление микроокружения кости, и их стоимость8,9. Культура костных экскультур explants ex vivo имеет то преимущество, что поддерживает трехмерную организацию, а также разнообразие костных клеток. Кроме того, можно контролировать экспериментальные условия. Модели explant включают культуру плюсневых костей, бедренных головок, calvarias, и mandibular или trabecular сердечников10. Преимущества моделей ex vivo были продемонстрированы в различных исследованиях. В 2009 году Nordstrand и сотрудники сообщили о создании модели кокультуры, основанной на взаимодействии между клетками костей и рака предстательной железы11. Кроме того, в 2012 году Кертин и его коллеги сообщили о разработке трехмерной модели с использованием ex vivo cocultures12. Цель таких моделей ex vivo – как можно точнее воссоздать условия микроокружения костей, чтобы иметь возможность охарактеризовать механизмы, участвующие в нормальной или патологической ремоделировании костей, и оценить эффективность новых терапевтических агентов.
Настоящий протокол основан на процедурах, опубликованных Гарреттомичем и Мохаммадом и др.14. Неонатальные мыши кальварии культуры были использованы в качестве экспериментальной модели, так как они сохраняют трехмерную архитектуру кости в стадии разработки и костных клеток, в том числе клеток на всех стадиях дифференциации (т.е., остеобласты, остеокласты, остромальные клетки), которые приводят к зрелым остеокластам и остеообластов, а также минерализованной матрицы14. Модель ex vivo не представляет патологический процесс костных заболеваний полностью. Тем не менее, влияние на костной ремоделирования или рак индуцированного костного остеолиза могут быть точно измерены.
Кратко, этот протокол состоит из следующих шагов: вскрытие calvarias от 5-7 дней мышей, кальварии прекультуры, кальварии культуры приложений (например, культура в присутствии инсулина, раковых клеток или условных среды, и даже агентов с терапевтический потенциал, в соответствии с целью исследования), фиксация костей и декальцинации кальварии, обработка тканей, гистологический анализ, и интерпретация результата.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well cell culture</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well non tissue culture</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>15705-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL cryovial</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-S0S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics-Antimycotic</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>P6154-100GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugue</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22628188</td>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2935-24X50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal resin</td>
			<td>Richard Allen</td>
			<td>8310-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td></td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modification of Eagles Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-017-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS (10X)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ebedding Cassettes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z672122-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Golden</td>
			<td>26400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Workstation</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A81000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Golden</td>
			<td>60600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>JALMEK</td>
			<td>E5325-17P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>BIO-S1650-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and scissors</td>
			<td>LANCETA HG</td>
			<td>74165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin buffered 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides 25 x 75 mm</td>
			<td>Premiere</td>
			<td>9105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris&#39;s Hematoxylin</td>
			<td>Jalmek</td>
			<td>SH025-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High profile blades</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1001259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoquinet</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>813150</td>
			<td>STP 120</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio Scope.A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>905200</td>
			<td>MICROM HM 355S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse food, 18% prot, 2018S</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>T.2018S.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orange G</td>
			<td>Biobasic</td>
			<td>OB0674-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Paraplast</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Section Flotation Bath</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8517X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Probiotek</td>
			<td>166-02072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax dispenser</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8523BX1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Golden</td>
			<td>534056-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry

Кость представляет собой соединительную ткань, образовавизированную из остеобластов, остеоцитов, остеокластов и минерализованной внеклеточной матрицы, что придает ей силу и гибкость и позволяет выполнять свои функции. Кость постоянно подвергается воздействию различных стимулов, которые в патологических условиях могут дерегулировать ремоделирование костей. Для изучения биологии костей и заболеваний и оценки потенциальных терапевтических агентов, было необходимо разработать в пробирке и in vivo моделей.
Данная рукопись описывает процесс вскрытия и культурные условия кальварии, изолированные от неонатальных мышей для изучения формирования костей и микроокружения костной опухоли. В отличие от моделей in vitro и in vivo, эта модель ex vivo позволяет сохранять трехмерную среду ткани, а также клеточное разнообразие кости при культивации в определенных условиях для имитации желаемой микросреды. Таким образом, можно исследовать костной ремоделирования и ее механизмы, а также взаимодействия с другими типами клеток, таких как взаимодействие между раковыми клетками и кости.
В анализах, представленных здесь, используются кальварии от 5-7-дневных мышей BALB/C. Полученные геми-кальвары культивируются в присутствии инсулина, раковых клеток молочной железы (MDA-MB-231), или обусловленной среды от культур раковых клеток молочной железы. После анализа было установлено, что инсулин индуцировал новое формирование костей, в то время как раковые клетки и их обусловленная средняя индуцированная резорбция костей. Кальвариальная модель успешно используется в фундаментальных и прикладных исследованиях для изучения развития костей и онкологических заболеваний костей. В целом, это отличный вариант для легкого, информативного и недорогого асссе.

Для оценки формирования костей в кальвариальной модели мы культивировали геми-кальварии в средствах массовой информации с 50 мкг/мл инсулина. Ткань разделы были подготовлены и окрашены н И Е. В этих условиях гистология показала, что совсежся структурная целостность ко...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry at JoVE.com

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

Ex vivo культуры костных explants может быть ценным инструментом для изучения физиологии костей и потенциальной оценки препаратов в костной ремоделирования и костных заболеваний. Представленный протокол описывает подготовку и культуру кальварии, изолированных от новорожденных черепов мышей, а также их применение.

Измерение ремоделирования костей и воссоздания микроокружения опухоли и кости с использованием кокультуры Кальварии и гистоморфометрии

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Цель этой процедуры состоит в том, чтобы иметь модель ex vivo для оценки ремоделирования костей и воссоздания микроокниронии опухолевых костей с использованием культуры кальварии или совместной культуры с раковыми клетками. Большинство кальварии техника системы культуры органов с использованием кальварии кости неонатальных мышей для оценки костной ремоделирования. Вы можете проверить терапевтический потенциал различных молекул, или даже воссоздать микрооквидеронирования костной опухоли, когда вы используете со-культуры с раковыми клетками.Все это в простой и простой анализ в течение короткого времени и низкой стоимости. Цель этого метода состоит в том, чтобы иметь инструмент для оценки регенерации костей в микроокноронации рака кости, используя ex vivo модель мыши кальвариальной культуры органов. Во-первых, выберите щенка мыши и поместите его под капот.Мы используем кальварию от пяти до семи дней детенышей мыши. Возьмите голову со шприцем, вырезать кожу, и очистить область кожи головы достаточно для вскрытия голгофы. Определите швы черепа, стрельца, коронала и лямбдоидов.Сделать сделать прямой разрез вдоль швов ягненка, примерно до уровня глаза. Вырезать с каждой стороны, от овсяных швов к корональной швы. Под углом 45 сделайте еще один разрез, чтобы соединить конец разреза, сделанного с разрезом переднего фонтанеля.Чрезвычайно важно определить швы черепа, сагиттал, лобной, корональный, лямбдоид, чтобы гарантировать правильное включение тканей и гистологический анализ. С тонкой стиппы советы, удалить кальварии, и положить его на крышку чашки Петри. С скальпелем, сделать прямой разрез из задней фонтанель вдоль sagittal шва через корональный шов.Получены две гемикалварии. Выберите каждую кальварию с типсами, и поместите их в новую чашку Петри с PBS. Для культуры поместите гемикалварию в 24-хорошо ткани культуры пластины, содержащей один миллилитр средств массовой информации, и инкубировать в течение 24 часов при 37 градусов.Мы также можем использовать первичные кальвариальные культуры для воспроизведения микроокноронности опухоли и кости для ресорбции костей. Для этого мы совместно культури кальварий с раковыми клетками, или с условными средствами массовой информации из раковых клеток. 24 часа спустя удалите средства массовой информации и замените их средствами массовой информации, содержащими лечение, которое вы хотели бы протестировать.Если вы хотите оценить раковые клетки и костные взаимодействия, или воссоздать микроокурение опухоли кости, передать кальварии низкоклеточной пластины крепления, чтобы избежать присоединения раковых клеток к пластине. Трипсинизировать раковые клетки, считать их, и поместите их тщательно в верхней части гемикалии. Вы также можете использовать условные средства массовой информации из раковых клеток, и использовать его для инкубации гемикалварии.Инкубация в течение шести-семи дней при 37 градусах, с пятью процентами CO2. На третий день, изменить средства массовой информации и продолжать инкубации. Количество клеток, использующих в совместной культуре зависит от рака клеточной линии.Вам нужно, во-первых, оптимизировать количество ячеек, которые необходимы, чтобы вызвать ответ в одном. После культуры, кальварии проходят через процесс фиксации, наклейки, и парафин-встроенных. Кроме того, ткани поделены в микротоме, окрашены, и гистоморфометрический анализ выполняется.Включение кальварии может быть сложно. Чтобы убедиться, что ткань защищена во время включения, вы можете положить ткань между губками или использовать бумагу или другую абсорбянтную бумагу, прежде чем положить его в кассету. Для обработки тканей, оберните hemicalvaria в бумаге ткани.Затем поместите его в встраиваемую кассету и зафиксните в нейтральном буфере в формалине в течение 24 часов при четырех градусах. Чтобы очистить кальварию, поместите кассету в 10%EDTA в течение 48 часов при четырех градусах. Обработать тканевых кассет с гемикалварией в автоматическом процессоре ткани.Следуйте регулярному циклу вращения день, то, включают в парафин. Для секций вырежьте четыре микротическими секциями с микротомом, смонтировать секции на стеклянные микроскопические горки и окрашивать гематоксилином, эозином. Гистологический анализ был использован для выполнения количественного анализа поверхности кости и области ремоделирования костей.Изображения кальварии за семь дней были проанализированы с помощью программного обеспечения для визуализации. Для количественной оценки, во-первых, определить область для анализа. Посмотрите в разделах на telopa, где четыре X для определения ориентации и швов.Определите корональной шов, и определить длинную поверхность кости с одной стороны, а затем короткую поверхность с другой. Под увеличением 40X, определить корональной швы и переместить два или три оптических полей от шва, вдоль длинной поверхности. Захват изображения этой области для анализа.Вы можете использовать программное обеспечение изображений для анализа структурной целостности кости. Количественный гистоморфометрический анализ толщины и костной области гемикалия может быть сделано. Правильный анализ кальварии зависит от хорошего встраивания и правильной ориентации для последовательных гистологических результатов.Не забудьте использовать по крайней мере три кальварии в экспериментальном состоянии. Здесь мы можем увидеть структуру кости. В оранжевом цвете наблюдается кость.Мы также можем видеть наличие периостея, остоцита, эндостея и других частей кости. В нашем случае, мы используем инсулин для увеличения ремоделирования костей. По сравнению с контролем, мы можем увидеть значительное увеличение в области кости.Здесь мы видим влияние клеточной линии MDA-MB-231 на кальварию модели. Мы можем видеть, по сравнению с контролем, что наличие раковых клеток вызывают остеолитические факторы, которые стимулируют разрушение костей. Мы использовали модель кальварии для измерения регенерации костей и взаимодействия раковых клеток и костей совместно культур с раковыми клетками и гистологией.Мы также проверяем наши данные количественным ПЦР в режиме реального времени. Эта модель ex vivo имеет много преимуществ, как трехмерная организация и клеточное разнообразие кости сохранены, и экспериментальные условия можно контролировать. Кроме того, модель проста, вы можете увидеть результаты в течение короткого периода времени, и это недорого.И его можно сочетать с другими методами, такими как количественный ПЦР в реальном времени, микроскопия и микроКТ.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

Всеобъемлющий протокол выборки и процесс костного мозга для измерения поддающихся оценке остаточной болезни и лейкозных клеток острой миелоидной лейкемией

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Мезенхимальных стволовых клеток изолированно от ткани пульпы и культуры совместно с раковых клеток, чтобы изучить их взаимодействия

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Studying the Effects of Tumor-Secreted Paracrine Ligands on Macrophage Activation using Co-Culture with Permeable Membrane Supports

Изучение влияния опухолевых паракринных лигандов на активацию макрофагов с помощью совместной культуры с проницаемой мембраной поддержкой

Tumor-derived paracrine signaling is an overlooked component of local immunosuppression and can lead to a permissive environment for continued cancer ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Анализ боковой популяции в линиях солидных опухолевых клеток

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Моделирование первичных опухолей костей и метастазов в кости с имплантацией солидного опухолевого трансплантата в кость

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Выделение проксимальных жидкостей для исследования микроокружения опухоли аденокарциномы поджелудочной железы

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Кокультура стволовых клеток глиобластомы на узорчатых нейронах для изучения миграции и клеточных взаимодействий

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Co-culture of Glutamatergic Neurons and Pediatric High-Grade Glioma Cells Into Microfluidic Devices to Assess Electrical Interactions

Кокультура глутаматергических нейронов и педиатрических клеток глиомы высокой степени в микрофлюидные устройства для оценки электрических взаимодействий

Pediatric high-grade gliomas (pHGG) represent childhood and adolescent brain cancers that carry a rapid dismal prognosis. Since there is a need to ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Расширение понимания микроокружения опухоли с помощью масс-спектрометрической визуализации формалин-фиксированных и парафин-внедренных образцов тканей

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Industrialized, Artificial Intelligence-guided Laser Microdissection for Microscaled Proteomic Analysis of the Tumor Microenvironment

Индустриализированная лазерная микродиссекция с искусственным интеллектом для микромасштабированного протеомного анализа микроокружения опухоли

The tumor microenvironment (TME) represents a complex ecosystem comprised of dozens of distinct cell types, including tumor, stroma, and immune cell ...