Name: measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry
Uploaded: 2020-03-14T12:00:00
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Los autores agradecen a Mario Nomura, M.D. y Rodolfo Díaz por su ayuda con la histología, y Pierrick Fournier, Ph.D. por sus valiosos comentarios para mejorar la calidad del trabajo.

Todos los ratones utilizados en estos ensayos se obtuvieron de cepas de ratones BALB/c, utilizando ratones machos y hembras indiscriminadamente. También se han realizado experimentos de cultivo previos utilizando otras cepas, como FVB, ratones suizos, CD-1 y ratones CsA11,,12,,14. Todos los ratones fueron alojados de acuerdo con las directrices de los Institutos Nacionales de Salud (NIH), Apéndice Q. Los procedimientos relacio...

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	<li>Boyce, B., Coleman, R. E., Abrahamsson, P. A., Hadji, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+biology+and+pathology.">Bone biology and pathology.</a> Handbook of Cancer-Related Bone Disease. , 3-21 (2012).</li><li>Clark, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anatomy and Physiology: Understanding the Human Body. 474, (2005).</li><li>Fournier, P. G. J., Ju&#225;rez, P., Guise, T. 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A., Adamczyk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+ex+vivo+explant+cultures:+applications+in+bone+research.">Models of ex vivo explant cultures: applications in bone research.</a> BoneKEY Reports. 5, 818 (2016).</li><li>Nordstrand, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+validation+of+an+in+vitro+coculture+model+to+study+the+interactions+between+bone+and+prostate+cancer+cells.">Establishment and validation of an in vitro coculture model to study the interactions between bone and prostate cancer cells.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 26 (8), 945-953 (2009).</li><li>Curtin, P., Youm, H., Salih, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cancer-bone+metastasis+model+using+ex+vivo+cocultures+of+live+calvaria+bones+and+cancer+cells.">Three-dimensional cancer-bone metastasis model using ex vivo cocultures of live calvaria bones and cancer cells.</a> Biomaterials. 33 (4), 1065-1078 (2012).</li><li>Garret, R., Helfrich, M. H., Ralston, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+bone+formation+using+mouse+calvarial+organ+cultures.">Assessing bone formation using mouse calvarial organ cultures.</a> Bone Research Protocols. , 183-198 (2003).</li><li>Mohammad, K. S., Chirgwin, J. M., Guise, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+new+bone+formation+in+neonatal+calvarial+organ+cultures.">Assessing new bone formation in neonatal calvarial organ cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 455 (1), 37-50 (2008).</li></ol>

Aquí, describimos el protocolo para un modelo calvarial ex vivo para evaluar la formación o resorción ósea y para estudiar las interacciones de las células cancerosas con el hueso del ratón calvarial. Los pasos críticos de esta técnica son la disección, el cultivo, la incrustación y el análisis histomorfométrico de las calvarias. Durante la disección de las calvarias, es crucial cortar el hemi-calvarias en un trapezoide, ya que facilitará fuertemente la orientación durante la inclusión de la para...

El hueso es un tejido conectivo dinámico que tiene varias funciones, incluyendo el apoyo a los músculos, la protección de los órganos internos y la médula ósea, y el almacenamiento y liberación de calcio y factores de crecimiento1,,2. Para mantener su integridad y función adecuada, el tejido óseo está continuamente bajo el proceso de remodelación. En términos generales, un ciclo de remodelación ósea se puede dividir en resorción ósea y formación ósea1. Un desequilibrio entre estas dos fases de remodelación ósea puede conducir al desarrollo de patologías óseas. Además, enfermedades como el cáncer de mama a menudo afectan la integridad ósea; aproximadamente más del 70% de los pacientes en etapas avanzadas tienen o tendrán metástasis óseas. Cuando las células de cáncer de mama entran en los huesos, afectan el metabolismo óseo, lo que resulta en una resorción excesiva (lesiones osteoclásticas) y/o formación (lesiones osteoblásticas)3.
Para entender la biología de las enfermedades óseas y desarrollar nuevos tratamientos, es necesario entender los mecanismos involucrados en la remodelación ósea. En la investigación del cáncer, es esencial investigar el proceso de metástasis ósea y su relación con el microambiente metastásico. En 1889, Stephen Paget hipotetizó que las metástasis ocurren cuando hay compatibilidad entre las células tumorales y el tejido diana, y sugirió que el sitio metastásico depende de la afinidad del tumor para el microambiente4. En 1997, Mundy y Guise introdujeron el concepto del "círculo vicioso de metástasis óseas" para explicar cómo las células tumorales modifican el microambiente óseo para lograr su supervivencia y crecimiento, y cómo el microambiente óseo promueve su crecimiento proporcionando calcio y factores de crecimiento5,,6,,7.
Para caracterizar los mecanismos implicados en la remodelación ósea y metástasis ósea y para evaluar moléculas con posible potencial terapéutico, ha sido necesario desarrollar modelos in vitro e in vivo. Sin embargo, estos modelos presentan actualmente muchas limitaciones, como la representación simplificada del microambiente óseo, y su costo8,9. El cultivo de explantes óseos ex vivo tiene la ventaja de mantener la organización tridimensional, así como la diversidad de células óseas. Además, se pueden controlar las condiciones experimentales. Los modelos explantatos incluyen el cultivo de huesos metatarsales, cabezas femorales, calvarias y núcleos mandibulares o trabeculares10. Las ventajas de los modelos ex vivo se han demostrado en diversos estudios. En 2009, Nordstrand y colaboradores informaron del establecimiento de un modelo de cocultura basado en las interacciones entre las células de cáncer de hueso y próstata11. Además, en 2012, Curtin y sus colaboradores informaron del desarrollo de un modelo tridimensional utilizando los coculturas ex vivo 12. El objetivo de estos modelos ex vivo es recrear las condiciones del microambiente óseo con la mayor precisión posible para poder caracterizar los mecanismos implicados en la remodelación ósea normal o patológica y evaluar la eficacia de los nuevos agentes terapéuticos.
El presente protocolo se basa en los procedimientos publicados por Garrett13 y Mohammad et al.14. Los cultivos de calvaria sómico se han utilizado como modelo experimental, ya que conservan la arquitectura tridimensional del hueso en desarrollo y las células óseas, incluyendo células en todas las etapas de diferenciación (es decir, osteoblastos, osteoclastos, osteoclasocitos, células estromales) que conducen a osteoclastos maduros y osteoblastos, así como a la matriz mineralizada14. El modelo ex vivo no representa totalmente el proceso patológico de las enfermedades óseas. Sin embargo, los efectos sobre la remodelación ósea o la osteolisis ósea inducida por cáncer se pueden medir con precisión.
Brevemente, este protocolo consta de los siguientes pasos: la disección de calvarias de ratones de 5-7 días de edad, precultivo de calvaria, aplicaciones de cultivo de calvaria (por ejemplo, cultivo en presencia de insulina, células cancerosas o medio condicionado, e incluso agentes con potencial terapéutico, según el objetivo de la investigación), fijación ósea y descalcificación calvaria, procesamiento de tejidos, análisis histológico e interpretación de resultados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well cell culture</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well non tissue culture</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>15705-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL cryovial</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-S0S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics-Antimycotic</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>P6154-100GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugue</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22628188</td>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2935-24X50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal resin</td>
			<td>Richard Allen</td>
			<td>8310-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td></td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modification of Eagles Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-017-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS (10X)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ebedding Cassettes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z672122-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Golden</td>
			<td>26400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Workstation</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A81000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Golden</td>
			<td>60600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>JALMEK</td>
			<td>E5325-17P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>BIO-S1650-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and scissors</td>
			<td>LANCETA HG</td>
			<td>74165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin buffered 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides 25 x 75 mm</td>
			<td>Premiere</td>
			<td>9105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris&#39;s Hematoxylin</td>
			<td>Jalmek</td>
			<td>SH025-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High profile blades</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1001259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoquinet</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>813150</td>
			<td>STP 120</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio Scope.A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>905200</td>
			<td>MICROM HM 355S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse food, 18% prot, 2018S</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>T.2018S.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orange G</td>
			<td>Biobasic</td>
			<td>OB0674-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Paraplast</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Section Flotation Bath</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8517X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Probiotek</td>
			<td>166-02072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax dispenser</td>
			<td>Electrothermal</td>
			<td>MH8523BX1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Golden</td>
			<td>534056-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring bone remodeling and recreating the tumor-bone microenvironment using calvaria co-culture and histomorphometry

El hueso es un tejido conectivo constituido por osteoblastos, osteocitos y osteoclastos y una matriz extracelular mineralizada, que le da su fuerza y flexibilidad y le permite cumplir sus funciones. El hueso está continuamente expuesto a una variedad de estímulos, que en condiciones patológicas pueden desregular la remodelación ósea. Para estudiar la biología ósea y las enfermedades y evaluar posibles agentes terapéuticos, ha sido necesario desarrollar modelos in vitro e in vivo.
Este manuscrito describe el proceso de disección y las condiciones de cultivo de las calvarias aisladas de ratones neonatales para estudiar la formación ósea y el microambiente tumoral óseo. A diferencia de los modelos in vitro e in vivo, este modelo ex vivo permite la preservación del entorno tridimensional del tejido, así como la diversidad celular del hueso mientras se cultúa en condiciones definidas para simular el microambiente deseado. Por lo tanto, es posible investigar la remodelación ósea y sus mecanismos, así como las interacciones con otros tipos de células, como las interacciones entre las células cancerosas y el hueso.
Los ensayos aquí indicados utilizan calvarias de ratones BALB/C de 5-7 días de edad. Los hemi-calvarias obtenidos se cultivan en presencia de insulina, células de cáncer de mama (MDA-MB-231) o medio acondicionado de cultivos celulares de cáncer de mama. Después del análisis, se estableció que la insulina indujo nueva formación ósea, mientras que las células cancerosas y su resorción ósea inducida media condicionada. El modelo calvarial se ha utilizado con éxito en la investigación básica y aplicada para estudiar el desarrollo óseo y las enfermedades óseas inducidas por el cáncer. En general, es una excelente opción para un ensayo fácil, informativo y de bajo costo.

Para evaluar la formación ósea en el modelo calvarial, cultivamos las hemi-calvarias en medios con o sin 50 g/ml de insulina. Las secciones de tejido se prepararon y teñiron con H&E. En estas condiciones, la histología demostró que se mantenía la integridad estructural del hueso calvarial, permitiendo la identificación de sus diferentes componentes(Figura 1). Las calvarias tratadas con insulina presentaron un aumento en la cantidad de tejido óseo en c...

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Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

El cultivo ex vivo de explantes óseos puede ser una herramienta valiosa para el estudio de la fisiología ósea y la evaluación potencial de fármacos en la remodelación ósea y enfermedades óseas. El protocolo presentado describe la preparación y el cultivo de calvarias aisladas de cráneos de ratones recién nacidos, así como sus aplicaciones.

Medición de la remodelación ósea y recreación del microambiente tumor-óseo utilizando la cocultura calvaria y la histomorfometría

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

El propósito de este procedimiento es tener un modelo ex vivo para evaluar la remodelación ósea y recrear el microambiente tumoral-hueso utilizando el cultivo de la calvaria o el co-cultivo con células cancerosas. La mayoría de la técnica de la calvaria es un sistema de cultivo de órganos que utiliza huesos de calvaria de ratones neonatales para evaluar la remodelación ósea. Puede probar el potencial terapéutico de diversas moléculas, o incluso recrear el microambiente tumoral óseo cuando utilice co-cultivos con células cancerosas.Todo ello en un ensayo sencillo y fácil en poco tiempo y bajo costo. El objetivo de esta técnica es contar con una herramienta para evaluar la regeneración ósea en el microambiente óseo canceroso, utilizando un modelo ex vivo de cultivo de órganos calvariales de ratón. Primero, selecciona un cachorro de ratón y colóquelo debajo del capó.Usamos calvaria de cachorros de ratón de cinco a siete días de edad. Tome la cabeza con la jeringa, corte la piel y despeje el área del cuero cabelludo lo suficiente para diseccionar la calvaria. Identifique las suturas del cráneo, sagital, coronal y lambdoids.Haga un corte recto a lo largo de las suturas lambdoide, a aproximadamente el nivel del ojo. Cortar a cada lado, de las suturas lambdoide hacia la sutura coronal. En ángulo 45, haga otro corte para conectar el extremo del corte hecho con el corte del fontanel anterior.Es extremadamente importante definir las suturas del cráneo, sagital, frontal, coronal, lambdoid, para garantizar la correcta inclusión de tejidos y análisis histología. Con fórceps finos, retire la calvaria y colócala en una cubierta de plato de Petri. Con un bisturí, haz un corte recto desde el fontanel posterior a lo largo de la sutura sagital a través de la sutura coronal.Se obtienen dos hemicalvarias. Recoge cada calvaria con los fórceps, y colócalos en un nuevo plato de Petri con PBS. Para el cultivo, coloque la hemicalvaria en una placa de cultivo de tejido de 24 pozos, que contenga un mililitro de medios, e incubar durante 24 horas a 37 grados.También podemos usar cultivos calvariales primarios para reproducir el microambiente tumoral-hueso para la resorción ósea. Para ello, co-cultivamos calvarias con células cancerosas, o con medios condicionados de células cancerosas. 24 horas más tarde, retire el soporte y sustitúyalo por un medio que contenga el tratamiento que desea probar.Si desea evaluar las células cancerosas y las interacciones óseas, o recrear el microambiente tumoral-hueso, pase la calvaria a una placa de unión celular baja, para evitar la unión de las células cancerosas a la placa. Pruebe las células cancerosas, contarlas y colocarlas cuidadosamente en la parte superior de la hemicalvaria. También puede utilizar medios condicionales de células cancerosas y utilizarlos para incubar las hemicalvarias.Incubar durante seis a siete días a 37 grados, con cinco por ciento de CO2. Al tercer día, cambie los medios de comunicación y continúe incubando. El número de células que se usan en el co-cultivo depende de la línea celular del cáncer.Primero necesita optimizar el número de celdas que se necesitan para inducir una respuesta en una. Después de la cultura, la calvaria pasa por un proceso de fijación, descalcificación e incrustada en parafina. Además, los tejidos se se dividen en un microtomo, se tiñen y se realiza un análisis histomorfométrico.La inclusión de la calvaria puede ser complicada. Para asegurarse de que el tejido está protegido durante la inclusión, puede colocar el tejido entre esponjas o usar un papel tisú u otro papel absorbente antes de ponerlo en el cassette. Para el procesamiento de tejidos, envuelva la hemicalvaria en papel tisú.A continuación, colóquelo en un cassette de incrustación, y fijar en búfer neutro en formalina, durante 24 horas a cuatro grados. Para descalcificar la calvaria, coloque el cassette en un EDTA del 10% durante 48 horas a cuatro grados. Procesar los casetes de tejido con la hemicalvaria en un procesador automático de tejidos.Siga un ciclo de rotación de día regular, luego, incluya en la parafina. Para el corte, corte cuatro secciones microticas con un microtoma, monte las secciones en diapositivas de microscopio de vidrio y manche con hematoxilina, eosina. El análisis histológico se utilizó para realizar análisis cuantitativos de la superficie ósea y las áreas de remodelación ósea.Las imágenes de la calvaria en los siete días fueron analizadas utilizando el software de imágenes. Para la evaluación cuantitativa, primero, defina el área para el análisis. Mira en las secciones de la telopa donde cuatro X para identificar la orientación y las suturas.Defina la sutura coronal e identifique la superficie ósea larga en un lado, y luego la superficie corta en el otro. Bajo el aumento 40X, identifique la sutura coronal y mueva dos o tres campos ópticos lejos de la sutura, a lo largo de la superficie larga. Capture la imagen de esta área para analizarla.Puede utilizar el software de imágenes para analizar la integridad estructural del hueso. Se puede realizar un análisis histomorfométrico cuantitativo para el espesor y el área ósea de la hemicalvaria. El análisis correcto de la calvaria depende de una buena incrustación y una orientación adecuada para obtener resultados histológicos consistentes.Asegúrese de usar al menos tres calvarias por condición experimental. Aquí, podemos ver la estructura del hueso. En naranja, se observa el hueso.También podemos ver la presencia del periosteo, el ostocito, el endosteo y otras partes del hueso. En nuestro caso, utilizamos insulina para aumentar la remodelación ósea. En comparación con un control, podemos ver un aumento significativo en el área ósea.Aquí, podemos ver el efecto de la línea celular MDA-MB-231 en el modelo calvaria. Podemos ver, en comparación con el control, que la presencia de células cancerosas induce factores osteolíticos que estimulan la destrucción ósea. Usamos el modelo de calvaria para medir la regeneración ósea y las interacciones entre células cancerosas y huesos por co-cultivos con células cancerosas e histología.También validamos nuestros datos mediante PCR cuantitativo en tiempo real. Este modelo ex vivo tiene muchas ventajas, como la organización tridimensional y la diversidad celular del hueso se conservan, y las condiciones experimentales se pueden controlar. Además, el modelo es simple, se pueden ver los resultados en un corto período de tiempo, y es de bajo costo.Y se puede combinar con otras técnicas, como PCR cuantitativa en tiempo real, microscopía y micro-CT.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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General protocolo muestra y médula de proceso para medir enfermedad Residual medible y células leucémicas en la leucemia mieloide aguda

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

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Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido de la pulpa y cocultivo con células de cáncer para estudiar sus interacciones

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

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Análisis De La Población Lateral En Líneas Celulares De Tumores Sólidos

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Co-cultivo De Glioblastoma Células Madre-como En Las Neuronas Modeladas Para Estudiar La Migración Y Las Interacciones Celulares

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Co-culture of Glutamatergic Neurons and Pediatric High-Grade Glioma Cells Into Microfluidic Devices to Assess Electrical Interactions

Cocultivo de neuronas glutamatérgicas y células pediátricas de glioma de alto grado en dispositivos microfluídicos para evaluar las interacciones eléctricas

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Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

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Microdisección láser industrializada guiada por inteligencia artificial para el análisis proteómico a microescala del microambiente tumoral

The tumor microenvironment (TME) represents a complex ecosystem comprised of dozens of distinct cell types, including tumor, stroma, and immune cell ...