Name: monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy
Uploaded: 2019-01-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Vi takker Steve Finkbeiner og medlemmer af Finkbeiner lab for banebrydende robot mikroskopi. Vi takker også Dan Peisach for bygning, den oprindelige software kræves til billedbehandling og automatiseret overlevelses analyse. Dette arbejde blev finansieret af National Institute for neurologiske lidelser og slagtilfælde (NINDS) R01-NS097542, University of Michigan Protein Folding sygdom initiativ og Ann Arbor aktivt mod ALS.

Alle hvirveldyr animalske arbejde blev godkendt af Udvalget om brug og pleje af dyr på University of Michigan (protokol # PRO00007096). Eksperimenter er nøje planlagt til at minimere antallet af dyr ofres. Gravid kvinde wild-type (WT), ikke-transgene lang Evans rotter (Rattus norvegicus) er opstaldet enkeltvis i kamre udstyret med miljøberigelse, og plejes af enhed for Laboratory Animal medicin (ULAM) på University of Michigan, i overensstemmelse med guiden NIH-understøttet for pleje og anvendelse af forsø...

<ol>
	<li>Lockshin, R. A., Zakeri, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+health+and+disease.">Cell death in health and disease.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 11, 1214-1224 (2007).</li><li>Kepp, O., Galluzzi, L., Lipinski, M., Yuan, J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+assays+for+drug+discovery.">Cell death assays for drug discovery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10, 221-237 (2011).</li><li>Lemasters, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+permeability+transition+in+cell+death:+a+common+mechanism+in+necrosis,+apoptosis+and+autophagy.">The mitochondrial permeability transition in cell death: a common mechanism in necrosis, apoptosis and autophagy.</a> Biochimica et Biophysica Acta Bioenergetics. , 177-196 (1998).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Chien, K. R., Abrams, J., Serroni, A., Martin, J. T., Farber, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+phospholipid+degradation+and+associated+membrane+dysfunction+in+irreversible,+ischemic+liver+cell+injury.">Accelerated phospholipid degradation and associated membrane dysfunction in irreversible, ischemic liver cell injury.</a> Journal of Biological Chemistry. 253, 4809-4817 (1978).</li><li>Zwaal, R. F. A., Comfurius, P., Bevers, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+exposure+of+phosphatidylserine+in+pathological+cells.">Surface exposure of phosphatidylserine in pathological cells.</a> Cell and Molecular Life Sciences. 62, 971-988 (2005).</li><li>Mitchell, D. B., Santone, K. S., Acosta, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+cytotoxicity+in+cultured+cells+by+enzyme+leakage.">Evaluation of cytotoxicity in cultured cells by enzyme leakage.</a> Journal of Tissue Culture Methods. 6, 113-116 (1980).</li><li>Moran, J. H., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+beta-NADH-linked+fluorescence+assay+for+lactate+dehydrogenase+in+cellular+death.">A rapid beta-NADH-linked fluorescence assay for lactate dehydrogenase in cellular death.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36, 41-44 (1996).</li><li>Mossman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+Application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Guerzoni, L. P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Modulation+of+TrkB+Receptor+Signaling+upon+Sequential+Delivery+of+Curcumin-DHA+Loaded+Carriers+Towards+Promoting+Neuronal+Survival.">In Vitro Modulation of TrkB Receptor Signaling upon Sequential Delivery of Curcumin-DHA Loaded Carriers Towards Promoting Neuronal Survival.</a> Pharmaceutical Research. 34 (2), 492-505 (2017).</li><li>Arrasate, M., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+microscope+system+for+determining+factors+that+predict+neuronal+fate.">Automated microscope system for determining factors that predict neuronal fate.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102, 3840-3845 (2005).</li><li>Christensen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivariate+survival+analysis+using+Cox&#8217;s+regression+model.">Multivariate survival analysis using Cox&#8217;s regression model.</a> Hepatology. 7, 1346-1358 (1987).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+induction+enhances+TDP43+turnover+and+survival+in+neuronal+ALS+models.">Autophagy induction enhances TDP43 turnover and survival in neuronal ALS models.</a> Nature Chemical Biology. 10, 677-685 (2014).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112, 7821-7826 (2015).</li><li>Malik, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrin+3-dependent+neurotoxicity+is+modified+by+nucleic+acid+binding+and+nucleocytoplasmic+localization.">Matrin 3-dependent neurotoxicity is modified by nucleic acid binding and nucleocytoplasmic localization.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Archbold, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP43+nuclear+export+and+neurodegeneration+in+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+frontotemporal+dementia.">TDP43 nuclear export and neurodegeneration in models of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia.</a> Scientific Reports. 8, 4606 (2018).</li><li>Green, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAN+translation+at+C9orf72-associated+repeat+expansions+is+selectively+enhanced+by+the+integrated+stress+response.">RAN translation at C9orf72-associated repeat expansions is selectively enhanced by the integrated stress response.</a> Nature Communications. 8, 2005 (2017).</li><li>Park, S. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+essential+Sis1+chaperone+reduces+TDP-43+effects+on+toxicity+and+proteolysis.">Overexpression of the essential Sis1 chaperone reduces TDP-43 effects on toxicity and proteolysis.</a> PLOS Genetics. 13, e1006805 (2017).</li><li>Gupta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proline/Arginine+Dipeptide+from+Hexanucleotide+Repeat+Expanded+C9ORF72+Inhibits+the+Proteasome.">The Proline/Arginine Dipeptide from Hexanucleotide Repeat Expanded C9ORF72 Inhibits the Proteasome.</a> eNeuro. 4, (2017).</li><li>Angelov, B., Angelova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+clustering+of+the+neurotrophin+receptor+TrkB+revealed+by+super-resolution+STED+microscopy.">Nanoscale clustering of the neurotrophin receptor TrkB revealed by super-resolution STED microscopy.</a> Nanoscale. 9 (28), 9797-9804 (2017).</li></ol>

Her præsenteres metode til direkte overvågning af neuronal overlevelse på grundlag af enkelt celle. I modsætning til traditionelle assays til celledød, der er begrænset til diskret tid point og hele populationer af celler, denne metode giver mulighed for kontinuerlig vurdering af en række faktorer såsom cellulære morfologi, protein udtryk eller lokalisering, og kan bestemme, hvordan hver faktor påvirker cellulære overlevelse i en fremadrettet måde.
Denne metode kan ændres så det ...

Unormal celledød er en drivende faktor i mange sygdomme, herunder kræft, neurodegeneration og slagtilfælde1. Robust og følsom assays til celledød er afgørende for karakterisering af disse lidelser, samt udviklingen af terapeutiske strategier til udvidelse eller indskrænkning cellulære overlevelse. Der er i øjeblikket snesevis af teknikker til at måle celledød, enten direkte eller gennem surrogat markører2. For eksempel, kan celledød vurderes visuelt ved hjælp af vitale farvestoffer, der selektivt pletter døde eller levende celler3, eller ved at overvåge forekomsten af specifikke fosfolipider på plasma membran4,5,6 . Målinger af intracellulære komponenter eller cellulære metabolitter frigives i medierne på cellulære opløsning kan også bruges som proxies for celle død7,8. Alternativt, cellulære levedygtighed kan estimeres ved at vurdere metaboliske aktivitet9,10. Selv om disse metoder giver hurtig vurdering af celle overlevelse, er de ikke uden forbehold. Hver teknik bemærker kulturen som en enkelt population, gør det umuligt at skelne mellem enkelte celler og deres unikke satser for overlevelse. Desuden er sådan befolkningsbaseret assays ude af stand til at måle faktorer, der kan være vigtige for celledød, herunder cellulære morfologi, protein udtryk eller lokalisering. I mange tilfælde disse assays er begrænset til diskret tid point, og giver mulighed ikke for kontinuerlig observation af celler over tid.
Derimod er langsgående Fluorescens mikroskopi en yderst fleksibel metode, der direkte og løbende overvåger risikoen for død på en enkelt celle grundlag11. Kort sagt, giver langsgående Fluorescens mikroskopi tusindvis af individuelle celler kan spores med jævne mellemrum i længere tid, giver mulighed for præcis bestemmelse af celledød og de faktorer, der øger eller undertrykke celledød. På sin base indebærer metoden forbigående Transfektion eller transduktion af celler med vektorer kodning fluorescerende proteiner. En unik fiduciary oprettes derefter, og placeringen af hver transfected celle i forhold til denne skelsættende tillader brugeren at billede og spore individuelle celler i løbet af timer, dage eller uger. Når disse billeder vises sekventielt, er celledød præget af karakteristiske ændringer i fluorescens, morfologi og fragmentering af cellen kroppen, gør det muligt for tildelingen af en dødstidspunktet for hver celle. Den beregnede sats af død, bestemmes af funktionen fare kan derefter kvantitativt i forhold mellem betingelser, eller relateret til Vælg cellulære karakteristika ved hjælp af inputområdet eller flerdimensional Cox proportional farer analyse12. Sammen, aktiverer disse tilgange den præcise og objektive forskelsbehandling af satserne for celledød blandt cellulære populationer, og identifikation af variabler, der væsentligt forudser celledød og/eller overlevelse (figur 1).
Selv om denne metode kan bruges til at overvåge overlevelse i enhver post mitotiske celletype i en række fra plating formater, vil denne protokol beskriver betingelserne for transfecting og imaging rotte kortikale neuroner kulturperler i en 96-brønd plade.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompactPrep Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12863</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride Hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kynurenic Acid Hydrate</td>
			<td>TCI</td>
			<td>H0303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly D-Lysine</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>52887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>TPP</td>
			<td>0876</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy

Standard celletoksicitet assays, som kræver indsamling af lysates eller fast celler på flere tidspunkter, har begrænset følsomhed og evne til at vurdere faktorer, der påvirker neuronal skæbne. Disse assays kræver observation af adskilte populationer af celler i diskret tidspunkter. Som et resultat, kan ikke individuelle celler fulgt prospektivt over tid, alvorligt begrænser evne til at skelne om subcellulært begivenheder, såsom puncta dannelse eller protein mislocalization, er patogene førere af sygdom, homeostatiske svar, eller blot tilfældigt fænomener. Encellede langsgående mikroskopi overvinder disse begrænsninger, så forskeren til at bestemme forskellene i overlevelse mellem befolkninger og drage årsagssammenhænge med øget følsomhed. Denne video guide vil skitsere en repræsentativ arbejdsproces for eksperimenter måling encellede overlevelse af rotte primære kortikale neuroner at udtrykke en fluorescerende proteiner markør. Seeren vil lære at opnå høj effektivitet transfections, indsamle og behandle billeder gør det muligt for potentielle sporingen af individuelle celler, og sammenligne den relative overlevelse af neuronal befolkninger ved hjælp af Cox proportional farer analyse.

Anvendelse af Transfektion proceduren beskrevet her, var DIV4 rat kortikale neuroner transfekteret med en plasmid kodning fluorescerende proteiner mApple. Start 24 h efter Transfektion, blev celler afbildet af Fluorescens mikroskopi hver 24 h i 10 på hinanden følgende dage. De resulterende billeder var organiseret som angivet i figur 2, så syet, stablet og scorede for celledød (figur 1). Figur 3 ...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Vi præsenterer her, en protokol for at overvåge overlevelse på grundlag af enkelt celle og identificere variabler, der væsentligt forudser celledød.

Overvågning Neuronal overlevelse via langsgående Fluorescens mikroskopi

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

Denne protokol gør det muligt for forskere at overvåge overlevelse på en enkelt celle basis og identificere variabler, der i væsentlig grad forudsige celledød eller overlevelse. Konventionelle cytotoksicitetsanalyser vurderer populationer af celler og mangler evnen til at diskriminere de enkelte celler. Mikroskopi i længderetningen gør det muligt at få til opgave at få hver celle i en population.Denne teknik er velegnet til evaluering af nye behandlingsformer for neurodegenerative sygdomme og andre tilstande. Denne metode har vist sig uvurderlig for at udforske sygdomsmekanismer i neurodegenerative tilstande, og kan anvendes med samme effekt mod andre lidelser, hvor celledød er af interesse. Forskere kan kæmpe med at opnå tilstrækkelig transfektion effektivitet uden unødig toksicitet.Øv dig med multikanalrøret og kendskab til protokollen bør mindske disse vanskeligheder over tid. Mikroskopi er en i sagens natur visuel metode. Derfor kan teknikken være lettere at forstå ved at se ud over at læse.Til at begynde, kombinere den passende mængde reduceret serum medier og transfektion reagens i et rør, og reduceret serum medier og DNA i et separat rør. Inkuber dem ved stuetemperatur i fem minutter. Derefter kombinere indholdet af begge rør og inkubere ved stuetemperatur i 20 minutter.Brug en multikanalrør og sterile plast trug til at vaske de kortikale neuroner to gange med 100 mikroliter af neurale basale medier pr brønd. Og gemme de betingede medier og andre resterende medier på 37 grader Celsius. NBM'en erstat med 100 mikroliter af tidligere forberedt NBKY-opløsning pr. brønd.Efter 20 minutter falder pipet 50 mikroliter af transfektionsregensen og DNA-blandingen med hinanden i hver brønd. Inkuber cellerne ved 37 grader Celsius i 20 minutter. Skyl cellerne to gange med NBKY opløsning.Derefter tilføje 100 mikroliter af konditionerede medier og 100 mikroliter af NBC løsning til brøndene. For at starte billeddannelse cellerne, placere 96 godt plade på en fluorescerende mikroskop. Brug et tillidsmærke, der er entydigt for hver plade, som reference til fremtidig justering, og gem et billede til fremtidig reference.Naviger derefter til interesseområder, og æd deres x- og y-koordinater i forhold til mærket. Brug et tillidsmærke, der er entydigt for hver plade, som reference til fremtidig justering, og gem et billede til fremtidig reference. Endelig fokusere på de transfekterede celler, der udtrykker en fluorescerende etiket.Tag flere billeder med jævne mellemrum i de relevante lysstofrør. Til at begynde med billedbehandling, dobbeltklik på Fiji-ikonet. Klik derefter på og træk billedbytstiserebehandlingsmakroen til Fiji-linjen for at åbne makroen i Fiji.Juster linjer to til syv af billedet understreger behandling af makro i henhold til tekstprotokollen. Klik derefter på syninger, og derefter gitter / samling syninger. Juster indstillingerne i rullemenuerne, type og rækkefølge, indtil der er frembragt et nøjagtigt syet billede.Juster gittertype- og stingrækkefølgevariabler i linje otte og ni i henhold til disse valg. Juster derefter linje 10 for at angive antallet af billeder pr. brønd og indstille indstillingen for undertraktion i linje 14 til sand, hvis det er nødvendigt. Juster linje 15 for at indstille den rullende kugleradius i henhold til tekstprotokollen, og klik på Kør.Endelig skal du åbne outputbilledet stakke og manuelt identificere de døde neuroner i henhold til tekstprotokollen. Post dataene i en regnearksfil. For at udføre statistisk analyse, skal du dobbeltklikke på ikonet for overlevelse.R-script. Fremhæv linje to, og klik på kørselsknappen for at indlæse overlevelsesbiblioteket. Skift derefter stien i linje fem for at kalde inputregnearket, og klik på knappen Kør.Fremhæv linje otte og ni, og klik på kørselsknappen for at udføre Cox proportional hazards-analysen. Fremhæv linjer 12 til 16 og 19 til 24. Klik på kørselsknappen for at afbilde den kumulative risiko for død og overlevelsesdataene som en Kaplan-Meier-kurve.I denne undersøgelse blev rottekortikale neuroner transficeret fire dage efter plating med en plasmid, der koderede fluorescerende protein M-æblet. 24 timer efter transfektion, neuroner blev afbildet af fluorescens mikroskopi hver 24 timer i 10 på hinanden følgende dage. Efter erhvervelse af billeder blev billeder behandlet og blev undersøgt sekventielt for at markere celledøden.Dødstidspunktet for hver celle blev bestemt af ændringer i fluorescens, morfologi og fragmentering af cellekroppen. Cox proportional hazards analyse udført på overlevelsesdata af de mutante neuroner resulterede i en fareforhold på 2,2. Dette resultat indikerede en hurtigere dødshastighed hos de mutante neuroner sammenlignet med populationen af vilde typer.Det vigtigste at huske, når du forsøger denne procedure er at pipet omhyggeligt. Minimering af lufteksponering og undgå bobler er afgørende for en vellykket transfektion. Efter transfektion, langsgående fluorescens mikroskopi kan bruges til at spore forskellige faktorer, der kan bidrage til celledød, herunder protein lokalisering, omsætning, og udtryk niveau, ud over celle overlevelse.Inden for neurodegeneration har den dynamiske karakter af mikroskopi i længderetningen kastet lys over, om sammenlægningen af sygdomsrelaterede proteiner udgør en giftig eller beskyttende begivenhed. Ingen af disse reagenser eller instrumenter er farlige.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Hurtig Mikro-iontophoresis af glutamat og GABA: et nyttigt redskab til Undersøge Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetisk manipulation af Cerebellær granuleneuroner<em&gt; In Vitro</em&gt; Og<em&gt; In Vivo</em&gt; At studere Neuronal morfologi og Migration

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Den neuromuskulære forbindelse: Måling Synapse Størrelse, fragmentering og ændringer i Synaptic Protein Density Brug Konfokal Fluorescens mikroskopi

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Optagelse Temperatur-induceret neuronal aktivitet gennem Overvågning Calcium Ændringer i det olfaktoriske pære af<em&gt; Xenopus laevis</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

Chronic Transcranial Electrical Stimulation and Intracortical Recording in Rats

Kronisk transkranial elektrisk Stimulation og Intracortical optagelse i rotter

Transcranial electrical stimulation (TES) is a powerful and relatively simple approach to diffusely influence brain activity either randomly or in a ...

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Overvågning af døgnrytmen ur genekspression i mus Suprachiasmatic kernen bruger fluorescens journalister

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene ...

Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Purkinje-cellernes overlevelse i Udsnitskulturer af Organotypiske cerebellar

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early ...

Brain Death Induction in Mice Using Intra-Arterial Blood Pressure Monitoring and Ventilation via Tracheostomy

Hjernedødinduktion hos mus ved hjælp af intraarteriel blodtryksovervågning og ventilation via tracheostomi

While both living donation and donation after circulatory death provide alternative opportunities for organ transplantation, donation after donor brain ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In Vitro Wedge Slice Forberedelse til efterligne In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Forberedelse voksen Drosophila melanogaster til hele hjernen Imaging under adfærd og Stimuli Svar

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...