Name: monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy
Uploaded: 2019-01-19T15:00:00
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हम अग्रणी रोबोट माइक्रोस्कोपी के लिए स्टीव Finkbeiner और Finkbeiner लैब के सदस्यों को धंयवाद । हम भी प्रारंभिक छवि प्रसंस्करण और स्वचालित अस्तित्व विश्लेषण के लिए आवश्यक सॉफ्टवेयर के निर्माण के लिए दान Peisach धंयवाद । इस काम के लिए राष्ट्रीय मस्तिष्क संबंधी विकार और स्ट्रोक के लिए संस्थान द्वारा वित्त पोषित किया गया (NINDS) R01-NS097542, मिशिगन प्रोटीन तह रोग पहल के विश्वविद्यालय, और एन आर्बर ALS के खिलाफ सक्रिय ।

सभी हड्डीवाला पशु काम मिशिगन विश्वविद्यालय (प्रोटोकॉल # PRO00007096) में पशुओं के उपयोग और देखभाल पर समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था । प्रयोगों को ध्यान से बलिदान पशुओं की संख्या को कम करने की योजना बनाई है ।...

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	<li>Lockshin, R. A., Zakeri, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+health+and+disease.">Cell death in health and disease.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 11, 1214-1224 (2007).</li><li>Kepp, O., Galluzzi, L., Lipinski, M., Yuan, J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+assays+for+drug+discovery.">Cell death assays for drug discovery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10, 221-237 (2011).</li><li>Lemasters, J. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+induction+enhances+TDP43+turnover+and+survival+in+neuronal+ALS+models.">Autophagy induction enhances TDP43 turnover and survival in neuronal ALS models.</a> Nature Chemical Biology. 10, 677-685 (2014).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112, 7821-7826 (2015).</li><li>Malik, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrin+3-dependent+neurotoxicity+is+modified+by+nucleic+acid+binding+and+nucleocytoplasmic+localization.">Matrin 3-dependent neurotoxicity is modified by nucleic acid binding and nucleocytoplasmic localization.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Archbold, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP43+nuclear+export+and+neurodegeneration+in+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+frontotemporal+dementia.">TDP43 nuclear export and neurodegeneration in models of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia.</a> Scientific Reports. 8, 4606 (2018).</li><li>Green, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAN+translation+at+C9orf72-associated+repeat+expansions+is+selectively+enhanced+by+the+integrated+stress+response.">RAN translation at C9orf72-associated repeat expansions is selectively enhanced by the integrated stress response.</a> Nature Communications. 8, 2005 (2017).</li><li>Park, S. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+essential+Sis1+chaperone+reduces+TDP-43+effects+on+toxicity+and+proteolysis.">Overexpression of the essential Sis1 chaperone reduces TDP-43 effects on toxicity and proteolysis.</a> PLOS Genetics. 13, e1006805 (2017).</li><li>Gupta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proline/Arginine+Dipeptide+from+Hexanucleotide+Repeat+Expanded+C9ORF72+Inhibits+the+Proteasome.">The Proline/Arginine Dipeptide from Hexanucleotide Repeat Expanded C9ORF72 Inhibits the Proteasome.</a> eNeuro. 4, (2017).</li><li>Angelov, B., Angelova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+clustering+of+the+neurotrophin+receptor+TrkB+revealed+by+super-resolution+STED+microscopy.">Nanoscale clustering of the neurotrophin receptor TrkB revealed by super-resolution STED microscopy.</a> Nanoscale. 9 (28), 9797-9804 (2017).</li></ol>

यहां, पद्धति को सीधे एक एकल कोशिका आधार पर ंयूरॉंस अस्तित्व पर नजर रखने के लिए प्रस्तुत किया है । कोशिका मृत्यु कि असतत समय अंक और कोशिकाओं की पूरी आबादी तक ही सीमित है के लिए पारंपरिक परख के विपरीत, इस व?...

असामान्य कोशिका मृत्यु कैंसर, neurodegeneration सहित कई रोगों में एक ड्राइविंग कारक है, और1स्ट्रोक. मजबूत और संवेदनशील सेल मौत के लिए परख इन विकारों के लक्षण वर्णन के लिए आवश्यक हैं, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विस्तार या सेलुलर अस्तित्व को कम करने के लिए चिकित्सीय रणनीतियों के विकास । वर्तमान में सेल मौत को मापने के लिए तकनीक के दर्जनों रहे हैं, या तो सीधे या किराए मार्करों2के माध्यम से । उदाहरण के लिए, कोशिका मृत्यु नेत्रहीन महत्वपूर्ण रंजक है कि चुनिंदा दाग मृत या जीवित कोशिकाओं3, या प्लाज्मा झिल्ली4,5,6 पर विशिष्ट फॉस्फोलिपिड की उपस्थिति की निगरानी द्वारा की मदद से मूल्यांकन किया जा सकता . intracellular घटकों या सेलुलर विघटन पर मीडिया में जारी चयापचयों की माप भी सेल मौत7,8के लिए परदे के नीचे के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । वैकल्पिक रूप से, सेलुलर व्यवहार्यता चयापचय गतिविधि9,10का आकलन करके अनुमानित किया जा सकता है । हालांकि इन तरीकों सेल अस्तित्व का आकलन करने के तेजी से साधन प्रदान करते हैं, वे निरंतर बिना नहीं कर रहे हैं । प्रत्येक तकनीक एक ही आबादी के रूप में संस्कृति का निरीक्षण, यह असंभव को व्यक्तिगत कोशिकाओं और अस्तित्व के अपने अद्वितीय दरों के बीच अंतर प्रतिपादन । इसके अलावा, इस तरह की आबादी आधारित परख कारकों है कि सेल मौत के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है, सेलुलर आकृति विज्ञान, प्रोटीन अभिव्यक्ति, या स्थानीयकरण सहित उपाय करने में असमर्थ हैं । कई मामलों में, इन परख असतत समय अंक तक ही सीमित हैं, और समय के साथ कोशिकाओं की सतत अवलोकन के लिए अनुमति नहीं है ।
इसके विपरीत, अनुदैर्ध्य प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी एक अत्यधिक लचीली पद्धति है जो सीधे और लगातार11एकल-कोशिका आधार पर मृत्यु के जोखिम पर नज़र रखता है । संक्षेप में, अनुदैर्ध्य प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी समय की विस्तारित अवधि के लिए नियमित अंतराल पर ट्रैक किया जा करने के लिए व्यक्तिगत कोशिकाओं के हजारों सक्षम बनाता है, सेल मौत के सटीक निर्धारण और कारकों है कि बढ़ाने या सेल मौत को दबाने की अनुमति. इसके आधार पर, विधि क्षणिक अभिकर्मक या कोशिकाओं के transductioning वैक्टर फ्लोरोसेंट प्रोटीन एंकोडिंग के साथ शामिल है । एक अनूठा प्रत्यई तो स्थापित है, और इस ऐतिहासिकता के संबंध में प्रत्येक transfected सेल की स्थिति उपयोगकर्ता छवि के लिए अनुमति देता है और घंटे, दिन, या सप्ताह के पाठ्यक्रम पर व्यक्तिगत कोशिकाओं को ट्रैक । जब इन छवियों को क्रमिक रूप से देखा जाता है, कोशिका मृत्यु प्रतिदीप्ति, आकृति विज्ञान, और कोशिका शरीर के विखंडन में विशिष्ट परिवर्तन द्वारा चिह्नित है, प्रत्येक कोशिका के लिए मृत्यु के एक समय के असाइनमेंट को सक्षम करने. मौत की गणना की दर, जोखिम समारोह द्वारा निर्धारित, तो मात्रात्मक शर्तों के बीच तुलना में किया जा सकता है, या सेलुलर विशेषताओं का चयन करने के लिए संबंधित univariate या बहुभिंनरूपी कॉक्स आनुपातिक खतरों12विश्लेषण । एक साथ, इन दृष्टिकोण सेलुलर आबादी के बीच सेल मौत की दरों का सही और उद्देश्य भेदभाव सक्षम है, और चर की पहचान है कि काफी सेल मौत की भविष्यवाणी और/
हालांकि इस विधि को चढ़ाना प्रारूपों के एक किस्म में किसी भी पोस्ट-mitotic सेल प्रकार में अस्तित्व पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, इस प्रोटोकॉल transfecting और इमेजिंग चूहे cortical एक ९६-अच्छी तरह से थाली में कल्चरित ंयूरॉंस के लिए शर्तों का वर्णन करेंगे ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompactPrep Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12863</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride Hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kynurenic Acid Hydrate</td>
			<td>TCI</td>
			<td>H0303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly D-Lysine</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>52887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>TPP</td>
			<td>0876</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy

मानक cytotoxicity परख है, जो एकाधिक समय बिंदुओं पर lysates या निश्चित कोशिकाओं के संग्रह की आवश्यकता है, सीमित संवेदनशीलता और कारकों का आकलन करने के लिए क्षमता है कि ंयूरॉंस भाग्य प्रभाव । इन परख असतत समय अंक में कोशिकाओं के अलग आबादी के अवलोकन की आवश्यकता है । एक परिणाम के रूप में, व्यक्तिगत कोशिकाओं को समय के साथ संभावित रूप से पीछा नहीं किया जा सकता, बुरी तरह puncta गठन या प्रोटीन स्थानीयकरण के रूप में उपसेलुलर घटनाओं, कि भेदभाव करने की क्षमता सीमित, रोग के रोगजनक ड्राइवरों, समस्थिति प्रतिक्रियाओं, या महज संयोग की घटनाएं । एकल सेल अनुदैर्ध्य माइक्रोस्कोपी इन सीमाओं पर काबू पा, शोधकर्ता आबादी के बीच अस्तित्व में मतभेद निर्धारित करने के लिए और बढ़ाया संवेदनशीलता के साथ कारण संबंधों को आकर्षित करने के लिए अनुमति देता है । इस वीडियो गाइड एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन मार्कर व्यक्त चूहे प्राथमिक cortical न्यूरॉन्स के एकल सेल अस्तित्व को मापने प्रयोगों के लिए एक प्रतिनिधि कार्यप्रवाह रूपरेखा होगी. दर्शक सीखना होगा कि कैसे उच्च दक्षता transfections प्राप्त करने के लिए, इकट्ठा करने और प्रक्रिया छवियों व्यक्तिगत कोशिकाओं के संभावित ट्रैकिंग को सक्षम करने, और ंयूरॉंस के सापेक्ष अस्तित्व की तुलना आबादी कॉक्स आनुपातिक खतरों विश्लेषण का उपयोग कर ।

अभिकर्मक प्रक्रिया का प्रयोग यहां वर्णित है, DIV4 चूहा cortical ंयूरॉंस एक प्लाज्मिड फ्लोरोसेंट प्रोटीन mApple एंकोडिंग के साथ transfected थे । 24 घंटे के बाद अभिकर्मक, कोशिकाओं प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्?...

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Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

यहां, हम एक एकल सेल के आधार पर अस्तित्व की निगरानी और चर कि काफी सेल मौत की भविष्यवाणी की पहचान करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद ।

अनुदैर्ध्य प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के माध्यम से ंयूरॉन अस्तित्व की निगरानी

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

यह प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं को एकल-कोशिका आधार पर अस्तित्व की निगरानी करने और उन चरों की पहचान करने में सक्षम बनाता है जो सेल मृत्यु या अस्तित्व की काफी भविष्यवाणी करते हैं। पारंपरिक साइटोटॉक्सिकिटी परख कोशिकाओं की आबादी का आकलन करता है और व्यक्तिगत कोशिकाओं को भेदभाव करने की क्षमता की कमी है। देशांतर माइक्रोस्कोपी एक आबादी में प्रत्येक कोशिका के लिए मौत के समय के असाइनमेंट की अनुमति देता है ।यह तकनीक न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों और अन्य स्थितियों के लिए नए उपचारों के मूल्यांकन के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है। यह विधि न्यूरोडीजेनेरेटिव स्थितियों में रोग तंत्र की खोज के लिए अमूल्य साबित हुई है, और अन्य विकारों के प्रति समान प्रभावकारिता के साथ लागू किया जा सकता है जिसमें सेल मृत्यु रुचि की है। शोधकर्ताओं ने अनुचित विषाक्तता के बिना पर्याप्त ट्रांसफैक्शन क्षमता प्राप्त करने के साथ संघर्ष कर सकते हैं ।मल्टीचैनल पिपेट और प्रोटोकॉल के साथ अपनेपन के साथ अभ्यास समय के साथ इन कठिनाई को कम करना चाहिए। माइक्रोस्कोपी एक स्वाभाविक दृश्य पद्धति है। इसलिए इस तकनीक को पढ़ने के अलावा देखने से ज्यादा आसानी से समझ में आ सकता है।शुरू करने के लिए, एक ट्यूब में कम सीरम मीडिया और ट्रांसफैक्शन रिएजेंट की उचित मात्रा को मिलाएं, और सीरम मीडिया और डीएनए को एक अलग ट्यूब में कम करें। उन्हें पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें। फिर, दोनों ट्यूबों की सामग्री को मिलाएं और कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।एक मल्टीचैनल पिपेट और स्टरल प्लास्टिक गर्त का उपयोग करें कॉर्टिकल न्यूरॉन्स को दो बार धोने के लिए तंत्रिका बेसल मीडिया के 100 माइक्रोलीटर के साथ अच्छी तरह से। और वातानुकूलित मीडिया और अन्य शेष मीडिया को 37 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। एनबीएम को पहले से तैयार NBKY समाधान के 100 माइक्रोलीटर के साथ बदलें।20 मिनट के बाद, ट्रांसफैक्शन रीएजेंट और डीएनए मिश्रण के 50 माइक्रोलीटर प्रत्येक कुएं में ड्रॉपवाइज होते हैं। कोशिकाओं को 20 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। एनबीकेवाई समाधान के साथ दो बार कोशिकाओं को कुल्लाएं।फिर कुओं में वातानुकूलित मीडिया के 100 माइक्रोलीटर और एनबीसी समाधान के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। कोशिकाओं इमेजिंग शुरू करने के लिए, एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप पर 96 अच्छी तरह से प्लेट रखें। भविष्य के संरेखण के संदर्भ के रूप में प्रत्येक प्लेट के लिए अद्वितीय प्रत्ययी चिह्न का उपयोग करें, और भविष्य के संदर्भ के लिए एक छवि को बचाएं।फिर, ब्याज के क्षेत्रों में नेविगेट करें और निशान के सापेक्ष अपने एक्स और वाई निर्देशांक रिकॉर्ड करें। भविष्य के संरेखण के संदर्भ के रूप में प्रत्येक प्लेट के लिए अद्वितीय प्रत्ययी चिह्न का उपयोग करें, और भविष्य के संदर्भ के लिए एक छवि को बचाएं। अंत में, फ्लोरोसेंट लेबल व्यक्त करने वाली संक्रमित कोशिकाओं पर ध्यान केंद्रित करें।उपयुक्त फ्लोरोसेंट चैनलों में नियमित रूप से दूरी वाले अंतराल पर कई छवियां लें। इमेज प्रोसेसिंग से शुरू करने के लिए, फिजी आइकन पर डबल क्लिक करें। फिर, फिजी के भीतर मैक्रो खोलने के लिए फिजी बार पर प्रसंस्करण मैक्रो को रेखांकित करने वाली छवि को क्लिक करें और खींचें।टेक्स्ट प्रोटोकॉल के अनुसार इमेज के दो से सात लाइनों को प्रोसेसिंग मैक्रो को रेखांकित करें। फिर, सिलाई पर क्लिक करें, और फिर ग्रिड/संग्रह सिलाई । ड्रॉपडाउन मेनू, प्रकार और ऑर्डर के भीतर सेटिंग्स को तब तक समायोजित करें, जब तक कि सही रूप से सिले हुए छवि का उत्पादन न हो जाए।इन चयनों के अनुसार आठ और नौ लाइनों में ग्रिड प्रकार और सिलाई आदेश चर समायोजित करें। फिर, लाइन 10 को समायोजित करने के लिए अच्छी तरह से प्रति छवियों की संख्या निर्दिष्ट करने के लिए और लाइन 14 में पृष्ठभूमि घटाव विकल्प सेट सच करने के लिए, यदि आवश्यक हो । टेक्स्ट प्रोटोकॉल के अनुसार रोलिंग बॉल त्रिज्या सेट करने के लिए लाइन 15 को समायोजित करें, और रन पर क्लिक करें।अंत में, आउटपुट इमेज स्टैक खोलें और टेक्स्ट प्रोटोकॉल के अनुसार मृत न्यूरॉन्स की मैन्युअल रूप से पहचान करें। स्प्रेडशीट फाइल में डेटा रिकॉर्ड करें। सांख्यिकीय विश्लेषण करने के लिए, अस्तित्व के लिए आइकन पर डबल क्लिक करें।आर स्क्रिप्ट। लाइन दो को हाइलाइट करें और सर्वाइवल लाइब्रेरी लोड करने के लिए रन बटन पर क्लिक करें। इसके बाद इनपुट स्प्रेडशीट को कॉल करने के लिए लाइन फाइव में रास्ता बदलें और रन बटन पर क्लिक करें ।आठ और नौ लाइनों को हाइलाइट करें, और कॉक्स आनुपातिक खतरों विश्लेषण करने के लिए रन बटन पर क्लिक करें। लाइनों को 12 से 16 और 19 से 24 को हाइलाइट करें। रन बटन पर क्लिक करें मौत के संचयी जोखिम और एक Kaplan-Meier वक्र के रूप में अस्तित्व के डेटा की साजिश ।इस अध्ययन में, चूहा कॉर्टिकल न्यूरॉन्स फ्लोरोसेंट प्रोटीन एम सेब को एन्कोडिंग करने वाले प्लाज्मिड के साथ चार दिनों के बाद चढ़ाना पर संक्रमित थे। 24 घंटे ट्रांसफैक्शन के बाद न्यूरॉन्स को लगातार 10 दिनों तक हर 24 घंटे फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी से इमेज किया गया । छवि अधिग्रहण के बाद, छवियों को संसाधित किया गया था और सेल मौत को चिह्नित करने के लिए क्रमिक रूप से जांच की गई थी।प्रत्येक कोशिका के लिए मृत्यु का समय फ्लोरेसेंस, आकृति विज्ञान और कोशिका शरीर के विखंडन में परिवर्तन से निर्धारित किया गया था। उत्परिवर्ती न्यूरॉन्स के अस्तित्व के आंकड़ों पर किए गए कॉक्स आनुपातिक खतरों का विश्लेषण 2.2 का जोखिम अनुपात हुआ। इस परिणाम ने जंगली प्रकार की आबादी की तुलना में उत्परिवर्ती न्यूरॉन्स में मौत की तेज दर का संकेत दिया।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय याद रखने के लिए सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि सावधानी से पिपेट करना है। हवा के संपर्क को कम करना और बुलबुले से बचना एक सफल ट्रांसफैक्शन के लिए महत्वपूर्ण है। ट्रांसफैक्शन के बाद, देशांतर फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग सेल अस्तित्व के अलावा प्रोटीन स्थानीयकरण, कारोबार और अभिव्यक्ति स्तर सहित सेल मृत्यु में योगदान देने वाले विभिन्न कारकों को ट्रैक करने के लिए किया जा सकता है।न्यूरो अध: पतन के क्षेत्र के भीतर, देशांतर माइक्रोस्कोपी की गतिशील प्रकृति ने इस बात पर प्रकाश डाला है कि क्या रोग से जुड़े प्रोटीन का एकत्रीकरण विषाक्त या सुरक्षात्मक घटना का प्रतिनिधित्व करता है । इनमें से कोई भी अभिकर् ता या उपकरण खतरनाक नहीं है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

वीवो में माउस Suprachiasmatic नाभिक में Circadian घड़ी जीन अभिव्यक्ति की निगरानी प्रतिदीप्ति पत्रकारों का उपयोग

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene ...

Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

ऑर्गानोटिपिक सेरिबेलर स्लाइस संस्कृतियों में पुरकिंजे सेल सर्वाइवल

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early ...

Brain Death Induction in Mice Using Intra-Arterial Blood Pressure Monitoring and Ventilation via Tracheostomy

ट्रेकोस्टोमी के माध्यम से इंट्रा-धमनी रक्तचाप निगरानी और वेंटिलेशन का उपयोग करचूहों में मस्तिष्क मृत्यु प्रेरण

While both living donation and donation after circulatory death provide alternative opportunities for organ transplantation, donation after donor brain ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

विवो न्यूरोनल सर्किट कनेक्टिविटी में नकल करने के लिए इन विट्रो वेज स्लाइस तैयारी

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

व्यवहार और उत्तेजनाओं प्रतिक्रियाओं के दौरान पूरे मस्तिष्क इमेजिंग के लिए वयस्क ड्रोसोफिला मेलानोगेस्टर तैयार करना

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...