Name: monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy
Uploaded: 2019-01-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Vi takker Steve Finkbeiner og medlemmer av Finkbeiner laboratorium for banebrytende robot mikroskopi. Vi takker også Dan Peisach for den første programvaren kreves for bildebehandling og automatisert overlevelse analyse. Dette arbeidet ble finansiert av National Institute for nevrologiske lidelser og strek (NINDS) R01-NS097542, Universitetet i Michigan Protein Folding sykdom initiativ og Ann Arbor aktive mot ALS.

Alle virveldyr dyr arbeid ble godkjent av komiteen på bruk og vare på dyrene ved University of Michigan (protokollen # PRO00007096). Eksperimenter er nøye planlagt å minimere antallet av dyr ofret. Gravid kvinne vill-type (WT), ikke-transgene lang Evans rotter (Rattus norvegicus) ligger enkeltvis i rom utstyrt med miljømessig berikelse, og tatt vare på av enheten for laboratoriet dyr medisin (ULAM) ved University of Michigan, i samsvar med NIH-støttet Guide og bruk av forsøksdyr. Alle rotter ble holdt i ...

<ol>
	<li>Lockshin, R. A., Zakeri, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+health+and+disease.">Cell death in health and disease.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 11, 1214-1224 (2007).</li><li>Kepp, O., Galluzzi, L., Lipinski, M., Yuan, J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+assays+for+drug+discovery.">Cell death assays for drug discovery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10, 221-237 (2011).</li><li>Lemasters, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+permeability+transition+in+cell+death:+a+common+mechanism+in+necrosis,+apoptosis+and+autophagy.">The mitochondrial permeability transition in cell death: a common mechanism in necrosis, apoptosis and autophagy.</a> Biochimica et Biophysica Acta Bioenergetics. , 177-196 (1998).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Chien, K. R., Abrams, J., Serroni, A., Martin, J. T., Farber, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+phospholipid+degradation+and+associated+membrane+dysfunction+in+irreversible,+ischemic+liver+cell+injury.">Accelerated phospholipid degradation and associated membrane dysfunction in irreversible, ischemic liver cell injury.</a> Journal of Biological Chemistry. 253, 4809-4817 (1978).</li><li>Zwaal, R. F. A., Comfurius, P., Bevers, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+exposure+of+phosphatidylserine+in+pathological+cells.">Surface exposure of phosphatidylserine in pathological cells.</a> Cell and Molecular Life Sciences. 62, 971-988 (2005).</li><li>Mitchell, D. B., Santone, K. S., Acosta, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+cytotoxicity+in+cultured+cells+by+enzyme+leakage.">Evaluation of cytotoxicity in cultured cells by enzyme leakage.</a> Journal of Tissue Culture Methods. 6, 113-116 (1980).</li><li>Moran, J. H., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+beta-NADH-linked+fluorescence+assay+for+lactate+dehydrogenase+in+cellular+death.">A rapid beta-NADH-linked fluorescence assay for lactate dehydrogenase in cellular death.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36, 41-44 (1996).</li><li>Mossman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+Application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Guerzoni, L. P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Modulation+of+TrkB+Receptor+Signaling+upon+Sequential+Delivery+of+Curcumin-DHA+Loaded+Carriers+Towards+Promoting+Neuronal+Survival.">In Vitro Modulation of TrkB Receptor Signaling upon Sequential Delivery of Curcumin-DHA Loaded Carriers Towards Promoting Neuronal Survival.</a> Pharmaceutical Research. 34 (2), 492-505 (2017).</li><li>Arrasate, M., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+microscope+system+for+determining+factors+that+predict+neuronal+fate.">Automated microscope system for determining factors that predict neuronal fate.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102, 3840-3845 (2005).</li><li>Christensen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivariate+survival+analysis+using+Cox&#8217;s+regression+model.">Multivariate survival analysis using Cox&#8217;s regression model.</a> Hepatology. 7, 1346-1358 (1987).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+induction+enhances+TDP43+turnover+and+survival+in+neuronal+ALS+models.">Autophagy induction enhances TDP43 turnover and survival in neuronal ALS models.</a> Nature Chemical Biology. 10, 677-685 (2014).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112, 7821-7826 (2015).</li><li>Malik, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrin+3-dependent+neurotoxicity+is+modified+by+nucleic+acid+binding+and+nucleocytoplasmic+localization.">Matrin 3-dependent neurotoxicity is modified by nucleic acid binding and nucleocytoplasmic localization.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Archbold, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP43+nuclear+export+and+neurodegeneration+in+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+frontotemporal+dementia.">TDP43 nuclear export and neurodegeneration in models of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia.</a> Scientific Reports. 8, 4606 (2018).</li><li>Green, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAN+translation+at+C9orf72-associated+repeat+expansions+is+selectively+enhanced+by+the+integrated+stress+response.">RAN translation at C9orf72-associated repeat expansions is selectively enhanced by the integrated stress response.</a> Nature Communications. 8, 2005 (2017).</li><li>Park, S. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+essential+Sis1+chaperone+reduces+TDP-43+effects+on+toxicity+and+proteolysis.">Overexpression of the essential Sis1 chaperone reduces TDP-43 effects on toxicity and proteolysis.</a> PLOS Genetics. 13, e1006805 (2017).</li><li>Gupta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proline/Arginine+Dipeptide+from+Hexanucleotide+Repeat+Expanded+C9ORF72+Inhibits+the+Proteasome.">The Proline/Arginine Dipeptide from Hexanucleotide Repeat Expanded C9ORF72 Inhibits the Proteasome.</a> eNeuro. 4, (2017).</li><li>Angelov, B., Angelova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+clustering+of+the+neurotrophin+receptor+TrkB+revealed+by+super-resolution+STED+microscopy.">Nanoscale clustering of the neurotrophin receptor TrkB revealed by super-resolution STED microscopy.</a> Nanoscale. 9 (28), 9797-9804 (2017).</li></ol>

Her presenteres metodikk direkte overvåke neuronal overlevelse på encellede basis. I motsetning til tradisjonelle analyser for celledød som er begrenset til diskret tidspunkt og hele populasjoner av celler, gir denne metoden kontinuerlig vurdering av en rekke faktorer som mobilnettet morfologi, protein uttrykk eller lokalisering, og kan bestemme hvordan hver faktor påvirker mobilnettet overlevelse i en potensiell måte.
Denne metoden kan endres for å passe en rekke eksperimentelle behov. ...

Unormal celledød er en drivende faktor i mange sykdommer, inkludert kreft, neurodegeneration og strek1. Robust og sensitive analyser for celledød er avgjørende for karakterisering av disse lidelsene, samt utvikling av strategier for utvider eller reduserer mobilnettet overlevelse. Det finnes dusinvis av teknikker for måling celledød, enten direkte eller via surrogat markører2. For eksempel kan celledød vurderes visuelt ved hjelp av vitale fargestoffer som selektivt flekker død eller levende celler3, eller ved å overvåke utseendet på bestemte fosfolipider på plasma membranen4,5,6 . Målinger av intracellular komponenter eller cellular metabolitter ut i media på mobilnettet oppløsning kan også brukes som proxyer for celle død7,8. Alternativt kan mobilnettet levedyktighet tilnærmes ved å vurdere metabolsk aktivitet9,10. Selv om disse metodene gir rask måte å vurdere celle overlevelse, er de ikke uten begrensninger. Hver teknikk observerer kulturen som en enkelt befolkning, gjengivelse det umulig å skille mellom individuelle celler og deres unike priser for å overleve. Videre er slik befolkningen-baserte analyser ikke måler faktorer som kan være viktige for celledød, inkludert mobilnettet morfologi, protein uttrykk eller lokalisering. I mange tilfeller disse analyser er begrenset til diskret tidspunkt og tillater ikke kontinuerlig observasjon av celler over tid.
Langsgående fluorescens mikroskopi er derimot en svært fleksibel metode som direkte og kontinuerlig overvåker risiko for død på en enkeltcelle basis11. I korte trekk kan langsgående fluorescens mikroskopi tusen individuelle celler spores regelmessig over lengre tid, slik at presise avgjørelser av celledød og faktorene som forbedrer eller undertrykke celledød. På sin base innebærer metoden forbigående transfection eller signaltransduksjon celler med vektorer koding fluorescerende proteiner. En unik tillitsforhold opprettes deretter, og plasseringen av hver transfekterte celle i forhold til dette landemerket lar brukeren image og spore individuelle celler i løpet av timer, dager eller uker. Når disse bildene vises etter hverandre, merkes celledød av karakteristiske endringer i fluorescens morfologi og fragmentering av cellen kroppen, aktivere tilordningen av gangen død for hver celle. De beregnede satsen av død, bestemmes av funksjonen fare, kan deretter kvantitativt forhold mellom vilkår eller relatert til Velg mobilnettet egenskaper univariate eller multivariabel Cox proporsjonal farer analyse12. Sammen kan disse metodene nøyaktig og objektive diskriminering av celledød blant mobilnettet populasjoner og identifikasjon av variabler som predikerer betydelig celledød og/eller overlevelse (figur 1).
Selv om denne metoden kan brukes til å overvåke overlevelse i en post mitotisk celle type i en rekke plating formater, vil denne protokollen beskrive transfecting og imaging rotte kortikale nevroner kultivert i en 96-brønns plate.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompactPrep Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12863</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride Hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kynurenic Acid Hydrate</td>
			<td>TCI</td>
			<td>H0303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly D-Lysine</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>52887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>TPP</td>
			<td>0876</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy

Standard cytotoksisitet analyser, som krever samlingen av lysates eller fast celler på flere tidspunkt, har begrenset følsomhet og kapasitet til å vurdere faktorene som påvirker neuronal skjebne. Disse analyser krever observasjon av egen befolkningen i celler på atskilte tidspunkt. Resultatet kan ikke enkeltceller følges prospektivt over tid, sterkt begrense muligheten til å diskriminere om subcellular hendelser, for eksempel puncta formasjon eller protein mislocalization, er patogene driverne av sykdom, homøostatisk svar, eller bare tilfeldig fenomener. Encellede langsgående mikroskopi overvinner disse begrensningene, slik at forskeren til å finne forskjellen i overlevelse mellom bestander og tegne årsaksforhold med økt følsomhet. Denne video guide vil skissere en representant arbeidsflyt for eksperimenter måle encellede overlevelse av rotte primære kortikale nevroner uttrykke merketråd fluorescerende protein. Betrakteren vil lære å oppnå høy virkningsgrad transfections, samle inn og behandle bilder slik at potensielle sporing av individuelle celler, og sammenligne relative overlevelse av neuronal bestander Cox proporsjonal farer analyse.

Bruke hva fremgangsmåten som er beskrevet her, DIV4 rotten kortikale nevroner ble transfekterte med en plasmider koding fluorescerende protein mApple. Fra 24 timer etter transfection, ble celler fotografert av fluorescens mikroskopi hver 24 timer for 10 dager. Resulterende bildene ble organisert som vist i figur 2, så sydd, stablet, og scoret for celledød (figur 1). Figur 3 viser en gang kurs for ...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Her presenterer vi en protokoll for å overvåke overlevelse på encellede basis og identifisere variabler som predikerer betydelig celledød.

Overvåking Neuronal overlevelse via langsgående fluorescens mikroskopi

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

Denne protokollen gjør det mulig for forskere å overvåke overlevelse på encellet basis og identifisere variabler som i betydelig grad forutsier celledød eller overlevelse. Konvensjonelle cytotoksisitetsanalyser vurderer populasjoner av celler og mangler evnen til å diskriminere individuelle celler. Langsgående mikroskopi tillater tildeling av dødstid for hver celle i en befolkning.Denne teknikken er godt egnet for å evaluere nye terapier for nevrodegenerative sykdommer og andre forhold. Denne metoden har vist seg uvurderlig for å utforske sykdomsmekanismer i nevrodegenerative forhold, og kan brukes med lik effekt mot andre lidelser der celledød er av interesse. Forskere kan slite med å oppnå tilstrekkelig transfection effektivitet uten unødig toksisitet.Øv med flerkanals pipet og kjennskap til protokollen bør redusere disse vanskelighetene over tid. Mikroskopi er en iboende visuell metodikk. Derfor kan teknikken lettere forstås ved å se i tillegg til å lese.Til å begynne med kombinerer du riktig mengde redusert serummedie og transfeksjonsreagens i ett rør, og reduserte serummedier og DNA i et eget rør. Inkuber dem ved romtemperatur i fem minutter. Deretter kombinerer du innholdet i begge rørene og inkuberer ved romtemperatur i 20 minutter.Bruk en flerkanals pipet og steril plast trau for å vaske kortikale nevroner to ganger med 100 mikroliter av nevrale basalmedier per brønn. Og lagre de bedede mediene og andre gjenværende medier på 37 grader Celsius. Bytt UT NBM med 100 mikroliter av tidligere forberedt NBKY-oppløsning per godt.Etter 20 minutter faller pipetter 50 mikroliter av transfeksjonsreagensen og DNA-blandingen inn i hver brønn. Inkuber cellene ved 37 grader Celsius i 20 minutter. Skyll cellene to ganger med NBKY-oppløsning.Tilsett deretter 100 mikroliter med bestemte medier og 100 mikroliter nbc-løsning til brønnene. For å begynne å forestille seg cellene, plasser 96-brønnplaten på et fluorescerende mikroskop. Bruk et fiduciary som er unikt for hver plate som referanse for fremtidig justering, og lagre et bilde for fremtidig referanse.Deretter navigerer du til interesseområder og registrerer sine x- og y-koordinater i forhold til merket. Bruk et fiduciary som er unikt for hver plate som referanse for fremtidig justering, og lagre et bilde for fremtidig referanse. Til slutt fokuserer du på de trans infiserte cellene som uttrykker en fluorescerende etikett.Ta flere bilder med jevne mellomrom i de aktuelle fluorescerende kanalene. Til å begynne med bildebehandling, dobbeltklikk på Fiji-ikonet. Deretter klikker og drar du bilde understrekingsmakroen til Fiji-linjen for å åpne makroen i Fiji.Juster linje to til syv av bildet understreker behandlingsmakroen i henhold til tekstprotokollen. Deretter klikker du på søm, og deretter rutenett / samling søm. Juster innstillingene i rullegardinmenyene, typen og rekkefølgen, til et nøyaktig sydd bilde produseres.Juster rutenetttype og stingrekkefølgevariabler i linje åtte og ni i henhold til disse valgene. Juster deretter linje 10 for å angi antall bilder per brønn og angi subtraksjonsalternativet for bakgrunnen i linje 14 til true, om nødvendig. Juster linje 15 for å angi rullende kuleradius i henhold til tekstprotokollen, og klikk Kjør.Til slutt åpner du utdatabildestablene og identifiserer de døde nevronene manuelt i henhold til tekstprotokollen. Registrere dataene i en regnearkfil. For å utføre statistisk analyse, dobbeltklikk på ikonet for overlevelse.R-skript. linje to, og klikk på kjør-knappen for å laste inn overlevelsesbiblioteket. Deretter endrer du banen i linje fem for å ringe inndataregnearket, og klikker kjør-knappen.linje åtte og ni, og klikk på løpsknappen for å utføre Cox proporsjonal fareanalyse. linje 12 til 16 og 19 til 24. Klikk på kjør-knappen for å plotte den kumulative risikoen for død og overlevelsesdataene som en Kaplan-Meier-kurve.I denne studien ble rottekortikale nevroner transfected på fire dager etter plating med en plasmid koding fluorescerende protein M eple. 24 timer etter transfeksjon ble nevroner avbildet av fluorescensmikroskopi hver 24. Etter bildeoppkjøp ble bildene behandlet og undersøkt sekvensielt for å markere celledøden.Dødstidspunktet for hver celle ble bestemt av endringer i fluorescens, morfologi og fragmentering av cellekroppen. Cox proporsjonale farer analyse utført på overlevelsesdata av mutant nevroner resulterte i en fareforhold på 2,2. Dette resultatet indikerte en raskere dødshastighet i mutantnevronene i forhold til den ville typen populasjon.Det viktigste å huske når du prøver denne prosedyren er å pipet nøye. Minimere lufteksponering og unngå bobler er avgjørende for en vellykket transfection. Etter transfection kan langsgående fluorescensmikroskopi brukes til å spore ulike faktorer som kan bidra til celledød, inkludert protein lokalisering, omsetning og uttrykksnivå, i tillegg til celleoverlevelse.Innen nevrodegenerasjon har den dynamiske naturen til langsgående mikroskopi belyst om aggregering av sykdomsrelaterte proteiner representerer en giftig eller beskyttende hendelse. Ingen av disse reagensene eller instrumentene er farlige.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Fast Micro-iontoforese av glutamat og GABA: Et nyttig verktøy for å etterforske Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetisk manipulering av Lillehjernen Granule Neuroner<em&gt; In Vitro</em&gt; Og<em&gt; I Vivo</em&gt; Å studere nevrale morfologi og migrasjon

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Nevromuskulære krysset: Måling Synapse Størrelse, fragmentering og endringer i Synaptic Protein Tetthet Bruke Confocal Fluorescensmikroskopi

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Opptak Temperatur-indusert neuronal aktivitet gjennom Overvåking Kalsium endringer i luktelappen av<em&gt; Xenopus laevis</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

Chronic Transcranial Electrical Stimulation and Intracortical Recording in Rats

Kronisk Transkraniell elektrisk stimulering og Intracortical opptak i rotter

Transcranial electrical stimulation (TES) is a powerful and relatively simple approach to diffusely influence brain activity either randomly or in a ...

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

I Vivo Overvåking av Circadian klokke genuttrykk i musen Suprachiasmatic kjernen bruker fluorescens journalister

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene ...

Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Purkinje Cell Survival i Organotypic lillehjernen Slice kulturer

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early ...

Brain Death Induction in Mice Using Intra-Arterial Blood Pressure Monitoring and Ventilation via Tracheostomy

Hjernedødinduksjon hos mus ved hjelp av intraarteriell blodtrykksovervåking og ventilasjon via trakeostomi

While both living donation and donation after circulatory death provide alternative opportunities for organ transplantation, donation after donor brain ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In Vitro Kile skive Forberedelse for å etterligne In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Forbereder voksen drosophila melanogaster for hele hjerneavbildning under atferd og stimuli responser

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...