Name: monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy
Uploaded: 2019-01-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Мы благодарим Стива Finkbeiner и члены Finkbeiner лаборатории для новаторских роботизированных микроскопии. Мы также благодарим Dan Пейсах за строительство первоначального программного обеспечения для обработки изображений и автоматизированный анализ выживаемости. Эта работа финансировалась Национальный институт неврологических расстройств и инсульта (NINDS) R01-NS097542, Мичиганского университета протеин складные болезни инициативы, и Энн Арбор активных против ALS.

Все позвоночных животных работы был одобрен Комитетом по использованию и уходу за животных в университете штата Мичиган (протокол # PRO00007096). Эксперименты, тщательно планируется свести к минимуму количество животных в жертву. Беременных женщин одичал тип (WT), не трансгенных крыс длинные ?...

<ol>
	<li>Lockshin, R. A., Zakeri, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+health+and+disease.">Cell death in health and disease.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 11, 1214-1224 (2007).</li><li>Kepp, O., Galluzzi, L., Lipinski, M., Yuan, J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+assays+for+drug+discovery.">Cell death assays for drug discovery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10, 221-237 (2011).</li><li>Lemasters, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+permeability+transition+in+cell+death:+a+common+mechanism+in+necrosis,+apoptosis+and+autophagy.">The mitochondrial permeability transition in cell death: a common mechanism in necrosis, apoptosis and autophagy.</a> Biochimica et Biophysica Acta Bioenergetics. , 177-196 (1998).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Chien, K. R., Abrams, J., Serroni, A., Martin, J. T., Farber, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+phospholipid+degradation+and+associated+membrane+dysfunction+in+irreversible,+ischemic+liver+cell+injury.">Accelerated phospholipid degradation and associated membrane dysfunction in irreversible, ischemic liver cell injury.</a> Journal of Biological Chemistry. 253, 4809-4817 (1978).</li><li>Zwaal, R. F. A., Comfurius, P., Bevers, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+exposure+of+phosphatidylserine+in+pathological+cells.">Surface exposure of phosphatidylserine in pathological cells.</a> Cell and Molecular Life Sciences. 62, 971-988 (2005).</li><li>Mitchell, D. B., Santone, K. S., Acosta, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+cytotoxicity+in+cultured+cells+by+enzyme+leakage.">Evaluation of cytotoxicity in cultured cells by enzyme leakage.</a> Journal of Tissue Culture Methods. 6, 113-116 (1980).</li><li>Moran, J. H., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+beta-NADH-linked+fluorescence+assay+for+lactate+dehydrogenase+in+cellular+death.">A rapid beta-NADH-linked fluorescence assay for lactate dehydrogenase in cellular death.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36, 41-44 (1996).</li><li>Mossman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+Application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Guerzoni, L. P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Modulation+of+TrkB+Receptor+Signaling+upon+Sequential+Delivery+of+Curcumin-DHA+Loaded+Carriers+Towards+Promoting+Neuronal+Survival.">In Vitro Modulation of TrkB Receptor Signaling upon Sequential Delivery of Curcumin-DHA Loaded Carriers Towards Promoting Neuronal Survival.</a> Pharmaceutical Research. 34 (2), 492-505 (2017).</li><li>Arrasate, M., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+microscope+system+for+determining+factors+that+predict+neuronal+fate.">Automated microscope system for determining factors that predict neuronal fate.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102, 3840-3845 (2005).</li><li>Christensen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivariate+survival+analysis+using+Cox&#8217;s+regression+model.">Multivariate survival analysis using Cox&#8217;s regression model.</a> Hepatology. 7, 1346-1358 (1987).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+induction+enhances+TDP43+turnover+and+survival+in+neuronal+ALS+models.">Autophagy induction enhances TDP43 turnover and survival in neuronal ALS models.</a> Nature Chemical Biology. 10, 677-685 (2014).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112, 7821-7826 (2015).</li><li>Malik, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrin+3-dependent+neurotoxicity+is+modified+by+nucleic+acid+binding+and+nucleocytoplasmic+localization.">Matrin 3-dependent neurotoxicity is modified by nucleic acid binding and nucleocytoplasmic localization.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Archbold, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP43+nuclear+export+and+neurodegeneration+in+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+frontotemporal+dementia.">TDP43 nuclear export and neurodegeneration in models of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia.</a> Scientific Reports. 8, 4606 (2018).</li><li>Green, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAN+translation+at+C9orf72-associated+repeat+expansions+is+selectively+enhanced+by+the+integrated+stress+response.">RAN translation at C9orf72-associated repeat expansions is selectively enhanced by the integrated stress response.</a> Nature Communications. 8, 2005 (2017).</li><li>Park, S. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+essential+Sis1+chaperone+reduces+TDP-43+effects+on+toxicity+and+proteolysis.">Overexpression of the essential Sis1 chaperone reduces TDP-43 effects on toxicity and proteolysis.</a> PLOS Genetics. 13, e1006805 (2017).</li><li>Gupta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proline/Arginine+Dipeptide+from+Hexanucleotide+Repeat+Expanded+C9ORF72+Inhibits+the+Proteasome.">The Proline/Arginine Dipeptide from Hexanucleotide Repeat Expanded C9ORF72 Inhibits the Proteasome.</a> eNeuro. 4, (2017).</li><li>Angelov, B., Angelova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+clustering+of+the+neurotrophin+receptor+TrkB+revealed+by+super-resolution+STED+microscopy.">Nanoscale clustering of the neurotrophin receptor TrkB revealed by super-resolution STED microscopy.</a> Nanoscale. 9 (28), 9797-9804 (2017).</li></ol>

Здесь представлены методологии непосредственно следить за выживаемость нейронов на основе одной ячейки. В отличие от традиционных анализов для смерти клетки, которые ограничены для дискретного времени точек и всей популяции клеток, этот метод позволяет для непрерывной оценки различ?...

Клеточная атипия смерть является движущим фактором во многих заболеваний, включая рак, нейродегенеративные и ход1. Надежные и чувствительные анализы для смерти клетки важны для характеристики этих расстройств, а также разработки терапевтических стратегий для расширения или сокращения сотовой выживания. В настоящее время есть множество методов для измерения смерти клетки, либо непосредственно, либо через суррогатные маркеры2. Например смерть клетки можно оценить визуально с помощью жизненно красителей, которые выборочно пятно3живых или мертвых клеток, или путем наблюдения за внешний вид конкретных фосфолипидов на плазматической мембраны4,5,6 . Измерения внутриклеточных компонентов или сотовых метаболитов, выпущенный в СМИ после клеточного распада также может использоваться как прокси для клеток смерть7,8. В качестве альтернативы клеточной жизнеспособности могут быть аппроксимированы оценки метаболической активности9,10. Хотя эти методы обеспечивают быстрое средства оценки выживаемость клеток, они не являются без оговорок. Каждый метод отмечает культуры как одной популяции, делает невозможным провести различие между отдельными клетками и их уникальные показатели выживания. Кроме того такие анализы на основе населения не в состоянии оценить факторы, которые могут быть важными для смерти клетки, в том числе клеточной морфологии, выражение протеина или локализации. Во многих случаях эти анализы ограничены точек дискретного времени и не позволяют для непрерывного наблюдения клеток с течением времени.
В отличие от продольных флуоресцентной микроскопии является весьма гибкой методологии, которая непосредственно и постоянно следит за риск смерти на основе одной ячейки11. Короче говоря продольные флуоресцентной микроскопии позволяет тысячи отдельных ячеек, чтобы быть отслежены на регулярной основе для длительных периодов времени, позволяя точные определения гибель клеток и факторов, которые расширения или подавить смерти клетки. На его базе метод предполагает переходных трансфекции или трансдукции клеток с векторами, кодирование флуоресцентных белков. Затем устанавливается уникальный доверенным лицом, и положение каждой transfected клеток по отношению к этот ориентир позволяет пользователю изображения и отслеживать отдельные ячейки в течение часов, дней или недель. Когда эти изображения просматриваются последовательно, гибель клеток характеризуется характерные изменения флюоресценции, морфология и фрагментации клетки тела, позволяя назначение времени смерти для каждой ячейки. Расчетный уровень смертности, определяется функцией опасности, можно затем количественном сравнении между условиями, или связанных с выбора сотовой характеристик с помощью одномерных или многовариантный Кокс пропорционально опасности анализ12. Вместе эти подходы позволяют точной и объективной дискриминации ставок клеточной смерти среди клеточных популяций, и определения переменных, которые значительно предсказать смерть клетки или выживания (рис. 1).
Хотя этот метод может использоваться для наблюдения за выживание в любой тип клеток после митотическая в различных покрытий форматов, этот протокол будет описывать условия для transfecting и визуализации крыса корковых нейронов, культивируемых в 96-луночных пластине.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompactPrep Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12863</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride Hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kynurenic Acid Hydrate</td>
			<td>TCI</td>
			<td>H0303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly D-Lysine</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>52887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>TPP</td>
			<td>0876</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy

Стандартные цитотоксичность анализов, которые требуют сбора лизатов или фиксированные ячейки в нескольких точках времени, имеют ограниченный чувствительность и способность оценить факторы, которые влияют нейрональных судьбы. Эти анализы требуют наблюдения за отдельные популяции клеток в точках дискретного времени. В результате отдельные клетки не могут следовать проспективно со временем, серьезно ограничивая способность различать ли субцеллюлярные события, такие как формирование puncta или белка mislocalization, патогенных драйвера болезни, гомеостатических реакций, или просто случайными явлениями. Одноклеточных продольной микроскопии преодолевает эти ограничения, позволяя исследователя определить различия в выживаемости между населением и привлечь причинно-следственной связи с повышенной чувствительностью. Это видео руководство будет изложить представитель рабочего процесса для экспериментов, измерения одноклеточных выживания крыса первичной корковых нейронов, выражая флуоресцентного белка маркера. Зритель будет узнать, как добиться высокой эффективности transfections, собирать и обрабатывать изображения, включение перспективных отслеживания отдельных ячеек и сравнить относительную выживания нейрональных популяций, с помощью анализа пропорционально опасности Кокс.

С помощью трансфекции процедуру, описанную здесь, DIV4 крыса корковых нейронов были transfected с плазмида кодирования mApple флуоресцентный белок. Начиная с 24 ч после трансфекции, клетки были образы микроскопии флуоресцирования каждые 24 ч для 10 дней подряд. Результирующего изо...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Здесь мы представляем протокол для отслеживания выживания на основе одной ячейки и определения переменных, которые значительно предсказать смерть клетки.

Мониторинг выживаемость нейронов через продольные флуоресцентной микроскопии

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

Этот протокол позволяет исследователям контролировать выживаемость на основе одноклеточных и определять переменные, которые значительно предсказывают гибель клеток или выживание. Обычные анализы цитотоксичности оценивают популяции клеток и не имеют возможности различать отдельные клетки. Продольная микроскопия позволяет назначение времени смерти для каждой клетки в популяции.Этот метод хорошо подходит для оценки новых методов лечения нейродегенеративных заболеваний и других заболеваний. Этот метод оказался бесценным для изучения механизмов заболевания в нейродегенеративных условиях, и может быть применен с одинаковой эффективностью по отношению к другим расстройствам, в которых гибель клеток представляет интерес. Исследователи могут бороться с достижением адекватной эффективности трансинфекции без чрезмерной токсичности.Практика с многоканальной трубой и знакомство с протоколом должны уменьшить эти трудности с течением времени. Микроскопия по своей сути является визуальной методологией. Таким образом, метод может быть более легко понять, наблюдая в дополнение к чтению.Для начала смешайте соответствующее количество пониженных средств сыворотки и реагента трансфекции в одной трубке, а также уменьшенные средства и ДНК сыворотки в отдельной трубке. Инкубировать их при комнатной температуре в течение пяти минут. Затем смешайте содержимое обеих трубок и инкубировать при комнатной температуре в течение 20 минут.Используйте многоканальные пипетки и стерильные пластиковые желоба для мытья корковых нейронов два раза с 100 микролитров нейронных базальных средств массовой информации на колодец. И хранить кондиционированные средства массовой информации и другие оставшиеся средства массовой информации на 37 градусов по Цельсию. Замените НБМ на 100 микролитров ранее подготовленного решения NBKY на одну колодец.Через 20 минут, трубы 50 микролитров трансфекции реагента и смеси ДНК dropwise в каждой хорошо. Инкубировать клетки при 37 градусах по Цельсию в течение 20 минут. Промыть клетки два раза с помощью решения NBKY.Затем добавьте 100 микролитров кондиционированных средств массовой информации и 100 микролитров раствора NBC к скважинам. Чтобы начать визуализацию клеток, поместите пластину 96 хорошо на флуоресцентный микроскоп. Используйте фидуциарный знак, уникальный для каждой пластины, в качестве эталона для будущего выравнивания и сохраните изображение для будущей ссылки.Затем перейдите в области, представляющие интерес, и заместить их координаты x и y относительно отметки. Используйте фидуциарный знак, уникальный для каждой пластины, в качестве эталона для будущего выравнивания и сохраните изображение для будущей ссылки. Наконец, сосредоточьтесь на трансфицированных клетках, выражаюх флуоресцентную этикетку.Сделай несколько изображений через регулярные промежутки времени в соответствующих флуоресцентных каналах. Для начала обработайте изображение, дважды нажмите на значок Фиджи. Затем щелкните и перетащите изображение, подчеркивая обработку макроса на бар Фиджи, чтобы открыть макрос в Фиджи.Отрегулируйте строки от двух до семи изображений, подчеркивая обработку макроса в соответствии с текстовым протоколом. Затем нажмите на шитье, а затем сетки / сбор стежка. Отрегулируйте настройки в меню высадки, ввех и порядок до тех пор, пока не будет получено точно сшитое изображение.Отрегулируйте тип сетки и переменные порядка стежка в строках восемь и девять в соответствии с этими выделениями. Затем отрегулируйте строку 10, чтобы указать количество изображений на колодец и при необходимости установите параметр вычитания фона в строке 14, чтобы это было правдой. Отрегулируйте строку 15, чтобы установить радиус подвижного шара в соответствии с текстовым протоколом, и нажмите Run.Наконец, откройте стеки выходных изображений и вручную определите мертвые нейроны в соответствии с текстовым протоколом. Запись данных в файле электронной таблицы. Для выполнения статистического анализа дважды нажмите на значок для выживания.R скрипт. Выделите строку 2 и нажмите кнопку запуска, чтобы загрузить библиотеку выживания. Затем измените путь в строке 5, чтобы вызвать таблицу ввода, и нажмите кнопку запуска.Выделите линии восемь и девять, и нажмите кнопку запуска для выполнения анализа пропорциональных опасностей Кокса. Выделите линии от 12 до 16 и от 19 до 24. Нажмите кнопку запуска, чтобы построить кумулятивный риск смерти и данные о выживании в качестве кривой Каплан-Мейер.В этом исследовании, крысы корковых нейронов были трансфицированы в течение четырех дней после покрытия с плазмидной кодирования флуоресцентного белка M яблоко. 24 часа после трансфекции, нейроны были изображены с помощью микроскопии флуоресценции каждые 24 часа в течение 10 дней подряд. После получения изображения изображения были обработаны и тщательно изучены в ознаменование смерти клетки.Время смерти каждой клетки определялось изменениями в флуоресценции, морфологии и фрагментации клеточного тела. Анализ пропорциональных опасностей Кокса, проведенный на данных о выживаемости мутантных нейронов, привел к соотношению опасности 2,2. Этот результат показал более быстрый уровень смертности в мутантных нейронах по сравнению с популяцией дикого типа.Самое главное помнить при попытке этой процедуры является трубопровод тщательно. Минимизация воздействия воздуха и предотвращение пузырьков имеет решающее значение для успешной трансфекции. После трансфекции, продольная микроскопия флуоресценции может быть использована для отслеживания различных факторов, которые могут способствовать гибели клеток, включая локализацию белка, оборот и уровень экспрессии, в дополнение к выживанию клеток.В области нейродегенерации динамический характер продольной микроскопии пролил свет на то, является ли агрегация связанных с болезнями белков токсичным или защитным событием. Ни один из этих реагентов или инструментов не является опасным.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Быстрый Micro-ионтофорезом глутамата и ГАМК: полезный инструмент по расследованию Synaptic интеграции

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Генетических манипуляций мозжечка Granule нейронов<em&gt; Экстракорпоральное</em&gt; И<em&gt; В Vivo</em&gt; По изучению нейронных Морфология и миграция

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Нервно-мышечном соединении: Synapse размер измерение, фрагментации и изменения в синаптической белка плотности с использованием конфокальной флуоресцентной микроскопии

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Запись температурное нейронную активность посредством мониторинга изменений кальция в обонятельной луковицы<em&gt; Xenopus Laevis</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

Chronic Transcranial Electrical Stimulation and Intracortical Recording in Rats

Хронический транскраниальной электростимуляции и Intracortical запись в крыс

Transcranial electrical stimulation (TES) is a powerful and relatively simple approach to diffusely influence brain activity either randomly or in a ...

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

В естественных условиях Мониторинг суточного часов экспрессии генов в мыши Супрахиазмальное ядро с помощью флуоресценции Репортеры

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene ...

Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Purkinje Cell выживания в органотипической церебеллярной части культур

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early ...

Brain Death Induction in Mice Using Intra-Arterial Blood Pressure Monitoring and Ventilation via Tracheostomy

Индукция смерти мозга у мышей с использованием внутриартериального мониторинга кровяного давления и вентиляции через трахеостомию

While both living donation and donation after circulatory death provide alternative opportunities for organ transplantation, donation after donor brain ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In Vitro Клин Фрагмент Подготовка для имитации In Vivo Нейрональной цепи подключения

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Подготовка взрослых Drosophila меланогастер для всего мозга изображений во время поведения и стимулов ответы

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...