Name: monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy
Uploaded: 2019-01-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Vi tackar Steve Finkbeiner och medlemmar av Finkbeiner labbet för banbrytande robotic mikroskopi. Vi tackar också Dan Peisach för byggnadens ursprungliga programvaran krävs för bildbehandling och automatiserad överlevnadsanalys. Detta arbete finansierades av det nationella institutet för neurologiska sjukdomar och Stroke (NINDS) R01-NS097542, University of Michigan Protein Folding Disease Initiative och Ann Arbor aktiva mot ALS.

Alla vertebrate djur arbete godkände utskottet för användning och skötsel av djur vid University of Michigan (protokoll nr PRO00007096). Experiment är noggrant planerad för att minimera antalet djur som offras. Gravid kvinna vildtyp (WT), icke-transgena lång Evans råttor (Rattus norvegicus) ligger ensamma i kamrarna utrustad med miljömässiga anrikning och vårdas av enheten för laboratorium djur medicin (ULAM) vid University of Michigan, i enlighet med guiden NIH-stöd för skötsel och användning av...

<ol>
	<li>Lockshin, R. A., Zakeri, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+health+and+disease.">Cell death in health and disease.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 11, 1214-1224 (2007).</li><li>Kepp, O., Galluzzi, L., Lipinski, M., Yuan, J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+assays+for+drug+discovery.">Cell death assays for drug discovery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10, 221-237 (2011).</li><li>Lemasters, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+permeability+transition+in+cell+death:+a+common+mechanism+in+necrosis,+apoptosis+and+autophagy.">The mitochondrial permeability transition in cell death: a common mechanism in necrosis, apoptosis and autophagy.</a> Biochimica et Biophysica Acta Bioenergetics. , 177-196 (1998).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Chien, K. R., Abrams, J., Serroni, A., Martin, J. T., Farber, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+phospholipid+degradation+and+associated+membrane+dysfunction+in+irreversible,+ischemic+liver+cell+injury.">Accelerated phospholipid degradation and associated membrane dysfunction in irreversible, ischemic liver cell injury.</a> Journal of Biological Chemistry. 253, 4809-4817 (1978).</li><li>Zwaal, R. F. A., Comfurius, P., Bevers, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+exposure+of+phosphatidylserine+in+pathological+cells.">Surface exposure of phosphatidylserine in pathological cells.</a> Cell and Molecular Life Sciences. 62, 971-988 (2005).</li><li>Mitchell, D. B., Santone, K. S., Acosta, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+cytotoxicity+in+cultured+cells+by+enzyme+leakage.">Evaluation of cytotoxicity in cultured cells by enzyme leakage.</a> Journal of Tissue Culture Methods. 6, 113-116 (1980).</li><li>Moran, J. H., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+beta-NADH-linked+fluorescence+assay+for+lactate+dehydrogenase+in+cellular+death.">A rapid beta-NADH-linked fluorescence assay for lactate dehydrogenase in cellular death.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36, 41-44 (1996).</li><li>Mossman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+Application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Guerzoni, L. P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Modulation+of+TrkB+Receptor+Signaling+upon+Sequential+Delivery+of+Curcumin-DHA+Loaded+Carriers+Towards+Promoting+Neuronal+Survival.">In Vitro Modulation of TrkB Receptor Signaling upon Sequential Delivery of Curcumin-DHA Loaded Carriers Towards Promoting Neuronal Survival.</a> Pharmaceutical Research. 34 (2), 492-505 (2017).</li><li>Arrasate, M., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+microscope+system+for+determining+factors+that+predict+neuronal+fate.">Automated microscope system for determining factors that predict neuronal fate.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102, 3840-3845 (2005).</li><li>Christensen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivariate+survival+analysis+using+Cox&#8217;s+regression+model.">Multivariate survival analysis using Cox&#8217;s regression model.</a> Hepatology. 7, 1346-1358 (1987).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+induction+enhances+TDP43+turnover+and+survival+in+neuronal+ALS+models.">Autophagy induction enhances TDP43 turnover and survival in neuronal ALS models.</a> Nature Chemical Biology. 10, 677-685 (2014).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112, 7821-7826 (2015).</li><li>Malik, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrin+3-dependent+neurotoxicity+is+modified+by+nucleic+acid+binding+and+nucleocytoplasmic+localization.">Matrin 3-dependent neurotoxicity is modified by nucleic acid binding and nucleocytoplasmic localization.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Archbold, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP43+nuclear+export+and+neurodegeneration+in+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+frontotemporal+dementia.">TDP43 nuclear export and neurodegeneration in models of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia.</a> Scientific Reports. 8, 4606 (2018).</li><li>Green, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAN+translation+at+C9orf72-associated+repeat+expansions+is+selectively+enhanced+by+the+integrated+stress+response.">RAN translation at C9orf72-associated repeat expansions is selectively enhanced by the integrated stress response.</a> Nature Communications. 8, 2005 (2017).</li><li>Park, S. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+essential+Sis1+chaperone+reduces+TDP-43+effects+on+toxicity+and+proteolysis.">Overexpression of the essential Sis1 chaperone reduces TDP-43 effects on toxicity and proteolysis.</a> PLOS Genetics. 13, e1006805 (2017).</li><li>Gupta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proline/Arginine+Dipeptide+from+Hexanucleotide+Repeat+Expanded+C9ORF72+Inhibits+the+Proteasome.">The Proline/Arginine Dipeptide from Hexanucleotide Repeat Expanded C9ORF72 Inhibits the Proteasome.</a> eNeuro. 4, (2017).</li><li>Angelov, B., Angelova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+clustering+of+the+neurotrophin+receptor+TrkB+revealed+by+super-resolution+STED+microscopy.">Nanoscale clustering of the neurotrophin receptor TrkB revealed by super-resolution STED microscopy.</a> Nanoscale. 9 (28), 9797-9804 (2017).</li></ol>

Här presenteras metod att direkt övervaka neuronal överlevnad på basis av encelliga. I motsats till traditionella analyser för celldöd som är begränsade till diskreta tidpunkter och hela populationer av celler, denna metod möjliggör kontinuerlig bedömning av en mängd faktorer såsom cellulär morfologi, proteinuttryck eller lokalisering, och kan avgöra hur varje faktor påverkar cellulära överlevnad i ett blivande sätt.
Denna metod kan ändras för att passa en rad olika experi...

Onormal celldöd är en drivande faktor i många sjukdomar, inklusive cancer, neurodegeneration och stroke1. Robust och känsliga analyser för celldöd är avgörande för karakterisering av dessa sjukdomar, liksom utvecklingen av terapeutiska strategier för att utöka eller minska cellulära överlevnad. Närvarande finns det massor av tekniker för att mäta celldöd, antingen direkt eller via surrogat markörer2. Till exempel kan celldöd bedömas visuellt med hjälp av vitala färgämnen som selektivt färgar döda eller levande celler3, eller genom att övervaka uppkomsten av specifika fosfolipider på plasmamembranet4,5,6 . Mätningar av intracellulära komponenter eller cellulära metaboliter släpps ut i media på cellulära upplösning kan också användas som proxyservrar för cell död7,8. Alternativt, cellulära livskraft kan approximeras genom att bedöma metabolisk aktivitet9,10. Även om dessa metoder ger snabba sätt att bedöma cellöverlevnad, är de inte utan förbehåll. Varje teknik har påpekat kulturen som en enda population, vilket gör det omöjligt att skilja mellan enskilda celler och deras unika priser för överlevnad. Dessutom kan sådana populationsbaserade analyser inte mäta faktorer som kan vara viktiga för celldöd, inklusive cellulära morfologi, proteinuttryck eller lokalisering. I många fall, dessa analyser är begränsade till diskreta tidpunkter, och tillåter inte för kontinuerlig observation av celler med tiden.
Däremot är längsgående fluorescensmikroskopi en mycket flexibel metod som direkt och kontinuerligt övervakar risken för död på en enskild cell grund11. I korthet, gör längsgående fluorescensmikroskopi tusentals enskilda celler spåras regelbundet för längre perioder, vilket gör att exakta bestämningar av celldöd och de faktorer som förbättrar eller undertrycka celldöd. På dess bas innebär metoden den övergående transfection eller transduktion celler med vektorer kodning fluorescerande proteiner. En unik Mï upprättas sedan och varje transfekterade cellen i förhållande till detta landmärke tillåter användaren att bilden och spåra enskilda celler under loppet av timmar, dagar eller veckor. När dessa bilder visas sekventiellt, markeras celldöd av karakteristiska förändringar i fluorescens, morfologi och fragmentering av cell kroppen, möjliggör tilldelning av en tid av döden för varje cell. Det beräknade priset av död, bestäms av funktionen fara, kan sedan kvantitativt jämfört mellan villkor eller relaterade till Välj cellulära egenskaper med univariat eller multivariat Cox proportionella riskmodell analys12. Tillsammans, aktivera dessa synsätt den korrekta och objektiv diskrimineringen av celldöd bland cellulära populationer och identifiering av variabler som betydligt förutsäger celldöd och/eller överlevnad (figur 1).
Även om denna metod kan användas för att övervaka överlevnad i någon post mitotiska celltyp i en mängd olika plätering format, kommer detta protokoll beskriva villkoren för transfecting och imaging råtta kortikala nervceller odlade i en plattan med 96 brunnar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompactPrep Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12863</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride Hexahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kynurenic Acid Hydrate</td>
			<td>TCI</td>
			<td>H0303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly D-Lysine</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>52887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>TPP</td>
			<td>0876</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring neuronal survival via longitudinal fluorescence microscopy

Standard cytotoxicitet analyser, som kräver insamling av lysates eller fasta celler vid flera tidpunkter, har begränsad känslighet och förmåga att bedöma faktorer som påverkar neuronala öde. Dessa analyser kräver observation av åtskilda populationer av celler vid diskret tidpunkter. Som ett resultat, kan inte enskilda celler följas prospektivt över tiden, starkt begränsa möjligheten att diskriminera huruvida subcellulär händelser, såsom puncta bildandet eller protein mislocalization, är patogena förare av sjukdom, homeostatiska svar, eller bara tillfällighet fenomen. Encelliga längsgående mikroskopi övervinner dessa begränsningar, så att forskaren att avgöra skillnader i överlevnad mellan populationer och dra kausala relationer med ökad känslighet. Denna video guide kommer att beskriva ett representativt arbetsflöde för experiment mäta encelliga överlevnad av råtta primära kortikala nervceller att uttrycka en fluorescerande protein markör. Betraktaren kommer att lära dig att uppnå hög verkningsgrad transfections, samla in och bearbeta bilder som gör det möjligt för blivande spårning av enskilda celler och jämför relativa överlevnaden av neuronala populationer med hjälp av Cox proportionella riskmodell analys.

DIV4 råtta kortikala nervceller använder transfection proceduren som beskrivs här, och var transfekterade med en plasmid kodning den fluorescerande protein mApple. Med början 24 h efter transfection, var celler fotograferad av fluorescensmikroskopi varje 24 h för 10 dagar. De resulterande bilderna var organiserade som anges i figur 2, och sedan sydda, staplade och gjorde för celldöd (figur 1). Figur 3<...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Här presenterar vi ett protokoll för att övervaka överlevnad på basis av encelliga och identifiera variabler som betydligt förutsäga celldöd.

Övervakning Neuronal överlevnad via längsgående fluorescensmikroskopi

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

Detta protokoll gör det möjligt för forskare att övervaka överlevnaden på encellig basis och identifiera variabler som signifikant förutsäger celldöd eller överlevnad. Konventionella cytotoxicitetsanalyser bedömer populationer av celler och saknar förmåga att diskriminera enskilda celler. Längsgående mikroskopi tillåter tilldelning av dödstid för varje cell i en population.Denna teknik är väl lämpad för att utvärdera nya terapier för neurodegenerativa sjukdomar och andra tillstånd. Denna metod har visat sig ovärderlig för att utforska sjukdomsmekanismer i neurodegenerativa tillstånd, och skulle kunna tillämpas med lika effekt mot andra sjukdomar där celldöd är av intresse. Forskare kan kämpa med att uppnå adekvata transfection effektivitetsvinster utan onödig toxicitet.Öva med den flerkanaliga pipet och förtrogenhet med protokollet bör minska dessa svårigheter över tiden. Mikroskopi är en naturlig visuell metodik. Därför kan tekniken lättare förstås genom att titta på förutom läsning.Till att börja, kombinera lämplig mängd reducerade serummedia och transfektionsreagens i ett rör, och reducerade serummedia och DNA i ett separat rör. Inkubera dem i rumstemperatur i fem minuter. Sedan, kombinera innehållet i båda rören och inkubera i rumstemperatur i 20 minuter.Använd en multichannel pipet och steril plast tråg att tvätta kortikala nervceller två gånger med 100 microliters av neurala basala medier per brunn. Och lagra betingade medier och andra återstående medier på 37 grader Celsius. Ersätt NBM med 100 mikroliter av tidigare beredd NBKY-lösning per brunn.Efter 20 minuter, pipet 50 mikroliter av transfektion reagens och DNA-blandningen dropwise i varje brunn. Inkubera cellerna i 37 grader Celsius i 20 minuter. Skölj cellerna två gånger med NBKY-lösning.Tillsätt sedan 100 mikroliter av konditionerade medier och 100 mikroliter av NBC-lösning på brunnarna. För att börja avbilda cellerna, placera 96 väl plattan på ett fluorescerande mikroskop. Använd ett förvaltaresmärke som är unikt för varje platta som referens för framtida justering, och spara en bild för framtida referens.Sedan navigerar du till intresseområden och registrerar deras x- och y-koordinater i förhållande till märket. Använd ett förvaltaresmärke som är unikt för varje platta som referens för framtida justering, och spara en bild för framtida referens. Slutligen fokusera på de transfekterade cellerna som uttrycker en fluorescerande etikett.Ta flera bilder med jämna mellanrum som är regelbundet fördelade i lämpliga lysrörskanaler. Till att börja med bildbehandling, dubbelklicka på Fiji ikonen. Klicka sedan och dra bildstreck bearbetning makro på Fiji bar för att öppna makrot inom Fiji.Justera linjer två till sju av bildstrecket bearbetning makro enligt textprotokollet. Klicka sedan på sömmar, och sedan rutnät / insamling sömmar. Justera inställningarna inom rullgardinsmenyerna, typen och ordningen, tills en exakt sydd bild produceras.Justera rutnätstyp och stygnordningsvariabler i rad åtta och nio enligt dessa val. Justera sedan linje 10 för att ange antalet bilder per brunn och ställa in alternativet för bakgrundsundertraktion i linje 14 till sant, om det behövs. Justera linje 15 för att ställa in den rullande bollen radien enligt textprotokollet, och klicka på Kör.Slutligen, öppna utgående bildstaplar och manuellt identifiera de döda nervceller enligt textprotokollet. Registrera data i en kalkylbladsfil. För att utföra statistisk analys, dubbelklicka på ikonen för överlevnaden.R-skript. Markera linje två och klicka på körknappen för att läsa in överlevnadsbiblioteket. Ändra sedan sökvägen i linje fem för att anropa inmatnings-kalkylbladet och klicka på körknappen.Markera linjerna åtta och nio, och klicka på körknappen för att utföra Cox proportionella faror analys. Markera linjerna 12 till 16 och 19 till 24. Klicka på körknappen om du vill rita den kumulativa risken för dödsfall och överlevnadsdata som en Kaplan-Meier-kurva.I denna studie, råtta när nervceller var transfected vid fyra dagar efter plätering med en plasmid kodning fluorescerande proteinet M äpple. 24 timmar efter transfection, var nervceller avbildas av fluorescens mikroskopi var 24 timmar i 10 på varandra följande dagar. Efter bild förvärv, var bilder bearbetas och undersöktes sekventiellt för att markera celldöd.Tidpunkt för död för varje cell bestämdes av förändringar i fluorescens, morfologi och fragmentering av cellkroppen. Cox proportionella faror analys utförs på överlevnadsdata av de muterade nervceller resulterade i en hazard ratio av 2.2. Detta resultat indikerade en snabbare frekvensen av död i de muterade nervcellerna i jämförelse med vildtyppopulationen.Det viktigaste att komma ihåg när man försöker detta förfarande är att pipet noggrant. Att minimera luftexponeringen och undvika bubblor är avgörande för en lyckad transfektion. Efter transfektion kan longitudinell fluorescensmikroskopi användas för att spåra olika faktorer som kan bidra till celldöd, inklusive proteinlokalisering, omsättning och uttrycksnivå, förutom cellöverlevnad.Inom området neurodegeneration har den dynamiska karaktären hos longitudinell mikroskopi kastat ljus över huruvida aggregering av sjukdomsrelaterade proteiner utgör en toxisk eller skyddande händelse. Ingen av dessa reagenser eller instrument är farliga.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Snabb Micro-iontophoresis av glutamat och GABA: Ett användbart verktyg för att undersöka Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation av Cerebellar granulneuroner<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em&gt; Att studera neuronal morfologi och migration

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Den neuromuskulära förbindelsen: Mäta Synapse Storlek, fragmentering och Förändringar i Synaptic Protein Densitet Använda Confocal fluorescensmikroskopi

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Inspelning Temperatur-inducerad neuronal aktivitet genom att övervaka Kalcium Förändringar i luktbulben av<em&gt; Xenopus laevis</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

Chronic Transcranial Electrical Stimulation and Intracortical Recording in Rats

Kronisk transkraniell elektrisk stimulering och Intracortical inspelning hos råttor

Transcranial electrical stimulation (TES) is a powerful and relatively simple approach to diffusely influence brain activity either randomly or in a ...

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

In Vivo Övervakning av dygnsrytm klocka genuttryck i mus suprachiasmatiska kärnan med hjälp av fluorescens reportrar

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene ...

Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Purkinje cell överlevnad i Organotypic cerebellär segment kulturer

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early ...

Brain Death Induction in Mice Using Intra-Arterial Blood Pressure Monitoring and Ventilation via Tracheostomy

Brain Death Induktion hos möss med intraarteriell blodtryck övervakning och ventilation via trakeostomi

While both living donation and donation after circulatory death provide alternative opportunities for organ transplantation, donation after donor brain ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In Vitro Wedge Slice Förberedelse för Härma In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Förbereda vuxen Drosophila melanogaster för hela hjärnan imaging under beteende och Stimuli svar

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...