Name: a simple migration/invasion workflow using an automated live-cell imager
Uploaded: 2019-02-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager at JoVE.com

ونود أن نعترف بدعمنا التمويل من "مؤسسة مجموعة بلومفيلد" عن طريق معهد البحوث الطبية هنتر (همري 13-02). X.Z تدعمه منحة أبا عن طريق جامعة نيوكاسل و "منحة الدكتوراه الرائد المؤشرات الحيوية هكرا".

ملاحظة: اثنين من خطوط الخلايا ينبغي التعامل معها بشكل منفصل. وينبغي تطبيقها على سطر واحد في خلية مفردة الإجراءات التالية إذا لم المحدد.
1-تحسين كثافة الخلية قبل إصابة
<ol><li>الثقافة الخلايا ملتصقة في T75 سم2 قوارير زراعة الأنسجة إلى حوالي 80% التقاء في تعديل النسر ...

<ol>
	<li>Graham, C. H., Lala, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+placental+invasion+of+the+uterus+and+their+control.">Mechanisms of placental invasion of the uterus and their control.</a> Biochemistry and Cell Biology. 70, 867-874 (1992).</li><li>Affolter, M., Zeller, R., Caussinus, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+remodelling+through+branching+morphogenesis.">Tissue remodelling through branching morphogenesis.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10, 831-842 (2009).</li><li>Brugues, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forces+driving+epithelial+wound+healing.">Forces driving epithelial wound healing.</a> Nature Physics. 10, 683-690 (2014).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nature Reviews Cancer. 5, 591-602 (2005).</li><li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 1420-1428 (2009).</li><li>Scully, O. J., Bay, B. H., Yip, G., Yu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis.">Breast cancer metastasis.</a> Cancer Genomics Proteomics. 9, 311-320 (2012).</li><li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays.">In vitro cell migration and invasion assays.</a> Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 752, 10-24 (2013).</li><li>Holliday, D. L., Speirs, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+the+right+cell+line+for+breast+cancer+research.">Choosing the right cell line for breast cancer research.</a> Breast Cancer Research. 13, 215 (2011).</li><li>Clark, A. G., Vignjevic, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+cancer+cell+invasion+and+the+role+of+the+microenvironment.">Modes of cancer cell invasion and the role of the microenvironment.</a> Current Opinion in Cell Biology. 36, 13-22 (2015).</li></ol>

الهجرة والغزو من المعالم الهامة لتقييم انتقال الخلايا السرطانية. باستخدام أداة 96-دبوس الصفر، من الممكن إجراء الجرح الشفاء فحوصات في 2D و 3D في وقت واحد. وبصرف النظر عن تيسير المسح التلقائي، توفير بيئة ثقافة خلية مستقرة مع الحد الأدنى من التعطيل، يوفر المقايسة الصفر التي أجريت باستخدام أداة ...

الهجرة الخلية وغزو من العمليات البيولوجية الهامة التي تمكن الوظائف الطبيعية في الجسم البشري، مثل إغلاق الجرح، غزو المشيمة في الرحم والغدة الثديية morphogenesis1،،من23. الجسم البشري لديه مراقبة دقيقة وصارمة لهذه الأحداث البيولوجية؛ ومع ذلك، هناك بعض الاستثناءات. على سبيل المثال، الأورام الخبيثة، قادرون على الهروب من هذه الضمانات، ويحمل انتشار غير طبيعي وتغزو الأنسجة المجاورة، وهو ما يسمى ورم خبيث. ورم خبيث هو السبب الرئيسي للوفيات المتصلة بالسرطان4.
سرطان الثدي هو الأكثر شيوعاً تشخيص السرطان في النساء، وهو ثاني أكبر سبب للوفيات المتصلة بالسرطان بين النساء في البلدان المتقدمة في العالم5. ينشأ سرطان الثدي من القنوات أو الفصيصات التي تتكون من واحد أو أكثر من طبقات من الخلايا الظهارية. في الثدي الطبيعي، تنضم الخلايا الظهارية لبعضها البعض والغشاء الطابق السفلي عن طريق بروتينات الغشاء مثل ه-كادهيرين وإينتيجرينس6. ولكن خلايا سرطان الثدي الغازية فقدوا قطبية والالتصاق خلية خلية، وتقليدياً الخضوع الظهارية الانتقالية الوسيطة (EMT) واكتساب القدرة على التحرك. بعد التسرب، هذه الخلايا تتحرك عبر المصفوفة خارج الخلية (ECM) وإدخال الأوعية الدموية أو اللمفاوي، تليها ثم إينترافاسيشن والنمو المنتشر7. فهم الآليات التي يحدث هذا يتسم بأهمية كبيرة، نظراً لورم خبيث هو السبب الأكثر شيوعاً للوفيات المتصلة بالسرطان، ويرتبط ارتباطاً وثيقا بسرطان الخلية الهجرة/الغزو. تصور حركة الخلايا السرطانية، فحوصات الهجرة والغزو، نماذج مثالية لدراسة حركة الخلية في 2D و 3D، على التوالي. ويقيم الهجرة مباشرة حركة الخلايا حين غزو ينطوي على تفاعل مع المكروية والقدرة على تخفيض الحواجز البيولوجية. هاتين العمليتين ليست مستقلة تماما عن بعضها البعض، كما الهجرة شرط للغزو.
وقد وضعت عدة طرق لدراسة الهجرة والغزو. كما استعرض بها كرامر et al، فحوصات الهجرة قبيل التئام الجروح، السور وفحوصات الصغرى-الناقل إنشاء منطقة خالية من الخلية السماح بالانتقال إلى الخلايا تقييم تغيير المنطقة؛ في حين، فحوصات ترانسويل والشعرية تستند إلى العدد الخلايا التي تتحرك نحو جاذبة8. لفحوصات الغزو، بيئة إدارة المحتوى في المؤسسة إعداد باستخدام الكولاجين أو هلام إدارة المحتوى في المؤسسة وعلى سبيل المثال، ويمكن تقييم الحركة ثلاثية الأبعاد من خلال رصد التهم غزو المنطقة والمسافة وخلية (مثل التحليل ترانسويل، الإنزيم خلد الماء)8. نوع آخر من الفحص الغزو هو الجمع بين الخلايا الغازية مع الخلايا غير الغازية وتقييم سلوك الخلايا الغازية (مثل فحوصات كروي). الأساليب المذكورة أعلاه الإيجابيات والسلبيات، وطريقة سهلة للنهج، سهل لتكرار، والجمع بين التحليل الهجرة والمقايسة الغزو في سير عمل مماثلة تفضيلية في التصميم التجريبي.
ويصف هذا البروتوكول قياس الهجرة الخلية والغزو تصوير الخلية تعيش باستخدام. خلية في الوقت الحقيقي رصد النظام المثبتة في حاضنة ثقافة خلية قياسية. فإنه يأخذ صور عالية الوضوح ووفقا لمجموعة مسح الفواصل الزمنية والقياسات عن طريق تطبيق أقنعة مناسبة للخلايا أو أهداف الفلورسنت. الوحدة النمطية للهجرة/غزو المقايسة تتضمن استخدام أداة 96-دبوس الصفر، ومناسبة لصنع الجروح الصفر متجانسة على أحادي الطبقة خلية في صفيحة 96-جيدا. وتستند الآلية الجرح في المختبر شفاء فحوصات، ورصد حركة الخلية 2D على البلاستيك أو سطح مصقول. ويمكن أيضا تقييم الغزو أو الحركة ثلاثية الأبعاد عبر المحتوى إضافية داخل الصفر الجرح. سير عمل موجزة يتضح في الشكل 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:695px;" width="695">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">0.5% trypsin-EDTA solution (10x)</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">30028-02</td>
			<td style="width:167px;">Dilute to 2x in DPBS</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Countess II FL Automated Cell Counter</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AMQAX1000</td>
			<td style="width:167px;">Automated cell counter</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Detergent 1 (Alconox)</td>
			<td style="width:100px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">242985</td>
			<td style="width:167px;">0.5% working concentration</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Detergent 2 (Virkon S)</td>
			<td style="width:100px;">VetProduct DIRECT</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">1% working concentration</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:309px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium, no phenol-red</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">21063-045</td>
			<td style="width:167px;">Supplimented with 10% FBS, 200 mM L-glutamine, 2 &#956;g/ml insulin</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">ECM Gel (matrigel)</td>
			<td style="width:100px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E6909</td>
			<td style="width:167px;">Growth-factor reduced, phenol red free</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Essen ImageLock 96-well plate, flat bottom</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;">4379</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">EVE Counting slides</td>
			<td style="width:100px;">BioTools</td>
			<td style="width:119px;">EVS-50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:100px;">Bovogen Biologicals</td>
			<td style="width:119px;">SFBS-F-500ml</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">IncuCyte 96-well scratch wound cell invasion accessories</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;">4444</td>
			<td style="width:167px;">Including CoolBox, 2x CoolSink</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:309px;">IncuCyte Cell migration kit</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;">4493</td>
			<td style="width:167px;">Including the 96-well pin block, 2x wash boats and the software</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">IncuCyte ZOOM</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Live cell analysis system</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Insulin solution human</td>
			<td style="width:100px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">19278-5ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">L-glutamine solution (100x)</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25030-091</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Tissue culture flask, 75 cm2 growth area</td>
			<td style="width:100px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">658175</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple migration/invasion workflow using an automated live-cell imager

سرطان الخلية التنقل أمر حاسم للبدء بورم خبيث. ولذلك، التحقيق في حركة الخلية والقدرة الغازية ذات أهمية كبيرة. توفير فحوصات الهجرة البصيرة الأساسية لحركة الخلية على مستوى ثنائي الأبعاد، حين غزو فحوصات ذات الصلة أكثر فسيولوجيا، محاكاة المجراة في سرطان الخلية ديسلودجمينت من الموقع الأصلي والغازية عن طريق المصفوفة خارج الخلية. ينص البروتوكول الحالي على سير عمل واحد لفحوصات الهجرة والغزو. جنبا إلى جنب مع كاميرا مجهرية الآلي المتكاملة للصور عالية الدقة في الوقت الحقيقي ووحدة التحليل المدمج، أنه يعطي الباحثين الوقت-الكفاءة، خيار بسيط واستنساخه تجريبي. ويشمل هذا البروتوكول أيضا بدائل للمواد الاستهلاكية وأساليب تحليل بديلة للمستخدمين للاختيار من بينها.

هذا التحليل الهجرة/غزو يستند على مقايسة شفاء الجرح، الذي يتولى تقييم معدل الخلايا تتحرك إلى منطقة خالية من الخلية التي تم إنشاؤها بواسطة الأداة الصفر 96-دبوس. الفرق بين الاختبارات الهجرة والغزو أن الهجرة فحوصات قياس الخلايا تتحرك على زراعة الأنسجة تعامل البلاستيك السطحي...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager at JoVE.com

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

سير عمل بسيطة هجرة/غزو تصوير خلية يعيش الآلي باستخدام

ويصف البروتوكول الحالي بأسلوب متكامل يحقق سرطان الخلية الهجرة والغزو على منصة واحدة في الوقت الحقيقي، وتوفير خيار استنساخه بسهولة وكفاءة من حيث الوقت لدراسة التنقل خلية ومورفولوجيا.

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

إن انتقال الخلايا السرطانية أمر حاسم لبدء الانبثاث. لذلك ، فإن التحقيق في حركة الخلايا والقدرة الغازية للخلايا السرطانية أمر مهم للغاية. هذه الطريقة المتكاملة للتحقيق في انتقال الخلايا السرطانية والغزو ، على منصة واحدة في الوقت الحقيقي ، توفر خيارًا سهلًا وفعالًا للوقت لدراسة حركة الخلايا وعلم الأمراض.هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في غزو الخلايا السرطانية، من خلال مصفوفة خارج الخلوية، ويمكن تطبيقها على أنواع الخلايا الأخرى. لتحقيق وقت الصفر الأمثل، تأكد من أن كثافة البذر قد تم تحسينها ولا تطيل فترة الحضانة بمجرد أن وصلت الخلية monolayer 100 في المئة التقاء. لتحديد العدد الأمثل للخلايا المصنفة لإجراء فحص الترحيل، ضع الخلايا في مجموعة من الكثافات في ثلاث ألواح ثلاثية في لوحة من 96 جدارًا.ضع اللوحة في صورة الخلية المباشرة، وحدد عمليات المسح من قائمة المهام في برنامج التصوير. في جزء إعداد الدرج، حدد مواضع اللوحة، وانقر على إضافة vessel'to تحديد نوع اللوحة. في جزء إعداد المسح الضوئي، حدد أو قم بتحرير نمط المسح الضوئي وفقًا لإعداد اللوحة التجريبية، ثم قم بتعيين نوع المسح الضوئي كنمط قياسي.انقر بزر الماوس الأيمن فوق المخطط الزمني، وحدد تعيين فواصل زمنية. ثم قم بتعيين إضافة عمليات مسح كل إلى ساعتين لمدة 24 ساعة، وانقر فوق تطبيق. بعد 24 ساعة، افتح درج الإعداد للسماح لوحة التجريبية ليتم اختيارها، وانقر على إزالة السفينة.حدد ثلاثة إلى ستة صور تمثيلية، ووضعها في مجموعة صور جديدة. لتحديد تعريف معالجة مناسب، استخدم ضبط التجزئة، التنظيف، و عوامل التصفية لتطبيق قناع التقاء مناسب، واستخدم معاينة all'current لعرض دقة الأقنعة. إطلاق وظيفة التحليل وتحديد كثافة الخلية الأمثل، وفقا لالتقاء تقريبا 100 في المئة مع الزمن، في غضون ست إلى ثماني عشرة ساعة، اعتمادا على متى يبدأ إجراء فحص الهجرة.ثم، تطبيق أداة تحليل معالجة التقاء على مرحلة عالية الوضوح على النقيض الصور التي يتم جمعها تلقائيا لتوليد منحنى انتشار الخلايا مع مرور الوقت. قبل البدء في الفحص ، معطف لوحة للجرافضة مع 50 ميكرولتر من هلام مصفوفة خارج الخلية ، مخففة في الجليد الباردة خلية ثقافة المتوسطة ، إلى 100 ميكروغرام في المليلتر التركيز. ثم، ضع اللوحة في حاضنة ثقافة الخلية بين عشية وضحاها.بعد ظهر اليوم التالي ، تعرق بلطف المتوسط الزائد ، وطبق الخلايا في الكثافة المثلى ، في ثلاث ية ، في الآبار المناسبة من لوحة مصفوفات خارج الخلية المغلفة ، وإلى لوحة إضافية غير مصقولة 96 جيدا. ثم، ضع اللوحات في حاضنة ثقافة الخلية بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، ضع لوحة مسحة الترحيل غير المصقول في حامل لوحة الأساس لأداة الخدش، واستخدم المسامير الإرشادية لوضع الجزء العلوي من الحامل بعناية إلى القاعدة.اضغط مع الاستمرار على رافعة سوداء مع رفع كتلة دبوس بعناية لجعل الخدوش. وينبغي أن تكون الخدوش في كل بئر مرئية بالعين المجردة، وكذلك تحت المجهر. ثم، قم بغسل اللوحة مرة أو مرتين بوسيلة ثقافة مُدفأة مسبقًا لإزالة أي خلايا منفصلة أو أوراق خلايا.بالنسبة للتشـاوض بالغزو، خدش اللوح المطلي كما هو موضح للتو. بعد إزالة أي خلايا وملاءات منفصلة، استخدم صندوقًا باردًا مبردًا مسبقًا لتكبيل الطبق عند أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق قبل التعرق بعناية في الوسط البارد. بعد ذلك، إضافة 50 ميكرولترات من هلام مصفوفة خارج الخلية المخفف في الآبار المناسبة ووضع لوحة في حاضنة ثقافة الخلية لمدة ثلاثين دقيقة.فقاعات شائعة عند العمل مع هلام مصفوفة خارج الخلية، ولكن يمكن القضاء عليها عن طريق الطامح 70 في المئة الإيثانول. ثم إضافة 100 ميكرولترات من الطازجة، وحار المتوسطة، مع أو بدون مجمع الاختبار، إلى الآبار المناسبة إما الهجرة أو لوحة اختبار الغزو، ووضع لوحة في منصة التصوير الخلية الحية. لتنظيف أداة الخدش ، ضع كتلة الدبوس العلوي في قوارب غسيل فردية 45 ملليلتر ، تحتوي على 5 في المئة من المنظفات واحد ، واحد في المئة من المنظفات اثنين ، الماء المقطر العقيم ، أو 70 في المئة الإيثانول لمدة خمس دقائق لكل غسيل قبل وضع أداة الخدش مرة أخرى على لوحة قاعدتها ، للتخزين في بيئة خالية من الغبار.لتصوير مقايسات الجرح، بعد السماح للصفيحة بالتركيل لمدة خمس دقائق، حدد نوع الوعاء كصفح سجل الصورة، وقم بتعيين نوع المسح الضوئي كجرح خدش. حدد أو قم بتحرير نمط المسح الضوئي، وفقًا لإعداد اللوحة التجريبية، وحدد الجدول الزمني للمسح الضوئي المتكرر كل ساعة إلى ساعتين لمدة 72 ساعة، أو حتى تلتئم الجروح كما هو موضح. عندما تلتئم جميع الجروح، أوقف المسح الضوئي، واختر ثلاث إلى ست صور تمثيلية، تمتد على مجموعة من النسب المئوية للصوت، بما في ذلك الصور بعد إجراء الجرح مباشرة، وإغلاق الجروح بنسبة 10 و 50 في المائة.لتحديد تعريف معالجة مناسب، قم بتطبيق قناع جرح الخدش المناسب، وقناع التقاء كما هو موضح، واستخدم معاينة all'current لعرض دقة الأقنعة. ثم، قم بتشغيل وظيفة التحليل. في فحص الهجرة، عرض الجرح هو متوسط المسافة بين أغطية الخلايا بجانب الجرح.التقاء الجرح هو التقاء داخل المنطقة الجرحى. وينبغي أن يكون التقاء الجرح الأولي المثالي على مقربة من الصفر في المئة. تشير كثافة الجرح النسبي والتقاء الجروح إلى سرعة الخلايا التي تحتل منطقة جرح الخدش.تتداخل هذه البيانات تقريباً في كل من خطوط الخلايا التمثيلية هذه. خطوط الخلية المختلفة تظهر قدرات التئام الجروح مختلفة جدا، مما يدل على قدرات الهجرة التفاضلية بين خطوط الخلية. على سبيل المثال، لوحظ lamellipodia في هذا الثدي غدية خط الخلية في جبهة الهجرة في بداية الهجرة، في حين أن هذا مخاطين 1 المنتجة لسرطان الثدي خط الخلية أظهرت أي علامة على الهجرة الخلية في نفس النقطة الوقت.وعلاوة على ذلك، كانت كثافة الجرح النسبي لخط الثدي غدية مشبعة بعد 50 ساعة، في حين أن كثافة الجرح النسبي لخط خلايا سرطان الثدي المنتجة للموسين 1 لم تتغير بمرور الوقت، مما يؤكد على النمط الظاهري الشديد الغازية لخلايا الخلايا الغدية وعدم التوغل في خلايا سرطان الثدي المنتجة للموسين 1. كما تصرفت خلايا الغدة السرطانية بشكل مختلف أثناء غزوها من خلال هلام المصفوفة خارج الخلية، مما يدل على مورفولوجيا ممدود مع نتوءات رائدة، وفي مقايسات الهجرة، تم تصور بليب في جبهة الهجرة. عند الطلاء، تذكر أنه إذا كانت الخلايا قليلة جداً بذر، فإن الصفر لن يتشكل بشكل صحيح، وإذا تم زرع الكثير من الخلايا، سيكون هناك اكتظاظ.بعد هذا الإجراء، يمكن إضافة علاجات المسار، مما يسمح بتكييف هذه الطريقة لفحص المسار عالي الإنتاجية. هذه الطريقة تسمح للباحثين بإجراء هذه المقايسات على منصة واحدة ، وهي عالية الإنتاجية ، وتسمح للباحثين بمراقبة خلاياهم في الوقت الحقيقي ، وليس في نقطة النهاية التجريبية. قد تكون المطهرات المستخدمة لتعقيم أداة الخدش خطرة.تأكد من جمع والتخلص من الحلول وفقا لMSDS ذات الصلة، وخطوط الزناد العادية للمرفق الخاص بك.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

تتحرك صعودا: بسيطة ومرنة في المختبر غزو ثلاثية الأبعاد مقايسة بروتوكول

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Long-term Live-cell Imaging to Assess Cell Fate in Response to Paclitaxel

الطويلة الأجل العيش-الخلية أن التصوير لتقييم مصير الخلية ردا على باكليتاكسيل

Live-cell imaging is a powerful technique that can be used to directly visualize biological phenomena in single cells over extended periods of time. Over ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

يعيش خلية تصوير TGF-β/Smad3 مما يشير إلى المسار في المختبر و في فيفو باستخدام نظام مراسل إتش

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

التحكم المكاني والزماني للبدء من الميلانوما من الخلايا الجذعية المتحولة للخلايا الصباغية

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

في المختبر الاختبار لدراسة التفاعل الورم الضامة

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

A Data Integration Workflow to Identify Drug Combinations Targeting Synthetic Lethal Interactions

سير عمل تكامل البيانات لتحديد مجموعات الأدوية التي تستهدف التفاعلات القاتلة الاصطناعية

A synthetic lethal interaction between two genes is given when knock-out of either one of the two genes does not affect cell viability but knock-out of ...

An Automated Differential Nuclear Staining Assay for Accurate Determination of Mitocan Cytotoxicity

الآلي التفاضلية النووية التفضيل الملطخة اختبار لتحديد دقيق للسمية الخلوية الميتوك

The contribution of mitochondria to oncogenic transformation is a subject of wide interest and active study. As the field of cancer metabolism becomes ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

سير عمل الفحص السريع لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام الخلايا الجذعية الدبقي المشتقة من المريض

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

Automated Dissection Protocol for Tumor Enrichment in Low Tumor Content Tissues

بروتوكول التشريح الآلي لإثراء الورم في الأنسجة منخفضة محتوى الورم

Tumor enrichment in low tumor content tissues, those below 20% tumor content depending on the method, is required to generate quality data reproducibly ...

An Automated Microscopic Scoring Method for the &#947;-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

An Automated Microscopic Scoring Method for the ÃƒÅ½Ã‚Â³-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

طريقة تسجيل مجهرية آلية لإجراء فحص foci γ-H2AX في الخلايا الليمفاوية الطرفية للدم البشري

Ionizing radiation is a potent inducer of DNA damage and a well-documented carcinogen. Biological dosimetry comprises the detection of biological effects ...