Name: a simple migration/invasion workflow using an automated live-cell imager
Uploaded: 2019-02-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager at JoVE.com

ברצוננו להודות תמיכתנו מימון על ידי קרן קבוצת בלומפילד דרך צייד המכון למחקר רפואי (HMRI 13-02). X.Z נתמך על ידי מלגת APA דרך האוניברסיטה של ניוקאסל את המלגה לתואר שלישי HCRA הדגל סמנים ביולוגיים.

הערה: שתי שורות תאים צריך להיות מטופל בנפרד. ההליכים הבאים צריך להיות מוחל על קו תא בודד אחד אם לא צוין.
1. למטב את צפיפות התאים לפני פציעתו
<ol><li>התרבות תאים חסיד ב T75 ס מ2 תרביות רקמה מבחנות עד כ 80% למפגש ב Dulbecco חינם של פנול אדום שונה נשר בינוני (DMEM) בתוספת 10% סרום ש...

<ol>
	<li>Graham, C. H., Lala, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+placental+invasion+of+the+uterus+and+their+control.">Mechanisms of placental invasion of the uterus and their control.</a> Biochemistry and Cell Biology. 70, 867-874 (1992).</li><li>Affolter, M., Zeller, R., Caussinus, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+remodelling+through+branching+morphogenesis.">Tissue remodelling through branching morphogenesis.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10, 831-842 (2009).</li><li>Brugues, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forces+driving+epithelial+wound+healing.">Forces driving epithelial wound healing.</a> Nature Physics. 10, 683-690 (2014).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nature Reviews Cancer. 5, 591-602 (2005).</li><li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 1420-1428 (2009).</li><li>Scully, O. J., Bay, B. H., Yip, G., Yu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis.">Breast cancer metastasis.</a> Cancer Genomics Proteomics. 9, 311-320 (2012).</li><li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays.">In vitro cell migration and invasion assays.</a> Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 752, 10-24 (2013).</li><li>Holliday, D. L., Speirs, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+the+right+cell+line+for+breast+cancer+research.">Choosing the right cell line for breast cancer research.</a> Breast Cancer Research. 13, 215 (2011).</li><li>Clark, A. G., Vignjevic, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+cancer+cell+invasion+and+the+role+of+the+microenvironment.">Modes of cancer cell invasion and the role of the microenvironment.</a> Current Opinion in Cell Biology. 36, 13-22 (2015).</li></ol>

ההעברה הפלישה פרמטרים חשובים כדי להעריך את הניידות של תאי הסרטן בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. על-ידי שימוש בכלי גירוד 96 פינים, זה אפשרי לערוך ריפוי מבחני ב 2D and 3D בו זמנית הפצע. מלבד בהנחיה בסריקה אוטומטית באמצעות סביבת התרבות התא יציב עם הפרעה מינימלית, וזמינותו מאפס נערך באמצעות הכלי מאפס ...

נדידת תאים הפלישה חשוב תהליכים ביולוגיים המאפשרים פונקציות נורמלית בגוף האדם, כגון סגירת הפצע, הפלישה של השליה לתוך הרחם ואת עטין מורפוגנזה1,2,3בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. בגוף האדם יש שליטה קפדני ומדויק של אירועים אלה ביולוגי; עם זאת, ישנם כמה חריגים. גידולים ממאירים, למשל, מסוגלים לברוח הגנה זו, מוצג התפשטות חריגה, לפלוש לתוך רקמות שכנות, אשר נקרא גרורות. גרורות הוא הגורם העיקרי של תמותה מסרטן4.
סרטן השד הוא הכי נפוץ אובחן סרטן אצל נשים, הוא הגורם השני-הגבוה של מוות מסרטן בקרב נשים במדינות מפותחות ברחבי העולם5. סרטן השד מקורו של צינוריות או האוניות המורכבים של שכבה אחת או יותר של תאים אפיתל. בשד נורמלי, תאים אפיתל לדבוק אחד לשני וכדי קרום המרתף דרך הממברנה חלבונים כגון E-קדהרין אינטגרינים6. עם זאת, תאי סרטן שד פולשני איבדו קוטביות והצמדות התא-התא שלהם, ולא בסגנון קלאסי עוברים אפיתל המעבר mesenchymal (החובשים) ולהשיג את היכולת לנוע. לאחר extravasation, תאים אלה תנוע מטריצה חוץ-תאית (ECM) והזן את כלי הדם או מערכת הלימפה, ואחריו ואז intravasation וגידול גרורתי7. הבנת המנגנונים שבאמצעותו זו מתרחשת היא משמעות רבה, מאז גרורות הוא הגורם הנפוץ ביותר הקשורים לסרטן בהירושימה, קשורה קשר הדוק סרטן תא העברה/הפלישה. כדי להמחיש את התנועה של תאים סרטניים, מבחני ההעברה ופלישה הם מודלים אידיאלי ללמוד 2D and 3D תנועת התא, בהתאמה. העברה ישירות מעריך את התנועה של תאי ואילו הפלישה ושכוללת מגע עם microenvironment ואת היכולת לבזות את המחסומים הביולוגיים. שני התהליכים אינם עצמאית לחלוטין של זה, כמו הגירה היא דרישה של פלישה.
פותחו מספר שיטות ללמוד הגירה ו הפלישה. כפי שנבדקו על ידי קרמר ואח ', העברת מבחני כגון ריפוי הפצע, גדר, מיקרו-המוביל מבחני ליצור אזור נטול תאים כדי לאפשר תאים להעביר, הערכת השינוי של אזור; ואילו, מבחני transwell ו נימי מבוססים על מספר התאים שנעים לכיוון attractant8. מבחני הפלישה, סביבה ECM צריך להיות מוגדרת עם ג'ל ECM או קולגן למשל, התנועה 3D יכול להיות מוערך על ידי ניטור הפלישה פינת, מרחק, תא הסעיפים (למשל assay transwell, ברווזן assay)8. סוג נוסף של הפלישה assay היא לשלב את התאים פולשנית עם תאים לא פולשנית, להעריך את ההתנהגות של התאים פולשני (למשל, מבחני ספרואיד). השיטות שהוזכרו לעיל יש את היתרונות שלהם, אסירים, דרך קלה לגישה, קל לחזור על, שילוב וזמינותו ההעברה והיא הפלישה assay בזרימת עבודה דומה מועדף בעיצוב ניסיוני.
פרוטוקול זה מתאר את המדידה של נדידת תאים ופלישה באמצעות imager לחיות תאים. . זה תא בזמן אמת ניטור מערכת המותקנת בתוך חממה התרבות תאים סטנדרטית. זה לוקח תמונות בחדות גבוהה לפי ערכת סריקה במרווחי זמן ומדידות על-ידי החלת מסיכות מתאימות התאים או מטרות פלורסנט. המודול של העברה/הפלישה assay כולל באמצעות כלי גירוד 96 פינים, אשר מתאים לייצור הומוגניות לגרד פצעים על טפט התא בצלחת 96-ובכן. המנגנון מבוסס על הפצע במבחנה ריפוי מבחני, ניטור תנועת התא 2D פלסטיק או משטח מצופה. הפלישה או תלת-ממד התנועה מעבר ECM נוספים בתוך השריטה פצע יכול גם להיות מוערך. זרימת עבודה קצרה מודגם באיור1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:695px;" width="695">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">0.5% trypsin-EDTA solution (10x)</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">30028-02</td>
			<td style="width:167px;">Dilute to 2x in DPBS</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Countess II FL Automated Cell Counter</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AMQAX1000</td>
			<td style="width:167px;">Automated cell counter</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Detergent 1 (Alconox)</td>
			<td style="width:100px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">242985</td>
			<td style="width:167px;">0.5% working concentration</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Detergent 2 (Virkon S)</td>
			<td style="width:100px;">VetProduct DIRECT</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">1% working concentration</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:309px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium, no phenol-red</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">21063-045</td>
			<td style="width:167px;">Supplimented with 10% FBS, 200 mM L-glutamine, 2 &#956;g/ml insulin</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">ECM Gel (matrigel)</td>
			<td style="width:100px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E6909</td>
			<td style="width:167px;">Growth-factor reduced, phenol red free</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Essen ImageLock 96-well plate, flat bottom</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;">4379</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">EVE Counting slides</td>
			<td style="width:100px;">BioTools</td>
			<td style="width:119px;">EVS-50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:100px;">Bovogen Biologicals</td>
			<td style="width:119px;">SFBS-F-500ml</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">IncuCyte 96-well scratch wound cell invasion accessories</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;">4444</td>
			<td style="width:167px;">Including CoolBox, 2x CoolSink</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:309px;">IncuCyte Cell migration kit</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;">4493</td>
			<td style="width:167px;">Including the 96-well pin block, 2x wash boats and the software</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">IncuCyte ZOOM</td>
			<td style="width:100px;">Essen</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Live cell analysis system</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:309px;">Insulin solution human</td>
			<td style="width:100px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">19278-5ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">L-glutamine solution (100x)</td>
			<td style="width:100px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25030-091</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:309px;">Tissue culture flask, 75 cm2 growth area</td>
			<td style="width:100px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">658175</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple migration/invasion workflow using an automated live-cell imager

סרטן התא ניידות חיונית אתחול של גרורות. לכן, חקירה של תנועת התא, קיבולת פולשנית היא משמעות רבה. העברת מבחני לספק תובנה בסיסית של תנועת התא ברמה 2D, ואילו מבחני הפלישה רלוונטיים יותר מבחינה פיזיולוגית, מחקה סרטן ויוו dislodgment תא מהאתר המקורי, פולשים באמצעות מטריצות. בפרוטוקול הנוכחי מספק זרימת עבודה יחידה עבור מבחני ההעברה ואת הפלישה. יחד עם משולב אוטומטי מיקרוסקופיים המצלמה עבור ניתוח מובנה מודול ותמונות בזמן אמת HD, זה נותן חוקרים היעילה, האפשרות ניסיוני פשוטה לשחזור. פרוטוקול זה כולל גם החלפות הגיוניות מתכלים ושיטות ניתוח חלופי עבור משתמשים לבחירה.

Assay הגירה/הפלישה הזו מבוססת על וזמינותו ריפוי הפצע, הבודקת את הקצב של התאים נעה לתוך אזור נטול תאים שנוצרו על-ידי הכלי מאפס 96 פינים. ההבדל בין מבחני ההעברה ופלישה הם מבחני ההעברה כי תאי מידות עובר בתאי רקמת-תרבות מטופלים פלסטיק משטח ופלישה אמצעים העברת ECM ג'ל.
<p class="jove_content...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager at JoVE.com

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

זרימת עבודה פשוטה הגירה/הפלישה באמצעות Imager אוטומטיות של תאים חיים

בפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה משולבת חוקרים נדידת תאים סרטן ופלישה על פלטפורמה אחת בזמן אמת, מתן אפשרות היעילה הדירים בקלות ללמוד ניידות תא ו מורפולוגיה.

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

ניידות תאים סרטניים חיונית ליזום גרורות. לכן, חקירה של תנועת תאים ויכולת פולשנית של תאים סרטניים הוא עניין רב. שיטה משולבת זו לחקר נדידת תאים סרטניים ופלישתם, בפלטפורמה אחת בזמן אמת, מספקת אפשרות ניתנת לשחזור וחסכונית בזמן לחקר ניידות התאים והפתולוגיה.שיטה זו יכולה לספק תובנה על פלישת תאים סרטניים, באמצעות מטריצה חוץ-תאית, ו ניתן להחיל אותה על סוגי תאים אחרים. כדי להשיג זמן גירוד אופטימלי, ודא שצפיפות הזריעה עברה אופטימיזציה ואל תאריך את תקופת הדגירה לאחר שמונוליית התאים הגיעה ל-100 אחוזי התכנסות. כדי לקבוע את המספר האופטימלי של תאים זרעים עבור מקדחת הגירה, מקם את התאים במגוון של צפיפות ב- triplicate בצלחת של 96 קיר.מקם את הלוחית בתמונה של התא החי ובחר סריקות לוח זמנים מרשימת המשימות בתוכנת התמונה. בחלונית הגדרת המגירה, קבעו את מיקומי הלוח ולחצו על 'הוסף כלי שיט' לבחירת סוג הלוח. בחלונית הגדרת הסריקה, בחר או ערוך את תבנית הסריקה בהתאם להגדרת לוח הניסיון והגדר את סוג הסריקה כסטנדרט.לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על ציר הזמן ובחר הגדרת מרווחי זמן. לאחר מכן קבעו הוספת סריקות כל שעתיים למשך 24 שעות ולחצו על הלחצן 'החל'. לאחר 24 שעות, פתח את הגדרת המגירה כדי לאפשר את הצלחת הניסיונית להיבחר, ולחץ על הסר כלי.בחרו שלוש עד שש תמונות מייצגות, והצבו אותן באוסף תמונות חדש. לקביעת הגדרת עיבוד מתאימה, השתמשו בהתאמות פילוח, בניקוי ובמסננים להחלת מסיכת קונפלונס מתאימה, ולהשתמש בזרם תצוגה מקדימה הכל'כדי להציג את דיוק המסיכות. הפעל את עבודת הניתוח ולקבוע צפיפות תאים ממוטבת, על פי משוער 100 אחוז confluence נגד הזמן, בתוך שש עד שמונה עשרה שעות, תלוי מתי ההגירה החלה.לאחר מכן, החל את כלי ניתוח עיבוד הקונפלונס על תמונות ניגודיות פאזה בהבחנה גבוהה שנאספו באופן אוטומטי כדי ליצור עקומת התפשטות תאים כנגד הזמן. לפני תחילת ההתמדה, מצפים את הצלחת לתרמיל הפלישה עם 50 מיקרוליטר של ג'ל מטריצה חוץ-תאית, מדולל במדיום תרבות תאים קר כקרח, לריכוז של 100 מיקרוגרם למיליליטר. לאחר מכן, מניחים את הצלחת באינקובטור של תרבות התאים למשך הלילה.למחרת אחר הצהריים, שאפו בעדינות את המדיום העודף, וצלו את התאים בצפיפות האופטימללית, בטריליקט, לתוך הבאר המתאימה של הצלחת החוץ-תאית מצופה המטריצה, ולתוך צלחת נוספת של 96 בארות לא מצופות. לאחר מכן, מניחים את הצלחות באינקובטור תרבות התאים בן לילה. למחרת בבוקר, מניחים את צלחת מסמן הנדידה לא מצופה לתוך מחזיק צלחת הבסיס של כלי השריטה, ולהשתמש dowels המנחה בזהירות למקם את החלק העליון של המחזיק על הבסיס.לחץ והחזק את הידית השחורה תוך הרמת בלוק הסיכה בזהירות כדי להפוך את השריטות. השריטות בכל באר צריכות להיות גלויות בעין בלתי, כמו גם מתחת למיקרוסקופ. לאחר מכן, לשטוף את הצלחת פעם או פעמיים עם מדיום תרבות מחומם מראש כדי להסיר תאים מנותקים או גיליונות תא.לצורך ההתדגם של הפלישה, גרד את הצלחת המצוהה כפי שהוכח. לאחר הסרת תאים וסדינים מנותקים, השתמשו בקופסה קרירה ומצוננת מראש כדי לצייד את הצלחת בארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות לפני שאתם שאפו בזהירות את המדיום הקר. לאחר מכן, מוסיפים 50 מיקרוליטרים של ג'ל מטריצה חוץ תאית מדולל לתוך הבאר המתאימה וממקמים את הצלחת לתוך החממה לתרבות התא במשך שלושים דקות.בועות נפוצות כאשר עובדים עם ג'ל מטריצה חוץ תאית, אבל הם יכולים להיות מסולקים על ידי שאפתנות 70 אחוז אתנול. לאחר מכן הוסיפו 100 מיקרוליטרים של מדיום טרי וחם, עם או בלי תרכובת הבדיקה, לבירות המתאימות של צלחת הבדיקה של הנדידה או הפלישה, והכנסו את הצלחת לפלטפורמת ההדמיה של התא החי. כדי לנקות את כלי השריטה, הנח את בלוק הסיכה העליון בסירות כביסה בודדות של 45 מיליליטר, המכילות 5 אחוז חומר ניקוי אחד, אחוז אחד של חומר ניקוי 2, מים מזוקקים סטריליים או 70 אחוז אתנול למשך חמש דקות לכביסה לפני הנחת כלי השריטה בחזרה לצלחת הבסיס שלו, לאחסון בסביבה נטולת אבק.להדמיית בדיקות הפצע, לאחר שאפשרו לצלחת לצייד במשך חמש דקות, בחרו את סוג הכלי 'כמישור יומן התמונה, והגדירו את סוג הסריקה כפצע שריטה. בחר או ערוך את תבנית הסריקה, בהתאם להגדרת לוחית הניסוי, ותזמן 24 שעות של סריקה חוזרת כל שעה עד שעתיים במשך 72 שעות, או עד שהפצעים ירפאו כפי שהוכח. לאחר שכל הפצעים החלימו, הפסיקו את הסריקה ובחרו שלוש עד שש תמונות מייצגות, המשתרעות על פני מגוון אחוזי קול, כולל תמונות מיד לאחר ביצוע הפצע, וסגירה של פצעים ב-10 וב-50 אחוזים.כדי לקבוע הגדרת עיבוד מתאימה, החל מסיכת פצע שריטה מתאימה ומסכת קונפלונס כפי שהוכח, ולהשתמש בזרם תצוגה מקדימה כדי להציג את הדיוק של המסכות. לאחר מכן, להשיק את עבודת הניתוח. בהגדה, רוחב הפצע הוא המרחק הממוצע בין יריעות התא לצד הפצע.הפציעה היא ההתכנסות בתוך האזור הפצוע. מהתכנסות הפצע הראשונית האידיאלית צריכה להיות קרובה לאפס אחוזים. צפיפות הפצע היחסית ומיעמד הפצע מצביעים על מהירות התאים הכובשים את אזור פצע השריטה.נתונים אלה כמעט חופפים בשתי שורות תא מייצגות אלה. קווי תאים שונים מדגימים יכולות שונות מאוד של ריפוי פצעים, המצביעות על יכולות העברה דיפרנציאליות בין קווי התא. לדוגמה, lamellipodia נצפו בקו זה תא אדנוקרצינומה השד בחזית הנדידה בתחילת הנדידה, ואילו זה mucin 1-לייצר סרטן השד קו התא לא הפגין שום סימן של נדידת תאים באותה נקודת זמן.יתר על כן, צפיפות הפצע היחסית של קו אדנוקרצינומה השד היה רווי לאחר 50 שעות, ואילו צפיפות הפצע היחסית של קו התאים של סרטן השד המייצר mucin 1 לא השתנה עם הזמן, מדגיש את פנוטיפ פולשני מאוד של תאי אדנוקרצינומה ולא פולשניות של mucin 1 מייצר תאים סרטניים בשד. תאי אדנוקרצינומה גם התנהגו בצורה שונה בעת פלישה דרך ג'ל מטריצה חוץ תאית, המדגים מורפולוגיה מוארכת עם בלטים מובילים, ובראיות הגירה, פעימה בחזית הנדידה הודמיה. כאשר ציפוי, זכור כי אם תאים מעטים מדי הם זרע, השריטה לא ייווצו כראוי, ואם תאים רבים מדי הם זרע, יהיה צפיפות.בעקבות הליך זה, ניתן להוסיף טיפולי מסלול, המאפשרים להתאים שיטה זו להקרנת מסלול תפוקה גבוהה. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לבצע בדיקות אלה בפלטפורמה אחת, שהיא בעלת תפוקה גבוהה, ומאפשרת לחוקרים לנטר את התאים שלהם בזמן אמת, ולא בנקודות קצה ניסיוניות. חומר החיטוי המשמש לחיטוי כלי השריטה עלול להיות מסוכן.הקפד לאסוף ולהיפטר מהפתרונות בהתאם ל- MSDS הרלוונטי, ולקווי ההדק הרגילים של המתקן שלך.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

נעים כלפי מעלה: פשוט וגמיש במבחנה הפלישה תלת מימדי Assay פרוטוקול

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Long-term Live-cell Imaging to Assess Cell Fate in Response to Paclitaxel

לטווח ארוך לחיות תאים הדמיה כדי להעריך את גורל בתגובה פקליטקסל

Live-cell imaging is a powerful technique that can be used to directly visualize biological phenomena in single cells over extended periods of time. Over ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

חיים תא הדמיה של TGF-β/Smad3 איתות לשביל במבחנה , In Vivo באמצעות מערכת הכתב אדנו

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

שליטה מרחבית וטמפורלית של מלנומה מורין ייזום מוטציה תאי גזע מלנוציט

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

בתוך שיטת חוץ גופית כדי ללמוד גידול-מקרופאג אינטראקציה

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

A Data Integration Workflow to Identify Drug Combinations Targeting Synthetic Lethal Interactions

זרימת עבודה של שילוב נתונים לזיהוי שילובי תרופות המכוונים לאינטראקציות קטלניות סינתטיות

A synthetic lethal interaction between two genes is given when knock-out of either one of the two genes does not affect cell viability but knock-out of ...

An Automated Differential Nuclear Staining Assay for Accurate Determination of Mitocan Cytotoxicity

תסיסה אוטומטית של כתמים גרעיניים דיפרנציאליים לקביעה מדויקת של ציטוקוקסיות מיטוקאן

The contribution of mitochondria to oncogenic transformation is a subject of wide interest and active study. As the field of cancer metabolism becomes ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

זרימת עבודה מהירה של סינון לזיהוי טיפול משולב פוטנציאלי עבור GBM באמצעות תאי גזע גליומה שמקורם במטופל

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

Automated Dissection Protocol for Tumor Enrichment in Low Tumor Content Tissues

פרוטוקול דיסקציה אוטומטי להעשרת גידולים ברקמות בעלות תכולת גידול נמוכה

Tumor enrichment in low tumor content tissues, those below 20% tumor content depending on the method, is required to generate quality data reproducibly ...

An Automated Microscopic Scoring Method for the &#947;-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

An Automated Microscopic Scoring Method for the ÃƒÅ½Ã‚Â³-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

שיטת ניקוד מיקרוסקופית אוטומטית לבדיקת מוקדי γ-H2AX בלימפוציטים אנושיים היקפיים

Ionizing radiation is a potent inducer of DNA damage and a well-documented carcinogen. Biological dosimetry comprises the detection of biological effects ...