Name: the left pneumonectomy combined with monocrotaline or sugen as a model of pulmonary hypertension in rats
Uploaded: 2019-03-08T14:30:00
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Este manuscrito foi apoiado pelo NIH conceder 7R01 HL083078-10 concede a AHA American Heart Association-17SDG33370112 e o nacional institutos de saúde NIH K01 HL135474 de Y.S. e institutos nacionais de saúde R01 HL133554, de Sara

Os procedimentos descritos abaixo foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e Comissão de utilização (IACUC) da faculdade de medicina da Icahn no Monte Sinai. Todos os ratos receberam atendimento humano em conformidade com o Monte Sinai "Guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório".
1. preparação para a cirurgia
<ol><li>Autoclave Cooley-Mayo curvo tesoura (grande tesoura), tesoura de íris reta (tesoura pequena), tesoura Iris McPherson-Vannas (tesoura de costas), f...

<ol>
	<li>Leopold, J., Maron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+of+Pulmonary+Vascular+Remodeling+in+Pulmonary+Arterial+Hypertension.">Molecular Mechanisms of Pulmonary Vascular Remodeling in Pulmonary Arterial Hypertension.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (5), 761 (2016).</li><li>Gomez-Arroyo, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective.">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 302 (4), L363-L369 (2012).</li><li>van Albada, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+increased+pulmonary+blood+flow+in+pulmonary+arterial+hypertension.">The role of increased pulmonary blood flow in pulmonary arterial hypertension.</a> European Respiratory Journal. 26 (3), 487-493 (2005).</li><li>Dickinson, M. G., Bartelds, B., Borgdorff, M. A. J., Berger, R. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+disturbed+blood+flow+in+the+development+of+pulmonary+arterial+hypertension:+lessons+from+preclinical+animal+models.">The role of disturbed blood flow in the development of pulmonary arterial hypertension: lessons from preclinical animal models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 305 (1), L1-L14 (2013).</li><li>Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+pulmonary+arterial+hypertension:+the+hope+for+etiological+discovery+and+pharmacological+cure.">Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 297 (6), L1013-L1032 (2009).</li><li>Cahill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiological+basis+of+chronic+hypoxic+pulmonary+hypertension+in+the+mouse:+vasoconstrictor+and+structural+mechanisms+contribute+equally.">The pathophysiological basis of chronic hypoxic pulmonary hypertension in the mouse: vasoconstrictor and structural mechanisms contribute equally.</a> Experimental Physiology. 97 (6), 796-806 (2012).</li><li>Okada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+hemodynamics+modify+the+rat+pulmonary+artery+response+to+injury.+A+neointimal+model+of+pulmonary+hypertension.">Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension.</a> American Journal of Pathology. 151 (4), 1019-1025 (1997).</li><li>Happ&#233;, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumonectomy+combined+with+SU5416+induces+severe+pulmonary+hypertension+in+rats.">Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (11), L1088-L1097 (2016).</li><li>Tanaka, Y., Schuster, D. P., Davis, E. C., Patterson, G. A., Botney, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+vascular+injury+and+hemodynamics+in+rat+pulmonary+artery+remodeling.">The role of vascular injury and hemodynamics in rat pulmonary artery remodeling.</a> Journal of Clinical Investigation. 98 (2), 434-442 (1996).</li><li>Nishimura, T., Faul, J. L., Berry, G. J., Kao, P. N., Pearl, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+a+surgical+aortocaval+fistula+on+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension.">Effect of a surgical aortocaval fistula on monocrotaline-induced pulmonary hypertension.</a> Critical Care Medicine. 31 (4), 1213-1218 (2003).</li><li>Linardi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+and+pulmonary+vascular+remodeling+induced+by+pulmonary+overflow+in+a+chronic+model+of+pretricuspid+shunt.">Ventricular and pulmonary vascular remodeling induced by pulmonary overflow in a chronic model of pretricuspid shunt.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (6), 2609-2617 (2014).</li><li>White, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plexiform-like+lesions+and+increased+tissue+factor+expression+in+a+rat+model+of+severe+pulmonary+arterial+hypertension.">Plexiform-like lesions and increased tissue factor expression in a rat model of severe pulmonary arterial hypertension.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 293 (3), L583-L590 (2007).</li><li>Samson, N., Paulin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetics,+inflammation+and+metabolism+in+right+heart+failure+associated+with+pulmonary+hypertension.">Epigenetics, inflammation and metabolism in right heart failure associated with pulmonary hypertension.</a> Pulmonary Circulation. 7 (3), 572-587 (2017).</li></ol>

Nos pulmões afetados PAH, proliferação vascular com formação neointimal e obliteração das artérias pulmonares resultar em graves alterações hemodinâmicas, insuficiência ventricular direita e precoce mortalidade7,8. As alterações às paredes do vaso aumentam a resistência ao fluxo sanguíneo, aumentando a pressão arterial e ventrículo direito. Nas fases iniciais de PAH, geralmente 3 semanas após a administração de MCT ou Sugen, ratos desenvolve...

Hipertensão arterial pulmonar (HAP) é uma doença progressiva e fatal, caracterizada por um aumento no fluxo sanguíneo pulmonar, aumento da resistência vascular, inflamação e remodelação de pequenos vasos sanguíneos pulmonares1. Esta remodelação geralmente resulta em lesões vasculares que obstruam e obliterar pequenas artérias pulmonares, causando vasoconstrição e aumento de pós-carga do ventrículo direito2. Existem alguns tratamentos farmacológicos bem sucedidos de PAH; Como consequência, restos de mortalidade PAH altas. Recentemente, o foco da pesquisa sobre a Patobiológico da hipertensão pulmonar mudou-se para um mecanismo de angio-proliferação, em que o papel do fluxo sanguíneo pulmonar aumentado é considerado como um gatilho importante no desenvolvimento da pulmonar vascular remodelação de3,4.
Modelos animais de hipertensão pulmonar forneceram introspecções críticas que ajudam a explicar a fisiopatologia da doença e têm servido como uma plataforma para a droga, celular, gene e entrega de proteína. Tradicionalmente, o modelo de hipertensão pulmonar induzida pela hipóxia crônica e o modelo de lesão pulmonar MCT têm sido os principais modelos utilizados para estudar PAH fisiopatologia5. No entanto, eles não são suficientes para produzir o padrão de fluxo e neointimal de sangue pulmonar aumentada de remodelação em relação às alterações descritas em pacientes humanos. O modelo de hipóxia crônica em roedores resulta em espessamento das paredes de vasos com vasoconstrição hipóxica sem angio-obliteração dos pequenos vasos pulmonares6. Além disso, a condição de hipóxia é reversível. Assim, o modelo de hipóxia não também é suficiente para produzir grave PAH. O modelo de lesão pulmonar MCT provocar alguma disfunção endotelial mas complexas vasculares obliterative lesões encontradas em humanos com HAP primária grave não desenvolvem no2ratos. Além disso, os ratos tratados com MCT tendem a morrer de toxicidade pulmonar induzida pelo MCT, doença hepática veno-oclusiva e miocardite em vez de PAH2. Finalmente, a pneumonectomia sozinha não é suficiente para produzir lesões neointimal em pequenos vasos pulmonares em um curto período de tempo. Depois a pneumonectomia, há mínima elevação na pressão arterial pulmonar7. Em humanos, a pneumonectomia é bem tolerada quando o pulmão contralateral é saudável7.
No entanto, o procedimento de pneumonectomia esquerda combinado com MCT ou Sugen é vantajoso uma vez que imita o fluxo sanguíneo pulmonar aumentado e resulta em remodelação vascular pulmonar comparável à Hap clínica grave. A pneumonectomia é executada no pulmão esquerdo, que tem apenas 1 lobo, em vez do direito, que possui quatro lóbulos. Se o pulmão direito foi removido, o animal seria incapaz de compensar a insuficiência respiratória. No modelo de pneumonectomia-MCT, neointimal padrão de remodelação desenvolve-se em mais de 90% dos animais operados tratados7. Da mesma forma, a combinação dos resultados Sugen e pneumonectomia em HAP grave, caracterizada por lesões vasculares angio-obliterative, proliferação, apoptose e RV disfunção8. O procedimento de pneumonectomia esquerda também é vantajoso em comparação com outros procedimentos cirúrgicos para induzir PAH. Anteriormente descritos modelos em ratos para aumentar o fluxo sanguíneo pulmonar para os pulmões incluem o aorto-caval shunt ou anastomose da artéria subclávia-pulmonar. Estes modelos são extremamente complicado7,9,10,11. Para realizar uma derivação aorto-caval, abdômen do animal tem que ser aberto. O shunt é colocado na aorta abdominal, que aumenta o fluxo sanguíneo para os órgãos abdominais em vez de apenas os pulmões, assim, PAH leva muito mais tempo para desenvolver. Além disso, é difícil determinar o fluxo de sangue através do shunt, Considerando que com a pneumonectomia, o sangue flui para as restantes duplas de pulmão. A anastomose da artéria subclávia-pulmonar também tem muitas complicações. O fluxo de sangue arterial na veia pode levar a trombose da anastomose e sangramento. Como a derivação aorto-caval, é difícil determinar o fluxo de sangue através da anastomose. Além disso, é uma técnica difícil e cara que requer habilidades cirúrgicas vasculares. A pneumonectomia esquerda unilateral duplica o fluxo sanguíneo e da tensão de cisalhamento no pulmão contralateral e, em combinação com MCT ou Sugen, faz com que os resultados típicos de hemodinâmicos e histopatológicos de PAH, que é a célula endotelial dano8, 12.
A novidade deste manuscrito é apresentada no protocolo cirúrgico muito detalhado e abrangente da pneumonectomia esquerda em ratos e na discussão dos desafios técnicos e fisiológicos destes modelos. Porque este protocolo não está atualmente disponível, muitos investigadores acreditam que o modelo é muito difícil usar. Os investigadores que tenham realizado a pneumonectomia esquerda têm enfrentado alta mortalidade e taxas de morbidade associadas com a perda desnecessária de animais, comprometendo a avaliação científica. Em vez disso, muitos vai usar modelos clássicos como MCT injeção, hipóxia crônica ou apenas a pneumonectomia criar PAH. No entanto, estes modelos são muito menos eficazes do que a combinação de MCT ou Sugen com a pneumonectomia esquerda. O objetivo principal deste artigo é fornecer o protocolo cirúrgico primeiro detalhado e reproduzível para a pneumonectomia esquerda unilateral em ratos e fornecer o melhor modelo cirúrgico de PAH. Combinar este protocolo para pneumonectomia unilateral à esquerda com MCT ou SU5416 permitirá que os investigadores criar um modelo muito mais eficaz e clinicamente relevante de grave PAH para estudar a patogênese desta doença fatal.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:739px;" width="739">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:223px;">Surgical Blade</td>
			<td style="width:111px;">Bard-Parker</td>
			<td style="width:153px;">371215</td>
			<td style="width:252px;">Incision</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Forane (Isoflurane, USP)</td>
			<td style="width:111px;">Baxter</td>
			<td style="width:153px;">NDC 10019-360-40</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">BD Angiocath 16 G</td>
			<td style="width:111px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">381157</td>
			<td>intubation tube, chest tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">BD 1 mL Insulin Syringe</td>
			<td style="width:111px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">329652</td>
			<td>administer buprinex post-operatively</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Biogel Surgeons Surgical Gloves</td>
			<td style="width:111px;">Biogel</td>
			<td style="width:153px;">30460-01</td>
			<td>sterile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Wahl BravMini+ Trimmer</td>
			<td style="width:111px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:153px;">CLP-41590 P</td>
			<td>shave surgical site</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">SU5416</td>
			<td style="width:111px;">Cayman Chemical</td>
			<td style="width:153px;">13342</td>
			<td>Sugen&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fiber Optic Illuminator</td>
			<td style="width:111px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:153px;">EW-41723-02</td>
			<td>light for intubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Surgipro II 4-0 Suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">VP831X</td>
			<td>Closing intercostal muscles</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Polysorb 5-0 Suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">GL-885</td>
			<td>Closing skin</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Medium Slide Top Induction Chamber</td>
			<td style="width:111px;">DRE Veterinary</td>
			<td style="width:153px;">12570</td>
			<td>oxygen &#38; isoflurane delivery</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">DRE Compact 150 Rodent Anesthesia Machine</td>
			<td style="width:111px;">DRE Veterinary</td>
			<td style="width:153px;">373</td>
			<td>oxygen &#38; isoflurane delivery</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Small Vessel Cauterizer Kit</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:153px;">18000-00</td>
			<td>cauterizer to minimize bleeding</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td style="width:111px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:153px;">55-7040</td>
			<td>ventilator</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">MouseSTAT Jr</td>
			<td style="width:111px;">Kent Scientific</td>
			<td style="width:153px;">MSTAT-JR</td>
			<td style="width:252px;">pulse oximeter &#38; heart rate monitor</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Mouse Paw Pulse Oximeter Sensor</td>
			<td style="width:111px;">Kent Scientific</td>
			<td style="width:153px;">SPO2-MSE</td>
			<td style="width:252px;">pulse oximeter &#38; heart rate paw sensor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">PhysioSuite RightTemp</td>
			<td style="width:111px;">Kent Scientific</td>
			<td style="width:153px;">PS-02</td>
			<td>temperature pad</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">PVP Prep Solution</td>
			<td style="width:111px;">Medline</td>
			<td style="width:153px;">MDS093944</td>
			<td>Cleaning surgical site</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Poly-lined Drape</td>
			<td style="width:111px;">Medline</td>
			<td style="width:153px;">NON21002Z</td>
			<td>cover animal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">3 mL syringe</td>
			<td style="width:111px;">Medline</td>
			<td style="width:153px;">SYR103010</td>
			<td>administer fluids post-operatively</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:223px;">Microsurgical Kits, Integra&#160;</td>
			<td style="width:111px;">Miltex</td>
			<td style="width:153px;">95042-540</td>
			<td style="width:252px;">surgical tools: plain wire speculum, double-ended probe, McPherson-Vannas Iris scissors straight, straight iris scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Hemostatic forceps - Micro-Jacobson-Mosquito</td>
			<td style="width:111px;">Miltex</td>
			<td style="width:153px;">17-2602</td>
			<td>mosquito</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Buprenorphrine HCl 0.3 mg/mL</td>
			<td style="width:111px;">Par Pharmaceutical</td>
			<td style="width:153px;">NDC 42023-179-01</td>
			<td>Pain relief</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cooley-Mayo curved scissors</td>
			<td style="width:111px;">Pilling</td>
			<td style="width:153px;">352090</td>
			<td>Large scissors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Gerald Tissue forceps</td>
			<td style="width:111px;">Pilling</td>
			<td style="width:153px;">351900</td>
			<td>forceps</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Wangesnsteen Tissue Forceps</td>
			<td style="width:111px;">Pilling</td>
			<td style="width:153px;">342929</td>
			<td>atraumatic forceps</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Pilling Thin Vascular Needle Holder</td>
			<td style="width:111px;">Pilling</td>
			<td style="width:153px;">354962DG</td>
			<td>needle holder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Crotaline</td>
			<td style="width:111px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">C2401-1G</td>
			<td>MCT</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Surflash 20 G IV Catheter</td>
			<td style="width:111px;">Terumo</td>
			<td style="width:153px;">SR*FF2051</td>
			<td style="width:252px;">For pressure reading during organ harvest</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">ADVantage PV System with 1.2 Fr Catheter</td>
			<td style="width:111px;">Transonic Inc</td>
			<td style="width:153px;">ADV500</td>
			<td style="width:252px;">Record pulmonary artery and right ventricle pressure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Medium Hemoclip</td>
			<td style="width:111px;">Weck</td>
			<td style="width:153px;">523700</td>
			<td>ligate vessels</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Open Ligating Clip Applicator; Medium, curved</td>
			<td style="width:111px;">Weck Horizon</td>
			<td style="width:153px;">237081</td>
			<td>hemoclip applicator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Surgical Microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss OPMI MD</td>
			<td style="width:153px;">1808</td>
			<td>magnification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the left pneumonectomy combined with monocrotaline or sugen as a model of pulmonary hypertension in rats

Neste protocolo, detalhamos os passos processuais corretos e precauções necessárias para com êxito executar uma pneumonectomia esquerda e induzir PAH em ratos com a administração adicional de monocrotaline (MCT) ou SU5416 (Sugen). Podemos também comparar esses dois modelos para outros modelos PAH comumente utilizados na investigação. Nos últimos anos, o foco dos modelos animais PAH mudou-se para estudar o mecanismo de angioproliferation de lesões plexiforme, no qual o papel do fluxo sanguíneo pulmonar aumentado é considerado como um gatilho importante no desenvolvimento da severa pulmonar remodelação vascular. Um dos mais promissores modelos de roedores de hiperfluxo pulmonar é a pneumonectomia esquerda unilateral, combinada com um hit"segundo" do MCT ou Sugen. A remoção do pulmão esquerdo leva ao fluxo sanguíneo pulmonar aumentado e turbulento e remodelação vascular. Atualmente, não há nenhum procedimento detalhado da cirurgia pneumonectomia em ratos. Este artigo detalha um protocolo passo a passo do procedimento cirúrgico pneumonectomia e cuidados pós-operatórios em ratos Sprague Dawley masculinos. Resumidamente, o animal é anestesiado e o peito é aberto. Uma vez que a artéria pulmonar esquerda, veia pulmonar e brônquio são visualizados, eles são ligados e o pulmão esquerdo é removido. Em seguida, fechado no peito e o animal recuperado. O sangue é forçado a circular apenas no pulmão direito. Este aumento da pressão vascular leva a uma remodelação progressivo e oclusão de pequenas artérias pulmonares. O segundo hit do MCT ou Sugen é usado uma semana depois da cirurgia para induzir disfunção endotelial. A combinação do aumento do fluxo sanguíneo no pulmão e disfunção endotelial produz grave PAH. A principal limitação deste procedimento é que ele requer habilidades cirúrgicas gerais.

De acordo com o sistema de classificação aceites, hipertensão pulmonar caracteriza-se por uma pressão média de artéria pulmonar (PAPm) excedeu os limites superiores da pressão normal de artéria pulmonar (i.e., 25 mm Hg). No grupo MCT + pneumonectomia, grave PAH desenvolvido por dia 21, com um aumento PAPm (Figura 1). A PAPm é calculado pela fórmula:
<img alt="Equation" src="/files/ftp_uplo...

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The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

A pneumonectomia esquerda combinado com Monocrotaline ou Sugen como modelo de hipertensão pulmonar em ratos

A roedor pneumonectomia esquerda é uma técnica valiosa na investigação de hipertensão pulmonar. Aqui, apresentamos um protocolo para descrever o procedimento de pneumonectomia de rato e cuidados pós-operatórios para garantir mínima morbidade e mortalidade.

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...

Este protocolo é significativo porque produz o melhor modelo possível para hipertensão arterial pulmonar. Nenhum outro modelo produz as lesões plexiformes encontradas em pacientes com AP. A principal vantagem é que dobramos o fluxo de sangue no pulmão direito e artéria pulmonar, causando danos endoteliais e forçando os pulmões a trabalhar duas vezes mais duro.Nosso grupo desenvolveu um modelo altamente eficiente de hipertensão arterial pulmonar para desenvolver terapêutica. Além da hipertensão arterial pulmonar, este método pode ser útil na medicina regenerativa e poderia dar uma visão de outras doenças com aumento do fluxo pulmonar, como defeitos cardíacos congênitos ou pacientes pós-pneumonectomia. Para alguém que nunca realizou essa técnica, meu conselho é seguir o protocolo exatamente e ter certeza de que o cirurgião pode ver exatamente o que está fazendo.Depois de anestesiar o rato com 4% de isoflurane, o animal é entubado usando uma luz de ganso de fibra óptica para iluminar a traqueia. Insira um cateter de calibre 16 na laringe e use um espelho frio para observar a condensação da umidade na respiração expirada do cateter para confirmar a intubação. Conecte o rato ao ventilador e coloque o rato sob o microscópio na posição de decúbito direito em uma almofada de aquecimento Celsius de 37 graus.Segure os membros dianteiros com fita adesiva e use cortadores para raspar o tórax esquerdo por trás da perna dianteira até o final da caixa torácica. Limpe a pele exposta com três soluçãos sequenciais de iodo povidone de 10% e lenços de 70% de etanol, e coloque um oxímetro de pulso no pé do rato para monitorar a frequência cardíaca e a saturação de oxigênio durante toda a cirurgia. Agora, ajuste o microscópio e leve a visão cirúrgica em foco.Em seguida, coloque uma cortina estéril sobre o corpo do rato e a bandeja de instrumentos para criar um ambiente estéril. E, finalmente, coloque instrumentos estéreis na bandeja de instrumentos estéreis. Para realizar uma pneumonectomia esquerda, use tesoura Cooley-Mayo e fórceps de tecido Gerald para cortar um buraco de dois a três centímetros na cortina cirúrgica, e use uma lâmina cirúrgica para fazer uma incisão lateral de dois centímetros de comprimento no tórax esquerdo.Use a tesoura Cooley-Mayo para cortar cada camada de tecido até que as costelas e músculos intercostais sejam expostos. Use um mosquito para fazer um buraco através do músculo do terceiro espaço intercostal. Usando uma sonda de duas pontas, mova o pulmão para visualizar a artéria pulmonar, e use a tesoura McPherson-Vannas Iris para abrir os músculos intercostais a uma largura de cerca de um a dois centímetros.Coloque um pequeno retrátil auto-retentor na pleura esquerda para manter as costelas e músculos abertos, e mova o pulmão esquerdo mais baixo no abdômen para permitir o acesso à artéria pulmonar e ao brônquio. Para ligadura do brônquio principal esquerdo e artéria pulmonar, primeiro, carregue um Hemoclip médio em um aplicador de clipe ligante e use as fórceps atraumáticas Wangensteen para levantar cuidadosamente a porção superior do pulmão esquerdo para expor a artéria pulmonar. Feche o clipe e o aplicador ao redor da artéria, tomando cuidado para não fechar ou romper a veia azygos esquerda.E abra ainda mais a incisão usando a amígdala para separar as fibras musculares. Depois de carregar outro Hemoclip médio no aplicador do clipe ligante, use as fórceps atraumáticas e fórceps de tecido padrão para levantar a porção inferior do pulmão para fora da incisão até que o brônquio principal esquerdo e a veia pulmonar esquerda sejam visualizados. Ligar cuidadosamente o brônquio principal esquerdo e a veia pulmonar junto com o segundo Hemoclip, e use uma tesoura para remover o pulmão sem cortar ou rasgar o clipe.Em seguida, use um pequeno pedaço de gaze estéril para absorver qualquer sangue e conter qualquer sangramento. Use o suporte de agulha e uma sutura de prolene 4-0 para fechar as costelas e músculos intercostais. Antes de fechar os músculos intercostais, insira um cateter de 16 bitolas na cavidade torácica longe da incisão cirúrgica e no sétimo espaço intercostal, e remova imediatamente a agulha, deixando o cateter no lugar.Coloque uma sutura de 5-0 na pele e ao redor do tubo torácico para que, quando o tubo torácico for removido, o orifício seja amarrado e amarre as suturas para fechar as costelas. Feche a pele e o espaço subcutâneo com uma sutura 5-0 em execução, e use uma seringa de três mililitros para evacuar o ar da cavidade pleural através do cateter para restaurar a pressão negativa normal no tórax. Use um suporte de agulha para fixar imediatamente o cateter para evitar que o ar volte para a cavidade torácica.Retire o cateter e amarre a sutura para fechar o orifício. No grupo pneumonectomia e monocrotalina, a hipertensão pulmonar grave desenvolve-se até o dia 21, como evidenciado por um aumento na pressão média da artéria pulmonar em comparação com o controle de animais falsos não tratados. No grupo pneumonectomia mais Sugen, a pressão média da artéria pulmonar é três vezes maior do que no grupo controle.A pressão sistólica ventricular direita também é muito maior tanto nos animais tratados com monocrotalina quanto em Sugen, em comparação com o grupo controle. Em hematoxilina e eosina manchadas seções normais de tecido pulmonar de ratos, espaços entre os alvéolos e as estruturas alveolares são aparentes, e os vasos são claros e de espessura normal. No pulmão da hipertensão arterial pulmonar, há evidência de remodelação, espessamento das paredes do vaso, constrição grave dos vasos e inflamação e arterite pulmonar focal.O animal tem que compensar a perda de um pulmão, por isso é importante ser paciente durante o período de recuperação. Monitore os sinais vitais e dê oxigênio adicional ou volume pulmonar conforme necessário. Sugen cria apoptose endielial que é sinal clínico relevante de hipertensão arterial pulmonar.O modelo de pneumonectomia esquerda em roedores abriu caminho para os cientistas estudarem anormalidades de fluxo e desenvolverem novos tratamentos para hipertensão arterial pulmonar. Devido ao uso de isoflurane, Sugen e/ou MCT neste modelo, os equipamentos de proteção individual devem ser usados o tempo todo.

Research

JoVE Journal

Medicine

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

5/6th Nephrectomy em combinação com uma dieta alta de sal e Óxido Nítrico Sintase inibição para induzir o Doença Renal Crônica no Rato Lewis

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Medicina

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets

O aumento de artéria pulmonar fluxo pulsátil melhora Hypoxic Hipertensão Pulmonar em Leitões

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries (PA). These arteries are deformed, leading to right ventricular ...

A Model of Cardiac Remodeling Through Constriction of the Abdominal Aorta in Rats

Um Modelo de Cardiologia remodela Através constrição da Aorta Abdominal em Ratos

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

A cirurgia de derivação, coração direito Cateterismo e Vascular morfometria em um modelo de rato para induzida Fluxo de Hipertensão Arterial Pulmonar

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Murine Echocardiography of Left Atrium, Aorta, and Pulmonary Artery

Murino Ecocardiografia de Esquerda Atrium, Aorta, ea artéria pulmonar

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Re-implantação direta de Esquerda da Artéria Coronária para a aorta em adultos com Origem Anômala da Coronária Esquerda da Artéria da artéria pulmonar (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

Estenose Atrial Esquerdo induzida Arterialization venoso pulmonar e hipertensão pulmonar do grupo 2 no rato

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

Indução e Caracterização da Hipertensão Pulmonar em Camundongos usando o Modelo De Hypoxia/SU5416

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

A Model of Reverse Vascular Remodeling in Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease by Aortic Debanding in Rats

Um modelo de remodelação vascular reversa na hipertensão pulmonar devido a doença cardíaca esquerda por debandada de aórtica em ratos

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary ...

Multiple Intravenous Bolus Dosing and Invasive Hemodynamic Assessment in a Hypoxia-Induced Mouse Pulmonary Artery Hypertension Model

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive life-threatening disease, primarily affecting small pulmonary arterioles of the lung. Currently, ...