Name: a fluorescence-based method to study bacterial gene regulation in infected tissues
Uploaded: 2019-02-19T15:00:00
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Nous remercions Alexander Horswill pour le don de la PsarAP1tdTomato - fusion et Karen Creswell pour aide à l’analyse en cytométrie en flux. Nous remercions également Alyssa King pour obtenir des conseils sur l’analyse statistique. Ce travail a été financé en partie par une bourse de recherche exploratoire et le développement de NIH (fief AI123708) et les fonds de démarrage de faculté à SRB. Les bailleurs de fonds n’avaient aucun rôle dans la conception de l’étude, la collecte de données et interprétation ou la décision de soumettre les travaux pour publication.

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de l’Université de Georgetown.
1. génération de la souche de journaliste Fluorescent
<ol><li>Digérer le vecteur d’intégration pRB4 génome séquentiellement avec les enzymes de restriction EcoRI et SmaI. Suivant le protocole du fabricant, mis en place une digestion au jour le jour avec la SmaI à l’aide de 1 µg de pRB4 à 25 ° C et ensuite procéder à la secon...

Les maladies infectieuses bactériennes sont un problème croissant de santé dans le monde entier en raison de l’acquisition de la résistance aux antibiotiques déterminants46. Adaptation aux environnements hôtes étant essentielle pour la croissance et la survie au cours de l’infection, stratégies de ciblage des programmes d’expression de gènes qui augmentent l’aptitude de l’agent pathogène peuvent s’avérer utiles thérapeutiquement. Un de ces programmes est l’ensemble des g?...

Bactéries répondent à l’évolution des conditions physiologiques et les modifications de l’état nutritionnel de leur environnement de façon différentielle exprimant des gènes nécessaires à l’adaptation et la survie. Par exemple, des agents pathogènes opportunistes colonisent les corps des surfaces à relativement faible densité et sont souvent inoffensifs. Cependant, une fois que la bactérie a pénétré les barrières physiques et chimiques, il doit composer avec Counter-défenses des cellules immunitaires de l’hôte et de la disponibilité restreinte des nutriments1. À titre d’exemple, Staphylococcus aureus colonise environ le tiers de la population de façon asymptomatique, mais est également la cause de dévastateur de la peau et des tissus mous, ostéomyélite, endocardite et bactériémie2. Le succès S. aureus comme un pathogène est souvent attribué à sa flexibilité métabolique, mais aussi un arsenal de facteurs de virulence de surface associées et sécrétées qui permettent à la bactérie d’échapper à la circulation sanguine et se répliquer dans les tissus périphériques 3,4,5. Parce que l’hôte mort due à une maladie staphylococcique est une impasse évolutive et la transmission de limites aux nouveaux hôtes6, l’engagement à la production de facteur de virulence doit être soigneusement contrôlée.
Un réseau complexe de réglementation des protéines et répond d’ARN non codants à une variété de stimuli environnementaux, y compris de cellules densité, phase de croissance, facteurs associés à neutrophile et disponibilité des nutriments, pour s’assurer que les gènes de virulence sont exprimées à la heure exacte et l’emplacement au sein de l’hôte tissus7,8,9,10,11,12,13. Par exemple, le système à deux composants SaeR/S (TCS) régule l’expression de plusieurs facteurs de virulence par la kinase de capteur (SaeS) et la réponse régulateur (SaeR)14. SaeS est autophosphorylated sur un résidu histidine conservée en réponse à l’hôte des signaux (par exemple, human neutrophiles peptides [HNPs], calprotectine)8,15,16. Le groupe phosphoryle est ensuite transféré dans un résidu aspartate sur SaeR, activant ce dernier comme une protéine de liaison à l’ADN (SaeR ~ P)17. Le SDC SaeR/S réglemente plus de 20 gènes qui contribuent à la pathogénèse, y compris les protéines de liaison de la fibronectine (FnBPs), leukocidins et staphylocoques à coagulase14,18,19,20. Cibles peuvent être classées en haute affinité et de faible affinité gènes cibles, qui sont probables induit que le niveau de SaeR ~ P augmente lorsqu’ils sont exposés à ses repères21. L’activité de SaeR/S est contrôlée par les autres organismes de réglementation de l’expression des gènes tels que le système de détection de quorum Agr, répresseur de protéine de toxines (Rot) et l’autre facteur sigma B (SigB)22,23,24.
NUC est un gène de virulence de Sae-dépendante chez Staphylococcus aureus et encode la Thermonucléase (Nuc), qui est essentiel pour échapper à neutrophilic emi tpa (filets) et pour la diffusion au cours de la cours de l’infection de25,26. L’expression du nuc est également fortement indirectement réprimée par CodY en présence d’acides aminés à chaîne ramifiée et GTP27et directement réprimée par la protéine staphylococcique accessoires régulateur SarA28,29 , dont l’activité est influencée par l’oxygène (état d’oxydoréduction) et pH30. Étant donné que les mutants sae et nuc sont atténués dans les modèles de souris de l’infection, il y a intérêt à développer des interventions chimiques qui inhibent leur correspondant activités26,31. Malgré cela, il n’y a aucune information au sujet de leur règlement au cours de l’infection.
Fluorescents reporters ont été utilisés pour surveiller et quantifier l’expression des gènes au niveau de la cellule unique. Ici, nous présentons une méthode de quantification de la S. aureus l’expression des gènes au cours de l’infection qui, lorsqu’il est associé avec analyse du transcriptome in vitro et puissantes techniques d’imagerie comme l’imagerie par résonance magnétique (IRM) et la spectroscopie par résonance magnétique (SRM), peuvent révéler comment bactérienne la physiologie est réglementée in vivo et l’abondance relative des éléments nutritifs dans certains créneaux. La méthode peut être appliquée à toute bactérie pathogène avec un système génétique tractable.
Vue d’ensemble du vecteur génomique intégrative.
La génomique intégrative vecteur pRB4 contient 500 paires de bases chaque des régions en amont et en aval de la pseudogène USA300 de Staphylococcus aureus SAUSA300_0087 pour faciliter la recombinaison homologue. pRB4 est dérivé de l’épine dorsale le vecteur thermosensibles pMAD contenant la cassette de résistance à l’érythromycine (ermC) et bêta-galactosidase thermostable gène bgaB pour le dépistage de bleu/blanc de recombinants32. La journaliste ingénierie construction contient également un marqueur de résistance de chloramphénicol (cat) pour la sélection après l’intégration du génome et élimination de plasmide, ainsi que des sites EcoRI et SmaI à fusionner la région régulatrice d’intérêt au vert superfolder protéine fluorescente (sGFP) (Figure 1). On sait que le choix du site de liaison du ribosome (RBS) influe sur l’activité du reporter et exige souvent empiriques optimisation33. Ainsi, un RBS n’est pas fourni. Ici, le site de fixation du ribosome native est utilisé pour fournir un modèle plus naturel de l’expression des gènes, mais les autres sites peuvent être utilisés.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1015px;" width="1014">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">5% sheep blood</td>
			<td style="width:343px;">Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)</td>
			<td style="width:139px;">A10</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:367px;">5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&#946;-D-galactopyranoside (X-Gal)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>R0402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Ampicillin</td>
			<td style="width:343px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">BP1760-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">C57Bl/6 Mice</td>
			<td style="width:343px;">Charles River</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Chloramphenicol</td>
			<td style="width:343px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">C-0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cryostat microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture, Cap</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>2005-02512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">D+2:25NA Oligo</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (Coralville, Iowa)</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA Ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Erythromycin</td>
			<td style="width:343px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">E5389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow Analyzer</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z273627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Miniprep, plasmid</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">orbital shaking water bath</td>
			<td>New Brunswick Innova</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PCR purification</td>
			<td>QIagen</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td style="width:343px;">Cellgrow</td>
			<td style="width:139px;">46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plate reader</td>
			<td style="width:343px;">Tecan</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precellys 24 homogenizer</td>
			<td>Bertin Laboratories</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pUC57-Kan</td>
			<td>GenScript (Piscataway, NJ)</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Q5 Taq DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs (Ipswich, MA)</td>
			<td style="width:139px;">M0491S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:367px;">Restriction Enzymes</td>
			<td>New England Biolabs (Ipswich, MA)</td>
			<td style="width:139px;">R0150S (PvuI), R3136S (BamHI), R0144S (BglII), R3131S (NheI), R0101S (EcoRI), R0141S (SmaI).</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reverse transcriptase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E6300L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Sanger Sequencing</td>
			<td>Genewiz (Germantown, MD)</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sub Xero clear tissue freezing medium</td>
			<td>Mercedes Medical</td>
			<td style="width:139px;">MER5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfrost Plus microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">superloop</td>
			<td>GE Lifesciences</td>
			<td>18111382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe, Filter</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>28145-481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syto 40</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">S11351</td>
			<td>Membrane permeant nucleic acid stain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Tetracycline</td>
			<td style="width:343px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">T7660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Tryptic Soy Broth</td>
			<td style="width:343px;">VWR</td>
			<td style="width:139px;">90000-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UV-visible spectrophotometer</td>
			<td>Beckman Coulter-DU350</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield Antifade Mounting medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td style="width:139px;">H-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a fluorescence-based method to study bacterial gene regulation in infected tissues

Les gènes de virulence bactérienne sont souvent réglementés au niveau transcriptionnel par de multiples facteurs qui répondent aux différents signaux environnementaux. Certains facteurs agissent directement sur les gènes de virulence ; d’autres contrôlent la pathogénie en ajustant l’expression des régulateurs en aval ou l’accumulation de signaux qui affecte l’activité de l’organisme de réglementation. Alors que le règlement a été largement étudiée au cours de la croissance in vitro , on connaît relativement comment l’expression des gènes est ajustée au cours de l’infection. Ces informations sont importantes lorsque le produit d’un gène particulier est un candidat pour une intervention thérapeutique. Transcriptionnels approches comme la RT-PCR quantitative, en temps réel et RNA-Seq sont de puissants moyens pour étudier l’expression des gènes au niveau mondial, mais souffrent de nombreux défis techniques, y compris de faible abondance d’ARN bactérien par rapport à l’hôte ARN et échantillon dégradation par les RNases. Évaluation de règlement à l’aide de reporters fluorescents est relativement facile et peut être multiplexé avec des protéines fluorescentes ayant des propriétés spectrales uniques. La méthode permet une analyse unicellulaires, spatio-temporelle de l’expression génique dans les tissus qui présentent des dégradés architecture et physiochimiques tridimensionnelles complexes qui influent sur les réseaux de régulation bactériens. Ces informations sont perdues lorsque les données sont en moyenne sur la population en vrac. Ici, on décrit une méthode pour la quantification de l’expression de gène dans les bactéries pathogènes in situ. La méthode repose sur le traitement de tissus simples et l’observation directe de la fluorescence des protéines de journaliste. Nous démontrent l’utilité de ce système en examinant l’expression de Staphylococcus aureus Thermonucléase (nuc), dont le produit génique est requis pour évasion immunitaire et virulence complet ex vivo et in vivo. Nous montrons que nuc-gfp est fortement exprimé dans les abcès rénales et révéler l’expression des gènes hétérogène due en partie à apparent règlement spatiale de l’activité de promoteur nuc en abcès pleinement engagée avec la réponse immunitaire. La méthode peut être appliquée à toute bactérie avec un système génétique balayages et de n’importe quel modèle d’infection, fournir des informations précieuses pour les études précliniques et développement de médicaments.

Nous avons développé un plasmide dérivé pMAD32 qui peut fournir n’importe quel journaliste construct de fusion dans le chromosome par recombinaison homologue double filtre (Figure 1). Cette construction permet d’analyse quantitative de toute région régulatrice qui prend en charge la production de la protéine GFP et signal fluorescent au-dessus de fond. Le plasmide confère la résistance à l’ampicilline (Apr) p...

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A Fluorescence-based Method to Study Bacterial Gene Regulation in Infected Tissues

Une méthode axée sur la Fluorescence pour étudier la régulation des gènes bactériens dans les tissus infectés

Décrite ici est une méthode permettant d’analyser l’expression des gènes bactériens dans les tissus animaux au niveau cellulaire. Cette méthode fournit une ressource pour étudier la diversité phénotypique survenant dans une population bactérienne en réponse à l’environnement tissulaire lors d’une infection.

Bacterial virulence genes are often regulated at the transcriptional level by multiple factors that respond to different environmental signals. Some ...

Cette méthode peut révéler des modèles spatiaux d’expression des gènes bactériens et des stratégies d’adaptation physiologique aux micro-environnements des tissus hôtes qui sont perdus lorsqu’ils sont en moyenne dans l’ensemble de la population dans les tissus. Avec cette technique, des hétérogénéités potentielles peuvent être détectées qui doivent être prises en compte lors de l’identification de nouvelles voies bactériennes et protéines à cibler par des antivirulences ou des composés antibactériens. Commencez par strier les souches s.aureus d’intérêt sur les plaques d’agar sanguin à partir d’un stock congelé de glycérol et en incubant les plaques à 37 degrés Celsius pendant 16 à 24 heures pour confirmer leurs phénotypes hémolytiques en fonction de leur capacité à lyser les globules rouges et à former des zones transparentes claires.Inoculer des isolats de colonie unique de chaque souche en quatre millilitres de bouillon de soja tryptique, ou BST, dans des tubes de verre stériles et faire pivoter les tubes à 37 degrés Celsius pendant 16 à 24 heures dans un rouleau à tube à un angle d’environ 70 degrés et 70 rotations par minute. Le lendemain matin, mesurez la densité optique à 600 nanomètres, ou OD 600, des cultures sur un spectrophotomètre et diluez les cellules à un OD 600 de 0,05 en 25 millilitres de BST stérile à un rapport de cinq à un flacon par volume en flacons de 125 millilitres Delong. Incuber les cultures dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius à 280 rotations par minute et récolter les cellules pendant la phase exponentielle.Pelleter les cellules par centrifugation et laver les cellules deux fois dans un volume égal de PBS stérile. Puis résuspendez les cellules dans le PBS frais à une fois 10 à la huitième colonie formant des unités par concentration millilitre pour leur injection suivante dans un animal destinataire. Au point final expérimental approprié, récoltez le rein, le cœur, le foie, les poumons et la rate en tubes de polypropylène de 15 millilitres contenant de la formaline tamponnée à 10 % pendant une incubation de 24 à 48 heures dans l’obscurité à température ambiante avec une légère secousse ou rotation.À la fin de la fixation, intégrer les organes dans un milieu clair de congélation des tissus pour le stockage à moins 80 degrés Celsius. Utilisez un cryostat pour acquérir 10 sections de tissus épais de micromètre et sécher les sections sur des glissières de verre chargées pré-nettoyées individuelles pendant 20 minutes dans l’obscurité avant d’appliquer un support de montage dur complété par dapi. Appliquez ensuite des feuillets de couverture et guérissez les glissières à température ambiante pendant la nuit avant de transférer les échantillons à l’entreposage à long terme à quatre degrés Celsius.Pour identifier les lésions dans les échantillons, placez une diapositive sur la scène d’un microscope confocal à balayage laser et utilisez un objectif approprié pour visualiser les cellules individuelles pour acquérir des images des lésions. Pour mesurer les intensités de fluorescence dans les images confocales, ouvrez une image dans ImageJ et ajustez la luminosité et le contraste pour visualiser correctement le signal de fluorescence de la lésion. Définissez la région d’intérêt en utilisant l’outil de sélection polygone et ajoutez le retour sur investissement au gestionnaire de retour sur investissement sous l’onglet Modifier dans ImageJ.Sélectionnez Modifier, puis Sélectionnez, et enfin Ajouter au Gestionnaire. Ensuite, renommez le roi et étiquetez l’image respective. Pour définir le centroïde, ouvrez l’onglet Analyser et sélectionnez Zone, Valeur grise moyenne, Centroïde et Limite de seuil.Extraire la valeur d’intensité de fluorescence centroïde ou mesurer l’intensité moyenne de fluorescence dans une lésion donnée par unité. Pour ce faire, il est possible d’utiliser la fonction de seuil pour fixer les limites de fluorescence inférieures et supérieures au besoin. Exportez les données vers un fichier Excel et préparez une colonne indiquant l’intensité moyenne de fluorescence par unité de surface pour la périphérie et le noyau.Pour calculer les intensités moyennes de fluorescence par unité de surface dans la périphérie et le noyau, définissez manuellement les limites supérieures et inférieures du seuil. Staphylococcus aureus thermonuclease GFP fusion fluorescence est en moyenne près de neuf fois plus élevé dans les cellules portant le gène de fusion que dans les cellules ne portant pas la fusion reporter. De même, la fluorescence de fusion de tomate dimère tandem est environ six fois plus élevée que le contrôle de reporter nul.Le modèle des activités de journaliste peut être confirmé par la cytométrie de flux avec des homogénéités de tissu. Bien que les différences de pli dans la fluorescence sont généralement plus faibles. Les variations dans les mesures de fluorescence peuvent être dues à l’expression hétérogène des journalistes.Par exemple, dans ces échantillons représentatifs, on a observé que certaines lésions exprimaient l’un ou les deux des reporters dans environ 100 micromètres de distance dans le même échantillon de tissu. L’examen de l’activité du journaliste à une résolution cellulaire unique dans les communautés abcess staphylococciques révèle une régulation spatiale de l’expression thermonucléase staphylocoque aureus dans les abcès circonscrits avec une forte coloration DAPI, probablement associée à la formation et à la libération de pièges extracellulaires neutrophiles. Par exemple, la fluorescence de fusion de GFP de staphylococcus aureus aureus sensiblement plus élevée est observée dans le noyau intérieur de la communauté staphylococcique d’abcèss comparée localisée à la périphérie.Dans le même abcess, le modèle pour la fluorescence dimeric tandem de fusion de tomate semble être inversé. Cependant, le modèle dans cette expérience n’était pas statistiquement significatif. L’obtention de dissections cryo-intégrées intactes est essentielle à l’analyse de l’image de fluorescence et doit être effectuée avec soin.Le tri des cellules bactériennes pour capturer les sous-populations exprimant la fusion à des degrés divers, couplé à l’analyse ARN-Seq pourrait éclairer les changements importants du génome dans le transcriptome. Prenez soin lorsque vous travaillez avec la formaline car elle est cancérigène et peut causer une irritation de la peau, des réactions allergiques ou des lésions oculaires lors d’une exposition directe. Générer des dérivés mutants de souches transportant des reporters fluorescents d’intérêt peut aider à révéler la base génétique des modèles de régulation spatiale observés.

Research

JoVE Journal

Genetics

Retroviral Scanning: Mapping MLV Integration Sites to Define Cell-specific Regulatory Regions

Numérisation Retroviral: Mapping des sites d&#39;intégration MLV pour définir des régions réglementaires spécifiques à une cellule

Moloney murine leukemia (MLV) virus-based retroviral vectors integrate predominantly in acetylated enhancers and promoters. For this reason, mLV ...

Recherche

Génétique

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Détermination de l’emplacement chromosomique optimale pour un élément d’ADN chez Escherichia coli en utilisant une nouvelle approche induite par le Transposon

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

Une méthode Standard pour examiner la mutagénicité sur place en fonction de la Mutation ponctuelle de réparation catalysée par CRISPR/Cas9 et SsODN dans les cellules humaines

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

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Laser Microirradiation à l’étude In Vivo des réponses cellulaires aux dommages d’ADN simples et complexes

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Une méthode Optogenetic pour contrôler et analyser les profils d’Expression génique dans les Interactions cellule-cellule

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