Name: a fluorescence-based method to study bacterial gene regulation in infected tissues
Uploaded: 2019-02-19T15:00:00
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フローサイトメトリー解析ヘルプについては PsarAP1- tdTomato 融合とカレン クレスウェルの贈り物ありがとうアレキサンダー Horswill。我々 はまた統計的な分析でアドバイスをアリッサ王をありがちましょう。この作品は、NIH 萌芽/発達研究賞 (グラント AI123708) と SRB 学部スタートアップ資金によって一部で賄われていた。資金提供者には、研究デザイン、データの収集と解釈、または出版物のための仕事を提出する決定の役割はなかった。

ここで説明したすべてのメソッドは、機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) ジョージタウン大学によって承認されています。
1. 蛍光レポーター歪みの世代
<ol><li>制限酵素 EcoRI と SmaI で順番にゲノム統合 pRB4 ベクトルを消化します。次の製造元のプロトコル SmaI 25 ° c、1 μ g の pRB4 を使用して一晩消化を設定、EcoRI を反応混合物に追加することによって 37 ° C で 1 時間 2 ...

細菌感染症は、抗生の抵抗の決定要因の46の取得により世界的な増加する健康問題です。ホスト環境への適応は成長と感染中の生存に不可欠な病原体のフィットネスを高める遺伝子発現プログラムを見据えた戦略は治療役に立つかもしれない。1 つのようなプログラムは、サエル/S 2 つコンポーネント システム (TCS)、免疫回避47で重要な役割を再生する前に?...

細菌は、適応や生存に必要な遺伝子の差動表現で生理学的な条件と環境の栄養状態の変化の変化に対応します。例えば、日和見病原体には、ボディ表面は比較的低密度で無害なことが多いが植民地化します。ただし、細菌には、物理的・化学的障壁が浸透して、一度、ホスト免疫細胞カウンター防御と栄養アベイラビリティの制限1主張する必要があります。例として、黄色ブドウ球菌性感の人口の約 3 分の 1 の定着が、壊滅的な皮膚および軟部組織感染症、骨髄炎、心内膜炎、菌血症と2の原因でもあります。黄色ブドウ球菌の病原体としての成功は、その代謝の柔軟性だけでなく、細菌を血流を脱出し、末梢組織の複製を有効にする表面関連と分泌の病原因子の武器といわれる3,4,5。ブドウ球菌性疾患によるホスト死は進化の行き止まりと新しいホスト6伝送が制限、病原性因子産生へのコミットメントを慎重に制御する必要があります。
非コーディング RNAs 反応する様々 な環境刺激とタンパク質の複雑な規制のネットワークを含む細胞密度、成長期、好中球関連要因と養分可用性、病原性遺伝子がで表されることを確保するため、正確な時間、ホスト組織7,8,9,10、11,12,13内の場所。例えば、サエル/S の 2 つのコンポーネント システム (TCS) は、センサー キナーゼ (サエス) と応答レギュレータ (サエル)14を介していくつかの病原因子の発現を調節します。サエスはホスト信号 (例,ひと好中球ペプチド [HNPs] カルプロテクチン)8,,1516レスポンスで節約されたヒスチジン残基の自己です。サエル、DNA 結合タンパク質としてそれをアクティブにするのにはアスパラギン酸残基にリン酸化グループ、転送されます (サエル ~ P)17。サエル/S TCS は、フィブロネクチン結合蛋白質 (FnBPs)、leukocidins、コアグラーゼ14,18,,1920など病態に寄与する 20 以上の遺伝子を調節します。サエルのレベルとして誘導の可能性がある高親和性・低親和性遺伝子ターゲットにターゲットを分類できます 〜 P 上昇その手がかり21に露出されたとき。サエル/S の活動は、Agr クォーラム センシング システムなど遺伝子発現の他の規制当局、毒素タンパク質 (Rot) と代替シグマ因子 B (SigB)22,23,24のリプレッサーによって制御されます。
nucの黄色ブドウ球菌の Sae 依存病原性遺伝子、 neutrophilic extracellular trap (ネット) から脱出するため、中に普及のために不可欠である thermonuclease (Nuc) をエンコード、感染25,26のコースです。Nucの式を分岐鎖アミノ酸と GTP27, 存在下でコーディでも強く直接に抑圧し、ブドウ球菌アクセサリー調節蛋白質サラ28,29 によって直接抑圧、その活動は、酸素 (酸化還元状態) と pH30によって影響されます。Sae 、 nucの変異体は、感染症のマウスモデルの減衰は、ことを考える彼らの対応する活動26,31を阻害する化学の介入の開発に関心があります。それにもかかわらず、感染時の規制に関する情報はありません。
蛍光レポーターは、監視し、単一細胞レベルでの遺伝子の発現を定量化する使用されています。ここで、 Sの定量化手法を提案します。黄色ブドウ球菌感染症に発現する遺伝子と組み合わせればin vitro におけるトランスクリプトーム解析と磁気共鳴画像 (MRI) や磁気共鳴分光法 (MRS) のような強力なイメージング技術を明らかにすることができますどのように細菌生理学は、特定のニッチで栄養素の相対的な存在量で規制されています。メソッドは、扱いやすい遺伝的システムと細菌の病原体に適用できます。
ゲノムの統合的なベクトルの概要です。
ゲノム統合のベクトル pRB4 には、各相同組換えを促進する黄色ブドウ球菌usa 300 SAUSA300_0087偽遺伝子の上流と下流地域から 500 の塩基対が含まれています。pRB4 は、耐熱性 β-ガラクトシダーゼ遺伝子ガラクトシダーゼ組み換え32の青/白のスクリーニングのためのエリスロマイシン耐性カセット (ermC) を含む温度敏感な pMAD ベクター バックボーンから派生されます。設計された記者コンストラクトでは、ゲノム統合プラスミド除去と superfolder グリーンに関心の規制地域をヒューズに EcoRI および SmaI サイト後選択のクロラムフェニ コール耐性マーカー (猫) も含まれています蛍光タンパク質 (sGFP) (図 1)。それは、リボソーム結合部位 (RBS) の選択が、レポーターの活動に影響を与える多くの場合経験的最適化33を必要とする知られています。したがって、RBS は付属されていません。ここでは、ネイティブ リボゾームの結合サイトは遺伝子発現のより自然なパターンを提供するために使用されるが、他のサイトを使用することがあります。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1015px;" width="1014">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">5% sheep blood</td>
			<td style="width:343px;">Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)</td>
			<td style="width:139px;">A10</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:367px;">5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&#946;-D-galactopyranoside (X-Gal)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>R0402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Ampicillin</td>
			<td style="width:343px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">BP1760-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">C57Bl/6 Mice</td>
			<td style="width:343px;">Charles River</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Chloramphenicol</td>
			<td style="width:343px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">C-0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cryostat microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture, Cap</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>2005-02512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">D+2:25NA Oligo</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (Coralville, Iowa)</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA Ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Erythromycin</td>
			<td style="width:343px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">E5389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow Analyzer</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z273627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Miniprep, plasmid</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">orbital shaking water bath</td>
			<td>New Brunswick Innova</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PCR purification</td>
			<td>QIagen</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td style="width:343px;">Cellgrow</td>
			<td style="width:139px;">46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plate reader</td>
			<td style="width:343px;">Tecan</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precellys 24 homogenizer</td>
			<td>Bertin Laboratories</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pUC57-Kan</td>
			<td>GenScript (Piscataway, NJ)</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Q5 Taq DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs (Ipswich, MA)</td>
			<td style="width:139px;">M0491S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:367px;">Restriction Enzymes</td>
			<td>New England Biolabs (Ipswich, MA)</td>
			<td style="width:139px;">R0150S (PvuI), R3136S (BamHI), R0144S (BglII), R3131S (NheI), R0101S (EcoRI), R0141S (SmaI).</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reverse transcriptase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E6300L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Sanger Sequencing</td>
			<td>Genewiz (Germantown, MD)</td>
			<td style="width:139px;">NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sub Xero clear tissue freezing medium</td>
			<td>Mercedes Medical</td>
			<td style="width:139px;">MER5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfrost Plus microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">superloop</td>
			<td>GE Lifesciences</td>
			<td>18111382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe, Filter</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>28145-481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syto 40</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">S11351</td>
			<td>Membrane permeant nucleic acid stain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Tetracycline</td>
			<td style="width:343px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">T7660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Tryptic Soy Broth</td>
			<td style="width:343px;">VWR</td>
			<td style="width:139px;">90000-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UV-visible spectrophotometer</td>
			<td>Beckman Coulter-DU350</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield Antifade Mounting medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td style="width:139px;">H-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a fluorescence-based method to study bacterial gene regulation in infected tissues

細菌の病原性遺伝子は多くの場合転写レベルで異なる環境シグナルに応答する複数の要因によって調整されます。いくつかの要因は病原性遺伝子に直接作用します。他の人は下流のレギュレータの式やレギュレータの活動に影響を与える信号の蓄積を調整することによって病態を制御します。規制は、生体外で成長中広く研究されている、しながら比較的感染時に遺伝子発現を調整する方法について少し知られています。そのような情報は、特定の遺伝子産物の治療的介入の候補であるときに重要です。転写のアプローチのように量的なリアルタイム RT-PCR 法と RNA シーケンスは、グローバル レベルでの遺伝子発現を調べるが、ホストの RNA とサンプルと比較して細菌の RNA の低い豊富を含む多くの技術的な課題に苦しむの強力な方法RNases による劣化。蛍光レポーターを使用して規制の評価は比較的簡単とユニークな波長特性を持つ蛍光タンパク質を用いた多重することができます。メソッドは、単一セル、時空間細菌制御ネットワークに影響を与える複雑な三次元アーキテクチャと物理化学的勾配を示す組織における遺伝子発現解析のためことができます。データは一括人口平均化と、このような情報は失われます。ここで、細菌性病原体の場で遺伝子の発現を定量化するための手法について述べる。メソッドは、単純なティッシュの処理と蛍光レポーター蛋白質からの直接観察に基づいています。黄色ブドウ球菌thermonuclease (nuc)、その遺伝子産物は免疫回避と ex vivo および in vivo における病原性に必要な発現を調べることによってこのシステムの有用性を示す.そのnuc gfpは強く腎膿瘍で表され、免疫応答による完全に従事して膿瘍におけるnucプロモーター活性の明白な空間規制の一部による異種遺伝子発現を明らかに示します。このメソッドは、操作可能な遺伝的システムに任意の細菌および前臨床研究と医薬品開発のための貴重な情報を提供する、任意の感染モデルに適用できます。

任意の記者を届けることができる pMAD32から派生したプラスミドを開発したダブル クロス オーバーの相同組み換え (図 1) による染色体に融合コンストラクト。このコンス トラクターは、GFP タンパク質と背景の上の蛍光信号の生成をサポートする任意の規制領域の定量分析のためことができます。プラスミッドのメンテナンス?...

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A Fluorescence-based Method to Study Bacterial Gene Regulation in Infected Tissues

感染した組織の細菌の遺伝子の規則を勉強する蛍光ベースのメソッド

ここで説明は、動物組織細胞レベルでの細菌の遺伝子発現解析の方法です。このメソッドは、組織環境への応答で感染症に細菌の人口の内で発生する表現型の多様性を研究するためのリソースを提供します。

Bacterial virulence genes are often regulated at the transcriptional level by multiple factors that respond to different environmental signals. Some ...

この方法は、細菌遺伝子発現の空間パターンと、組織中の全集団にわたって平均化すると失われる組織微小環境をホストする生理学的適応のための戦略を明らかにすることができる。この技術を用いて、抗毒性または抗菌化合物によって標的とされる新しい細菌経路およびタンパク質を同定する際に考慮しなければならない潜在的な不均一性を検出することができる。まず、凍結したグリセロールストックから血液寒天プレートに関心のあるS.aureus株をストリークし、16〜24時間摂氏37度でプレートをインキュベートし、赤血球をライスする能力に基づいて血解性の異型を確認し、透明な領域を形成することから始めます。滅菌ガラス管中のトリプティック大豆ブロス(TSB)の4ミリリットルで各株の単一コロニー分離株を接種し、チューブローラーで16〜24時間37°Cでチューブを約70度の角度と毎分70回転で回転させます。翌朝、分光光度計上の培養物の光学密度を600ナノメートル(OD 600)で測定し、125ミリリットルのデロンフラスコで5~1フラスコの体積比で25ミリリットルの無菌TSBのOD 600に希釈します。1分あたり280回転で37°Cの水浴で培養物をインキュベートし、指数相の間に細胞を収穫する。遠心分離によって細胞をペレット化し、滅菌PBSの等量で細胞を2回洗浄する。次いで、新鮮なPBS中の細胞を、レシピエント動物へのその後の注射のためにミリリットル濃度当たりの8番目のコロニー形成単位に10回再懸濁する。適切な実験終点で、腎臓、心臓、肝臓、肺、脾臓を15ミリリットルのポリプロピレンチューブに収穫し、10%緩衝ホルマリンを含む15ミリリットルのホルマリンを暗所で24〜48時間の静かな揺れまたは回転で収穫する。固定の終わりに、マイナス80°Cで貯蔵するために透明な組織凍結培地に器官を埋め込む。クライオスタットを使用して、厚さ10マイクロメートルの組織切片を取得し、個別のプリクリーニングされた充電ガラススライドのセクションを暗闇の中で20分間乾燥させてから、DAPIを添加したハードマウント媒体を塗布します。その後、カバースリップを適用し、摂氏4度で長期保存にサンプルを転送する前に、一晩室温でスライドを治します。サンプル内の病変を識別するには、レーザー走査共焦点顕微鏡のステージ上にスライドを配置し、個々の細胞を可視化して病変の画像を取得するための適切な目的を使用します。共焦点画像内の蛍光強度を測定するには、ImageJで画像を開き、明るさとコントラストを調整して、病変の蛍光信号を適切に可視化します。ポリゴン選択ツールを使用して対象地域を定義し、ImageJ の [編集] タブの ROI マネージャに ROI を追加します。[編集]、[選択]の順に選択し、最後に [マネージャに追加] を選択します。次に、ROI の名前を変更し、それぞれの画像にラベルを付けます。中心心を定義するには、[解析]タブを開き、[面積]、[平均グレー値]、[心数]、[しきい値に制限]を選択します。中心の蛍光強度値を抽出するか、単位面積当たりの与えられた病変における平均蛍光強度を測定します。これは、しきい値関数を使用して、必要に応じて蛍光の下限と上限を設定することによって達成することができる。データを Excel ファイルにエクスポートし、周辺とコアの単位面積あたりの平均蛍光強度を示す列を準備します。周囲およびコアの単位面積あたりの平均蛍光強度を計算するには、しきい値の上限と下限を手動で定義する。黄色ブドウ球菌のサーキュレウスサーヌクレアーゼGFP融合蛍光は、レポーター融合を担っていない細胞よりも、融合遺伝子を担持する細胞において平均9倍近く高い。同様に、タンデムジメリックトマト融合蛍光は、ヌルレポーターコントロールより約6倍高い。レポーター活動のパターンは、組織ホモジメートを有するフローサイトメトリーによって確認することができる。蛍光の折り目差は典型的には低い。蛍光測定の変動は、レポーターの異種発現に起因する可能性がある。例えば、これらの代表的なサンプルでは、一部の病変が同じ組織サンプル内の約100マイクロメートルの距離内で一方または両方のレポーターを発現することが観察された。スタフィロコッカルabcess群集における単一細胞分解能に対するレポーター活性を調べると、強いDAPI染色を伴う膿瘍におけるブドウ球菌のサーヌクレアーゼ発現の空間調節が明らかにされ、好中球外細胞トラップの形成および放出に関連している可能性が高い。例えば、ブドウ球菌の黄色ブドウ球菌の熱ヌクレアーゼGFP融合は、周囲に局在するのと比較して、ブドウ球菌のabcess群の内部コアにおいて有意に高く観察される。同じabcessでは、タンデムジメリックトマト融合蛍光のパターンは反転しているように見える。しかし、この実験のパターンは統計的に有意ではなかった。蛍光画像解析には、完全な凍結埋め込み解剖を得ることが不可欠であり、慎重に行う必要があります。RNA-Seq分析と相まって、様々な範囲に融合を発現する亜集団を捕捉するための細菌細胞の選別は、トランスクリプトームのゲノム全体の変化を照らすことができる。ホルマリンは発がん性物質であり、直接暴露時に皮膚刺激、アレルギー反応、または眼の損傷を引き起こす可能性があるため、ホルマリンを扱う際には注意してください。目的の蛍光レポーターを運ぶ株の変異型誘導体を生成することは、観察された空間調節パターンの遺伝的根拠を明らかにするのに役立つ。

Research

JoVE Journal

Genetics

Retroviral Scanning: Mapping MLV Integration Sites to Define Cell-specific Regulatory Regions

レトロウイルススキャン：細胞特異的調節領域を定義するためのMLV統合サイトのマッピング

Moloney murine leukemia (MLV) virus-based retroviral vectors integrate predominantly in acetylated enhancers and promoters. For this reason, mLV ...

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Determination of the Optimal Chromosomal Locations for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

新規トランスポゾンを介したアプローチを使用してエシェリヒア属大腸菌DNA 要素の最適な染色体の場所の決定

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

点突然変異修復 CRISPR/Cas9 とひと細胞での SsODN によって触媒の機能として敷地内変異原性を調べるための標準方法論

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

生体内で単純および複雑な DNA 損傷に対する細胞応答を研究するレーザー Microirradiation

DNA damage induces specific signaling and repair responses in the cell, which is critical for protection of genome integrity. Laser microirradiation ...

An Optogenetic Method to Control and Analyze Gene Expression Patterns in Cell-to-cell Interactions

制御、細胞間相互作用における遺伝子発現パターンを分析して光遺伝学的方法

Cells should respond properly to temporally changing environments, which are influenced by various factors from surrounding cells. The Notch signaling ...

A Method to Study the C924T Polymorphism of the Thromboxane A2 Receptor Gene

トロンボキサン A2 受容体遺伝子の C924T 多型を勉強する方法

The thromboxane A2 receptor (TBXA2R) gene is a member of the G-protein coupled superfamily with seven-transmembrane regions. It is involved in ...

Exploring the Root Microbiome: Extracting Bacterial Community Data from the Soil, Rhizosphere, and Root Endosphere

探索ルート マイクロバイ: 土、根、およびルート Endosphere から細菌群集のデータを抽出

The intimate interaction between plant host and associated microorganisms is crucial in determining plant fitness, and can foster improved tolerance to ...

High-throughput Identification of Gene Regulatory Sequences Using Next-generation Sequencing of Circular Chromosome Conformation Capture (4C-seq)

High-throughput Identification of Gene Regulatory Sequences Using Next-generation Sequencing of Circular Chromosome Conformation Capture 4C-seq

円の染色体構造の次世代シーケンシングによる遺伝子制御配列の高スループット識別キャプチャ (4 C seq)

The identification of regulatory elements for a given target gene poses a significant technical challenge owing to the variability in the positioning and ...

Manipulation of Gene Function in Mexican Cavefish

メキシコの血脈遺伝子機能の操作

Cave animals provide a compelling system for investigating the evolutionary mechanisms and genetic bases underlying changes in numerous complex traits, ...

Lentiviral Mediated Gene Silencing in Human Pseudoislet Prepared in Low Attachment Plates

低アタッチメントプレートで調製されたヒト擬似スイスレットにおけるレンチウイルス媒介遺伝子サイレンシング

Various genetic tools are available to modulate genes in pancreatic islets of rodents to dissect function of islet genes for diabetes research. However, ...