Name: highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70
Uploaded: 2019-08-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 at JoVE.com

يشكر المؤلفون كريستينا شواند، وبلانكا دوفنجاك، ونيكولا كور على مساعدتهم التقنية الاستثنائية، والدكتور دينيس سون على مساعدته في فحص الفلورة. وقد تم دعم هذا البحث بمنحة من شركة Forschungsgemeinschaft الألمانية (DFG) SFB 612 TP B18 إلى L.C.R. و L.S. لم يكن للمحول أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليلها، أو قرار نشر المخطوطة أو إعدادها.

وأجريت التحقيقات وفقا للمبادئ التوجيهية المبينة في دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (منشورات المعاهد الوطنية للصحة في الولايات المتحدة رقم 85-23، المنقحة لعام 1996). وقد أجريت جميع التجارب الحيوانية وفقا للموافقات المؤسسية ذات الصلة (حكومة الولاية Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] الر...

<ol>
	<li>Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estimated+glomerular+filtration+rate+and+albuminuria+with+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+general+population+cohorts:+a+collaborative+meta-analysis.">Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis.</a> Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).</li><li>Mori, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+of+Total+Nephron+Albumin+Filtration+and+Reabsorption+in+Diabetic+Nephropathy.">Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 278-289 (2017).</li><li>Amsellem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cubilin+is+essential+for+albumin+reabsorption+in+the+renal+proximal+tubule.">Cubilin is essential for albumin reabsorption in the renal proximal tubule.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (11), 1859-1867 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid,+dynamic+changes+in+glomerular+permeability+to+macromolecules+during+systemic+angiotensin+II+(ANG+II)+infusion+in+rats.">Rapid, dynamic changes in glomerular permeability to macromolecules during systemic angiotensin II (ANG II) infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 303 (6), F790-F799 (2012).</li><li>Grande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unaltered+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+caveolin-1+knockout+mice.">Unaltered size selectivity of the glomerular filtration barrier in caveolin-1 knockout mice.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (2), F257-F262 (2009).</li><li>Jeansson, M., Haraldsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+size+and+charge+selectivity+in+the+mouse+after+exposure+to+glucosaminoglycan-degrading+enzymes.">Glomerular size and charge selectivity in the mouse after exposure to glucosaminoglycan-degrading enzymes.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (7), 1756-1765 (2003).</li><li>Reis, L. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+features+of+the+urethra+and+urinary+bladder+catheterization+in+female+mice+and+rats.+An+essential+translational+tool.">Anatomical features of the urethra and urinary bladder catheterization in female mice and rats. An essential translational tool.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 26, 106-110 (2011).</li><li>Konigshausen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+glomerular+permeability+by+beta-arrestin+mediated+nephrin+endocytosis.">Angiotensin II increases glomerular permeability by beta-arrestin mediated nephrin endocytosis.</a> Scientific Reports. 6, 39513 (2016).</li><li>Venturoli, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ficoll+and+dextran+vs.+globular+proteins+as+probes+for+testing+glomerular+permselectivity:+effects+of+molecular+size,+shape,+charge,+and+deformability.">Ficoll and dextran vs. globular proteins as probes for testing glomerular permselectivity: effects of molecular size, shape, charge, and deformability.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 288 (4), F605-F613 (2005).</li><li>Bohrer, M. P., Deen, W. M., Robertson, C. R., Troy, J. L., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+molecular+configuration+on+the+passage+of+macromolecules+across+the+glomerular+capillary+wall.">Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall.</a> The Journal of General Physiology. 74 (5), 583-593 (1979).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+Effects+of+Tempol,+NOS-,+RhoA-+and+Rac-1-inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: Effects of Tempol, NOS-, RhoA- and Rac-1-inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2018).</li><li>Dolinina, J., Sverrisson, K., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+inhibition+causes+acute+increases+in+glomerular+permeability+in+vivo,+dependent+upon+reactive+oxygen+species.">Nitric oxide synthase inhibition causes acute increases in glomerular permeability in vivo, dependent upon reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 311 (5), F984-F990 (2016).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reactive+oxygen+species+(ROS)-dependent+effects+of+IL-1beta,+TNF-alpha,+and+IL-6+on+the+glomerular+filtration+barrier+(GFB)+in+vivo.">Acute reactive oxygen species (ROS)-dependent effects of IL-1beta, TNF-alpha, and IL-6 on the glomerular filtration barrier (GFB) in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 309 (9), F800-F806 (2015).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic,+size-selective+effects+of+protamine+sulfate+and+hyaluronidase+on+the+rat+glomerular+filtration+barrier+in+vivo.">Dynamic, size-selective effects of protamine sulfate and hyaluronidase on the rat glomerular filtration barrier in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 307 (10), F1136-F1143 (2014).</li><li>Sverrisson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+fetal+hemoglobin+induces+increases+in+glomerular+permeability:+inhibition+with+alpha1-microglobulin+and+tempol.">Extracellular fetal hemoglobin induces increases in glomerular permeability: inhibition with alpha1-microglobulin and tempol.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 306 (4), F442-F448 (2014).</li><li>Axelsson, J., Mahmutovic, I., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats+following+laparotomy+and+muscle+trauma.">Loss of size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats following laparotomy and muscle trauma.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (3), F577-F582 (2009).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+and+sustained+increases+in+glomerular+permeability+following+ANP+infusion+in+rats.">Transient and sustained increases in glomerular permeability following ANP infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F24-F30 (2011).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+hyperglycemia+induces+rapid,+reversible+increases+in+glomerular+permeability+in+nondiabetic+rats.">Acute hyperglycemia induces rapid, reversible increases in glomerular permeability in nondiabetic rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 298 (6), F1306-F1312 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Venturoli, D., Sward, P., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+early+endotoxemia+and+dextran-induced+anaphylaxis+on+the+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats.">Effects of early endotoxemia and dextran-induced anaphylaxis on the size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 296 (2), F242-F248 (2009).</li><li>Andersson, M., Nilsson, U., Hjalmarsson, C., Haraldsson, B., Nystrom, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+renal+ischemia-reperfusion+reduces+charge+and+size+selectivity+of+the+glomerular+barrier.">Mild renal ischemia-reperfusion reduces charge and size selectivity of the glomerular barrier.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (6), F1802-F1809 (2007).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+effects+of+Tempol,+NOS,+RhoA,+and+Rac-1+inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: effects of Tempol, NOS, RhoA, and Rac-1 inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (3), F445-F453 (2018).</li><li>Rosengren, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transvascular+protein+transport+in+mice+lacking+endothelial+caveolae.">Transvascular protein transport in mice lacking endothelial caveolae.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 291 (3), H1371-H1377 (2006).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (6), H2408-H2415 (2004).</li><li>Eisner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+contribution+of+tubular+secretion+to+creatinine+clearance+in+mice.">Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice.</a> Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).</li></ol>

الطريقة المعروضة تمكن المحقق من اختبار نفاذية الكبيبي في الفئران بطريقة حساسة جدا باستخدام التتبع. مع هذه الطريقة، يمكن تشخيص الزيادات على المدى القصير في نفاذية الكبيبي باستخدام كميات صغيرة فقط من البول. الخطوات الأكثر أهمية لإتقان هذه التقنية بنجاح هي 1) تطوير الخبرة اليدوية في جراحة ا?...

العيوب الوظيفية أو الهيكلية داخل حاجز الترشيح الكبيبي زيادة نفاذية الكبيبي إلى الزلال، مما أدى إلى الكشف عن الزلال في البول (الزلال). الزلال يتوقع نتائج القلب والأوعية الدموية وهو علامة هامة لإصابة الكبيبي1. حتى انخفاض مستويات الزلال، والكذب ضمن النطاق الطبيعي، وترتبط مع زيادة خطر القلب والأوعية الدموية1.
في ظل الظروف الفسيولوجية، يتم تصفية الزلال من خلال glomerulus ويتم إعادة امتصاصه تماما تقريبا في نظام أنبوبي2،3. في الفئران، وعادة ما يتم الكشف عن الزلال في البول عن طريق اختبار المناعية المرتبطة بإنزيم الزلال (ELISA) من 24 ساعة من جمع البول. إذا تم استخدام البول من جمع البول 24 ساعة أو البول بقعة، قد غاب عن اختلافات صغيرة في تركيزات الزلال بسبب مشاكل الحساسية اختبار. معظم الباحثين، لذلك، استخدام النماذج الحيوانية التي يتم فيها الزلال بسبب إصابة الكلى القوية بسبب السموم والأدوية وجراحة الكلى.
ولذلك، فإن العثور على طريقة حساسة للكشف عن التغيرات الصغيرة والعابرة في نفاذية الكبيبية مهم جدا ً للحقل. وقد قدم Rippe وآخرون نموذج الفئران لاختبار نفاذية الكبيبي عن طريق تطبيق التتبع المسمى الفلورسنت، وهي FITC-polysucrose 70 (أي، FITC-Ficoll 70)، في حجم الزلال4. يسمح تطبيق التتبع باختبار التغيرات قصيرة الأجل في نفاذية الكبيبي (فيغضون دقائق) وهو حساس جدا4 . وقد استخدمت دراستان طريقة التتبع في الفئران5،6. على الرغم من فوائده، وهذا الأسلوب، للأسف، لديه عيوب: فمن الناحية الفنية معقدة جدا، والمشعة، والغازية. يتم إجراء مزيد من التحليل للبول فقط باستخدام الترشيح هلام أو حجم استبعاد HPLC5،6.
ضمن هذه الورقة، نقدم طريقة بديلة، حساسة، غير مشعة، وسريعة لقياس نفاذية الكبيبي في الفئران باستخدام الفلورسنت المسمى FITC-polysucrose 70. من خلال إدخال قسطرة عبر القسطرة، جمع البول هو أقل الغازية من ثقب المثانة، استئصال الإحليل، وتطبيق القسطرة فوق العانة، ويسمح جمع البول كل 30 دقيقة على الأقل. قارئ لوحة الفلورسنت. يتم تطبيع تركيزات التتبع في البول إلى تركيزات الكرياتينين في البول باستخدام اختبار الكرياتينين الأنزيمي.
ولذلك، فإن هذه الطريقة الجديدة توفر أداة حساسة لدراسة الإصابة الكبيبية المبكرة مع زيادة نفاذية الكبيبي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Motic SMZ168 BL</td>
			<td style="width:77px;">Motic</td>
			<td style="width:101px;">SMZ168BL</td>
			<td style="width:235px;">microscope for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:257px;">KL1500LCD</td>
			<td style="width:77px;">Pulch and Lorenz microscopy</td>
			<td style="width:101px;">150500</td>
			<td>light for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Microfederschere</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">FD100R</td>
			<td>fine scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Durotip Feine Scheren</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BC210R</td>
			<td>for neck cut</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Anatomische Pinzette</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BD215R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Pr&#228;parierklemme</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BJ008R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Seraflex</td>
			<td style="width:77px;">Serag Wiessner</td>
			<td style="width:101px;">IC108000</td>
			<td>silk thread</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Ketamine 10%</td>
			<td style="width:77px;">Medistar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Rompun (Xylazin) 2%</td>
			<td style="width:77px;">Bayer</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.28mm OD 0.61mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/100</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.58mm OD 0.96mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/200</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Harvard apparatus 11 Plus</td>
			<td style="width:77px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:101px;">70-2209</td>
			<td>syringe pump</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;"></td>
			<td style="width:77px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">BD Insyte Autoguard</td>
			<td style="width:77px;">BD</td>
			<td style="width:101px;">381823</td>
			<td>&#160;urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Multimode Detector DTX 880</td>
			<td style="width:77px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:257px;">384 well microtiterplate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">262260</td>
			<td style="width:235px;">384 well platte</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Creatinine Assay Kit</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">MAK080</td>
			<td>to measure creatinine concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">96 well plate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">260836</td>
			<td>for creatinine assay&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">FITC-labeled polysuccrose 70</td>
			<td style="width:77px;">TBD Consultancy</td>
			<td style="width:101px;">FP70</td>
			<td>FITC-ficoll</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Angiotensin II</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">A9525</td>
			<td>used to test glomerular permeability</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BP-98A</td>
			<td style="width:77px;">Softron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">OTS 40.3040</td>
			<td style="width:77px;">Medite</td>
			<td style="width:101px;">01-4005-00</td>
			<td>heating plate for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">Instillagel 6mL</td>
			<td style="width:77px;">Farco-Pharma GmbH</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Exacta</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">GT415</td>
			<td>shaver</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70

فقدان الزلال في البول (الزلال) يتوقع نتائج القلب والأوعية الدموية. في ظل الظروف الفسيولوجية، يتم تصفية كميات صغيرة من الزلال من قبل glomerulus وإعادة استيعابها في النظام أنبوبي حتى يتم التوصل إلى حد الامتصاص. الزيادات المبكرة في الترشيح الزلال المرضية قد, وبالتالي, قد غاب عن طريق تحليل الزلال. ولذلك، فإن استخدام التتبع لاختبار الانتقائية الكبيبية يبدو مفيداً. يمكن استخدام الفلورسنت المسمى الفلورسين إيزوثيوسينات (FITC)-بوليسوكروز (أي FITC-Ficoll)، لدراسة الانتقيط الكبيبي. يتم تصفية جزيئات FITC-polysucrose بحرية من قبل الكبيبي دون أن يتم إعادة امتصاصها في النظام الأنبوبي. في الفئران والجرذان، تم التحقيق في فيتك-بوليسوروس في نماذج من نفاذية الكبيبي باستخدام إجراءات معقدة تقنيا (أي القياسات المشعة، والكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء [HPLC]، والترشيح هلام). قمنا بتعديل وتسهيل بروتوكول يستند إلى التتبع FITC-polysucrose لاختبار الزيادات المبكرة والصغيرة في نفاذية الكبيبي إلى FITC-polysucrose 70 (حجم الزلال) في الفئران. تسمح هذه الطريقة بتحليل البول المتكرر مع أحجام البول الصغيرة (5 ميكرولتر). يحتوي هذا البروتوكول على معلومات حول كيفية تطبيق جهاز تتبع FITC-polysucrose 70 عن طريق الوريد ويتم جمع البول عن طريق قسطرة بولية بسيطة. يتم تحليل البول عن طريق قارئ لوحة الفلورة وتطبيعها إلى علامة تركيز البول (الكرياتينين)، وبالتالي تجنب الإجراءات المعقدة تقنيا.

وكما هو موضح في الشكل 2، يتم بناء طريقة اختبار نفاذية الكبيبي في الفئران على ثلاث مراحل. وتسمى المرحلة الأولى مرحلة الإعداد، حيث يتم وضع القسطرة البولية والقسطرة الوريدية المركزية. وتسمى المرحلة الثانية مرحلة التوازن، بدءا من حقن البولات الوريدي من FITC-poly...

Watch this Scientific Journal Video about Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 at JoVE.com

Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

هنا، نقدم بروتوكول لاختبار نفاذية الكبيبي في الفئران باستخدام تعقب حساس للغاية وغير مشع. تسمح هذه الطريقة بتحليل البول المتكرر مع أحجام البول الصغيرة.

قياس حساس للغاية من نفاذية الكبيبي في الفئران مع الفلورسيين إيزوثيوسيانات-بوليسوكروز 70

The loss of albumin in urine (albuminuria) predicts cardiovascular outcome. Under physiological conditions, small amounts of albumin are filtered by the ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الكلى حول دور نفاذية الكبيات في أمراض الكلى. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الزيادات الصغيرة والعابرة من نفاذية الكبيّة يتم الكشف عنها باستخدام متتبع الرصاص الفلورسنت المسمى. بعد التخدير، ضع قسطرة بولية في فأرة الإناث.ضع الماوس في وظيفة إعادة شغل الظهر. تشديد أسفل البطن والعثور على أوستيوم مجرى البول. الحصول على الجزء البلاستيك من القسطرة من 22 G أنجيوكاثيتر وتشحيم مع هلام إكسيلوكاين.استخدام السبابة اليسرى لوضع التوتر الدقيق على أسفل البطن وإدخال القسطرة ثلاثة ملليمترات في أوستريوم مجرى البول في حين بالتوازي مع محور مجرى مجرى الظهر. بدوره الجزء العلوي من angiocatheter 180 درجة عن طريق الحفاظ على طرف داخل أوستيوم مجرى البول والحفاظ على محور مجرى البول. ثم، أدخل القسطرة سبعة ملليمتر كذلك في الماوس بحيث يتم وضعها داخل المثانة.ضع أنبوب بني 1.5 ملليلتر فوق الجزء العلوي من أنجيوكاثيتر لجمع البول. تطبيق ملليلتر واحد من 0.9٪ كلوريد الصوديوم تحت الجلد لتعزيز إنتاج البول. حلق عنق الفأر وضعه في إعادة شغل مع الرأس نحو الجراح.فرط تمديد رأس الماوس مع شريط. تطهير الرقبة مع 70٪ isopropanol. باستخدام ملاقط وزوج من مقص جعل شق الجلد خمسة ملليمتر تحت خط الفك.قطع الجلد ما يقرب من سنتيمتر واحد في اتجاه القص حتى يتم الوصول إلى منتصف القص. استخدمي مقص تشريح بعناية الجلد إلى الجانب الأيمن من الرقبة.جعل شق مستطيل من الجلد إلى اليمين لفضح الأنسجة الرخوة من الرقبة. يجب الحرص على عدم الإضرار الوريد الوداجي. استخدمي مقص ومقطّط لإصلاح رفرف الجلد بمشابكين.باستخدام طرف من الملقط غرامة، وفضح بعناية الوريد الوداجي عن طريق إعداد صريح. إذا لزم الأمر، إزالة الأنسجة مع مقص غرامة. تجنب الإصابة في فروع الوريد.ضع واغلق رباطًا بخيط حرير في الجزء الزاوي المرئي الذي هو في اتجاه رأس الفأر. إصلاح خيط الحرير مع شريط لوضع التوتر على الرباط. وهذا يضمن التوتر الطفيف على الوريد الوداجي.إعداد رباط حول الجزء القريب من الوريد الوداجي. بعد ذلك ، قم بملء القسطرة بمحلول التوازن والانصهار. أصلح القسطرة بشريط بحيث تقوم القسطرة بمحاذاة الوريد الوداجي.السيطرة على فقاعات لتجنب انسداد الهواء. ارفع الوريد الوداجي بملاقط ناعم في موقع الإدراج. محاذاة أنابيب موازية للورد الوداجي وثقب الوريد الوداجي تهدف إلى التجويف.إدراج ما يقرب من 2-4 ملليمترات موازية لمحور الوريد الوداجي. تجنب أي حركات سريعة. أغلق الأربطة لإصلاح القسطرة.السيطرة على ضيق من الرباط عن طريق عرض بعناية من خلال المجهر. وضع مسحة رطبة على موقع الجراحة. ضع الكفة التيل في الجزء السفلي من ذيل الماوس بينما يضع الماوس في إعادة شغل الظهر.بدء القياسات وتكرارها عشر مرات في نقطة الوقت. إذا لم تكن قياسات ضغط الدم صحيحة ويتم إنتاج بيانات خاطئة، قم بضبط موضع الكفة التيل. قبل مرحلة التوازن، قم بتغيير أنبوب جمع البولية وضعه على الجليد.أضعاف مسحة ووضعها حول قسطرة السفينة الصغيرة التي يتم إدخالها في الوريد الوداجي. وضع المشبك على مسحة لإلغاء تراجع تدفق الدم أو انسداد الهواء. قم بتوصيل إبرة 27 G مع حقنة ملليلتر واحدة مليئة ببولوس FITC إلى نهاية قسطرة السفينة الصغيرة.فتح المشبك وتطبيق 100 ميكروليتر فيتC bolus. أغلق المشبك مرة أخرى، ثم قم بتوصيل القسطرة الأكبر بالقسطرة الأصغر. إعادة فتح المشبك وبدء ضخ حقنة مع معدل تدفق 0.008 ملليلتر في الدقيقة الواحدة.استمر في التسريب لمدة 60 دقيقة. في هذه المرحلة ، يتم التحقيق في الأدوية الفعالة على الانتقائية بيرم الكبيّة. تغيير أنبوب البولية شكل نقطة الصفر دقيقة إلى آخر 1.5 ملليلتر أنبوب بني.ضع مسحة حول قسطرة الأوعية الصغيرة وافصل القسطرة الكبيرة عن قسطرة الأوعية الصغيرة. ملء حقنة مع حل المرحلة التجريبية. وضعه في مضخة الحقنة والسماح لضخ ضخ تشغيل بحيث يتم تعبئة القسطرة الكبيرة مع حل المرحلة التجريبية.أعد توصيل القسطرة مع تجنب انسداد الهواء وإعادة فتح المشبك. بدء ضخ حقنة بمعدل تدفق 0.008 ملليلتر في الدقيقة الواحدة. مواصلة تشغيل مضخة حقنة لمدة 60 دقيقة وجمع البول داخل أنبوب البولية بعد ذلك.ضع أنبوب البول على الثلج. في هذه الدراسة، يظهر مسح الفلوريس لبول الماوس الأصلي ذروة عند 395 نانومتر. FITC polysucrose 70 بتركيز 40 ميكروغرام لكل ملليلتر في البول الماوس يعرض الفلورا كحد أقصى في 525 نانومتر.البول الماوس لا يزعج قياس الفلورانس من فيتC polysucrose 70. عند قبول 525 نانومتر زيادة تركيزات من فيتC polysucrose 70 يظهر زيادة كثافة الفلورس. هذه الطريقة هي أيضا قادرة على الكشف عن الاختلافات في نفاذية الكبيّرة.الأعمدة البيضاء تمثل فيت سي polysucrose 70 المستويات قبل بدء التحفيز الثاني أنجيوتنسين في المرحلة التجريبية. بعد جرعات لمدة 60 دقيقة, زادت نفاذية الكبيات مقارنة مع مجموعة التحكم. أنجيوتنسين الثاني غسل انخفض نفاذية الكبيّة.انخفض مستويات فيتC البولي السكروز 70 بعد 60 دقيقة إضافية من التحفيز أنجيوتنسين الثاني أو 60 دقيقة من تبييض أنجيوتنسين الثاني. ويمكن أن يتم حظر الزيادة في نفاذية الكبيّة بسبب أنجيوتنسين الثاني من قبل مانع مستقبلات أنجيوتنسين الثاني. لم يظهر ضغط الدم الذي رصدته طريقة الكفة الذيل اختلافات كبيرة بين مجموعة التحكم و angiotensin II المعالجة.أثناء محاولة هذا الإجراء من المهم تجنب انسداد الهواء عند تغيير حلول التسريب.

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

تحديد وعزل بطيئة تقسيم الخلايا في الإنسان عن طريق ورم أرومي دبقي كربوكسي فلوريسئين Succinimidyl استر (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

قياس نفاذية كبيبي الجزيئات نيون باستخدام المجهر 2 فوتون في ميونيخ فئران ويستار

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

على<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; الفحص لفحص الدم نفاذية سفينة

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

القياس الآلي للالرئوي وانتفاخ الرئة ومجرى الهواء الصغيرة في إعادة عرض السجائر الفئران المعرضة للدخان

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

نماذج الجراحية من الجزر المعدي مع الفئران

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

التصور الأوعية الدموية ومتني التجديد بعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ في الفئران العادية

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

على المدى الطويل قياس ضغط الدم في الانتقال بحرية الفئران عن طريق القياس

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

أرتيرياليزيد إعادة "زرع الكبد الجزئي الفئران" مع في فيفو المنحى السفينة 70% ظهرت

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

تقييم لوظيفة الكلي في نماذج الماوس من المرض الكبيبي

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...