Name: highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70
Uploaded: 2019-08-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 at JoVE.com

De auteurs bedanken Christina Schwandt, Blanka Duvnjak en Nicola Kuhr voor hun uitzonderlijke technische assistentie en Dr. Dennis Sohn voor zijn hulp bij de fluorescentie scan. Dit onderzoek werd gesteund door een subsidie van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) SFB 612 TP b18 tot L.C.R. en L.S. De Funder had geen rol in het studie ontwerp, gegevensverzameling en-analyse, besluit tot publicatie of voorbereiding van het manuscript.

De onderzoeken zijn uitgevoerd volgens de richtlijnen die zijn uiteengezet in de gids voorzorg en gebruik van proefdieren (US National Institutes of Health Publication No. 85-23, herziene versie van 1996). Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de relevante institutionele goedkeuringen (staatsbestuur Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] referentienummer 84-02.04.2012. A397).
1. voorbereiding van instrumenten, oplossingen en apparatuur
<ol><li>Reconsti...

<ol>
	<li>Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estimated+glomerular+filtration+rate+and+albuminuria+with+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+general+population+cohorts:+a+collaborative+meta-analysis.">Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis.</a> Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).</li><li>Mori, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+of+Total+Nephron+Albumin+Filtration+and+Reabsorption+in+Diabetic+Nephropathy.">Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 278-289 (2017).</li><li>Amsellem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cubilin+is+essential+for+albumin+reabsorption+in+the+renal+proximal+tubule.">Cubilin is essential for albumin reabsorption in the renal proximal tubule.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (11), 1859-1867 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid,+dynamic+changes+in+glomerular+permeability+to+macromolecules+during+systemic+angiotensin+II+(ANG+II)+infusion+in+rats.">Rapid, dynamic changes in glomerular permeability to macromolecules during systemic angiotensin II (ANG II) infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 303 (6), F790-F799 (2012).</li><li>Grande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unaltered+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+caveolin-1+knockout+mice.">Unaltered size selectivity of the glomerular filtration barrier in caveolin-1 knockout mice.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (2), F257-F262 (2009).</li><li>Jeansson, M., Haraldsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+size+and+charge+selectivity+in+the+mouse+after+exposure+to+glucosaminoglycan-degrading+enzymes.">Glomerular size and charge selectivity in the mouse after exposure to glucosaminoglycan-degrading enzymes.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (7), 1756-1765 (2003).</li><li>Reis, L. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+features+of+the+urethra+and+urinary+bladder+catheterization+in+female+mice+and+rats.+An+essential+translational+tool.">Anatomical features of the urethra and urinary bladder catheterization in female mice and rats. An essential translational tool.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 26, 106-110 (2011).</li><li>Konigshausen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+glomerular+permeability+by+beta-arrestin+mediated+nephrin+endocytosis.">Angiotensin II increases glomerular permeability by beta-arrestin mediated nephrin endocytosis.</a> Scientific Reports. 6, 39513 (2016).</li><li>Venturoli, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ficoll+and+dextran+vs.+globular+proteins+as+probes+for+testing+glomerular+permselectivity:+effects+of+molecular+size,+shape,+charge,+and+deformability.">Ficoll and dextran vs. globular proteins as probes for testing glomerular permselectivity: effects of molecular size, shape, charge, and deformability.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 288 (4), F605-F613 (2005).</li><li>Bohrer, M. P., Deen, W. M., Robertson, C. R., Troy, J. L., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+molecular+configuration+on+the+passage+of+macromolecules+across+the+glomerular+capillary+wall.">Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall.</a> The Journal of General Physiology. 74 (5), 583-593 (1979).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+Effects+of+Tempol,+NOS-,+RhoA-+and+Rac-1-inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: Effects of Tempol, NOS-, RhoA- and Rac-1-inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2018).</li><li>Dolinina, J., Sverrisson, K., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+inhibition+causes+acute+increases+in+glomerular+permeability+in+vivo,+dependent+upon+reactive+oxygen+species.">Nitric oxide synthase inhibition causes acute increases in glomerular permeability in vivo, dependent upon reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 311 (5), F984-F990 (2016).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reactive+oxygen+species+(ROS)-dependent+effects+of+IL-1beta,+TNF-alpha,+and+IL-6+on+the+glomerular+filtration+barrier+(GFB)+in+vivo.">Acute reactive oxygen species (ROS)-dependent effects of IL-1beta, TNF-alpha, and IL-6 on the glomerular filtration barrier (GFB) in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 309 (9), F800-F806 (2015).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic,+size-selective+effects+of+protamine+sulfate+and+hyaluronidase+on+the+rat+glomerular+filtration+barrier+in+vivo.">Dynamic, size-selective effects of protamine sulfate and hyaluronidase on the rat glomerular filtration barrier in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 307 (10), F1136-F1143 (2014).</li><li>Sverrisson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+fetal+hemoglobin+induces+increases+in+glomerular+permeability:+inhibition+with+alpha1-microglobulin+and+tempol.">Extracellular fetal hemoglobin induces increases in glomerular permeability: inhibition with alpha1-microglobulin and tempol.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 306 (4), F442-F448 (2014).</li><li>Axelsson, J., Mahmutovic, I., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats+following+laparotomy+and+muscle+trauma.">Loss of size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats following laparotomy and muscle trauma.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (3), F577-F582 (2009).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+and+sustained+increases+in+glomerular+permeability+following+ANP+infusion+in+rats.">Transient and sustained increases in glomerular permeability following ANP infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F24-F30 (2011).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+hyperglycemia+induces+rapid,+reversible+increases+in+glomerular+permeability+in+nondiabetic+rats.">Acute hyperglycemia induces rapid, reversible increases in glomerular permeability in nondiabetic rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 298 (6), F1306-F1312 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Venturoli, D., Sward, P., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+early+endotoxemia+and+dextran-induced+anaphylaxis+on+the+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats.">Effects of early endotoxemia and dextran-induced anaphylaxis on the size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 296 (2), F242-F248 (2009).</li><li>Andersson, M., Nilsson, U., Hjalmarsson, C., Haraldsson, B., Nystrom, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+renal+ischemia-reperfusion+reduces+charge+and+size+selectivity+of+the+glomerular+barrier.">Mild renal ischemia-reperfusion reduces charge and size selectivity of the glomerular barrier.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (6), F1802-F1809 (2007).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+effects+of+Tempol,+NOS,+RhoA,+and+Rac-1+inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: effects of Tempol, NOS, RhoA, and Rac-1 inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (3), F445-F453 (2018).</li><li>Rosengren, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transvascular+protein+transport+in+mice+lacking+endothelial+caveolae.">Transvascular protein transport in mice lacking endothelial caveolae.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 291 (3), H1371-H1377 (2006).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (6), H2408-H2415 (2004).</li><li>Eisner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+contribution+of+tubular+secretion+to+creatinine+clearance+in+mice.">Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice.</a> Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).</li></ol>

De gepresenteerde methode stelt de onderzoeker in staat om de glomerulaire permeabiliteit bij muizen op een zeer gevoelige manier te testen met behulp van een Tracer. Met deze methode, op korte termijn stijgingen van de glomerulaire permeabiliteit kan worden gediagnosticeerd met behulp van slechts kleine hoeveelheden urine. De meest kritieke stappen voor het succesvol beheersen van deze techniek zijn 1) ontwikkeling van handmatige expertise in muis chirurgie, vooral in de cannulatie van een centrale ader, 2) het plaatsen...

Functionele of structurele defecten binnen de glomerulaire filtratie barrière verhogen glomerulaire permeabiliteit aan albumine, wat resulteert in de detectie van albumine in de urine (albuminurie). Albuminurie voorspelt cardiovasculaire uitkomst en is een belangrijke marker voor glomerulaire letsel1. Zelfs lage niveaus van albuminurie, liggend binnen het normale bereik, worden geassocieerd met een verhoogd cardiovasculair risico1.
Onder fysiologische omstandigheden, wordt albumine gefilterd door de glomerulus en wordt bijna volledig geabsorbeerd in het buisvormige systeem2,3. Bij muizen wordt de detectie van albumine in de urine gewoonlijk uitgevoerd door een albumine-enzym-gebonden immunosorptie test (ELISA) van 24 uur urine verzameling. Als urine uit een urine verzameling van 24 uur of spot urine wordt gebruikt, kunnen kleine verschillen in albumine concentraties worden gemist als gevolg van gevoeligheids problemen. De meeste onderzoekers gebruiken daarom diermodellen waarin albuminurie wordt geïnduceerd door robuuste nierschade als gevolg van toxines, drugs en nierchirurgie.
Daarom is de bevinding van een gevoelige methode voor het detecteren van kleine en voorbijgaande veranderingen in de glomerulaire permeabiliteit zeer belangrijk voor het veld. Rippe et al. hebben een rat-model gepresenteerd om de glomerulaire permeabiliteit te testen door een fluorescently gelabelde Tracer toe te passen, namelijk FITC-polysucrose 70 (d.w.z. FITC-Ficoll 70), op de grootte van albumine4. De Tracer applicatie maakt het testen van korte termijn veranderingen in glomerulaire permeabiliteit (binnen minuten) en is zeer gevoelig4. Twee studies hebben de Tracer methode gebruikt bij muizen5,6. Ondanks de voordelen heeft deze methode helaas nadelen: het is technisch zeer complex, radioactief en invasief. Verdere analyse van de urine wordt alleen bereikt door het gebruik van gel filtratie of grootte-uitsluiting HPLC5,6.
In dit document presenteren we een alternatieve, gevoelige, niet-radioactieve en snelle methode om de glomerulaire permeabiliteit bij muizen te meten met fluorescently gelabelde FITC-polysucrose 70. Door de invoering van een transurethrale katheter, urine inzameling is minder invasief dan blaas punctie, urethrotomie, en suprapubische katheter toepassing, en laat urine inzameling ten minste elke 30 min. urine analyse wordt uitgevoerd vanuit kleine hoeveelheden (5μL) met fluorescerende plaat lezer. Tracer concentraties in de urine worden genormaliseerd naar creatinine concentraties in de urine met behulp van een enzymatische creatinine test.
Daarom biedt deze nieuwe methode een gevoelig hulpmiddel om vroege glomerulaire letsels te bestuderen met verhoogde glomerulaire permeabiliteit.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Motic SMZ168 BL</td>
			<td style="width:77px;">Motic</td>
			<td style="width:101px;">SMZ168BL</td>
			<td style="width:235px;">microscope for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:257px;">KL1500LCD</td>
			<td style="width:77px;">Pulch and Lorenz microscopy</td>
			<td style="width:101px;">150500</td>
			<td>light for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Microfederschere</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">FD100R</td>
			<td>fine scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Durotip Feine Scheren</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BC210R</td>
			<td>for neck cut</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Anatomische Pinzette</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BD215R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Pr&#228;parierklemme</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BJ008R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Seraflex</td>
			<td style="width:77px;">Serag Wiessner</td>
			<td style="width:101px;">IC108000</td>
			<td>silk thread</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Ketamine 10%</td>
			<td style="width:77px;">Medistar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Rompun (Xylazin) 2%</td>
			<td style="width:77px;">Bayer</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.28mm OD 0.61mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/100</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.58mm OD 0.96mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/200</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Harvard apparatus 11 Plus</td>
			<td style="width:77px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:101px;">70-2209</td>
			<td>syringe pump</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;"></td>
			<td style="width:77px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">BD Insyte Autoguard</td>
			<td style="width:77px;">BD</td>
			<td style="width:101px;">381823</td>
			<td>&#160;urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Multimode Detector DTX 880</td>
			<td style="width:77px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:257px;">384 well microtiterplate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">262260</td>
			<td style="width:235px;">384 well platte</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Creatinine Assay Kit</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">MAK080</td>
			<td>to measure creatinine concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">96 well plate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">260836</td>
			<td>for creatinine assay&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">FITC-labeled polysuccrose 70</td>
			<td style="width:77px;">TBD Consultancy</td>
			<td style="width:101px;">FP70</td>
			<td>FITC-ficoll</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Angiotensin II</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">A9525</td>
			<td>used to test glomerular permeability</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BP-98A</td>
			<td style="width:77px;">Softron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">OTS 40.3040</td>
			<td style="width:77px;">Medite</td>
			<td style="width:101px;">01-4005-00</td>
			<td>heating plate for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">Instillagel 6mL</td>
			<td style="width:77px;">Farco-Pharma GmbH</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Exacta</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">GT415</td>
			<td>shaver</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70

Het verlies van albumine in de urine (albuminurie) voorspelt cardiovasculaire uitkomst. Onder fysiologische omstandigheden worden kleine hoeveelheden albumine gefilterd door de glomerulus en weer geabsorbeerd in het buis systeem tot de absorptie limiet is bereikt. Vroege verhogingen van pathologische albumine filtratie kunnen dus worden gemist door het analyseren van albuminurie. Daarom lijkt het gebruik van tracers voor het testen van glomerulaire permselectiviteit voordelig. Fluorescently gelabeld Tracer fluoresceïne isothiocyanaat (FITC)-poly sucrose (d.w.z. FITC-Ficoll), kan worden gebruikt om glomerulaire permselectiviteit te bestuderen. FITC-poly sucrose moleculen worden vrij gefilterd door de glomerulus maar niet geabsorbeerd in het buis systeem. Bij muizen en ratten is FITC-poly sucrose onderzocht in modellen van glomerulaire permeabiliteit door gebruik te maken van technisch complexe procedures (d.w.z. radioactieve metingen, hogedrukvloeistofchromatografie [HPLC], gel filtratie). We hebben een FITC-polysucrose Tracer-gebaseerd protocol aangepast en vergemakkelijkt om vroege en kleine stijgingen van de glomerulaire permeabiliteit te testen op FITC-poly sucrose 70 (grootte van albumine) bij muizen. Deze methode maakt repetitieve urine analyses mogelijk met kleine urine volumes (5 μL). Dit protocol bevat informatie over hoe de Tracer FITC-poly sucrose 70 intraveneus wordt aangebracht en urine wordt opgevangen via een eenvoudige urinaire katheter. Urine wordt geanalyseerd via een fluorescentie plaat lezer en genormaliseerd naar een urine concentratie marker (creatinine), waardoor technisch complexe procedures te vermijden.

Zoals afgebeeld in Figuur 2, is de methode om de glomerulaire permeabiliteit bij muizen te testen opgebouwd in drie fasen. De eerste fase wordt de voorbereidingsfase genoemd, waarin een urine katheter en een centrale veneuze katheter worden geplaatst. De tweede fase wordt de evenwichts fase genoemd, beginnend met een intraveneuze bolusinjectie van FITC-poly sucrose 70 en gevolgd door de continue infusie van FITC-polysucrose 70 voor 60 min. De laatste fase wor...

Watch this Scientific Journal Video about Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 at JoVE.com

Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

Hier presenteren we een protocol voor het testen van de glomerulaire permeabiliteit in muizen met behulp van een zeer gevoelige, niet-radioactieve Tracer. Deze methode maakt repetitieve urine analyses mogelijk met kleine urine volumes.

Zeer gevoelige meting van de glomerulaire permeabiliteit bij muizen met Fluorescein isothiocyanaat-poly sucrose 70

The loss of albumin in urine (albuminuria) predicts cardiovascular outcome. Under physiological conditions, small amounts of albumin are filtered by the ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het nefrologieveld over de rol van glomerulaire doorlaatbaarheid bij nierziekten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat kleine en voorbijgaande toename van de glomerulaire doorlaatbaarheid worden gedetecteerd met behulp van een fluorescerende lood gelabelde tracer. Na anesthesie plaatst u een urinekatheter in de vrouwelijke muis.Plaats de muis in rugvermogen. Draai de onderbuik aan en vind het urethrale ostium. Verkrijg het plastic deel van de katheter van een 22 G angiocatheter en smeer het in met xylocaine gel.Gebruik de linker wijsvinger om voorzichtige spanning op de onderbuik te plaatsen en de katheter drie millimeter in het urethrale ostium te introduceren terwijl de distale urethrale as wordt parallel getrokken. Draai de bovenkant van de angiocatheter 180 graden door de punt binnen het urethrale ostium te houden en de as van de plasbuis te behouden. Introduceer vervolgens de katheter zeven millimeter verder in de muis, zodat deze in de blaas wordt geplaatst.Plaats een 1,5 milliliter bruine buis over de bovenkant van de angiocatheter om de urine te verzamelen. Breng een milliliter van 0,9% natriumchloride onderhuids aan om de urineproductie te verbeteren. Scheer de hals van de muis en plaats deze in recumbency met het hoofd naar de chirurg.Hyper uit te breiden het hoofd van de muis met een tape. Desinfecteer de hals met 70% isopropanol. Met behulp van een pincet en een schaar maak een vijf millimeter huid incisie onder de kaaklijn.Snijd de huid ongeveer een centimeter in de richting van het borstbeen tot het midden van het borstbeen is bereikt. Gebruik een schaar. Ontleed de huid voorzichtig aan de rechterkant van de nek.Maak een rechthoekige incisie van de huid naar rechts om het zachte weefsel van de nek bloot te leggen. Wees voorzichtig om de halsader niet te beschadigen. Gebruik een schaar en een pincet om de huidkleppen met twee klemmen te bevestigen.Met behulp van de punt van de fijne pincet, voorzichtig bloot de halsader door botte voorbereiding. Verwijder indien nodig weefsel met een fijne schaar. Vermijd letsel aan adertakken.Plaats en sluit een ligatuur met een zijden draad op het distale deel van de zichtbare halsader die zich naar het hoofd van de muis bevindt. Bevestig de zijden draad met een tape om spanning op de ligatuur te zetten. Dit zorgt voor lichte spanning op de halsader.Bereid een ligatuur rond het proximale deel van de halsader. Vul daarna de katheter met de equilibratie- en fusieoplossing. Bevestig de katheter met een tape, zodat de katheter is het uitlijnen van de halsader.Controle voor bellen om luchtembolie te voorkomen. Til de halsader op met een fijne pincet op de plaats van inbrengen. Lijn de slang parallel aan de halsader en prik de halsader gericht op het lumen.Invoegen voor ongeveer twee tot vier millimeter parallel aan de as van de halsader. Vermijd stevige bewegingen. Sluit de ligatuur om de katheter te repareren.Controle voor dichtheid van de ligatuur door zorgvuldig te bekijken door de microscoop. Leg een vochtig uitstrijkje over de plaats van de operatie. Plaats de staart manchet aan de onderkant van de muisstaart, terwijl de muis legt in rug recumbency.Start de metingen en herhaal ze tien keer per keer punt. Als bloeddrukmetingen niet correct lijken en er valse gegevens worden geproduceerd, pas dan de positie van de staartmanchet aan. Vóór de evenwichtsfase, verander de urineinzamelingsbuis en plaats het op ijs.Vouw een wattenstaafje en zet het rond de kleine vaatkatheter die wordt geïntroduceerd in de halsader. Plaats een klem over het wattenstaafje om de bloedstroom of luchtembolie retrograde af te schaffen. Sluit een 27 G naald aan met een spuit van één milliliter gevuld met de FITC bolus aan het einde van de kleine vaatkatheter.Open de klem en breng de 100 microliter FITC bolus aan. Sluit de klem opnieuw en sluit de grotere katheter aan op de kleinere katheter. Open de klem en start de spuitpomp met een stroomsnelheid van 0,008 milliliter per minuut.Zet de infusie 60 minuten voort. In deze fase wordt de effectieve geneesmiddelen op glomerulaire perm selectiviteit onderzocht. Verander de urinebuis vorm tijd punt nul minuut naar een andere 1,5 milliliter bruine buis.Doe een uitstrijkje rond de kleine vaatkatheter en koppel de grote katheter los van de kleine vaatkatheter. Vul de spuit met de experimentele faseoplossing. Plaats het in de spuitpomp en laat de infuuspomp draaien zodat de grote katheter wordt gevuld met de experimentele faseoplossing.Sluit de katheters opnieuw aan terwijl u luchtembolie vermijdt en de klem heropent. Start de spuitpomp met een stroomsnelheid van 0,008 milliliter per minuut. Blijf de spuitpomp 60 minuten draaien en verzamel daarna de urine in de urinebuis.Zet de urinebuis op ijs. In deze studie, fluorescentie scan van inheemse muis urine toont een piek op 395 nanometer. FITC polysucrose 70 bij een concentratie van 40 microgram per milliliter in muisurine geeft een fluorescentie maximum op 525 nanometer.Muisurine verstoort de fluorescentiemeting van FITC polysucrose 70 niet. Bij de toelating van 525 nanometer tonen de stijgende concentraties van FITC polysucrose 70 een verhoogde fluorescentieintensiteit. Deze methode is ook in staat om verschillen in glomerulaire doorlaatbaarheid op te sporen.De witte kolommen vertegenwoordigen FITC polysucrose 70 niveaus vóór het begin van angiotensin II stimulatie in de experimentele fase. Na doseringen gedurende 60 minuten nam de glomerulaire doorlaatbaarheid toe in vergelijking met de controlegroep. angiotensine II was verminderde glomerulaire doorlaatbaarheid.De FITC polysucrose 70 niveaus daalde na een extra 60 minuten angiotensin II stimulatie of 60 minuten angiotensin II washout. De toename van de glomerulaire doorlaatbaarheid als gevolg van angiotensin II kan worden geblokkeerd door een angiotensin II receptor blocker. Bloeddruk gecontroleerd door de staart manchet methode bleek geen significante verschillen tussen de controle en angiotensin II behandelde groepen.Tijdens het proberen van deze procedure is het belangrijk om luchtembolie te vermijden bij het veranderen van infusieoplossingen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

Identificatie en isolatie van Slow-delende cellen in Human Glioblastoma Met behulp van Carboxy fluoresceïne succinimidylester (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

Kwantificeren Glomerulaire Doorlatendheid Fluorescent macromoleculen Met 2-Photon Microscopy in München Wistarratten

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Een<em&gt; In vivo</em&gt; Assay naar Blood Vessel Permeabiliteit Test

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halsslagader Infusions voor farmacokinetische en farmacodynamische analyse van Taxanen in Muizen

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

Geautomatiseerde Meting van longemfyseem en Kleine luchtweg remodeling in sigarettenrook blootgesteld Muizen

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Chirurgische Modellen van Gastro-oesofageale met Muizen

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

Visualisatie van vasculaire en Parenchymale Regeneratie na 70% Gedeeltelijke hepatectomy in normale muizen

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

Langdurige Bloeddruk meten in vrij bewegende muizen met behulp van telemetrie

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Opnieuw Arterialized Rat gedeeltelijke lever transplantatie met een in vivo vaartuig georiënteerde 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

Beoordeling van de nierfunctie in muismodellen van glomerulaire ziekte

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...