Name: highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70
Uploaded: 2019-08-09T13:00:00
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저자들은 뛰어난 기술 지원에 대해 크리스티나 슈반트, 블랭카 듀벤작, 니콜라 쿠어에게 감사를 표하고, 데니스 손 박사는 형광 스캔에 도움을 주었습니다. 이 연구는 도이치 포충스게마인샤프트(DFG) SFB 612 TP B18을 L.C.R. 및 L.S에 부여하여 지원되었다. 자금 은 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할이 없었다.

조사는 실험실 동물의 배려 그리고 사용을 위한 가이드에 설명된 지침에 따라 실시되었습니다 (미국 국립 보건원 제85-23호, 개정된 1996). 모든 동물 실험은 관련 기관 승인에 따라 수행되었다(주 정부 Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] 참조 번호 84-02.04.2012.A397).
1. 기기, 솔루션 및 장비 준비
<ol><li>FITC-폴리수크로오스 70을 0.9% 멸균 염화나트륨(NaCl)으로 재구성하여 최...

<ol>
	<li>Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estimated+glomerular+filtration+rate+and+albuminuria+with+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+general+population+cohorts:+a+collaborative+meta-analysis.">Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis.</a> Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).</li><li>Mori, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+of+Total+Nephron+Albumin+Filtration+and+Reabsorption+in+Diabetic+Nephropathy.">Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 278-289 (2017).</li><li>Amsellem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cubilin+is+essential+for+albumin+reabsorption+in+the+renal+proximal+tubule.">Cubilin is essential for albumin reabsorption in the renal proximal tubule.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (11), 1859-1867 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid,+dynamic+changes+in+glomerular+permeability+to+macromolecules+during+systemic+angiotensin+II+(ANG+II)+infusion+in+rats.">Rapid, dynamic changes in glomerular permeability to macromolecules during systemic angiotensin II (ANG II) infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 303 (6), F790-F799 (2012).</li><li>Grande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unaltered+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+caveolin-1+knockout+mice.">Unaltered size selectivity of the glomerular filtration barrier in caveolin-1 knockout mice.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (2), F257-F262 (2009).</li><li>Jeansson, M., Haraldsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+size+and+charge+selectivity+in+the+mouse+after+exposure+to+glucosaminoglycan-degrading+enzymes.">Glomerular size and charge selectivity in the mouse after exposure to glucosaminoglycan-degrading enzymes.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (7), 1756-1765 (2003).</li><li>Reis, L. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+features+of+the+urethra+and+urinary+bladder+catheterization+in+female+mice+and+rats.+An+essential+translational+tool.">Anatomical features of the urethra and urinary bladder catheterization in female mice and rats. An essential translational tool.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 26, 106-110 (2011).</li><li>Konigshausen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+glomerular+permeability+by+beta-arrestin+mediated+nephrin+endocytosis.">Angiotensin II increases glomerular permeability by beta-arrestin mediated nephrin endocytosis.</a> Scientific Reports. 6, 39513 (2016).</li><li>Venturoli, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ficoll+and+dextran+vs.+globular+proteins+as+probes+for+testing+glomerular+permselectivity:+effects+of+molecular+size,+shape,+charge,+and+deformability.">Ficoll and dextran vs. globular proteins as probes for testing glomerular permselectivity: effects of molecular size, shape, charge, and deformability.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 288 (4), F605-F613 (2005).</li><li>Bohrer, M. P., Deen, W. M., Robertson, C. R., Troy, J. L., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+molecular+configuration+on+the+passage+of+macromolecules+across+the+glomerular+capillary+wall.">Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall.</a> The Journal of General Physiology. 74 (5), 583-593 (1979).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+Effects+of+Tempol,+NOS-,+RhoA-+and+Rac-1-inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: Effects of Tempol, NOS-, RhoA- and Rac-1-inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2018).</li><li>Dolinina, J., Sverrisson, K., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+inhibition+causes+acute+increases+in+glomerular+permeability+in+vivo,+dependent+upon+reactive+oxygen+species.">Nitric oxide synthase inhibition causes acute increases in glomerular permeability in vivo, dependent upon reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 311 (5), F984-F990 (2016).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reactive+oxygen+species+(ROS)-dependent+effects+of+IL-1beta,+TNF-alpha,+and+IL-6+on+the+glomerular+filtration+barrier+(GFB)+in+vivo.">Acute reactive oxygen species (ROS)-dependent effects of IL-1beta, TNF-alpha, and IL-6 on the glomerular filtration barrier (GFB) in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 309 (9), F800-F806 (2015).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic,+size-selective+effects+of+protamine+sulfate+and+hyaluronidase+on+the+rat+glomerular+filtration+barrier+in+vivo.">Dynamic, size-selective effects of protamine sulfate and hyaluronidase on the rat glomerular filtration barrier in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 307 (10), F1136-F1143 (2014).</li><li>Sverrisson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+fetal+hemoglobin+induces+increases+in+glomerular+permeability:+inhibition+with+alpha1-microglobulin+and+tempol.">Extracellular fetal hemoglobin induces increases in glomerular permeability: inhibition with alpha1-microglobulin and tempol.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 306 (4), F442-F448 (2014).</li><li>Axelsson, J., Mahmutovic, I., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats+following+laparotomy+and+muscle+trauma.">Loss of size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats following laparotomy and muscle trauma.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (3), F577-F582 (2009).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+and+sustained+increases+in+glomerular+permeability+following+ANP+infusion+in+rats.">Transient and sustained increases in glomerular permeability following ANP infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F24-F30 (2011).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+hyperglycemia+induces+rapid,+reversible+increases+in+glomerular+permeability+in+nondiabetic+rats.">Acute hyperglycemia induces rapid, reversible increases in glomerular permeability in nondiabetic rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 298 (6), F1306-F1312 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Venturoli, D., Sward, P., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+early+endotoxemia+and+dextran-induced+anaphylaxis+on+the+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats.">Effects of early endotoxemia and dextran-induced anaphylaxis on the size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 296 (2), F242-F248 (2009).</li><li>Andersson, M., Nilsson, U., Hjalmarsson, C., Haraldsson, B., Nystrom, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+renal+ischemia-reperfusion+reduces+charge+and+size+selectivity+of+the+glomerular+barrier.">Mild renal ischemia-reperfusion reduces charge and size selectivity of the glomerular barrier.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (6), F1802-F1809 (2007).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+effects+of+Tempol,+NOS,+RhoA,+and+Rac-1+inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: effects of Tempol, NOS, RhoA, and Rac-1 inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (3), F445-F453 (2018).</li><li>Rosengren, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transvascular+protein+transport+in+mice+lacking+endothelial+caveolae.">Transvascular protein transport in mice lacking endothelial caveolae.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 291 (3), H1371-H1377 (2006).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (6), H2408-H2415 (2004).</li><li>Eisner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+contribution+of+tubular+secretion+to+creatinine+clearance+in+mice.">Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice.</a> Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).</li></ol>

제시된 방법은 조사자가 추적자를 사용하여 매우 민감한 방식으로 마우스의 사구 체 투과성을 테스트 할 수 있게합니다. 이 방법을 사용하면 소량의 소변만 사용하여 사구 체 투과성의 단기 증가를 진단 할 수 있습니다. 이 기술을 성공적으로 마스터하기 위한 가장 중요한 단계는 1) 마우스 수술, 특히 중앙 정맥의 통조림, 2) 점막에 해를 끼치지 않고 오줌 카테터를 배치하는 수동 전문 지식 개발, ...

사구 여과 장벽 내의 기능적 또는 구조적 결함은 알부민에 사구체 투과성을 증가시켜 소변에서 알부민 (알부민뇨)을 검출합니다. 알부민뇨아는 심혈관 결과를 예측하고 사구체 부상에 대한 중요한 마커입니다1. 알부민뇨증의 낮은 수준조차도 정상 범위 내에 놓여있으며 심장 혈관 위험 증가와 관련이있습니다 1.
생리적 조건하에서, 알부민은 사구체를 통해 여과되고 관 계통2,3에서거의 완전히 재흡수됩니다. 마우스에서, 소변에 있는 알부민의 검출은 일반적으로 소변 수집의 24 시간에서 알부민 효소 연결된 면역 흡착 분석 (ELISA)에 의해 수행됩니다. 24 시간 소변 수집 또는 반점 소변에서 소변을 사용하는 경우, 알부민 농도의 작은 차이는 분석 감도 문제로 인해 놓칠 수 있습니다. 대부분의 연구원은, 그러므로, 독소, 약 및 신장 수술 때문에 강력한 신장 상해에 의해 알부민뇨가 유도되는 동물 모형을 이용합니다.
따라서 사구 체 투과성의 작고 일시적인 변화를 감지하는 민감한 방법의 발견은 현장에서 매우 중요합니다. Rippe 등은 알부민4의크기로 형광 표지 된 트레이서, 즉 FITC-폴리 수크로오스 70 (즉, FITC-Ficoll 70)을 적용하여 사구체 투과성을 테스트하는 랫트 모델을 제시했습니다. 추적 응용 프로그램은 사구 체 투과성의 단기 변화를 테스트 할 수 있습니다 (분 이내) 매우 민감한4. 2건의 연구에서는 마우스5,6에서트레이서 방법을 사용하였다. 그 이점에도 불구하고,이 방법은 불행히도 기술적으로 매우 복잡하고 방사능및 침습적이라는 단점이 있습니다. 소변의 추가 분석은 겔 여과 또는 크기 배제 HPLC5,6을사용하여 수행된다.
이 논문에서, 우리는 형광으로 표지된 FITC-polysucrose 70를 사용하여 마우스에 있는 사구 체 투과성을 측정하는 대안, 과민한, 비방사성 및 빠른 방법을 제시합니다. 요도 카테터를 도입함으로써, 소변 수집은 방광 천자, 요도 절제술 및 상피 카테터 적용보다 덜 침습적이며, 적어도 30 분마다 소변 수집을 허용합니다. 형광 플레이트 리더. 소변에 있는 추적자 농도효소 크레아티닌 분석술을 사용하여 소변에 있는 크레아티닌 농도로 정규화됩니다.
따라서, 이 새로운 방법은 증가 사구 체 투과성 초기 사구체 부상을 연구하는 민감한 도구를 제공합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Motic SMZ168 BL</td>
			<td style="width:77px;">Motic</td>
			<td style="width:101px;">SMZ168BL</td>
			<td style="width:235px;">microscope for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:257px;">KL1500LCD</td>
			<td style="width:77px;">Pulch and Lorenz microscopy</td>
			<td style="width:101px;">150500</td>
			<td>light for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Microfederschere</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">FD100R</td>
			<td>fine scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Durotip Feine Scheren</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BC210R</td>
			<td>for neck cut</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Anatomische Pinzette</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BD215R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Pr&#228;parierklemme</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BJ008R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Seraflex</td>
			<td style="width:77px;">Serag Wiessner</td>
			<td style="width:101px;">IC108000</td>
			<td>silk thread</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Ketamine 10%</td>
			<td style="width:77px;">Medistar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Rompun (Xylazin) 2%</td>
			<td style="width:77px;">Bayer</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.28mm OD 0.61mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/100</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.58mm OD 0.96mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/200</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Harvard apparatus 11 Plus</td>
			<td style="width:77px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:101px;">70-2209</td>
			<td>syringe pump</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;"></td>
			<td style="width:77px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">BD Insyte Autoguard</td>
			<td style="width:77px;">BD</td>
			<td style="width:101px;">381823</td>
			<td>&#160;urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Multimode Detector DTX 880</td>
			<td style="width:77px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:257px;">384 well microtiterplate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">262260</td>
			<td style="width:235px;">384 well platte</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Creatinine Assay Kit</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">MAK080</td>
			<td>to measure creatinine concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">96 well plate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">260836</td>
			<td>for creatinine assay&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">FITC-labeled polysuccrose 70</td>
			<td style="width:77px;">TBD Consultancy</td>
			<td style="width:101px;">FP70</td>
			<td>FITC-ficoll</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Angiotensin II</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">A9525</td>
			<td>used to test glomerular permeability</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BP-98A</td>
			<td style="width:77px;">Softron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">OTS 40.3040</td>
			<td style="width:77px;">Medite</td>
			<td style="width:101px;">01-4005-00</td>
			<td>heating plate for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">Instillagel 6mL</td>
			<td style="width:77px;">Farco-Pharma GmbH</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Exacta</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">GT415</td>
			<td>shaver</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70

소변에 있는 알부민의 손실 (알부민뇨) 심장 혈관 결과를 예측합니다. 생리적 조건하에서, 소량의 알부민은 사구체에 의해 여과되고 흡수 한계에 도달 할 때까지 관 시스템에서 재흡수됩니다. 병리학 적인 알부민의 초기 증가따라서, 알부민뇨증을 분석해서 놓칠 수 있습니다. 따라서 사구체 파면을 테스트하기 위해 트레이서를 사용하는 것이 유리해 보입니다. 형광 표지된 트레이서 플루오레세인 이소티오차네이트(FITC)-폴리수크로오스(즉, FITC-Ficoll)는 사구체 파면선택성을 연구하는데 사용될 수 있다. FITC-폴리수크로오스 분자는 사구체에 의해 자유롭게 여과되지만 관형 시스템에서 재흡수되지 는 않습니다. 마우스 및 래트에서 FITC-polysucrose는 기술적으로 복잡한 절차 (즉, 방사성 측정, 고성능 액체 크로마토그래피 [HPLC], 겔 여과)를 사용하여 사구체 투과성의 모델에서 조사되었습니다. 우리는 마우스에서 FITC-polysucrose 70 (알부민의 크기)에 사구 체 투과성의 초기 및 작은 증가를 테스트하기 위해 FITC-polysucrose 추적자 기반 프로토콜을 수정하고 촉진했습니다. 이 방법은 작은 소변 볼륨 (5 μL)을 가진 반복적인 소변 분석을 허용합니다. 이 프로토콜은 트레이서 FITC-polysucrose 70이 정맥내 적용되고 소변이 간단한 오줌 카테터를 통해 집합되는 방법에 대한 정보를 포함합니다. 소변은 형광 판 리더를 통해 분석하고 소변 농도 마커 (크레아티닌)로 정규화되어 기술적으로 복잡한 절차를 피합니다.

도2에 도시된 바와 같이, 마우스에서 사구체 투과성을 시험하는 방법은 3단계로 구축된다. 첫 번째 단계는 오줌 카테터와 중앙 정맥 카테터가 배치되는 준비 단계라고합니다. 두 번째 단계는 FITC-폴리수크로오스 70의 정맥 볼러스 주입으로 시작하여 60 분 동안 FITC-폴리 수크로오스 70의 연속 주입으로 시작하여 평형 단계라고합니다. 마지막 단계는 실?...

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Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

여기에서, 우리는 고과민성, 비방사성 추적자를 사용하여 마우스에 있는 사구체 투과성을 시험하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 작은 소변 볼륨을 가진 반복적인 소변 분석을 허용합니다.

플루오레세인 이소티오차네이트-폴리수크로오스 70을 가진 마우스에서 사구체 투과성의 고감도 측정

The loss of albumin in urine (albuminuria) predicts cardiovascular outcome. Under physiological conditions, small amounts of albumin are filtered by the ...

이 방법은 신장 병에서 구체 투과성의 역할에 관하여 신장학 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 형광 납 라벨 추적자를 사용하여 구체 투과성의 작고 일시적인 증가가 검출된다는 것입니다. 마취 후, 여성 마우스에 오줌 카테터를 놓습니다.마우스를 등갈 에 배치합니다. 하복부를 조이고 요도 타튬을 찾습니다. 22 G angiocatheter의 카테터의 플라스틱 부분을 얻고 실로카인 젤로 윤활합니다.왼쪽 검지 손가락을 사용하여 하복부에 주의 깊은 장력을 배치하고 탈모 요도 축을 평행화하면서 도도 오스트리움에 3 밀리미터카테터를 도입하십시오. 요도 오골 내의 팁을 유지하고 요도의 축을 유지하여 앙미오카테터 180도의 상단을 돌립니다. 그런 다음 카테터를 마우스에 7밀리미터 더 도입하여 방광 내에 배치되도록 합니다.소변을 수집하기 위해 앙뇨시카테터 위에 1.5 밀리리터 브라운 튜브를 놓습니다. 소변 생산을 향상시키기 위해 염화 나트륨 0.9 %의 1 밀리리터를 피하로 적용하십시오. 마우스의 목을 면도하고 외과 의사를 향해 머리와 함께 수납에 배치합니다.하이퍼는 테이프로 마우스의 머리를 확장합니다. 70%의 이소프로판올로 목을 소독합니다. 트위저와 가위를 사용하면 턱선 아래 5밀리미터 의 피부 절개를 합니다.흉골 의 중간에 도달 할 때까지 흉골 방향으로 약 1 센티미터 피부를 잘라. 가위 한 켤레를 사용하십시오. 조심스럽게 목의 오른쪽에 피부를 해부.목의 연조직을 노출시키기 위해 피부에 직사각형 절개를 오른쪽으로 만듭니다. 경정맥을 손상시키지 않도록 주의하십시오. 가위 한 켤레와 트위저를 사용하여 두 개의 클램프로 피부 플랩을 고정합니다.미세 트위저의 끝을 사용하여 무딘 준비로 경정맥을 조심스럽게 노출시합니다. 필요한 경우 미세 가위로 조직을 제거하십시오. 정맥 가지에 부상을 피하십시오.마우스 의 머리를 향해 보이는 경정맥의 말단 부분에 실크 실로 합자를 놓고 닫습니다. 실크 실을 테이프로 고정하여 합자에 장력을 더합니다. 이것은 경정맥에 약간의 긴장을 보장합니다.경정맥의 근위 부분 주위의 합자를 준비한다. 그 후, 평형 및 융합 용액으로 카테터를 채웁니다. 카테터가 경정맥을 정렬할 수 있도록 카테터를 테이프로 고정합니다.공기 색전증을 피하기 위해 거품에 대한 제어. 삽입 부위에 미세 핀셋으로 경정맥을 들어 올립니다. 경정맥에 평행하게 튜빙을 정렬하고 루멘을 목표로 경정맥을 뚫는다.경정맥의 축을 평행하여 약 2~4밀리미터 에 삽입합니다. 활발한 움직임을 피하십시오. 합자를 닫아 카테터를 수정합니다.현미경을 통해 주의 깊게 볼 수 있도록 합자의 압박감을 제어합니다. 수술 부위에 젖은 면봉을 놓습니다. 마우스가 등쪽 회기에 누워있는 동안 꼬리 커프를 마우스 꼬리 의 바닥에 놓습니다.측정을 시작하고 시간 당 10 번 반복합니다. 혈압 측정이 정확하지 않고 잘못된 데이터가 생성되면 꼬리 커프의 위치를 조정하십시오. 평형 단계 전에 오줌 수집 튜브를 변경하고 얼음에 놓습니다.면봉을 접어 경정맥에 도입된 작은 용기 카테터 주위에 놓습니다. 역행 된 혈류 또는 공기 색전증을 폐지하기 위해 면봉 위에 클램프를 놓습니다. FITC 볼루스로 채워진 1밀리리터 주사기와 함께 27 G 바늘을 작은 용기 카테터 의 끝에 연결합니다.클램프를 열고 100 마이크로리터 FITC 볼러스를 적용합니다. 클램프를 다시 닫고 더 큰 카테터를 더 작은 카테터와 연결합니다. 클램프를 다시 열고 분당 0.008 밀리리터의 유량으로 주사기 펌프를 시작합니다.60분 동안 주입을 계속합니다. 이 단계에서, 구체 파마 선택성에 효과적인 약은 조사됩니다. 또 다른 1.5 밀리리터 갈색 튜브로 오줌 튜브 양식 시간 점 0 분 변경합니다.작은 선박 카테터 주위에 면봉을 넣고 작은 선박 카테터에서 큰 카테터를 분리합니다. 주사기를 실험단계 용액으로 채웁니다. 주사기 펌프에 넣고 주입 펌프가 작동하여 대형 카테터가 실험상 용액으로 채워지도록 합니다.공기 색전증을 피하면서 카테터를 다시 연결하고 클램프를 다시 엽니다. 분당 0.008 밀리리터의 유량으로 주사기 펌프를 시작합니다. 주사기 펌프를 60분 동안 계속 가동하고 그 후 오줌관 내에서 소변을 수집합니다.소변 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 이 연구에서는, 네이티브 마우스 소변의 형광 검사는 395 나노미터에서 피크를 보여줍니다. FITC 폴리수크로오스 70은 마우스 소변에서 밀리리터당 40 마이크로그램의 농도로 525나노미터의 형광을 최대로 나타낸다.마우스 소변은 FITC 다각형 제 70의 형광 측정을 방해하지 않습니다. FITC 다각형산제(70)의 농도를 증가시켜 525나노미터의 입학시 형광 강도가 증가한다. 이 방법은 또한 구체 투과성의 차이를 감지 할 수있다.백색 기둥은 실험 단계에서 안지오텐신 II 자극이 시작되기 전에 FITC 다당류 70 레벨을 나타낸다. 60 분 동안 투여 한 후, 사구체 투과성이 대조군에 비해 증가했습니다. 안지오텐신 II는 구체 투과성을 감소 시폐합니다.FITC 다당류 70 레벨은 안지오텐신 II 자극의 추가 60 분 또는 안지오텐신 II 세척60 분 후에 감소했습니다. 안지오텐신 II로 인한 사구체 투과성의 증가는 안지오텐신 II 수용체 차단제에 의해 차단될 수 있다. 꼬리 커프 방법에 의해 모니터링되는 혈압은 대조군과 안지오텐신 II 치료군 사이에 유의한 차이를 나타내지 않았다.이 절차를 시도하는 동안 주입 솔루션을 변경할 때 공기 색전증을 피하는 것이 중요합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

카르복시 Fluorescein Succinimidyl 에스터 (CFSE)를 사용 인간 Glioblastoma의 속도가 느린 - 나누면 전지의 식별 및 분리

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

연구

의학

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

뮌헨의 Wistar 쥐에서 2 광자 현미경을 사용하여 형광 고분자의 사구체 투과율을 정량화

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

<em&gt; 생체 내</em혈관 투과율을 테스트하려면&gt; 분석

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

담배 연기에 노출 된 마우스의 폐 폐기종 및 작은기도 리모델링 자동 측정

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

마우스와 위식도 역류의 외과 모델

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

일반 마우스의 70 % 부분 간 절제술 후 혈관 및 실질 재생의 시각화

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

텔레 메 트리를 사용하여 자유롭게 이동 마우스의 장기 혈압 측정

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

다시는 vivo에서 선박 지향 70% 쥐 부분 간 이식 Arterialized Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

신장 기능 사 질병 마우스 모델에서의 평가

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...