Name: highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70
Uploaded: 2019-08-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 at JoVE.com

Авторы благодарят Кристину Швандт, Бланку Дувняк и Николу Кур за исключительную техническую помощь и доктора Денниса Сона за помощь в сканировании флуоресценции. Это исследование было поддержано грантом Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) SFB 612 TP B18 в Л.К.Р. и Л.С. Фонднера не принимала никакого значения в разработке, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Исследования проводились в соответствии с руководящими принципами, изложенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (Публикация Национальных институтов здравоохранения США No 85-23, пересмотренный 1996 год). Все эксперименты на животных проводились в соответствии...

<ol>
	<li>Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estimated+glomerular+filtration+rate+and+albuminuria+with+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+general+population+cohorts:+a+collaborative+meta-analysis.">Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis.</a> Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).</li><li>Mori, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+of+Total+Nephron+Albumin+Filtration+and+Reabsorption+in+Diabetic+Nephropathy.">Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 278-289 (2017).</li><li>Amsellem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cubilin+is+essential+for+albumin+reabsorption+in+the+renal+proximal+tubule.">Cubilin is essential for albumin reabsorption in the renal proximal tubule.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (11), 1859-1867 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid,+dynamic+changes+in+glomerular+permeability+to+macromolecules+during+systemic+angiotensin+II+(ANG+II)+infusion+in+rats.">Rapid, dynamic changes in glomerular permeability to macromolecules during systemic angiotensin II (ANG II) infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 303 (6), F790-F799 (2012).</li><li>Grande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unaltered+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+caveolin-1+knockout+mice.">Unaltered size selectivity of the glomerular filtration barrier in caveolin-1 knockout mice.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (2), F257-F262 (2009).</li><li>Jeansson, M., Haraldsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+size+and+charge+selectivity+in+the+mouse+after+exposure+to+glucosaminoglycan-degrading+enzymes.">Glomerular size and charge selectivity in the mouse after exposure to glucosaminoglycan-degrading enzymes.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (7), 1756-1765 (2003).</li><li>Reis, L. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+features+of+the+urethra+and+urinary+bladder+catheterization+in+female+mice+and+rats.+An+essential+translational+tool.">Anatomical features of the urethra and urinary bladder catheterization in female mice and rats. An essential translational tool.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 26, 106-110 (2011).</li><li>Konigshausen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+glomerular+permeability+by+beta-arrestin+mediated+nephrin+endocytosis.">Angiotensin II increases glomerular permeability by beta-arrestin mediated nephrin endocytosis.</a> Scientific Reports. 6, 39513 (2016).</li><li>Venturoli, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ficoll+and+dextran+vs.+globular+proteins+as+probes+for+testing+glomerular+permselectivity:+effects+of+molecular+size,+shape,+charge,+and+deformability.">Ficoll and dextran vs. globular proteins as probes for testing glomerular permselectivity: effects of molecular size, shape, charge, and deformability.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 288 (4), F605-F613 (2005).</li><li>Bohrer, M. P., Deen, W. M., Robertson, C. R., Troy, J. L., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+molecular+configuration+on+the+passage+of+macromolecules+across+the+glomerular+capillary+wall.">Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall.</a> The Journal of General Physiology. 74 (5), 583-593 (1979).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+Effects+of+Tempol,+NOS-,+RhoA-+and+Rac-1-inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: Effects of Tempol, NOS-, RhoA- and Rac-1-inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2018).</li><li>Dolinina, J., Sverrisson, K., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+inhibition+causes+acute+increases+in+glomerular+permeability+in+vivo,+dependent+upon+reactive+oxygen+species.">Nitric oxide synthase inhibition causes acute increases in glomerular permeability in vivo, dependent upon reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 311 (5), F984-F990 (2016).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reactive+oxygen+species+(ROS)-dependent+effects+of+IL-1beta,+TNF-alpha,+and+IL-6+on+the+glomerular+filtration+barrier+(GFB)+in+vivo.">Acute reactive oxygen species (ROS)-dependent effects of IL-1beta, TNF-alpha, and IL-6 on the glomerular filtration barrier (GFB) in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 309 (9), F800-F806 (2015).</li><li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic,+size-selective+effects+of+protamine+sulfate+and+hyaluronidase+on+the+rat+glomerular+filtration+barrier+in+vivo.">Dynamic, size-selective effects of protamine sulfate and hyaluronidase on the rat glomerular filtration barrier in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 307 (10), F1136-F1143 (2014).</li><li>Sverrisson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+fetal+hemoglobin+induces+increases+in+glomerular+permeability:+inhibition+with+alpha1-microglobulin+and+tempol.">Extracellular fetal hemoglobin induces increases in glomerular permeability: inhibition with alpha1-microglobulin and tempol.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 306 (4), F442-F448 (2014).</li><li>Axelsson, J., Mahmutovic, I., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats+following+laparotomy+and+muscle+trauma.">Loss of size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats following laparotomy and muscle trauma.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (3), F577-F582 (2009).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+and+sustained+increases+in+glomerular+permeability+following+ANP+infusion+in+rats.">Transient and sustained increases in glomerular permeability following ANP infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F24-F30 (2011).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+hyperglycemia+induces+rapid,+reversible+increases+in+glomerular+permeability+in+nondiabetic+rats.">Acute hyperglycemia induces rapid, reversible increases in glomerular permeability in nondiabetic rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 298 (6), F1306-F1312 (2010).</li><li>Axelsson, J., Rippe, A., Venturoli, D., Sward, P., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+early+endotoxemia+and+dextran-induced+anaphylaxis+on+the+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats.">Effects of early endotoxemia and dextran-induced anaphylaxis on the size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 296 (2), F242-F248 (2009).</li><li>Andersson, M., Nilsson, U., Hjalmarsson, C., Haraldsson, B., Nystrom, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+renal+ischemia-reperfusion+reduces+charge+and+size+selectivity+of+the+glomerular+barrier.">Mild renal ischemia-reperfusion reduces charge and size selectivity of the glomerular barrier.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (6), F1802-F1809 (2007).</li><li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction:+effects+of+Tempol,+NOS,+RhoA,+and+Rac-1+inhibition.">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: effects of Tempol, NOS, RhoA, and Rac-1 inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (3), F445-F453 (2018).</li><li>Rosengren, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transvascular+protein+transport+in+mice+lacking+endothelial+caveolae.">Transvascular protein transport in mice lacking endothelial caveolae.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 291 (3), H1371-H1377 (2006).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (6), H2408-H2415 (2004).</li><li>Eisner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+contribution+of+tubular+secretion+to+creatinine+clearance+in+mice.">Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice.</a> Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).</li></ol>

Представленный метод позволяет исследователю проверить glomerular проницаемость у мышей в очень чувствительным образом с помощью трассировщика. С помощью этого метода, краткосрочное увеличение гломерулярной проницаемости может быть диагностировано с использованием только небольшое ко?...

Функциональные или структурные дефекты в пределах гломерулярного барьера фильтрации увеличивают гломерулярную проницаемость альбумина, в результате чего обнаружение альбумина в моче (альбуминурия). Альбуминурия предсказывает сердечно-сосудистые результаты и является важным маркером для glomerular травмы1. Даже низкие уровни альбуминурии, лежащие в пределах нормального диапазона, связаны с повышенным сердечно-сосудистым риском1.
В физиологических условиях альбумин фильтруется через гломерулус и почтиполностью поглощается в трубчатой системе 2,3. У мышей, обнаружение альбумина в моче, как правило, осуществляется альбумина фермент-связанных иммуносорбент анализа (ELISA) от 24 ч сбора мочи. Если моча из 24 ч мочи или пятно мочи используется, небольшие различия в концентрации альбумина могут быть упущены из-за проблем с чувствительностью анализа. Большинство исследователей, таким образом, используют животные модели, в которых альбуминурия индуцируется надежной почечной травмы из-за токсинов, наркотиков и почечной хирургии.
Таким образом, поиск чувствительного метода для обнаружения небольших и переходных изменений в гломерулярной проницаемости очень важен для поля. Rippe et al. представили крысиную модель для проверки гломерулярной проницаемости, применяя флуоресцентно помеченный трассировщик, а именно FITC-polysucrose 70 (т.е. FITC-Ficoll 70), размером с альбумин4. Приложение трассировщик позволяет тестирование краткосрочных изменений в glomerular проницаемость (в течение нескольких минут) и очень чувствительны4. Два исследования использовали метод трассировщика у мышей5,6. Несмотря на свои преимущества, этот метод, к сожалению, имеет недостатки: он технически очень сложный, радиоактивный и инвазивный. Дальнейший анализ мочи осуществляется только с помощью гель фильтрации или размера исключения HPLC5,6.
В этой работе мы представляем альтернативный, чувствительный, нерадиоактивный и быстрый метод измерения гломерулярной проницаемости у мышей с помощью флуоресцентно помеченного FITC-полисуроз7. Вводя трансуретральный катетер, сбор мочи является менее инвазивным, чем прокол мочевого пузыря, уретотомия и супрапубического катетера применения, и позволяет сбор мочи по крайней мере каждые 30 минут. Анализ мочи выполняется из небольших количествах (5 л) с использованием флуоресцентный считыватель пластин. Концентрации трейда в моче нормализуются до креатинина концентрации в моче с помощью ферментативного анализа креатинина.
Таким образом, этот новый метод предлагает чувствительный инструмент для изучения ранней гломерулярной травмы с повышенной гломерулярной проницаемости.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Motic SMZ168 BL</td>
			<td style="width:77px;">Motic</td>
			<td style="width:101px;">SMZ168BL</td>
			<td style="width:235px;">microscope for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:257px;">KL1500LCD</td>
			<td style="width:77px;">Pulch and Lorenz microscopy</td>
			<td style="width:101px;">150500</td>
			<td>light for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Microfederschere</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">FD100R</td>
			<td>fine scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Durotip Feine Scheren</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BC210R</td>
			<td>for neck cut</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Anatomische Pinzette</td>
			<td style="width:77px;">Braun, Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BD215R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Pr&#228;parierklemme</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">BJ008R</td>
			<td>for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Seraflex</td>
			<td style="width:77px;">Serag Wiessner</td>
			<td style="width:101px;">IC108000</td>
			<td>silk thread</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Ketamine 10%</td>
			<td style="width:77px;">Medistar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Rompun (Xylazin) 2%</td>
			<td style="width:77px;">Bayer</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.28mm OD 0.61mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/100</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Fine Bore Polythene Tubing ID 0.58mm OD 0.96mm</td>
			<td style="width:77px;">Portex</td>
			<td style="width:101px;">800/100/200</td>
			<td style="width:235px;">Catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Harvard apparatus 11 Plus</td>
			<td style="width:77px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:101px;">70-2209</td>
			<td>syringe pump</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;"></td>
			<td style="width:77px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">BD Insyte Autoguard</td>
			<td style="width:77px;">BD</td>
			<td style="width:101px;">381823</td>
			<td>&#160;urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Multimode Detector DTX 880</td>
			<td style="width:77px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:257px;">384 well microtiterplate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">262260</td>
			<td style="width:235px;">384 well platte</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Creatinine Assay Kit</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">MAK080</td>
			<td>to measure creatinine concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">96 well plate</td>
			<td style="width:77px;">Nunc</td>
			<td style="width:101px;">260836</td>
			<td>for creatinine assay&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">FITC-labeled polysuccrose 70</td>
			<td style="width:77px;">TBD Consultancy</td>
			<td style="width:101px;">FP70</td>
			<td>FITC-ficoll</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:257px;">Angiotensin II</td>
			<td style="width:77px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">A9525</td>
			<td>used to test glomerular permeability</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BP-98A</td>
			<td style="width:77px;">Softron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for blood pressure measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">OTS 40.3040</td>
			<td style="width:77px;">Medite</td>
			<td style="width:101px;">01-4005-00</td>
			<td>heating plate for mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:257px;">Instillagel 6mL</td>
			<td style="width:77px;">Farco-Pharma GmbH</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>for urinary catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Exacta</td>
			<td style="width:77px;">Aesculap</td>
			<td style="width:101px;">GT415</td>
			<td>shaver</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

highly sensitive measurement of glomerular permeability in mice with fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70

Потеря альбумина в моче (альбуминурия) предсказывает сердечно-сосудистый исход. В физиологических условиях, небольшое количество альбумина фильтруется гломерулем и поглощается в трубчатой системе до достижения предела поглощения. Раннее увеличение патологической фильтрации альбумина может, таким образом, быть пропущено при анализе альбуминурии. Поэтому использование трассеров для проверки гломерулярной пермякции представляется выгодным. Флуоресцентно помеченный трассик флуоресцеин изотиоцианат (FITC)-полисукроз (т.е. FITC-Ficoll), может быть использован для изучения гломерулярной пермской вертики. Молекулы FITC-полисурозы свободно фильтруются гломерулем, но не поглощаются в трубчатой системе. У мышей и крыс, FITC-полисукроз был исследован в моделях гломерулярной проницаемости с помощью технически сложных процедур (т.е. радиоактивных измерений, высокопроизводительных жидких хроматографии (HPLC), фильтрации геля). Мы модифицировали и облегчили FITC-полисахарозный протокол на основе трассировщика для раннего и небольшого увеличения гломерулярной проницаемости fitC-polysucrose 70 (размер альбумина) у мышей. Этот метод позволяет проводить повторные анализы мочи с небольшими объемами мочи (5 кЛ). Этот протокол содержит информацию о том, как трассировщик FITC-полисукроз 70 применяется внутривенно и моча собирается с помощью простого мочевого катетера. Моча анализируется с помощью флуоресценционного считывателя пластин и нормализуется до маркера концентрации мочи (креатинин), тем самым избегая технически сложных процедур.

Как показано на рисунке 2, метод проверки гломерулярной проницаемости у мышей строится в три фазы. Первая фаза называется фазой подготовки, в которой помещаются мочевой катетер и центральный венозный катетер. Второй этап называется фазой равновесия, н?...

Watch this Scientific Journal Video about Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 at JoVE.com

Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

Здесь мы представляем протокол для проверки glomerular проницаемости у мышей с помощью высокочувствительных, нерадиоактивных трассировщик. Этот метод позволяет проводить повторные анализы мочи с небольшими объемами мочи.

Высокочувствительная измерение гломерулярной проницаемости у мышей с флуоресцеином изотиоцианат-полисукроз 70

The loss of albumin in urine (albuminuria) predicts cardiovascular outcome. Under physiological conditions, small amounts of albumin are filtered by the ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области нефрологии о роли гломерулярной проницаемости при заболеваниях почек. Основным преимуществом этого метода является то, что небольшое и преходящее увеличение glomerular проницаемости обнаруживаются с помощью флуоресцентного свинца помечены трассировщик. После анестезии поместите мочевой катетер в женскую мышь.Распоистить мышь в спинной лежачих. Затяните нижнюю часть живота и найдите уретриальный остий. Получить пластиковую часть катетера 22 G ангиокатетера и смазать его ксилокаин гель.Используйте левый указательный палец, чтобы разместить тщательное напряжение на нижней части живота и ввести катетер три миллиметра в уретриальный остий, параллельно дистальной уретриальной оси. Поверните верхнюю часть ангиокатетера на 180 градусов, удерживая кончик в уретральном остии и поддерживая ось уретры. Затем ввимить катетер на семь миллиметров дальше в мышь, чтобы он был помещен в мочевой пузырь.Поместите 1,5 миллилитров коричневой трубки поверх ангиокатетера для сбора мочи. Нанесите один миллилитр 0,9% хлорида натрия подкожно для повышения выработки мочи. Бритье шеи мыши и поместить его в лежачем положении с головой к хирургу.Hyper расширить голову мыши с лентой. Дезинфицировать шею 70%изопропанолом. С помощью пинцета и ножниц сделать пять миллиметров кожи разрез ниже челюсти.Вырежьте кожу примерно на один сантиметр в направлении грудины до середины грудины. Используйте ножницы. Тщательно рассекаете кожу на правую сторону шеи.Сделайте прямоугольный разрез кожи справа, чтобы разоблачить мягкие ткани шеи. Будьте осторожны, чтобы не повредить яремную вену. Используйте ножницы и пинцет, чтобы исправить закрылки кожи с двумя зажимами.Используя кончик тонкого пинцета, тщательно обнажайте яремную вену тупым препаратом. При необходимости удалите ткани мелкими ножницами. Избегайте повреждения ветвей вен.Поместите и закройте лигатуру шелковой нитью в дистальной части видимой яремной вены, которая находится к голове мыши. Зафиксните шелковую нить лентой, чтобы поставить напряжение на лигатуру. Это обеспечивает небольшое напряжение на яремной вене.Подготовьте лигатуру вокруг проксимальной части яремной вены. После этого заполните катетер раствором эквилибрации и синтеза. Зафиксить катетер лентой так, чтобы катетер выравнивает яремную вену.Управление пузырьками, чтобы избежать эмболии воздуха. Поднимите яремную вену с помощью тонкого пинцета в месте вставки. Выровнять труб параллельно яремной вены и прокол яремной вены, направленных на люмен.Вставьте примерно на два-четыре миллиметра параллельно оси яремной вены. Избегайте любых оживленных движений. Закройте лигатуру, чтобы починить катетер.Контроль герметичности лигатуры путем тщательного просмотра через микроскоп. Положите влажный тампон над местом операции. Поместите хвост манжеты в нижней части хвоста мыши в то время как мышь лежит в спинной recumbency.Запустите измерения и повторите их десять раз за точку времени. Если измерения артериального давления не кажутся правильными и производятся ложные данные, отрегулируйте положение хвостовой манжеты. Перед фазой эквилибрации измените трубку сбора мочи и поместите ее на лед.Сложите тампон и положите его вокруг катетера небольшого сосуда, который вводится в яремную вену. Поместите зажим над тампоном, чтобы отменить ретроградный кровоток или эмболию воздуха. Подключите иглу 27 G с одним миллилитровый шприц заполнен FITC болюс к концу малого сосуда катетера.Откройте зажим и нанесите 100 микролитров FITC bolus. Закройте зажим снова и соедините более большой катетер с более малым катетером. Вновь открыть зажим и начать шприц насос с скоростью потока 0,008 миллилитров в минуту.Продолжайте настой в течение 60 минут. На этом этапе исследованы эффективные препараты по гломерулярной избирательности завивки. Изменение мочевой трубки форме времени точки нулевой минуты еще 1,5 миллилитров коричневой трубки.Положите тампон вокруг катетера небольшого сосуда и отсоедините большой катетер от катетера малого сосуда. Заполните шприц экспериментальным фазовым раствором. Поместите его в шприц-насос и дайте насосу настой работать так, чтобы большой катетер был заполнен экспериментальным фазовым раствором.Восстановите катетеры, избегая при этом эмболии воздуха и вновь открыв зажим. Запустите шприц-насос со скоростью потока 0,008 миллилитра в минуту. Продолжайте работать шприц насос в течение 60 минут и собирать мочу в мочевой трубке после этого.Поместите трубку мочи на лед. В этом исследовании, флуоресценция сканирования родной мочи мыши показывает пик на 395 нанометров. Полисукола FITC 70 при концентрации 40 микрограммов на миллилитр в моче мыши показывает флуоресценцию максимум на 525 нанометров.Моча мыши не нарушает измерение флуоресценции полисустрозы FITC 70. При приеме 525 нанометров повышение концентрации полисуцозы FITC 70 показывает повышенную интенсивность флуоресценции. Этот метод также способен обнаруживать различия в гломерулярной проницаемости.Белые столбцы представляют уровни полисуцозы FITC 70 до начала стимуляции ангиотензина II в экспериментальной фазе. После дозы в течение 60 минут, гломерулярная проницаемость увеличилась по сравнению с контрольной группой. ангиотензин II вымывают снижение проницаемости гломерулярной.Уровни полисуклезы FITC 70 снизились после дополнительных 60 минут стимуляции ангиотензина II или 60 минут вымывания ангиотензина II. Увеличение гломерулярной проницаемости из-за ангиотензина II может быть заблокировано блокатором рецепторов ангиотензина II. Кровяное давление, отслеживаемое методом хвостовой манжеты, не показывает существенных различий между контрольными и ангиотензиновыми II обработанными группами.При попытке этой процедуры важно, чтобы избежать эмболии воздуха при изменении инфузионных решений.

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

Выявление и изоляция Медленно делящихся клеток глиобластомы человека в использовании Carboxy Fluorescein сукцинимидил Эстер (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

Количественная клубочковой проницаемости Флуоресцентные макромолекул Используя 2-фотонной микроскопии в Мюнхене крыс Wistar

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Анализ для тестирования проницаемости кровеносных сосудов

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Сонной артерии Настои для Фармакокинетические и фармакодинамические анализ Таксаны в мышах

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

Автоматическое измерение эмфиземы легких и малых дыхательных путей Ремоделирование в сигаретном дыме, подвергшихся воздействию мышей

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Хирургические Модели гастроэзофагеальной рефлюксной с мышами

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

Визуализация сосудистой и паренхиматозных регенерации после того, как 70% частичной гепатэктомии у нормальных мышей

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

Долгосрочный Измерение артериального давления у свободно передвигающихся мышей с использованием Телеметрия

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Повторно Arterialized крысы частично трансплантации печени в естественных условиях судно-ориентированный 70% гепатектомии

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

Оценка функции почек в моделях мыши клубочковых болезни

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...