Name: yeast as a chassis for developing functional assays to study human p53
Uploaded: 2019-08-04T13:00:00
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我々は、欧州連合(FEDERファンドPOCI/01/0145/FEDER/007728プログラプラオペラファクターデ・コンペティティビダード-コンペティシダード-コンペティシダード)と国家基金(FCT/MEC、ファンダサン・パラ・ア・シエンシア・エ・テクノロジア、ミニステリオ・ダ・エドゥカサオ・エ・シエンシア)に感謝します。パートナーシップ契約 PT2020 UID/QUI/50006/2019 およびプロジェクト (3599-PPCDT) PTDC/DTP-FTO/1981/2014 - POCI-01-0145-FEDER-016581。FCTフェローシップ:SFRH/BD/96189/2013(S.ゴメス)この研究は、コンパニア・S・パオロ、トリノ、イタリア(プロジェクト2017.0526)と保健省(プロジェクト5x1000、2015、2016;現在の研究2016)によってサポートされました。テレサ・ロペス=アリアス・モンテネグロ博士(トレント大学実験科学教育研究所)に対し、ビデオ録画の支援に深く感謝します。

1. 特定のRE(yAFM-REまたはyLFM-RE)を含むADE2またはLUC1レポーター酵母株の構築
<ol><li>yAFM-ICOREまたはyLFM-ICORE株12,14(ICORE=I、GAL1プロモーター下でのISce-Iエンドヌクレアーゼ;CO = カウンタ選択可能 URA3 ;RE = レポーター KanMX4カナマイシン耐性を与える;表 1)YPDA寒天プレート上の-80°Cで保存された15%のグリセロール?...

酵母ベースのアッセイは、P53タンパク質機能の様々な側面を調べるのに有用であることが証明されています。これらのアッセイは、機能性多型の評価を含むRE標的部位の変異体に対するP53トランス活性化電位を評価するために特に敏感である。カラーレポーターの使用とルシフェラーゼアッセイの小型化は、費用対効果が高く、比較的スケーラブルなアッセイをもたらす。また、増殖抑制試?...

転写は、転写因子(TF)の動的、空間的、時間的組織を含む非常に複雑なプロセスであり、特定の刺激に応答してクロマチン領域におけるRNAポリメラーゼンの募集および変調のための共因子である1.ヒトP53腫瘍抑制剤を含むほとんどのTFは、単一(または複数の)ユニークなモチーフから成る応答要素(REs)と呼ばれるDNA配列の形で特定のシス作用要素を認識し、単一(または複数)のユニークなモチーフから成る〜6〜10ヌクレオチドを長くする。これらのモチーフの中で、個々の位置は、様々な程度の変動性2を示し、通常、位置重量行列(PWM)またはロゴ3、4によって要約される。
酵母S.セレビシエは、補体アッセイ、異所性発現、および機能アッセイを通じてヒトタンパク質の異なる側面を研究するための適切なモデルシステムであり、たとえ外来酵母遺伝子が存在しない場合でも5、6,7.転写系8の基底成分の進化的保存により、多くのヒトTF(酵母細胞で異所発現した場合)は、導約されたプロモーターを介して作用することによってレポーター遺伝子の発現を調節することができる。適切な R が含まれています。ヒトP53のためにここに提示された転写モデルシステムは、効果を変調することができる3つの主要な変数によって特徴付けられます:1)P53の発現とタイプのモダリティ、2)P53依存転写を制御するRE配列、および3)のタイプレポーター遺伝子(図1A)。
P53発現のモダリティに関して、S.cerevisiaeは、誘導性、抑圧性、または構成的プロモーター9、10、11の選択を可能にする。 特に、誘導性GAL1プロモーターは、酵母におけるTFの発現(炭素源としてラフィノースを用いる)または可変(培地中のガラクトースの量を変化させることによって)を可能にする。実際、微細に微細に微細に発現することは、P53自体だけでなく、他のP53ファミリータンパク質12、13を研究するための重要な開発を表す。
P53依存式を制御するREのタイプに関しては、S.cerevisiaeは、そうでなければ同種の背景に関心のあるREのユニークな違いを有する異なるレポーター株の構築を可能にする。この目標は、S.セレビシエで開発された特に汎用性の高いゲノム編集アプローチの適応を用いて達成され、デリット・パーフェット12、14、15、16と呼ばれる。
さらに、異なるレポーター遺伝子(すなわち、URA3、HIS3、およびADE2)は、S.セレビシエにおけるヒトTFの転写活性を定性的かつ定量的に評価するために使用することができ、それぞれが特定の特徴を有する実験的ニーズに合わせて調整される17,18,19,20,21.これらのレポーター遺伝子の発現は、それぞれウラシル、ヒスチジン、アデニンプロトトロフィーを付与する。URA3レポーターは、5-FOAの存在下での細胞の増殖も許可しないため、逆選択することができます。ADE2レポーターシステムは、栄養選択に加えて、野生型(すなわち、ADE2発現で機能的)または変異体(すなわち、ADE2上では機能しない)を発現する酵母細胞の同定を可能にするという利点を有する。)コロニー色からP53。
例えば、ADE2遺伝子を発現する酵母細胞は、制限量のアデニン(2.5-5.0 mg/L)を含むプレート上に通常サイズの白いコロニーを生成するが、不十分または転写しないものは、より小さい赤(またはピンク)と同じプレートに現れる。コロニー。これは、アデニン生合成経路における中間体の蓄積(すなわち、以前はアミノイミダゾールリボチドまたはAIRと呼ばれてきたP-リボシラミアミノアミノイミダゾール)に蓄積され、これは赤色顔料を形成するために変換される。定性的色ベースのADE2レポーター遺伝子は、その後、定量的なホタルホチホチピナスピラリス(LUC1)12、22に置き換えられました。最近では、ADE2レポーターはlacZレポーターと組み合わせることで、機能の残りのレベルに応じてP53変異体をサブ分類するために利用できる簡単に得点、半定量、ダブルレポーターアッセイを行っています。23.
EGFP(増強された緑色蛍光タンパク質)またはDsRed(ディスコスコスマsp. 赤色蛍光タンパク質)などの蛍光レポーターは、全ての誤解変異に関連するトランス活性化活性の定量評価にも使用されています。TP53コーディング シーケンス24.最後に、P53対立遺伝子発現の調節性プロモーターと、RE遺伝子および/またはレポーター遺伝子と異なる同種酵母株を組み合わせる可能性は、癌関連および生殖細胞系列の精製分類を生成するデータマトリックスの開発につながった。変異体P53ア列25、26、27.
上述のアプローチは、P53タンパク質の転写活性を測定するために使用される。しかしながら、酵母S.セレビシエ28およびシゾサッカロマイセスポンベ29における野生型P53の発現は、細胞周期停止28、30またはに関連している成長遅滞を引き起こす可能性がある。細胞死31.いずれの場合も、酵母増殖阻害は高いP53発現によって引き起こされ、細胞増殖に関与する内因性酵母遺伝子の転写変調の可能性と相関している。この仮説を支持して、機能喪失変異体P53 R273Hは、野生型P5332と同様のレベルで発現した場合、酵母細胞の増殖を妨げなかった。逆に、有毒変異体P53V122Aの酵母における発現(野生型P53と比較して転写活性が高いとして知られている)は、野生型P5332よりも強い増殖抑制効果を引き起こした。
さらに、ヒトMDM2が酵母におけるヒトP53転写活性を阻害し、そのユビキチン化およびその後の分解33を促進できることが実証された。従って、ヒトMDM2およびMDMXがP53誘発酵母増殖阻害を阻害する能力が32,34であった。追加の研究では、P53転写活性とアクチン発現レベルとの間に相関が確立され、酵母32におけるACT1遺伝子上流におけるP53 RE上流の同定が確立された。一貫して、アクチン発現は野生型P53によって増強され、さらにP53 V122Aによって強化されたが、変異型P53 R273Hでは増加しなかった。逆に、P53によるアクチン発現は、P53阻害剤MDM2、MDMX、またはピフィトリンα(P53転写活性の低分子阻害剤)の共存在において減少し、酵母増殖アッセイに基づく結果と一致する。重要なことに、これらの結果は、P53誘発成長阻害と酵母におけるその活性の程度との間に相関関係を確立し、P53機能を調節する小分子を同定し、研究することも利用されている28,34,35.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:790px;" width="789">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">L-Aspartic acid</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">11189</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td style="width:119px;">QIAGEN</td>
			<td style="width:123px;">28104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Phenylalanine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">78019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:486px;">Peptone</td>
			<td style="width:119px;">BD Bacto</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:486px;">Yeast ex+A2:C26tract</td>
			<td style="width:119px;">BD Bacto</td>
			<td>212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Difco Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids and Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:119px;">BDTM</td>
			<td style="width:123px;">233520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lithium Acetate Dihydrate</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">517992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:486px;">Bacteriological Agar Type A</td>
			<td style="width:119px;">Biokar Diagnostics</td>
			<td style="width:123px;">A1010 HA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">G418 disulfate salt</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">A1720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">A2939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Arginine Monohydro-chloride</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">A5131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">Adenine Hemisulfate Salt</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">A9126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">Passive Lysis Buffer 5x</td>
			<td style="width:119px;">PROMEGA</td>
			<td style="width:123px;">E1941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">Bright-Glo Luciferase Assay System&#160;</td>
			<td style="width:119px;">PROMEGA</td>
			<td style="width:123px;">E2620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">5-FOA</td>
			<td style="width:119px;">Zymo Research</td>
			<td style="width:123px;">F9001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">D-(+)-Galactose</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">G0750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Glutamic acid</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">G1251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">Dextrose&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Histidine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">H8125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Isoleucine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">I2752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Lysine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">L1262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">L-Leucine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">L8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Methionine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">M2893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PEG</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">P3640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:486px;">D-(+)-Raffinose Pentahydrate</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">R0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Serine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">S4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Tryptophan</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">T0271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Threonine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">T8625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Uracil</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">U0750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Valine</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">V0500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

yeast as a chassis for developing functional assays to study human p53

よく知られている哺乳動物P53タンパク質が酵母S.セレビシエにおける転写因子(TF)として作用し得ることを知ることは、1)結合部位(すなわち、応答元素(RE)の影響を研究するための異なる機能的アッセイの開発を可能にした。P53トランス活性化特異性または2)TP53変異、共発現共起因子、またはP53トランス活性化活性上の小分子に関する配列変異。異なる基礎研究および翻訳研究アプリケーションが開発されました。実験的に、これらのアプローチは酵母モデルの2つの主要な利点を利用する。一方、ゲノム編集の容易さは、特定のP53-REのレベルでのみ異なるアイソジェニック株を利用して、P53依存性の配列特異性を調べることにより、定性的または定量的レポーターシステムの迅速な構築を可能にします。トランスアクティベーション。一方、異所性P53発現に対する調節システムの利用可能性は、広範囲のタンパク質発現におけるトランス活性化の評価を可能にする。この報告書でレビューされているのは、カラーレポーター遺伝子、ルシフェラーゼ、酵母の成長に基づく広範に使用されるシステムであり、その主な方法論的ステップを説明し、その予測力を批判的に評価する。さらに、これらのアプローチの極端な汎用性は、TP53遺伝子ファミリーの他のメンバーであるP63およびP73を含む異なるTFを研究するために容易に利用することができる。

の建設ADE2またはリュック1レポーター酵母株
デリト・ペルフェットアプローチ12、14、15、16は、P53レポーター酵母株の構築を可能にするように適合された(<sup cla...

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Yeast As a Chassis for Developing Functional Assays to Study Human P53

ここでは、ヒトP53トランス活性化の可能性、その様々な癌関連変異の影響、共発現相互作用タンパク質、および酵母サッカロマイセスセレビシエレポーター株を構築し、利用するための4つのプロトコルを示します。特定の低分子の効果。

ヒトP53を研究する機能アッセイを開発するシャーシとしての酵母

The finding that the well-known mammalian P53 protein can act as a transcription factor (TF) in the yeast S. cerevisiae has allowed for the development of ...

こんにちは、私の名前はバルトロメオ・ボスコで、イタリアのトレント大学統合生物学センターの転写ネットワーク研究所の博士課程の学生です。ご存知のように、転写は、転写因子と補因子の空間的および時間的な組織を含む非常に複雑なプロセスです。それらのほとんどは、ヒトP53を含め、応答元素と呼ばれる特異的なシス作用要素を認識し、このDNAシーケンシングに対する結合は、標的遺伝子の転写の変調に必要である。本研究では、酵母をモデル系として、色レポーター遺伝子やルシファーゼのタンパク質として、あるいは細胞増殖の定量化に関するトランス活性化関数に特異的なP53配列を研究するプロトコルを紹介し、これらのアプローチの主な実験ステップと多様性を強調したいと思います。プロトコル1は、アデニン−2またはホタルルシファーゼ遺伝子の上流に特異的なP53応答要素を含むレポーター酵母株の構築である。レポーター株を構築するために、まず、所望のプロモーター領域を標的とするオリゴヌクレオチドを有する酵母細胞を変換するステップ1.1〜1.15に従う。この変換は、標準的な酢酸リチウムベースのプロトコルに基づいています。5-FOAプレートに変形が現れたら、通常30度で3日間のインキュベーションの後、レプリカは非選択的なYPDAプレート上にそれらをプレートし、またG418を含むYPDAプレート上に、その後の比較を容易にするために各プレートをマークします。プレートを一晩30度でインキュベートします。翌日、G418感受性であるがYPDAプレート上で成長したコロニーからの候補レポーター株を特定する。同定されたコロニーを新しいYPDAプレートにストリークして単一コロニー分離株を得て、30度で2日間成長させる。望ましいP53応答エレメントの正しい集積をチェックし、ステップ1.20で述べた条件でPCR反応を行う。PCR産物のアリコートをアガロースゲルにロードし、サンガーシーケンシング前に正しいアンプリコンの長さを確認します。プロトコル2は、定性的な色ベースのアデニン-2酵母アッセイを用いてP53タンパク質トランス活性化能を評価する方法の一例を提示する。第1項に記載の同じ酢酸リチウムベースのプロトコルに従うP53発現ベクターを用いて酵母細胞を変換する。新しい選択的プレート上のプレートあたり最大6個の単一酵母変態コロニーを、30度で一晩成長させます。翌日、無菌ベルベットを使用して、色表現型、すなわちアデニンの制限量を含む選択的プレートの評価を可能にする新しい選択的プレート上のストリークをレプリカプレート。3日間30度でインキュベートします。同じストリークをレプリカメッキを複数回行うことができます。プロトコル3は、定量発光ベースのLUC1酵母アッセイを用いたP53タンパク質トランス活性化能の評価の一例を提示する。まず、P53発現ベクターを用いて酵母細胞を変換し、再度、第2項に記載の酢酸リチウムベースのプロトコルを用いた。グルコースを炭素源として含む新しい選択的プレート上の単一の形質転換体にパッチを当て、一晩で30度で成長させます。変換の種類ごとに、5 ~ 7 個の異なるパッチを作成します。一晩増殖した後、炭素源としてラフィノースを含む合成選択的培地中に滅菌爪楊枝またはピペットチップを用いて少量の細胞を再懸濁する。これらの細胞懸濁液は、0.4の周りに600ナノメートルで光学密度を有し、異なる温度、治療でのインキュベーションのために複数の96ウェルプレートに分割することができ、またはP53発現を活性化するために様々な量のガラクトースに細胞を露出させることができる。ホタルレポーターの活動を測定するには、透明な96ウェルプレートから白い384ウェルプレートに10〜20マイクロリットルの細胞懸濁液を移し、細胞を同量のリシスバッファーと混合し、シェーカーの室温で10分、15分間インキュベートします。ホタルルシファーゼ基板を10,20マイクロリットル加えます。マルチラベルプレートリーダーを使用して光単位を測定します。また、96ウェルプレートにおける培養物の光学濃度も測定する。プロトコル4は、P53によって誘導される酵母の増殖の阻害を利用する方法の一例を提示する。P53発現ベクターを用いて酵母細胞を変換し、発現ベクターと共変換してP53およびその補因子の1つ(MDM2など)を、再び、セクション1に記載されている酢酸リチウムベースのプロトコルに従う。選択的培地で、約1つの光学密度に変換細胞を成長させます。そして、0.05にそれらを希釈し、適切な濃度に選択した分子を追加します。シェーカーで細胞を30度で42時間インキュベートします。次いで、最小選択培地プレートでの酵母細胞培養の種子100マイクロリットル。30度で2日間インキュベートします。ICOREカセットの代わりに正しいREインテグレーションは、候補酵母クローンからの微量の細胞から始まり、表3に記載されたプライマーを使用して標的遺伝子座を増幅するコロニーPCRによってチェックすることができます。PCR産物は、約500ヌクレオチドのバンドであり、その後、正しいP53応答要素配列の存在について編集されたゲノム位置の配列を確認するためにサンガーシーケンシングによって確認することができる。レポーター株は機能アッセイで使用する準備ができています。P53タンパク質トランス活性化能を評価するには、酵母コロニーの色を確認してください。例えば、野生型P53と変異体R175HとR282Wの比較を、P21-5プライムとPUMAの2つの異なるレポーターと、30度と37度の2つの異なる温度を用いて提示する。興味深いことに、R175Hは機能喪失P53アレーレであるが、R282Wは、すべての条件で、赤色コロニーは、30度の残留トランス活性化活性を有する温度感受性を示し、白いコロニーを生じるが、37度で活性を失い、赤またはピンクのコロニーをもたらす。拡張データセットは、4つの変異型対立遺伝子における図2B.Wild型P53で提示され、10種類のP53応答要素レポーター株、3つの温度、および構成的発現レベルを用いてトランス活性化について試験した。結果は、酵母コロニー色表現型を思い出させる色コードにまとめられる。P53 K139E変異型アレーレは部分的な活性を保持し、冷感を持ちます。例えば、GADD45レポーター株では24度と30度のコロニーは赤色ですが、37度では白色です。ここでは、この方法で得られた結果の一例を示し、ヒトとC.elegans P53酵母のトランス活性化特異性を比較する。棒グラフの結果は、4つの反復の標準誤差を持つ平均相対光単位として表されます。5つの異なるP53応答要素を比較した。P53タンパク質発現の3つの異なるレベルは、培地中のガラクトースの濃度を変化させることによって試験した。2つのP53オルソログは、著しく異なるトランス活性化特異性を示しています。これは、28ヌクレオチドスペーサーの有無を除いて、同じ配列を共有するced13およびV1応答要素を有する結果によって例示される。ヒトP53はV1結合部位とのトランスアクティベーションの方がはるかに高く、C.elegans P53は反対を示す。結果は、ガラクトース誘導性プロモーターの下でのP53発現のレベルから独立している。100マイクロリットルの培養液滴で得られたコロニー数を数えて酵母の増殖を測定する。野生型P53発現酵母の増殖を最大可能な効果として考慮した化合物の変異再活性化効果を計算し、変異体P53を発現する細胞の増殖がゼロレベルの再活性化を表す一方で100%に設定する。この例では、Nutlin-3aはMDM2の共発現によって引き起こされる野生型P53の阻害を緩和し、一方、PhiKan083はY220C P53突然変異体を部分的に再活性化する。両方の場合において、これは、酵母の成長のP53依存的な減少をもたらす。酵母基底細胞は、P53タンパク質機能の値、側面を調査するのに有用であることが証明されています。本研究で説明するプロトコルは、標的部位の変異体に対する野生型または癌関連変異体P53のトランス活性化電位を評価する場合に特に敏感である。さらに、P53機能に影響を与える小分子を同定し、補因子とのP53相互作用を研究するためにこのアプローチを使用することができる。カラーレポーターの使用により、ルシファーゼの小型化、ならびに成長抑制試験は、化学的ライブラリースクリーニングに潜在的に適した費用対効果の高いスケーラブルなアッセイをもたらす。最後に、この研究で説明するシステムは、他の配列特異的転写因子の研究と容易に採用することができる。

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Cancer stem cells (CSCs) are implicated in tumor initiation, development and recurrence after treatment, and have become the center of attention of many ...

Monitoring eIF4F Assembly by Measuring eIF4E-eIF4G Interaction in Live Cells

ライブセルにおけるeIF4E-eIF4G相互作用を測定してeIF4Fアセンブリをモニタリング

Formation of the eIF4F complex has been shown to be the key downstream node for the convergence of signalling pathways that often undergo&#160;oncogenic ...

Using the E1A Minigene Tool to Study mRNA Splicing Changes

E1Aミニジーンツールを使用したmRNAスプライシング変更の研究

mRNA processing involves multiple simultaneous steps to prepare mRNA for translation, such as 5&#180;capping, poly-A addition and splicing. Besides ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

患者由来グリオーマ幹細胞を用いたGBMの潜在的併用療法を同定するための迅速スクリーニングワークフロー

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

乳がん研究のための潜在的機能 インビトロ モデルとしての乳腺上皮および内皮細胞スフェロイド

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...