Name: probiotic studies in neonatal mice using gavage
Uploaded: 2019-01-27T15:00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage at JoVE.com

شكرا لموظفي "مرفق رعاية الحيوان" والبيطريين UBC للتدريب، والمساعدة في الماوس يعمل في معهد أبحاث مستشفى الأطفال قبل الميلاد. شكرا لجامعة كولومبيا البريطانية وإدارة الطب التجريبي لتمويل الدراسة.

<ol>
	<li>Reid, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+and+prebiotics+&#8211;+Progress+and+challenges.">Probiotics and prebiotics &#8211; Progress and challenges.</a> International Dairy Journal. 18 (10-11), 969-975 (2008).</li><li>Lin, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+probiotics+reduce+the+incidence+and+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+very+low+birth+weight+infants.">Oral probiotics reduce the incidence and severity of necrotizing enterocolitis in very low birth weight infants.</a> Pediatrics. 115 (1), 1-4 (2005).</li><li>Panigrahi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+synbiotic+trial+to+prevent+sepsis+among+infants+in+rural+India.">A randomized synbiotic trial to prevent sepsis among infants in rural India.</a> Nature. 548 (7668), 407-412 (2017).</li><li>Amenyogbe, N., Kollmann, T. R., Ben-Othman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-Life+Host&#8211;Microbiome+Interphase:+The+Key+Frontier+for+Immune+Development.">Early-Life Host&#8211;Microbiome Interphase: The Key Frontier for Immune Development.</a> Frontiers in Pediatrics. 5, 111 (2017).</li><li>Ofek Shlomai, N., Deshpande, G., Rao, S., Patole, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+for+Preterm+Neonates:+What+Will+It+Take+to+Change+Clinical+Practice?.">Probiotics for Preterm Neonates: What Will It Take to Change Clinical Practice?.</a> Neonatology. 105 (1), 64-70 (2014).</li><li>Elazab, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+administration+in+early+life,+atopy,+and+asthma:+a+meta-analysis+of+clinical+trials.">Probiotic administration in early life, atopy, and asthma: a meta-analysis of clinical trials.</a> Pediatrics. 132 (3), e666-e676 (2013).</li><li>Arrieta, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+infancy+microbial+and+metabolic+alterations+affect+risk+of+childhood+asthma.">Early infancy microbial and metabolic alterations affect risk of childhood asthma.</a> Science Translational Medicine. 7 (307), 307ra152 (2015).</li><li>Arrieta, M. C., Walter, J., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Microbiota-Associated+Mice:+A+Model+with+Challenges.">Human Microbiota-Associated Mice: A Model with Challenges.</a> Cell Host and Microbe. 19 (5), 575-578 (2016).</li><li>Qi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effect+of+BCG+vaccination+and+enriched+environment+promote+neurogenesis+and+spatial+cognition+via+a+shift+in+meningeal+macrophage+M2+polarization.">Combined effect of BCG vaccination and enriched environment promote neurogenesis and spatial cognition via a shift in meningeal macrophage M2 polarization.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 32 (2017).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+BCG+vaccination+of+mice+improves+neurogenesis+and+behavior+in+early+life.">Neonatal BCG vaccination of mice improves neurogenesis and behavior in early life.</a> Brain Research Bulletin. 120, 25-33 (2016).</li><li>Deshmukh, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiota+regulates+neutrophil+homeostasis+and+host+resistance+to+Escherichia+coli+K1+sepsis+in+neonatal+mice.">The microbiota regulates neutrophil homeostasis and host resistance to Escherichia coli K1 sepsis in neonatal mice.</a> Nature Medicine. 20 (5), 524-530 (2014).</li><li>Butchbach, M. E. R., Edwards, J. D., Schussler, K. R., Burghes, A. H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+oral+delivery+of+drug+compounds+to+the+neonatal+SMNDelta7+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy.">A novel method for oral delivery of drug compounds to the neonatal SMNDelta7 mouse model of spinal muscular atrophy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 161 (2), 285-290 (2007).</li><li>Hickey, L., Garland, S. M., Jacobs, S. E., O&#8217;Donnell, C. P. F., Tabrizi, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-colonization+of+infants+with+probiotic+organisms+in+a+neonatal+unit.">Cross-colonization of infants with probiotic organisms in a neonatal unit.</a> Journal of Hospital Infection. 88 (4), 226-229 (2014).</li><li>Costeloe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomised+controlled+trial+of+the+probiotic+Bifidobacterium+breve+BBG-001+in+preterm+babies+to+prevent+sepsis,+necrotising+enterocolitis+and+death:+the+Probiotics+in+Preterm+infantS+(PiPS)+trial.">A randomised controlled trial of the probiotic Bifidobacterium breve BBG-001 in preterm babies to prevent sepsis, necrotising enterocolitis and death: the Probiotics in Preterm infantS (PiPS) trial.</a> Health Technology Assessment. 20 (66), 1-94 (2016).</li><li>Kitajima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+administration+of+Bifidobacterium+breve+to+preterm+infants:+randomised+controlled+trial.">Early administration of Bifidobacterium breve to preterm infants: randomised controlled trial.</a> Archives of Disease In Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 76 (2), F101-F107 (1997).</li><li>Millar, M. R., Bacon, C., Smith, S. L., Walker, V., Hall, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteral+feeding+of+premature+infants+with+Lactobacillus+GG.">Enteral feeding of premature infants with Lactobacillus GG.</a> Archives of Disease In Childhood. 69 ((5 Spec No)), 483-487 (1993).</li><li>Preidis, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+stimulate+enterocyte+migration+and+microbial+diversity+in+the+neonatal+mouse+intestine.">Probiotics stimulate enterocyte migration and microbial diversity in the neonatal mouse intestine.</a> The FASEB Journal. 26 (5), 1960-1969 (2012).</li><li>Kirjavainen, P. V., El-Nezami, H. S., Salminen, S. J., Ahokas, J. T., Wright, P. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+orally+administered+viable+probiotic+and+dairy+lactobacilli+on+mouse+lymphocyte+proliferation.">The effect of orally administered viable probiotic and dairy lactobacilli on mouse lymphocyte proliferation.</a> FEMS Immunology &amp; Medical Microbiology. 26 (2), 131-135 (1999).</li><li>Gill, H. S., Rutherfurd, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viability+and+dose&#8211;response+studies+on+the+effects+of+the+immunoenhancing+lactic+acid+bacterium+Lactobacillus+rhamnosus+in+mice.">Viability and dose&#8211;response studies on the effects of the immunoenhancing lactic acid bacterium Lactobacillus rhamnosus in mice.</a> British Journal of Nutrition. 86 (2), 285-289 (2001).</li><li>Yu, Z., Morrison, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+extraction+of+PCR-quality+community+DNA+from+digesta+and+fecal+samples.">Improved extraction of PCR-quality community DNA from digesta and fecal samples.</a> BioTechniques. 36 (5), 808-812 (2004).</li><li>Holland, J. L., Louie, L., Simor, A. E., Louie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+detection+of+Escherichia+coli+O157:H7+directly+from+stools:+evaluation+of+commercial+extraction+methods+for+purifying+fecal+DNA.">PCR detection of Escherichia coli O157:H7 directly from stools: evaluation of commercial extraction methods for purifying fecal DNA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 38 (11), 4108-4113 (2000).</li><li>M&#252;ller, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+powerful+DNA+extraction+method+and+PCR+for+detection+of+microsporidia+in+clinical+stool+specimens.">A powerful DNA extraction method and PCR for detection of microsporidia in clinical stool specimens.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 6 (2), 243-246 (1999).</li><li>Pitcher, D. G., Saunders, N. A., Owen, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+extraction+of+bacterial+genomic+DNA+with+guanidium+thiocyanate.">Rapid extraction of bacterial genomic DNA with guanidium thiocyanate.</a> Letters in Applied Microbiology. 8 (4), 151-156 (1989).</li><li>Bollet, C., Gevaudan, M. J., de Lamballerie, X., Zandotti, C., de Micco, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+the+isolation+of+chromosomal+DNA+from+gram+positive+or+acid-fast+bacteria.">A simple method for the isolation of chromosomal DNA from gram positive or acid-fast bacteria.</a> Nucleic Acids Research. 19 (8), 1955 (1991).</li><li>Thomas, C. M., Versalovic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics-host+communication.">Probiotics-host communication.</a> Gut Microbes. 1 (3), 148-163 (2010).</li><li>Tancredi, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+prevents+infections+in+newborns.">Probiotic prevents infections in newborns.</a> Nature. 548 (7668), 404-405 (2017).</li><li>Bernardo, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+Probiotics+in+the+Prophylaxis+of+Necrotizing+Enterocolitis+in+Preterm+Neonates:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Effectiveness of Probiotics in the Prophylaxis of Necrotizing Enterocolitis in Preterm Neonates: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Jornal de Pediatria. 89 (1), 18-24 (2013).</li><li>Aceti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+for+prevention+of+necrotizing+enterocolitis+in+preterm+infants:+systematic+review+and+meta-analysis.">Probiotics for prevention of necrotizing enterocolitis in preterm infants: systematic review and meta-analysis.</a> Italian Journal of Pediatrics. 41 (1), 89 (2015).</li></ol>

لا تضارب في المصالح الكشف عنها.

ووضعت إجراءات تزقيمية IE بإدارة جرعة محددة من الكائنات الحية المجهرية الفئران حديثي الولادة بأمان. يتم تسليم كميات صغيرة من السائل إلى الجهاز الهضمي العلوي باستخدام إبرة تغذية لمنع تطلع مع ضمان إيصال الجرعة في الثقة. جمعت أمعاء الفئران لاستعمار تحليل اثنين وستة أيام بعد تزقيمية مدتها. تعديل الإجراءات المتعلقة باستخراج الحمض النووي لضمان عالية الغلة في الحي إيجابية الكائنات الحية المجهرية. قبكر تحليل الحمض النووي المستخرج يومين بعد آخر تزقيمية أظهرت أعلى نسبيا استعمار ليرة لبنانية في الفئران جافاجيد كل يومين بالمقارنة مع الفئران جافاجيد كل يوم بين دول 2-8. كان هناك أيضا انخفاضا قدرة ليرة لبنانية على مدى ستة أيام، عرض هذه الكائنات الحية المجهرية أن يكون كائن عابر في أمعاء الفأرة. نتائج هذه التجارب تهيئة الظروف اللازمة لإجراء البحوث مع دقة عالية في هذه الفئة العمرية.
لمراقبة آثار طويلة الأجل من البروبيوتيك في الفئران حديثي الولادة، كانت تدار بالفئران حديثي الولادة في دول 2؛ وقت بدء مماثلة تشير إلى المحاكمة البشرية. المكنسية تغذية الفئران حديثي الولادة هو الموصوفة سابقا في الأدب وقد نفذ إلا بعد12،DOL 5-817 عندما يكون خطر تطلع أقل بسبب ميكانيكا البلع متطورة. تغذية المكنسية غير مناسبة تماما للفئران 2 دول كما لوحظت معدلات أعلى من الطموح في الدراسة التجريبية (البيانات لا تظهر). طبيعة لزج حل بربيوتيك إضافة إلى مخاطر الاستنشاق والكائنات الحية المجهرية. اتباع الإجراء جافاجينج IE إلى أدنى حد خطر تطلع في الفئران DOL 2 بينما كان يلقي وحدة التخزين المطلوبة مباشرة إلى الجهاز الهضمي العلوي. وكان أولاً التحقق من صحة نجاح الإجراء استخدام تلوين الطعام غرست تزقيمية الكائنات الحية المجهرية. تلوين الطعام بمثابة علامة مرئية من خلال جلد ألجرو. أي آثار سلبية قد لوحظت في الفئران جافاجيد مع تلوين الطعام، ومن المستحسن للتحقق من صحة الإجراء جافاجينج بهذه الطريقة قبل بدء التجارب على نطاق واسع. يمكن استخدام القرار السريع من تزقيمية وظيفة المشاهدة منعكس تجمع أيضا كمؤشر إضافي تزقيمية ناجحة. حالما يتم وضع الماوس على بطانية تدفئة تزقيمية مدتها بعد، سوف تهدأ المعاكسة تجمع وسوف يلاحظ زيادة في وتيرة التنفس خلال 20 ثانية. استمرار المعاكسة تجمع لمدة أطول من 30 ثانية يشير إلى تزقيمية فاشلة. تزقيمية النجاح يعتمد أيضا على إدخال إبرة التغذية المناسبة مع لمبة يجلس الحق فوق فتح المصرة القلب المعدة. يمكن أن يتيسر ذلك بضمان أن الوسم على إبرة قياس طول بين عملية الرهابه وطرف الآنف، عدم تجاوز الآنف الماوس أثناء تزقيمية مدتها. وهذا يقلل من فرصة الإصابة بالماوس. تواتر تزقيمية يمكن أن يكون لها تأثير كبير على النتائج التجريبية. جافاجينج المتكررة كما يمكن إنشاء مزيد من الضغط الجراء والأم بسبب اضطراب مستمر من القفص والعش. جدول تزقيمية المثلى عند أقل تواترا جافاجيس وخلال مدة أقصر من الوقت دون أن تفقد الأثر المتوقع في النظام. لضمان سلامة والعقم من الإجراء تزقيمية يجب تعقيم إبرة الغسيل والتعقيم الفترات الفاصلة بين استخدام. الغسيل صرامة على استخدام خارج فرك والداخل عن طريق إجبار المياه عن طريق الإبرة باستخدام حقنه قبل التعقيم ضروري كأي جزيئات بقايا يمكن انكروست على الإبرة أثناء التعقيم، ويمكن أن تتداخل مع الإجراء جافاجينج.
لوحظ أعلى LP الاستعمار في الجراء التي كانت جافاجيد مرة كل يوم بالمقارنة مع الجراء جافاجيد كل يوم. يمكن أن يكون هذا بسبب انخفاض الضغط على الجراء جافاجيد كل يوم، ويحتمل أن بروبيوتيك الحصول على المزيد من المواد الغذائية عن طريق بلعها من هذه الجراء الحليب أكثر نسبيا. التبعية جرعة من العلاج بروبيوتيك قد درست سابقا في الماوس نماذج18،19 وهكذا المهم إدارة الجرعة الصحيحة. هو مطلي الحل بروبيوتيك أعدت قبل كل تزقيمية للحصول على حصيلة دقيقة لزيمبابوى التي تديرها. إذا كان الكائن الحي بروبيوتيك اللاهوائية، من المهم لمعرفة ما إذا كان هناك فرق في زيمبابوي عند مثقف هوائيا أو لاهوائيا. ولما ليرة لبنانية أهوائي اختياري، هو مثقف باستخدام كلا الأسلوبين وكان يلاحظ أي اختلاف في زيمبابوي.
تم القيام بتحليل تحميل ليرة لبنانية المعوية وظيفة تزقيمية استخدام عينات الحمض النووي قبكر وعالية الجودة. لتقليل التلوث LP الحمض النووي بين العلاج ومجموعات المراقبة، مختلفة تغذية الإبر، خزانات السلامة البيولوجية والمعدات الجراحية واستخدمت لضمان أعلى جودة العينات. القياس الدقيق للكائنات الحية المجهرية في الأمعاء تتطلب طريقة استخراج الحمض النووي أمثل. الأساليب الأكثر كفاءة لاستخراج الحمض النووي من البراز ينطوي على عدة حبة ضرب الخطوات20،،من2122. هذا الأسلوب اعتمد لاستخراج البكتيريا المعوية باستخدام الضرب حبة ولاحظ تقلص التمثيل (< 10 نسخ2 المستردة) لليرة لبنانية في استخراج الحمض النووي كله الأمعاء. كما ليرة لبنانية كائن إيجابية غرام مع كمية كبيرة من peptidoglycan في جدار الخلية، كان تحسين البروتوكول مع خطوة حل بيبتيدوجليكان باستخدام ليسوزيمي23،24 إضافة إلى المخزن المؤقت تحلل الانزيمية. وهذا زاد تمثيل ليرة لبنانية في نفس العينة المعوية بأكبر من شقين. ويضمن معاملة lysozyme انحلال الطبقة الخارجية بينما حبة ضرب خطوة يسهل تحلل الكائن الحي. الأمثل لكمية من الأنسجة، نوع حبة العقيق وفترة انقطاع استخدام الخرز ضروري للحصول على منتجات الحمض النووي المثلى لإجراء تحليل PCR.
يدل على الأثر الإيجابي البروبيوتيك تدار كالوقاية أو العلاج في الولدان قبل الأجل والأجل في الدراسات الأخيرة25،26،،من2728. هناك ما يبرر إنشاء نموذج الفأر الوليد السليم البروبيوتيك فك تأثير وقائي من البروبيوتيك. يمثل هذا البروتوكول المبينة هنا دليل للباحثين غير مألوف مع عمل الماوس الولدان استخدام البروبيوتيك. على الرغم من المشكلات التي تحدث مع الحجمية القوارض أثناء الدراسة صحة الإنسان والمرض، ويمكن تمديد هذا الأسلوب للبحوث التي تركز على فهم التغييرات التي حدثت ميكروبيومي بسبب البروبيوتيك. هذا النموذج أيضا منبرا لدراسة التفاعل الميكروبات والمضيف والاستجابات المناعية على مدى مراحل إنمائية مختلفة.

في الرضع والتعرض المبكر للكائنات الحية المجهرية ارتبطت مع آثار إيمونومودولاتوري مما أدى إلى انخفاض حالات الإصابة بأمراض مثل التهاب الأمعاء والقولون النّاخر، الاستشرائية والإنتان1،2،3، 4 , 5-إلا أن تحدي الآلية وراء هذه الاستجابة إيمونومودولاتوري لاستكشاف نظراً إلى القيد لأخذ العينات في التجارب البشرية حديثي الولادة (أي توجه الدم متسلسلة وخزعات). نماذج الماوس حديثي الولادة يمكن أن تساعد دراسة إليه العمل المشاركة في التنظيم المناعي حديثي الولادة المرتبطة باستخدام الكائنات الحية المجهرية، والتغييرات في الحجمية المعوية. لسوء الحظ، معظم نماذج الماوس البروبيوتيك ركزت إلى حد كبير على الفئران الكبار؛ بيد أن تأثير البروبيوتيك يرجح أن تكون أعلى في بداية الحياة، مما يوحي بنماذج محددة لهذه الفئة العمرية سوف تكون مفيدة3،6. وبالإضافة إلى ذلك، نماذج الماوس حديثي الولادة أكثر ملاءمة لدراسة الأمراض والتدخلات الموجهة للتطبيق في الحياة المبكرة للرضع البشرية كما أنها من المتوقع أن تحاكي أوثق تطوير نظام المناعة والميكروبات7،8 ،،من910. وكان الهدف لدراسة مدى وأنماط الكائنات الحية المجهرية الاستعمار للفئران حديثي الولادة مع تركيز على ميكانيكية التفاعل بين البلد المضيف وأن ميكروبيومي. لم يتم العثور على وصف مناسب لنماذج الوليد في الأدب، وهكذا كان تناول حاجة إلى تطوير أسلوب قوي وموحد.
الأساليب المتبعة للإدارة عن طريق الفم من المركبات المختلفة للفئران حديثي الولادة تشمل نقل المركبات المطلوبة عن طريق حليب الأم بعلاج مصدر المياه للسدود الحوامل11 أو باستخدام الإبر التغذية لتسهيل إدارة المطلوب من المركبات إلى البلعوم12. هذه الأساليب مفيدة للتجارب التي لا تحتوي على متطلبات دقة الجرعة وحيث سهولة بلعها العلاج عن طريق الماوس المتلقية. وكثيراً ما تدار البروبيوتيك بالاقتران مع بربيوتيك مثل جالاكتوليجوساكتشاريدي وفروكتوليجوساكتشاريدي (المنحدر) التي تكون بمثابة مصدر للتغذية للبكتيريا بروبيوتيك؛ هذه المركبات المضافة تجعل الحل لزج وتحديا لإدارة عبر المنهجيات المشار إليها أعلاه. وضع أسلوب لإدارة كميات محددة من البروبيوتيك والبريبايوتكس للفئران حديثي الولادة ابتداء من أقرب وقت ضروري اليوم الأول من الحياة (DOL). عملية تطوير تقنية تزقيمية مدتها، إمكانية انتشار الاستعمار (كما لوحظ في دراسات أخرى الكائنات الحية المجهرية بين المعالجة ومراقبة الأسلحة13،14،،من1516) وقد تم اختبار والوفرة النسبية للمستعمر بلنتروم ملبنة (ليرة لبنانية) في أمعاء الجراء مع تزقيمية مختلف الجداول الزمنية المقررة. إعداد الكائنات الحية المجهرية المستخدمة في التجارب التي تتألف من الوحدات المكونة للمستعمرة9 10 (زيمبابوي) كل تزقيمية ليرة لبنانية (سلالة ATCC 202195)، مختلطة مع المنحدر (بربيوتيك) و maltodextrin (السواغ) كما هو موضح في المحاكمة البشرية الأخيرة3. وأنجز تسليم الكائنات الحية المجهرية باستخدام IE تزقيمية مدتها والعملية مفصلة في البروتوكول أدناه. تم تقييم الشخصية الاستعمار للكائنات الحية المجهرية استخدام الوقت الحقيقي تضخيم الحمض النووي المستخرج من الأمعاء كلها استخدام الإشعال ليرة لبنانية محددة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1132px;" width="1132">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">1 mL tuberculin syringe with slip tip&#160;</td>
			<td style="width:165px;">BD</td>
			<td style="width:216px;">309659</td>
			<td style="width:357px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">1.2% Triton X-100&#160;</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">2 mM sodium EDTA&#160;&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">20 mM Tris&#183;Cl&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15568025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">5% dextrose and 0.9% NaCl injection solution</td>
			<td style="width:165px;">Baxter Corp.</td>
			<td style="width:216px;">JB1064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Alphaimager</td>
			<td style="width:165px;">Alpha Innotech</td>
			<td style="width:216px;">N/A</td>
			<td>Gel imaging system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">Anaerobic jar</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>28029-1EA-F</td>
			<td>2.5 L</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD GasPak EZ anaerobe container system sachets</td>
			<td style="width:165px;">BD</td>
			<td>260678</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">BD&#160;Difco Lactobacilli MRS Broth</td>
			<td style="width:165px;">BD</td>
			<td>288130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disruptor Genie</td>
			<td>Scientific Industries Inc.</td>
			<td>SI-D236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Feeding/oral gavage needles for newborn mice and rats&#160;</td>
			<td>Cadence Science Inc.</td>
			<td>01-290-1</td>
			<td>24 Gauge, 1&#8221; needle length, 1.25 mm ball diameter</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">Fructooligosaccharides</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>F8052</td>
			<td>&#160;from chicory</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Garnet bead tubes 0.70 mm&#160;</td>
			<td style="width:165px;">Qiagen</td>
			<td>13123-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">iTaq Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td style="width:165px;">BioRad</td>
			<td style="width:216px;">172-5120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:395px;">Lactobacillus plantarum (Orla-Jensen) Bergey et al.&#160;</td>
			<td style="width:165px;">ATCC</td>
			<td style="width:216px;">BAA-793</td>
			<td>for qPCR standard curve</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Lyophilized probiotic bacteria</td>
			<td style="width:165px;">N/A</td>
			<td style="width:216px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Lysozyme</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>89833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">Maltodextrin</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>419672&#160;</td>
			<td style="width:357px;">dextrose equivalent 4.0-7.0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Mini-Sub Cell GT Cell</td>
			<td style="width:165px;">BioRad</td>
			<td style="width:216px;">1704406</td>
			<td style="width:357px;">Gel chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanodrop 1000&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:216px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">QIAamp Blood and Tissue kit&#160;</td>
			<td style="width:165px;">Qiagen</td>
			<td>51504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">StepOnePlus Real-Time PCR System</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:216px;">4376600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">UltraPure Agarose</td>
			<td style="width:165px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:216px;">16500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure dH2O</td>
			<td style="width:165px;">Invitrogen</td>
			<td>10977023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

probiotic studies in neonatal mice using gavage

نماذج الماوس الكبار قد استخدمت على نطاق واسع فهم الآلية وراء تطور المرض في البشر. ويقتصر تطبيق الدراسات التي أجريت في نماذج الماوس الكبار لأمراض الأطفال حديثي الولادة. إلى فهم أفضل لتطور المرض واستجابات المضيف والأثر الطويل الأجل للتدخلات في الولدان، نموذج الفأر حديثي الولادة المحتمل تتناسب بشكل أفضل. استخدام نماذج الماوس الولدان متفرق يمكن أن يعزى جزئيا إلى الصعوبات التقنية للعمل مع هذه الحيوانات الصغيرة. وضع نموذج الولدان ماوس لتحديد آثار إدارة الكائنات الحية المجهرية في وقت مبكر من الحياة وعلى وجه التحديد تقييم القدرة على إقامة الاستعمار في الأمعاء الماوس حديثي الولادة. على وجه التحديد، لتقييم الاستعمار الكائنات الحية المجهرية في الماوس الأطفال حديثي الولادة، تم تسليم بلنتروم ملبنة (ليرة لبنانية) مباشرة في الجهاز الهضمي الماوس الأطفال حديثي الولادة. وتحقيقا لهذه الغاية، تدار ليرة لبنانية للفئران بالتغذية عن طريق تزقيمية مدتها (IE) داخل المريء. تم تطوير أسلوب استنساخه بدرجة عالية لتوحيد عملية تزقيمية IE تسمح إدارة دقيقة لجرعات بروبيوتيك مع التقليل من الصدمات، جانبا بالغ أهمية نظراً لهشاشة الفئران حديثي الولادة. وتشمل القيود هذه العملية إمكانيات تهيج المريء أو تلف وتطلع إذا جافاجيد بشكل غير صحيح. هذا النهج يمثل تحسنا عن الممارسات الحالية تزقيمية IE إلى المريء القاصي يقلل فرص الطموح. عقب تزقيمية مدتها، كان تتبع الشخصية الاستعمار للكائنات الحية المجهرية استخدام الكمية تفاعل البوليميراز المتسلسل (qPCR) من الحمض النووي المعوية المستخرجة مع الإشعال ليرة لبنانية محددة. إعدادات مختلفة من القمامة وتقنيات إدارة قفص استخدمت لتقييم احتمالات انتشار الاستعمار. تفاصيل البروتوكول تعقيدات تزقيمية الماوس الولدان IE والكمي الاستعمار اللاحقة مع ليرة لبنانية.

تقع على الطابع الفريد لهذا الأسلوب في تكيفها مع تقنية جافاجينج لحجم وهشاشة ماوس الولدان. المقطع السابق وصف الخطوات الهامة في الاضطلاع بإجراء تزقيمية ناجحة على ماوس 2 دول. وضع جدول لتقدير جيد، تم إنشاء منحنى قياسي باستخدام "الحمض النووي ليرة لبنانية" خالصة مع ثلاثة replicates التقنية (الشكل 2). قدمت المنحنى القياسي مجموعة ديناميكية من الكشف عن "الحمض النووي ليرة لبنانية" في كبسولة تفجير باستخدام. وكان النطاق الديناميكي بين 7 و 28 دورات فيها مجموعة من 10 تم الكشف عن1 إلى 107 نسخ الحمض النووي "ليرة لبنانية". ميل المنحنى القياسي مطرد تمثل كفاءة وقابلية لرد فعل.
قد استخدمت إجراءات تزقيمية IE في الفئران الكبار بسهولة نسبية. ومع ذلك، الجهاز الهضمي العلوي بالماوس الولدان هشة والمطلوب تحركات معايرة تزقيمية مدتها إبرة أثناء الإجراء. جافاجيس المتكررة يمكن أن تزيد من فرص تهيج داخل المريء أو الإصابة والفشل أو الرفض بالسد بسبب التعامل. وهكذا، تم اختبار جدولين جافاجينج مختلفة واستعمار الأمعاء كان كمياً باستخدام الحمض النووي من هوموجيناتيس الأمعاء كاملة. وكانت الفئران جافاجيد من دول 2 إلى 8 دول بالكائنات الحية المجهرية التي تديرها كل يوم أو كل يومين (الشكل 3). كل عينة الوارد تكرار التقنية واحدة وكل شرط replicates البيولوجي اثنين على الأقل. الجراء جافاجيد كل يوم مع جرعة 7 كان حوالي 103 نسخ من ليرة لبنانية بينما الجراء جافاجيد كل يومين مع جرعات 4 كان حوالي 105 نسخ. اتساق النتائج بين replicates إضافة رصيد إلى الدقة للأسلوب. وكان هناك المزيد ليرة لبنانية اكتشاف في أمعاء الجراء جافاجيد كل يومين بالمقارنة مع الجراء التي كانت جافاجيد كل يوم. ونظرا لهذا، التجارب اللاحقة أقيمت مع تزقيمية جدول كل يوم كما أنه يقلل أيضا من الضغط الجراء.
من المهم تجنب القمامة داخل الكائنات الحية المجهرية عبر التلوث عند العمل مع البروبيوتيك. ويتوقع ميكروبيومي ليتيرماتيس أن مماثلة كما أنها تشترك في نفس الأم وتداخل البيئة. وهذا يثبت مشكلة بالنسبة للدراسات بروبيوتيك لو لم تكن موجودة داخل القمامة نفس ظروف العلاج ومراقبة الكائن الكائنات الحية المجهرية لديه القدرة على أن تصبح جزءا من الحجمية ("الاستعمار نشر'). لتحديد إذا كان الكائنات الحية المجهرية سوف تلوث واستعمار ليتيرماتيس غير المعالجة، كان نصف القمامة جافاجيد أعلاه وجمعت الأمعاء ل qPCR. وأظهر تحليل qPCR المعوية من الفئران 10 دول التضخيم المتوقع من "الحمض النووي ليرة لبنانية" في الفئران جافاجيد ولكن أيضا، بدرجة أقل في ليتيرماتيس غير جافاجيد (الشكل 4). أظهرت أمعاء الفئران دول نفسه من قفص دون علاج لا التضخيم أو التضخيم الحد الأدنى في دورات أكبر من 32. وهذا دليلاً للتقاسم الطائفي ميكروبيومي داخل القمامة في قفص. وهكذا، لتجارب مع البروبيوتيك المجموعات المعاملة يجب أن تكون مفصولة أقفاص لعنصر التحكم للتقلبات المناخية من خلال الصليب التلوث. يمكن اعتبار استخدام السدود الحاضنة إذا كانت تجربة إعداد إطار إعداد القمامة، ولكن آثار الخلط مثل تضاؤل الرعاية من السد الحاضنة والرفض ينبغي تقييمها والأمثل ل. عند الفئران جافاجيد حتى 8 دول وتركت دون علاج لمدة ستة أيام وكان تحليل الحمض النووي المعوية في 14 دول، تم العثور على حوالي 10 نسخ من ليرة لبنانية (الشكل 5). وهكذا، تم العثور على استعمار ليرة لبنانية أن تكون عابرة وتناقص السكان يمكن اكتشافها على مر الزمن.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig1.jpg"> الشكل 1 . قياس طول بين عملية الرهابه (نهاية القص السفلي) والأنف جعل الحد الأقصى الإدراج مناسبة للابرة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig2.jpg"> الشكل 2 . المنحنى المعياري المنشأة باستخدام كبسولة تفجير ليرة لبنانية و ATCC ليرة لبنانية الحمض النووي- مسلسل إضعاف "الحمض النووي ATCC ليرة لبنانية" صدر بإنشاء مجموعة ديناميكية قابلة للكشف للإشعال المستخدمة في الدراسة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig3.jpg"> الشكل 3 . LP تضخيم الحمض النووي المعوية من الجراء 10 دول تعامل بين دول 2 و 8 دول في جافاجيس المجدولة يوميا (7 جرعات) وكل يوم (4 جرعات). جافاجينج كل يوم أظهر LP المعوية أعلى بالمقارنة مع جافاجينج كل يوم. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig4.jpg"> الشكل 4 . علاج LP تضخيم الحمض النووي المعوية من 10 دول الجراء مع 2 2 وغير المعالجة في القمامة من الجراء 4. كان تزقيمية مدتها بين دول 2 و 8 دول في جافاجيس المجدولة يوميا (7 جرعات). بروبيوتيك اثنين تعامل الجراء إظهار الشخصية التضخيم المتوقع. إظهار الجراء غير المعالجة التضخيم متغير لليرة لبنانية تشير إلى تقاسم الطائفي في الحي بروبيوتيك داخل القمامة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig5.jpg"> الشكل 5 . LP تضخيم الحمض النووي المعوية من 14 دول الجراء تعامل بين دول 2 و 8 دول في جافاجيس المجدولة يوميا (7 جرعات) وكل يوم (4 جرعات). قطرات تحميل ليرة لبنانية أدناه تشير إلى تطهير دورة 28 ليرة لبنانية على مدى 6 أيام بعد آخر بروبيوتيك تزقيمية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>الخطوة</td>
			<td>درجة الحرارة</td>
			<td>الوقت</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>50 درجة مئوية</td>
			<td>2 دقيقة</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>95 درجة مئوية</td>
			<td>3 دقائق</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>95 درجة مئوية</td>
			<td>30 ثانية</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>58 درجة مئوية</td>
			<td>30 ثانية</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>72 درجة مئوية</td>
			<td>30 ثانية</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1-ظروف التضخيم qPCR. درجة الحرارة وعدد من شروط دورة لتفاعل PCR.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>الهدف</td>
			<td>منطقة فاصلة إينتيرجينيك 16S-23S</td>
		</tr>
<tr>
<td>حجم جزء المتوقعة</td>
			<td>144 bp</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tm التمهيدي</td>
			<td>58˚C</td>
		</tr>
<tr>
<td>التمهيدي إلى الأمام (FP)</td>
			<td>Lpn-1: المنسوجات والملابس تج TCC لجنة التنسيق الإدارية TTT كبار المستشارين التقنيين AGG صرفة</td>
		</tr>
<tr>
<td>عكس التمهيدي (RP)</td>
			<td>Lpn-2: القط TTT وظفته TGT TCT تأت جا AAA ATA</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 2. تفاصيل المكونات لرد فعل qPCR. التفاصيل في كبسولة تفجير، انلينغ درجة الحرارة، وحجم جزء المتوقعة في تفاعل PCR.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>تركيز</td>
			<td>رد فعل 10 ميليلتر</td>
			<td>رد 20 ميليلتر</td>
		</tr>
<tr>
<td>قالب الحمض النووي</td>
			<td>200 جزء من الغرام/ميليلتر</td>
			<td>1 ميليلتر</td>
			<td>1 ميليلتر</td>
		</tr>
<tr>
<td>سيبر ماستر ميكس</td>
			<td>-</td>
			<td>5 ميليلتر</td>
			<td>10 ميليلتر</td>
		</tr>
<tr>
<td>تنظيم الأسرة</td>
			<td>10 ميكرومتر</td>
			<td>ميليلتر 0.3</td>
			<td>ميليلتر 0.6</td>
		</tr>
<tr>
<td>البرنامج العادي</td>
			<td>10 ميكرومتر</td>
			<td>ميليلتر 0.3</td>
			<td>ميليلتر 0.6</td>
		</tr>
<tr>
<td>dH2س</td>
			<td>-</td>
			<td>3.4 ميليلتر</td>
			<td>ميليلتر 8.8</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 3. كل رد فعل كميات وتركيزات. تركز الكواشف ووحدات التخزين لردود الفعل.

Watch this Scientific Journal Video about Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage at JoVE.com

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

تفاصيل هذه الدراسة العملية جافاجينج كميات محددة من البروبيوتيك للفئران حديثي الولادة. الإعداد التجريبية هو الأمثل لتشمل ولكن لا تقتصر على الكائنات الحية المجهرية الجرعات، أساليب الإدارة، والتقدير الكمي للبكتيريا في الأمعاء.

دراسات الكائنات الحية المجهرية في الفئران حديثي الولادة باستخدام تزقيمية

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...

دراسات بروبيوتيك, في الفئران حديثي الولادة باستخدام gavage. مقدمة, هذا البروتوكول الفيديو سوف تفاصيل الإعداد والإجراءات للبروبيوتيك gavaging إلى ماوس حديثي الولادة, في يوم من الحياة اثنين. كما يتم تفصيل مجموعة الأمعاء المعقمة ، لتحليل الميكروبيوم المعوي ، في هذا البروتوكول.وترد بعض النتائج التمثيلية في هذا البروتوكول أيضاً، لإدخال بعض أنواع البيانات التي يمكن استخلاصها من اتباع هذا الإجراء. داخل المريء gavage من الفأر الوليدي، يوم من الحياة اثنين. وضع قفص السد في نفس غطاء محرك السيارة حيث يتم وضع، والأقفاص التجريبية على وسادة التدفئة، يتم تعيين وسادة التدفئة إلى مستوى متوسط، وهو ما يقرب من 38 درجة مئوية.إزالة بعض تعشيش التربة من القفص المنزلي، فرك التعشيش مع أيدي قفاز لنقل الروائح، من المواد التعشيش على القفاز. هذا يقلل من نقل الروائح الأجنبية ، على الجرو عند التعامل معها. وهذا بدوره يقلل من خطر، من التخلي أو أكل لحوم البشر، من قبل السد بسبب الروائح الأجنبية.عندما يتم إرجاع الجراء إلى القفص المنزلي، بعد الإجراء. إنشاء عش عقد مخروطي الشكل، ووضعها في القفص التجريبي الجديد والمعقيم، الذي تم تسخينه مسبقا. نقل جميع الجراء من قفص المنزل، إلى القفص التجريبي.نقل الجراء في التعشيش المخروطية، في القفص التجريبي. إزالة قفص السد ووضعها، بعيدا عن منطقة القفاف. وهذا يقلل من الظروف المجهدة للسد، من خلال منع السد من سماع الجرو، والقيام بهذا الإجراء.افتح عبوة الحقنة لسهولة الوصول إليها. إزالة لصناعة السيارات قعقعة تغذية إبرة، بطريقة معقمة، وإرفاقه إلى رئيس الحقنة. يتم غسل الإبرة مع 70٪ الإيثانول، والماء، قبل autoclaving.وتستخدم مجموعات مختلفة من إبر التغذية، بين مجموعات العلاج والسيطرة، لتجنب التلوث عبر. رسم محلول صبغ بروبيوتيك في الحقنة، عكس ونفض الغبار مع الإصبع لإزالة فقاعات، ومساحة فارغة في حجم داخل الحقنة. سحب مرة أخرى على المكبس لمسح السائل، من الإبر الفضاء الميت، ومن ثم الاكتئاب المكبس، لطرد فقاعات الهواء والهواء، وهذا أمر مهم لضمان، أن لا فقاعات الهواء هي gavaged، في الحيوان.ضبط وحدة التخزين المطلوبة في حقنة، ليوم واحد من الحياة اثنين من الماوس، لا ينبغي أن يكون 30 ميكروليتر أكثر من gavaged. علامة سوداء أنّ أنت رأيت على الإبرة, يشير الطول قصوى, أنّ الإبرة يستطيع كنت أدخلت داخل الفأرة. يتم الحصول على هذا الطول عن طريق قياس خارجيا، وطول بين الخطم وعملية xiphoid.ضع الحقنة على سطح معقمة ، وأزل الجرو ليتم نقوشه من القفص التجريبي ، ولاحظ العلامات الصحية. وتشمل هذه العلامات الصحية، والتنفس المنتظم والتلوين الوردي للجلد. وضع الجرو على ورقة ملاحظ العقيمة، على وسادة التدفئة.تليين السطح الخارجي لإبرة التغذية، وذلك باستخدام المذيبات المستخدمة في حل بروبيوتيك. هنا هو ماء ديكستروز، وهذا مرافق دخول سلس من الإبرة، في المريء من الحيوان. Scruff الجرو من الجلد على الرقبة، وذلك باستخدام الإبهام وإصبع السبابة.فهم حقنة في يدك المهيمنة، في موقف يسمح لك لإدراج الإبرة، والاكتئاب المكبس دون ضبط أصابعك. أدخل لمبة إبرة التغذية بزاوية 45 درجة، حتى تصل إلى الجزء الخلفي من الفم. قم بمحور يدك مع الإبرة بعيدا عنك، في حين عقد لمبة من الإبرة في مكان، مرة واحدة الإبرة هو عادي مع الجذع، وسوف تبدأ في الانزلاق.تأكد من عدم وجود ضغط إضافي على الحقنة ، لتحفيز الحركة. عملية البلع ستكون بطيئة، والصبر هو المفتاح. كما يحصل على الجرو كبار السن ابتلاع الإبرة، وسوف تصبح أسرع وأسهل.وقد تم وضع علامة مسبقة لإبرة التغذية، لمنع لمبة من دخول المعدة. بمجرد وضع علامات الاقتراب من خطم, اعتقال حركة الإبرة, وتسليم ببطء الحل بروبيوتيك. بمجرد الانتهاء من التسليم، وإزالة الإبرة ببطء.وضع الماوس على وسادة التدفئة ومراقبة للانتعاش. حل منعكس يلهث وارتفاع معدل ضربات القلب ، والتلوين الوردي صحية يظهر ، وعدم حل منعكس لهث بعد 45 ثانية ، يشير إلى فشل gavage والفأر يجب أن يكون القتل الرحيم. يجب أن تكون صبغة الحفلاج مرئية من خلال الجلد الشاحب ، وينبغي أن تكون الصبغة مرئية فقط في المنطقة ، حيث توجد عادة بقعة الحليب.الحبس على الصبغة إلى المعدة, يشير إلى نجاح غافج. إذا تم العثور على الصبغة في تجويف الصدر ، أو أي تجويف آخر غير المعدة ، فيجب أن يكون الماوس قتلًا رحيمًا ، لأنه يشير إلى فشل الخفقان. هناك حاجة إلى الحد الأدنى من الضغط، لscruff يوم من الحياة اثنين من الماوس.علامات التكسير إلى الصعب يمكن أن تشمل، وعدم القدرة على التنفس، لهث كبير، والتمسك اللسان لمدة طويلة. وهناك بعض الاقتراحات لإجراء ال gavaging، بقية الجزء الخلفي من إصبع اليدين scruffing الخاص بك، على راحة اليد عقد الحقنة، وهذا يضمن وضع الجراء مستقرة، أثناء الإجراء والإبرة، لا يتم نقلها داخل الحيوان. خلال gavage، فإن وزن الإبرة، وتسهيل انزلاق، والسماح للإبرة أن يبتلعها الجرو، دون ممارسة أي ضغط خارجي.إعادة الجراء إلى قفص السد، ومتابعة مع رصد وفقا للجدول الزمني الخاص بك. جمع عينات الأمعاء لتحليل الاستعمار. تم القتل الرحيم الحيوان إنسانيا، من خلال الأساليب المعتمدة في بروتوكول رعاية الحيوان واستخدامها.وتصطف الطاولة الجراحية مع حصيرة ماصة معقمة. وقد تم تعقيم الأدوات باستخدام 70 في المائة الإيثانول، والتعقيم فاز الساخنة في 250 درجة مئوية. يتم تطهير الخدمة الخارجية للحيوان، مع 70 نسبة الإيثانول.قطع الجلد الخارجي باستخدام ملقط ومقص، إلى أربعة أرباع، مع أخذ المزيد من الحذر، لا تمزق الصفاق. ثني الجلد إلى الجانب بحيث، يتم كشف الصفاق بشكل جيد. استخدام مختلف، أدوات عقيمة جديدة، لخفض الصفاق مفتوحة، واتخاذ المزيد من الحذر لا لتمزق، والأعضاء الداخلية في هذه العملية.حدد موقع المعدة من الجرو، ومشبك في الاثنيع. باستخدام اثنين من ملقط العقيمة، وتحديد موقع المعدة، وتحديد موقع الطرف الاثني للمعدة. المشبك الحق في تقاطع، من المعدة والاثني.استخدام اثنين من ملقط العقيمة الجديدة لتشغيل الأمعاء، واستخدام قوة واحدة لعقد على الاثنيع، في حين استخدام الآخر لمزق بعيدا أي الأنسجة الضامة، وعقد الأمعاء سليمة. كما كنت كشف، ووضع الأمعاء، على وسادة ماصة معقمة تغطي الحيوان. إذا كنت يحدث لمزق الأمعاء، أثناء عملية كشف، علامة أسفل المنطقة التي مزقت، بحيث اتجاه الأمعاء سليمة.المشبك في نهاية المستقيم، وجعل التخفيضات في كل من المشابك. وضع الأمعاء سليمة، على رقائق الألومنيوم ملحوظ معقمة في الاتجاه الصحيح. وضع علامة على أي أجزاء من الأمعاء، ضرورية لتحليلك اللاحق.يتم استخراج الحمض النووي من هذه الأمعاء، وذلك باستخدام إجراء الاستخراج الأمثل، ويتم تحليل QPCR لتحديد كمي بروبيوتيك. يتم استخراج الحمض النووي من الأمعاء الطازجة، أو يمكن تخزين الأمعاء، في درجة حرارة سالبة 80 درجة مئوية باستخدام مربع الفريزر. نتائج تمثيلية، lactobacillus plantarium، والاستيطان مع gavage كل يوم وكل يومين.لوحظ إشارة ليرة لبنانية أعلى في الأمعاء من الفئران، gavaged كل يومين، بالمقارنة مع الفئران gavaged كل يوم. وهكذا، تم بناء التجارب اللاحقة، وذلك باستخدام gavages كل يومين. الفئران plantarum plantarum، في الإقامة المشتركة مع الفئران ungavaged.لوحظت إشارات متغيرة من LP في الفئران غير المعالجة ، التي كانت في مكان مشترك مع الفئران LP gavaged. انتشار الاستعمار من ليرة لبنانية، هو ممكن مع زملاء القمامة، وبالتالي تم فصل ظروف العلاج، من قبل أقفاص لتجاربنا اللاحقة. الخلاصة، يمكن استخدام هذا الإجراء لتقديم كميات دقيقة من أي سائل للفئران حديثي الولادة.يمكن استقراء أخذ عينات من الأمعاء ، لاستكشاف التغيرات في الميكروبيوم ، من خلال طرق أخرى للتحليل. نطاق هذا الفيديو هو توفير منصة، للباحثين لاستخدام نماذج الماوس حديثي الولادة، لفهم الآليات وراء الآثار التي لوحظت، مع الإدارة المبكرة للبروبيوتيك. شكر خاص لفريق مختبر كولمان، خدمات رعاية الحيوان في جامعة كولومبيا البريطانية، لجعل هذه الدراسة ممكنة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Luciferase به لالتهابات جرثومية في صورة الفئران

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

نضوب وإعادة إعماره الضامة في الفئران

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

نموذج غير الغازية من ممرض للأعصاب<em&gt; الإشريكية القولونية</em&gt; العدوى في الأطفال حديثي الولادة الجرذ

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

تحليل وظائف الخلايا الصاري في فيفو باستخدام 'الصاري خلية طرق في' الفئران

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice

التحول من الخميرة بروبيوتيك وشفائهم من الجهاز الهضمي المناعي الأنسجة بعد بالتزقيم عن طريق الفم في الفئران

Development of recombinant oral therapy would allow for more direct targeting of the mucosal immune system and improve the ability to combat ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

موسع لأخذ العينات من السوائل البطانة المخاطية للتحديد الكمي للمناعة-الوسيط في فيفو مجرى الهواء العلوي في مستويات

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

فيروس الإنفلونزا أ الفيروس دراسات في نموذج ماوس للإصابة

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

وصف الاستجابات ايستب الغلوبولين المناعي تعتمد على الغدة الصعترية، والغدة الصعترية مستقلة في الفئران باستخدام مقايسة الممتز المرتبط بالانزيم

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

الكشف عن مجموعه Hemolymph والتلقيح من المسام البدائية ميتارهيميوم في القراد Microplus Rhipicppus نحو دراسات علم الامراض لافقاريات

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...