Name: probiotic studies in neonatal mice using gavage
Uploaded: 2019-01-27T15:00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage at JoVE.com

Спасибо сотрудникам Фонда уход животных и UBC ветеринаров для подготовки кадров и оказания помощи в мыши работают научно-исследовательском институте до н.э. Детская больница. Благодаря Университета Британской Колумбии и экспериментальной медицины для финансирования исследования.

<ol>
	<li>Reid, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+and+prebiotics+&#8211;+Progress+and+challenges.">Probiotics and prebiotics &#8211; Progress and challenges.</a> International Dairy Journal. 18 (10-11), 969-975 (2008).</li><li>Lin, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+probiotics+reduce+the+incidence+and+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+very+low+birth+weight+infants.">Oral probiotics reduce the incidence and severity of necrotizing enterocolitis in very low birth weight infants.</a> Pediatrics. 115 (1), 1-4 (2005).</li><li>Panigrahi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+synbiotic+trial+to+prevent+sepsis+among+infants+in+rural+India.">A randomized synbiotic trial to prevent sepsis among infants in rural India.</a> Nature. 548 (7668), 407-412 (2017).</li><li>Amenyogbe, N., Kollmann, T. R., Ben-Othman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-Life+Host&#8211;Microbiome+Interphase:+The+Key+Frontier+for+Immune+Development.">Early-Life Host&#8211;Microbiome Interphase: The Key Frontier for Immune Development.</a> Frontiers in Pediatrics. 5, 111 (2017).</li><li>Ofek Shlomai, N., Deshpande, G., Rao, S., Patole, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+for+Preterm+Neonates:+What+Will+It+Take+to+Change+Clinical+Practice?.">Probiotics for Preterm Neonates: What Will It Take to Change Clinical Practice?.</a> Neonatology. 105 (1), 64-70 (2014).</li><li>Elazab, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+administration+in+early+life,+atopy,+and+asthma:+a+meta-analysis+of+clinical+trials.">Probiotic administration in early life, atopy, and asthma: a meta-analysis of clinical trials.</a> Pediatrics. 132 (3), e666-e676 (2013).</li><li>Arrieta, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+infancy+microbial+and+metabolic+alterations+affect+risk+of+childhood+asthma.">Early infancy microbial and metabolic alterations affect risk of childhood asthma.</a> Science Translational Medicine. 7 (307), 307ra152 (2015).</li><li>Arrieta, M. C., Walter, J., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Microbiota-Associated+Mice:+A+Model+with+Challenges.">Human Microbiota-Associated Mice: A Model with Challenges.</a> Cell Host and Microbe. 19 (5), 575-578 (2016).</li><li>Qi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effect+of+BCG+vaccination+and+enriched+environment+promote+neurogenesis+and+spatial+cognition+via+a+shift+in+meningeal+macrophage+M2+polarization.">Combined effect of BCG vaccination and enriched environment promote neurogenesis and spatial cognition via a shift in meningeal macrophage M2 polarization.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 32 (2017).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+BCG+vaccination+of+mice+improves+neurogenesis+and+behavior+in+early+life.">Neonatal BCG vaccination of mice improves neurogenesis and behavior in early life.</a> Brain Research Bulletin. 120, 25-33 (2016).</li><li>Deshmukh, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiota+regulates+neutrophil+homeostasis+and+host+resistance+to+Escherichia+coli+K1+sepsis+in+neonatal+mice.">The microbiota regulates neutrophil homeostasis and host resistance to Escherichia coli K1 sepsis in neonatal mice.</a> Nature Medicine. 20 (5), 524-530 (2014).</li><li>Butchbach, M. E. R., Edwards, J. D., Schussler, K. R., Burghes, A. H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+oral+delivery+of+drug+compounds+to+the+neonatal+SMNDelta7+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy.">A novel method for oral delivery of drug compounds to the neonatal SMNDelta7 mouse model of spinal muscular atrophy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 161 (2), 285-290 (2007).</li><li>Hickey, L., Garland, S. M., Jacobs, S. E., O&#8217;Donnell, C. P. F., Tabrizi, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-colonization+of+infants+with+probiotic+organisms+in+a+neonatal+unit.">Cross-colonization of infants with probiotic organisms in a neonatal unit.</a> Journal of Hospital Infection. 88 (4), 226-229 (2014).</li><li>Costeloe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomised+controlled+trial+of+the+probiotic+Bifidobacterium+breve+BBG-001+in+preterm+babies+to+prevent+sepsis,+necrotising+enterocolitis+and+death:+the+Probiotics+in+Preterm+infantS+(PiPS)+trial.">A randomised controlled trial of the probiotic Bifidobacterium breve BBG-001 in preterm babies to prevent sepsis, necrotising enterocolitis and death: the Probiotics in Preterm infantS (PiPS) trial.</a> Health Technology Assessment. 20 (66), 1-94 (2016).</li><li>Kitajima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+administration+of+Bifidobacterium+breve+to+preterm+infants:+randomised+controlled+trial.">Early administration of Bifidobacterium breve to preterm infants: randomised controlled trial.</a> Archives of Disease In Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 76 (2), F101-F107 (1997).</li><li>Millar, M. R., Bacon, C., Smith, S. L., Walker, V., Hall, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteral+feeding+of+premature+infants+with+Lactobacillus+GG.">Enteral feeding of premature infants with Lactobacillus GG.</a> Archives of Disease In Childhood. 69 ((5 Spec No)), 483-487 (1993).</li><li>Preidis, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+stimulate+enterocyte+migration+and+microbial+diversity+in+the+neonatal+mouse+intestine.">Probiotics stimulate enterocyte migration and microbial diversity in the neonatal mouse intestine.</a> The FASEB Journal. 26 (5), 1960-1969 (2012).</li><li>Kirjavainen, P. V., El-Nezami, H. S., Salminen, S. J., Ahokas, J. T., Wright, P. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+orally+administered+viable+probiotic+and+dairy+lactobacilli+on+mouse+lymphocyte+proliferation.">The effect of orally administered viable probiotic and dairy lactobacilli on mouse lymphocyte proliferation.</a> FEMS Immunology &amp; Medical Microbiology. 26 (2), 131-135 (1999).</li><li>Gill, H. S., Rutherfurd, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viability+and+dose&#8211;response+studies+on+the+effects+of+the+immunoenhancing+lactic+acid+bacterium+Lactobacillus+rhamnosus+in+mice.">Viability and dose&#8211;response studies on the effects of the immunoenhancing lactic acid bacterium Lactobacillus rhamnosus in mice.</a> British Journal of Nutrition. 86 (2), 285-289 (2001).</li><li>Yu, Z., Morrison, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+extraction+of+PCR-quality+community+DNA+from+digesta+and+fecal+samples.">Improved extraction of PCR-quality community DNA from digesta and fecal samples.</a> BioTechniques. 36 (5), 808-812 (2004).</li><li>Holland, J. L., Louie, L., Simor, A. E., Louie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+detection+of+Escherichia+coli+O157:H7+directly+from+stools:+evaluation+of+commercial+extraction+methods+for+purifying+fecal+DNA.">PCR detection of Escherichia coli O157:H7 directly from stools: evaluation of commercial extraction methods for purifying fecal DNA.</a> Journal of Clinical Microbiology. 38 (11), 4108-4113 (2000).</li><li>M&#252;ller, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+powerful+DNA+extraction+method+and+PCR+for+detection+of+microsporidia+in+clinical+stool+specimens.">A powerful DNA extraction method and PCR for detection of microsporidia in clinical stool specimens.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 6 (2), 243-246 (1999).</li><li>Pitcher, D. G., Saunders, N. A., Owen, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+extraction+of+bacterial+genomic+DNA+with+guanidium+thiocyanate.">Rapid extraction of bacterial genomic DNA with guanidium thiocyanate.</a> Letters in Applied Microbiology. 8 (4), 151-156 (1989).</li><li>Bollet, C., Gevaudan, M. J., de Lamballerie, X., Zandotti, C., de Micco, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+the+isolation+of+chromosomal+DNA+from+gram+positive+or+acid-fast+bacteria.">A simple method for the isolation of chromosomal DNA from gram positive or acid-fast bacteria.</a> Nucleic Acids Research. 19 (8), 1955 (1991).</li><li>Thomas, C. M., Versalovic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics-host+communication.">Probiotics-host communication.</a> Gut Microbes. 1 (3), 148-163 (2010).</li><li>Tancredi, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+prevents+infections+in+newborns.">Probiotic prevents infections in newborns.</a> Nature. 548 (7668), 404-405 (2017).</li><li>Bernardo, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+Probiotics+in+the+Prophylaxis+of+Necrotizing+Enterocolitis+in+Preterm+Neonates:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Effectiveness of Probiotics in the Prophylaxis of Necrotizing Enterocolitis in Preterm Neonates: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Jornal de Pediatria. 89 (1), 18-24 (2013).</li><li>Aceti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotics+for+prevention+of+necrotizing+enterocolitis+in+preterm+infants:+systematic+review+and+meta-analysis.">Probiotics for prevention of necrotizing enterocolitis in preterm infants: systematic review and meta-analysis.</a> Italian Journal of Pediatrics. 41 (1), 89 (2015).</li></ol>

Нет конфликта интересов раскрыть.

Процедура кормления IE был разработан для безопасно управлять конкретным дозы пробиотик для новорожденных мышей. Небольшое количество жидкости, доставляются в верхнем желудочно-кишечного тракта, с помощью кормления иглы для предотвращения аспирации при одновременном обеспечении доставки дозировка в конфиденциальном порядке. Кишечник мышей были собраны для колонизации анализа двух и шесть дней после затравки. Процедура для экстракции ДНК была изменена для обеспечения высокодоходных пробиотик грамположительных организма. ПЦР анализ ДНК извлечено два дня пост последние кормления показали относительно высокие колонизации LP в мышей gavaged каждые два дня по сравнению с gavaged мышей каждый день между DOL 2-8. Там был также уменьшение количества LP более шести дней, показаны этот пробиотик быть временной организма в кишечнике мыши. Результаты этих экспериментов создать условия для проведения исследований с высоким строгости в этой возрастной группе.
Соблюдать долгосрочные эффекты пробиотиков в новорожденных мышей, проводилась для новорожденных мышей на дол 2; же время начала указывают на человека суда. Ротоглотки кормления новорожденных мышей ранее описанные в литературе и осуществляется только после DOL 5-812,17 когда риск аспирации ниже благодаря развитой глотания механики. Однако ротоглотки кормления не хорошо подходит для мышей DOL 2 как более высокие темпы аспирации были замечены в экспериментальном исследовании (данные не показаны). Вязкий характер пробиотические и пребиотик раствор добавляется риск аспирации. После процедуры gavaging IE к минимуму риск аспирации в дол 2 мышей обеспечивая требуемый объем непосредственно в верхнем желудочно-кишечного тракта. Успех процедуры сначала была проверена с помощью пищевого красителя, проникнуты пробиотик затравки. Пищевой краситель выступает в качестве маркера, который виден через кожу щенка. Отрицательные эффекты не наблюдались у мышей gavaged с пищевой краситель, и рекомендуется для проверки процедуры gavaging таким образом до начала широкомасштабных экспериментов. Быстрое урегулирование задыхаясь затравки рефлекс видел пост также может использоваться в качестве дополнительного показателя для успешного кормления. Когда указатель мыши помещается на электроодеяло после затравки, задыхаясь рефлекс будет ослабевать и увеличение частоты дыхания будет соблюдаться в течение 20 секунд. Продолжение задыхаясь рефлекс для более чем 30 секунд указывает неудачного принудительного кормления. Успешного кормления зависит также соответствующие вставки кормления иглы с лампой, сидя прямо над отверстием сердца сфинктера желудка. Это может способствовать путем обеспечения того, что маркировка на иглу, измерение длины между мечевидного отростка и кончик морды, не пройти мимо морду мыши во время кормления. Это минимизирует вероятность травмы с мышью. Частота кормления может иметь значительное влияние на результаты эксперимента. Частые gavaging также можно создать больше стресса для щенков и мать из-за постоянного возмущения клетке и гнезда. Наиболее оптимальный график кормления, когда gavages не менее часты и за короткий период времени без потери ожидаемого эффекта в системе. Для обеспечения безопасности и стерильности процедуры затравки иглы должны быть простерилизованы стирки и промежуточное использование автоклавированием. Стиральная строго на извне с помощью скраба и внутрь, заставляя воду через иглу, с помощью шприца перед автоклавированием необходима как любые оставшиеся частицы можно инкрустировать иглы во время автоклавирования и может помешать с процедурой gavaging.
Выше LP колонизации было отмечено в детенышей, которые были gavaged любой другой день, когда по сравнению с щенков gavaged каждый день. Это может быть из-за снижения стресса на щенков gavaged каждый день и потенциально пробиотик, получать больше питательных веществ через сравнительно больше молока, заглатывается этих щенков. Зависимость доза пробиотик лечения ранее изучалось в мыши модели18,19 и таким образом администрация правильную дозировку имеет важное значение. Пробиотик раствор, приготовленный покрытием перед каждой затравки получить точное количество Карибский управляемый. Если организм пробиотик анаэробных, важно увидеть, если есть разница в кое когда культивированный высокоусвояемого или анаэробно. Так как LP факультативно анаэробных, был культурный, с использованием обоих методов и было отмечено никакой разницы в ГРУ.
Был проведен анализ нагрузки пост затравки кишечных LP с помощью ПЦР и высокое качество образцов ДНК. Чтобы свести к минимуму загрязнение LP ДНК между лечения и управления группами, различные кормления иглы, шкафы биологической безопасности и хирургическое оборудование были использованы для обеспечения высокого качества образцов. Точное измерение пробиотик в кишечнике требуется оптимизированный метод экстракции ДНК. Наиболее эффективные методы для извлечения ДНК из стула включает в себя несколько шарик, победив шаги20,21,22. Этот метод был принят для извлечения с использованием бисера бьющееся кишечных бактерий и наблюдается снижение представительства (< 102 копии восстановить) из LP в целом кишечника экстракции ДНК. Как LP грамм позитивные организма с значительное количество мукопептида клеточной стенки, протокол был оптимизирован с шагом распада мукопептида, используя лизоцима23,24 добавляется ферментативные литического буфера. Это представление LP в образце же кишечных увеличился более чем два раза. Лизоцим лечения обеспечивает распада наружный слой, а шарик, победив шаг облегчает lysis организма. Оптимизации количество ткани, тип гранат шарик и продолжительность нарушения с использованием бисера необходим для получения оптимального ДНК продукции для проведения ПЦР-анализа.
Недавние исследования25,26,27,28свидетельствует положительное влияние пробиотиков, как профилактика или лечение в досрочном и срок новорожденных. Создание надлежащего новорожденных мыши модели для пробиотиков является оправданным для распаковки защитный эффект пробиотики. Этот протокол, изложенные здесь представляет руководства для исследователей не знакомы с работой неонатальной мыши с использованием пробиотиков. Несмотря на проблемы с грызун микробиоты изучая человеческое здоровье и болезни этот метод может быть продлен для исследований, направленных на понимание изменений микрофлора благодаря пробиотики. Эта модель также предоставляет платформу для изучения взаимодействия хост микробов и иммунных реакций в течение различных этапов развития.

У грудных детей раннего пробиотик экспозиции была связана с иммуномодулирующих эффектов, ведущих к сокращению распространенности заболеваний как некротизирующего энтероколита, атопического дерматита и сепсис1,2,3, 4 , 5. Однако, механизм за этот ответ иммуномодулирующих является сложной задачей для изучения с учетом ограничения для выборки в новорожденных человеческих испытаний (т.е. последовательных крови ничьих и биопсии). Новорожденных мыши модели может помочь изучить механизм действий участвующих в неонатальной иммунной регуляции, связанных с использованием пробиотических и изменения в кишечную микрофлору. К сожалению большинство моделей мыши для пробиотики основном сосредоточились на взрослых мышей; Однако влияние пробиотиков может быть высоким в начале жизни, предполагая, что модели для этой возрастной группы будет полезным3,6. Кроме того неонатальной мыши модели лучше подходят для изучения заболеваний и мероприятия, предназначенные для приложения в начале жизни человеческих младенцев, как ожидается, что они более тесно имитировать развивающихся микробов и иммунной системы7,8 ,9,10. Цель заключалась в том, чтобы изучение масштабов и характера пробиотик колонизации новорожденных мышей с акцентом на механистические взаимодействия между основным приложением и его микрофлора. Подходящего описания новорожденных моделей не были найдены в литературе, и таким образом было рассмотреть необходимость разработки надежных и стандартизированных метода.
Установленные методы орального применения различных соединений для новорожденных мышей относятся материнской передача желаемых соединений через молоко, лечении источник воды для беременных плотин11 или с помощью кормления иглы для облегчения управления желаемой соединений в ротоглотки12. Эти методы полезны для экспериментов, которые не имеют точного дозирования потребности и где лечение легко попадает получателя мышью. Пробиотики являются часто осуществляется в сочетании с пребиотик, таких как galactooligosaccharide и fructooligosaccharide (ФСУ), которые служат в качестве источника питания для пробиотических бактерий; Эти добавки соединения делают решение вязкой и сложно управлять через вышеупомянутой методологии. Разработка метода обеспечивать точное количество пробиотиков и пребиотиков для новорожденных мышей, начиная уже в первый день жизни (DOL) было необходимо. В процессе разработки затравки технику, возможность распространения колонизации (как это наблюдается в других исследованиях пробиотик между лечения и управления оружия13,14,,1516) был протестирован и оценивали относительное обилие колонизированных Lactobacillus plantarum (LP) в кишечнике щенков с различными затравки расписания. Пробиотик подготовки, используемых в экспериментах состояла из 109 образуя колонии единиц (CFU) за затравки LP (ATCC-202195 штамм), смешанного с ПКС (пребиотик) и мальтодекстрин (наполнитель), как описано в последние человека суда3. Пробиотик доставки была выполнена с использованием IE затравки, и этот процесс подробно описан в протоколе ниже. Профиль колонизации пробиотика оценивали с помощью реального времени амплификации ДНК, извлеченные из всего кишечника с помощью конкретных грунтовки LP.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1132px;" width="1132">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">1 mL tuberculin syringe with slip tip&#160;</td>
			<td style="width:165px;">BD</td>
			<td style="width:216px;">309659</td>
			<td style="width:357px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">1.2% Triton X-100&#160;</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">2 mM sodium EDTA&#160;&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">20 mM Tris&#183;Cl&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15568025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">5% dextrose and 0.9% NaCl injection solution</td>
			<td style="width:165px;">Baxter Corp.</td>
			<td style="width:216px;">JB1064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Alphaimager</td>
			<td style="width:165px;">Alpha Innotech</td>
			<td style="width:216px;">N/A</td>
			<td>Gel imaging system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">Anaerobic jar</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>28029-1EA-F</td>
			<td>2.5 L</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD GasPak EZ anaerobe container system sachets</td>
			<td style="width:165px;">BD</td>
			<td>260678</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">BD&#160;Difco Lactobacilli MRS Broth</td>
			<td style="width:165px;">BD</td>
			<td>288130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disruptor Genie</td>
			<td>Scientific Industries Inc.</td>
			<td>SI-D236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Feeding/oral gavage needles for newborn mice and rats&#160;</td>
			<td>Cadence Science Inc.</td>
			<td>01-290-1</td>
			<td>24 Gauge, 1&#8221; needle length, 1.25 mm ball diameter</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">Fructooligosaccharides</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>F8052</td>
			<td>&#160;from chicory</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Garnet bead tubes 0.70 mm&#160;</td>
			<td style="width:165px;">Qiagen</td>
			<td>13123-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">iTaq Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td style="width:165px;">BioRad</td>
			<td style="width:216px;">172-5120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:395px;">Lactobacillus plantarum (Orla-Jensen) Bergey et al.&#160;</td>
			<td style="width:165px;">ATCC</td>
			<td style="width:216px;">BAA-793</td>
			<td>for qPCR standard curve</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Lyophilized probiotic bacteria</td>
			<td style="width:165px;">N/A</td>
			<td style="width:216px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Lysozyme</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>89833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:395px;">Maltodextrin</td>
			<td style="width:165px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>419672&#160;</td>
			<td style="width:357px;">dextrose equivalent 4.0-7.0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Mini-Sub Cell GT Cell</td>
			<td style="width:165px;">BioRad</td>
			<td style="width:216px;">1704406</td>
			<td style="width:357px;">Gel chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanodrop 1000&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:216px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">QIAamp Blood and Tissue kit&#160;</td>
			<td style="width:165px;">Qiagen</td>
			<td>51504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">StepOnePlus Real-Time PCR System</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:216px;">4376600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">UltraPure Agarose</td>
			<td style="width:165px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:216px;">16500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure dH2O</td>
			<td style="width:165px;">Invitrogen</td>
			<td>10977023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

probiotic studies in neonatal mice using gavage

Взрослый мыши модели широко используются понять механизм позади прогрессирования заболевания в организме человека. Применимость исследований, проведенных в взрослых мыши модели неонатальных заболеваний является ограниченной. Чтобы лучше понять прогрессирования заболевания, принимающей ответов и долгосрочное воздействие мероприятий у новорожденных, неонатальной мыши модель вероятно является лучше подходят. Разреженный использования моделей новорожденных мышей может частично объясняться на технические трудности работы с этих мелких животных. Определить эффекты пробиотических администрации в начале жизни и непосредственно оценить способность создать колонизации кишечного тракта новорожденных мышь была разработана новорожденных мыши модель. В частности оценить пробиотик колонизации у новорожденных мышей, Lactobacillus plantarum (LP) была осуществлена непосредственно в неонатальной мыши желудочно-кишечного тракта. С этой целью LP в ведении мышей кормления через внутри пищевода затравки (IE). Весьма воспроизводимый метод был разработан для стандартизации процесса затравки IE, которая позволяет точную отправления пробиотик дозировки при сведении к минимуму травмы, аспект особенно важно, учитывая хрупкость новорожденных мышей. Ограничения этого процесса включают возможности раздражение пищевода или повреждения и аспирации, если gavaged неправильно. Этот подход представляет улучшения текущей практики, потому что IE затравки в дистальной части esophagus уменьшает шансы аспирации. После кормления колонизации профиль пробиотика было проследить с помощью количественных полимеразной цепной реакции (ПЦР) ДНК кишечной с LP конкретных грунтовки. Кейдж методы управления и настройки различных урны были использованы для оценки возможностей для колонизации распространения. Протокол подробно тонкостях кормления новорожденных мыши IE и последующей колонизации количественной оценки с LP.

Уникальность данного метода лежит в его адаптация метода gavaging к размеру и бренности новорожденных мыши. В предыдущем разделе описаны важные шаги в осуществлении успешной затравки процедура DOL 2 мыши. Установить хороший количественной оценки шкалу, калибровочной кривой был сгенерирован с помощью чистого LP ДНК с трех технических реплицирует (рис. 2). Калибровочной кривой предоставляет динамический диапазон обнаружения LP ДНК с помощью грунтовки. Динамический диапазон был между 7 и 28 циклов, где ряд 101 до 10 копий7 LP ДНК была обнаружена. Устойчивый наклон кривой стандартного представлял эффективность и масштабируемость реакции.
Процедура кормления IE был использован в взрослых мышей с относительной легкостью. Однако верхних отделов пищеварительного тракта новорожденных мыши является хрупким и требуется калиброванные движения затравки иглы во время процедуры. Неоднократно gavages может увеличить шансы интра пищевода раздражение, травмы и сбоя или отказа, плотины из-за обработки. Таким образом два разных gavaging расписания были протестированы и колонизации кишечника был количественно с помощью ДНК от всего кишечника гомогенатах. Мышей были gavaged от DOL 2 через 8 дол с пробиотик, каждый день или раз в два дня (рис. 3). Каждый пример содержит один технический реплицировать, и каждое состояние имел по крайней мере два биологических реплицирует. Щенки gavaged каждый день с 7 доз были около 103 копии LP, тогда как щенков gavaged каждые два дня с 4 дозы около 105 копий. Согласованность результатов между реплицирует добавить кредит с точностью техники. Там было больше LP, обнаруженных в кишечнике щенков gavaged каждые два дня по сравнению с щенков, которые были gavaged каждый день. Учитывая это последующие эксперименты были созданы с графиком затравки каждый день как это также уменьшает стресс для щенков.
Важно избежать интра помета пробиотик перекрестного загрязнения при работе с пробиотиками. Ожидается, что микрофлора Однопометники быть похожими, поскольку они разделяют же мать и вложенности окружающей среды. Это доказывает проблемой для исследования пробиотик, если условия лечения и контроля присутствовали в пределах одного помета, как пробиотик организм имеет потенциал, чтобы стать частью микробиоты («колонизация распространения '). Чтобы определить, если пробиотических будет загрязнять и колонизировать необработанных однопометники, половина помет был gavaged как выше и кишечника были собраны для ПЦР. Кишечные ПЦР анализ DOL 10 мышей показало ожидается усиление LP ДНК в gavaged мышей, но и, в меньшей степени в не gavaged однопометники (рис. 4). Кишечника же DOL мышей от необработанной Кейдж показал без усиления или минимального усиления циклов больше 32. Это обеспечило доказательств для коммунальных обмен микрофлора в помете в клетке. Таким образом для экспериментов с пробиотиками группы лечения должны быть разделены клетки для контроля колебаний путем перекрестного загрязнения. Использование приемных плотин можно считать если эксперимент должен быть создан в рамках параметра помет, но смешанные эффекты как уменьшение ухода от плотины приемных и отказа должны оцениваться и оптимизирован для. Когда мышей gavaged до DOL 8 остались необработанной шесть дней и кишечные ДНК была проанализирована на 14 дол, примерно 10 копий LP были найдены (рис. 5). Таким образом колонизация LP было установлено быть временным и обнаружению население уменьшилось со временем.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig1.jpg"> Рисунок 1 . Измерение длины между мечевидного отростка (нижний конец грудины) и морда сделать максимум вставки маркировки для иглы. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig2.jpg"> Рисунок 2 . Калибровочной кривой с помощью LP грунты и ATCC LP ДНК. Серийный разрежения ATCC LP ДНК было принято создать динамический диапазон обнаруживаемыми для грунтовки, используемые в исследовании. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig3.jpg"> Рисунок 3 . LP усиления кишечной ДНК от DOL 10 щенков лечение между DOL 2 и 8 дол в запланированных gavages каждый день (7 доз) и каждый день (4 дозы). Gavaging каждый день показали выше кишечных LP по сравнению с gavaging каждый день. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig4.jpg"> Рисунок 4 . В помете 4 щенков не лечить LP усиления кишечной ДНК от DOL 10 щенков с 2 лечение и 2. Калийную был между DOL 2 и 8 дол в запланированных gavages каждый день (7 доз). Два пробиотик лечение шоу щенков ожидается усиление профиль. Неочищенные щенков шоу переменное усиление LP указанием коммунальных обмен пробиотик организма в помете. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59074/59074fig5.jpg"> Рисунок 5 . LP усиления кишечной ДНК от DOL 14 щенков лечение между DOL 2 и 8 дол в запланированных gavages каждый день (7 доз) и каждый день (4 дозы). LP нагрузка падает ниже цикла 28 указанием Распродажа LP в течение 6 дней пост последние пробиотик затравки. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59074/59074fig5large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Шаг</td>
			<td>Температура</td>
			<td>Время</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>50 ° C</td>
			<td>2 минуты</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>95 ° C</td>
			<td>3 минуты</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>95 ° C</td>
			<td>30 секунд</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>58 ° C</td>
			<td>30 секунд</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>72 ° C</td>
			<td>30 секунд</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1. ПЦР-амплификации условий. Температура и количество условий, цикла для реакции PCR.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Цель</td>
			<td>Регион intergenic прокладку 16S-23S</td>
		</tr>
<tr>
<td>Размер ожидаемых фрагментов</td>
			<td>144 bp</td>
		</tr>
<tr>
<td>Грунтовка ТМ</td>
			<td>58˚C</td>
		</tr>
<tr>
<td>Грунтовка вперед (FP)</td>
			<td>LPN-1: TGG ATC АКК TCC TTT CTA AGG AAT</td>
		</tr>
<tr>
<td>Обратный грунт (RP)</td>
			<td>LPN-2: TGT TCT КЭУ TTT CAT ТАТ ГАА AAA ATA</td>
		</tr>
</tbody></table>В таблице 2. Подробная информация о компоненты реакции ПЦР. Подробная информация о грунтовки, их отжига температура и размер ожидаемых фрагментов в реакции PCR.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Концентрация</td>
			<td>10 мкл реакция</td>
			<td>20 мкл реакция</td>
		</tr>
<tr>
<td>Шаблон ДНК</td>
			<td>Промаркированные pg</td>
			<td>1 МКЛ</td>
			<td>1 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td>SYBR Мастер микс</td>
			<td>-</td>
			<td>5 МКЛ</td>
			<td>10 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td>FP</td>
			<td>10 МКМ</td>
			<td>0,3 МКЛ</td>
			<td>0,6 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td>RP</td>
			<td>10 МКМ</td>
			<td>0,3 МКЛ</td>
			<td>0,6 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td>dH2O</td>
			<td>-</td>
			<td>3.4 МКЛ</td>
			<td>8.8 МКЛ</td>
		</tr>
</tbody></table>В таблице 3. В реакционных объемов и концентрации. Концентрация реагентов и томов для реакций.

Watch this Scientific Journal Video about Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage at JoVE.com

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

Это исследование подробности процесса gavaging точное количество пробиотиков для новорожденных мышей. Экспериментальная установка был оптимизирован для включают, но не ограничивается пробиотик, дозирования, методы управления и количественная оценка бактерий в кишечнике.

Пробиотик исследования новорожденных мышей, используя затравки

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...

Пробиотические исследования у неонатальных мышей с использованием гаважа. Введение, этот видео протокол будет подробно установки и процедуры для gavaging пробиотики для неонатальной мыши, на его день жизни два. В этом протоколе также подробно описана стерильная коллекция кишечника для анализа микробиома кишечника.Некоторые репрезентативные результаты, также включенные в этот протокол, вводят некоторые типы данных, которые могут быть получены из следовать этой процедуре. Внутриэзофагеальный гаваг неонатальной мыши, день жизни два. Поместите клетку плотины в тот же капот, где экспериментальные клетки помещаются на грелку, грелка установлена на среднем уровне, который составляет около 38 градусов по Цельсию.Удалите почву гнездования из домашней клетки, руб гнездования с перчатками руки для передачи ароматов, гнездования материала на перчатку. Это уменьшает передачу иностранных ароматов, на щенка при работе. Это, в свою очередь, снижает риск оставления или каннибализации плотины из-за иностранных ароматов.Когда щенков возвращают в домашнюю клетку, после процедуры. Создайте коническое гнездо и поместите его в новую и стерильную экспериментальную клетку, которая была предварительно разогрета. Перенесите всех щенков из домашней клетки в экспериментальную клетку.Перемести щенков в коническое гнездование, в экспериментальную клетку. Удалите клетку плотины и поместите ее подальше от области гаваги. Это уменьшает стрессовые условия для плотины, предотвращая плотину от слушания щенка, делая процедуру.Откройте упаковку шприца для легкого доступа. Удалите автоматическую канаву gavage кормления иглы, в стерильной манере, и прикрепить его к голове шприца. Иголку промывают 70%этанолом и водой перед автоклавом.Различные наборы игл для кормления используются между лечебными и контрольных группами, чтобы избежать перекрестного загрязнения. Нарисуйте раствор пробиотических красителей в шприц, инвертировать и щелкнуть пальцем, чтобы удалить пузырьки, и пустое пространство в объеме внутри шприца. Оттянуть на поршень, чтобы очистить жидкость, от игл мертвого пространства, а затем угнетать поршень, чтобы изгнать пузырьки воздуха и воздуха, это важно для обеспечения того, чтобы пузырьки воздуха не gavaged, в животное.Отрегулируйте нужный объем в шприце, за день жизни две мыши, не более 30 микролитров должны быть gavaged. Черная маркировка, которую вы видите на игле, указывает на максимальную длину, что игла может быть вставлена в мышь. Эта длина получена путем внешнего измерения, длина между мордой и процессом xiphoid.Поместите шприц вниз на стерильной поверхности, удалить щенка, чтобы быть gavaged из экспериментальной клетке, и наблюдать за признаками здоровья. Эти признаки здоровья включают, регулярное дыхание и розовая окраска кожи. Поместите щенка на стерильный наблюдательный лист, на грелку.Смазка внешней поверхности кормления иглы, используя растворитель, используемый для растворения пробиотика. Здесь это декстроза воды, это средства плавного входа иглы, в пищевод животного. Scruff щенка по коже на шее, используя большой палец и указательный палец.Возьмите шприц в доминирующей руке, в положении, которое позволяет вставить иглу, и угнетать поршень, не регулируя пальцы. Вставьте луковицу кормления иглы под углом 45 градусов, пока она не достигнет задней части рта. Pivot руку с иглой от вас, держа луковицу иглы на месте, как только игла равнине с туловищем, он начнет скользить.Убедитесь, что не дополнительное давление применяется к шприцу, чтобы стимулировать движение. Процесс глотания будет медленным, и терпение является ключевым фактором. Как щенок становится старше глотания иглы, станет быстрее и проще.Кормление иглы была предварительно отмечена, чтобы предотвратить луковицу от входа в желудок. Как только маркировка приближается морда, остановить движение иглы, и медленно доставить пробиотический раствор. Как только доставка завершена, удалите иглу медленно.Поместите мышь на грелку и наблюдайте за восстановлением. А задыхаясь рефлекс разрешает и пульс поднимается, здоровая розовая окраска появляется, и нерешенные задыхаясь рефлекс после 45 секунд, указывает на не удалось gavage и мышь должна быть усыпана. Гаваж краситель должен быть виден через бледную кожу, краситель должен быть виден только в области, где молоко пятно обычно находится.Заключение красителя в желудок, указывает на успешный gavage. Если краситель находится в грудной полости, или любой другой полости, чем желудок, мышь должна быть усыпана, так как это указывает на неудавшийся гаваг. Минимальное давление необходимо, чтобы потертости в день жизни две мыши.Признаки scruffing трудно может включать в себя, неспособность дышать, значительные задыхаясь, и торчащие язык в течение длительного времени. Несколько предложений для gavaging процедуры, отдых задней части пальца scruffing руки, на ладони, держа шприц, это гарантирует, что положение щенков стабильна, во время процедуры и иглы, не перемещается внутри животного. Во время gavage, вес иглы, облегчит сползание, позволит игле быть проглоченным щенком, без приложить любое внешнее давление.Верните щенков в клетку плотины, и следить за мониторингом в соответствии с вашим графиком. Сбор кишечных образцов для анализа колонизации. Это животное было гуманно усыпано методами, утвержденными в Протоколе по уходу за животными и использованию.Хирургический стол облицован стерильным абсорбентным ковриком. Инструменты были стерилизованы с использованием 70 процентов этанола, и горячей стерилизации бить при 250 градусов по Цельсию. Внешняя служба животного, дезинфицируется 70 процентов этанола.Разрежьте внешнюю кожу с помощью миппов и ножниц, на четыре квадранта, принимая при этом дополнительную осторожность, чтобы не рваные брюшной полых. Tuck кожи в сторону так, что, брюшной полых хорошо подвергается. Используйте различные, новые стерильные инструменты, чтобы сократить брюшной открытый, и принять дополнительную осторожность, чтобы не рваные, внутренние органы в этом процессе.Найдите желудок щенка, и зажим на двенадцатиперстной части. Используя два стерильных типса, найдите желудок и найдите двенадцатиперстной части желудка. Зажим прямо на перекрестке, желудка и двенадцатиперстной части.Используйте два новых стерильных типсов для запуска кишечника, использовать один forcep провести на двенадцатиперстной кишке, в то время как с помощью другого, чтобы сорвать любой соединительной ткани, держа кишечник нетронутыми. Как вы разгадать, поместите кишечник, на стерильные абсорбента площадку, покрывающую животное. Если вам случится рип кишечника, во время процедуры распутывания, пометить области, на которой он разорвал, так что ориентация кишечника нетронутыми.Зажим на ректальный конец, и сделать разрезы на обоих зажимов. Поместите нетронутую кишку, на стерильную маркированную алюминиевую фольгу в правильную ориентацию. Отметите любые участки кишечника, необходимые для последующего анализа.ДНК извлекается из этих кишечников, используя оптимизированную процедуру экстракции, и анализ ПЦР делается для количественной оценки пробиотика. ДНК извлекается из свежего кишечника, или кишечник может храниться, при отрицательном 80 градусов по Цельсию с помощью морозильной камеры. Репрезентативные результаты, лактобактерии растений, колонизация с гаважем каждый день и через день.Более высокий сигнал LP наблюдался в кишечнике мышей, gavaged через день, по сравнению с мышами gavaged каждый день. Таким образом, последующие эксперименты были построены, используя gavages через день. Lactobacillus plantarum gavaged мышей, совместно размещенных с ungavaged мышей.Переменные сигналы LP наблюдались у необработанных мышей, которые были совместно размещены с LP gavaged мышей. Распространение колонизации LP, по возможности с товарищами помета, и таким образом условия обработки, были отделены клетками для наших затем экспериментов. Вывод, эта процедура может быть использована для доставки, точное количество любой жидкости для новорожденных мышей.Выборка кишечника может быть экстраполирована, чтобы исследовать изменения в микробиоме, с помощью других методов анализа. Область этого видео заключается в том, чтобы обеспечить платформу, для исследователей, чтобы использовать неонатальные модели мыши gavage, чтобы понять механизмы, стоящие за наблюдаемых эффектов, с ранним введения пробиотиков. Особая благодарность команде лаборатории Коллманн, Службе по уходу за животными Университета Британской Колумбии, за то, что она делает это исследование возможным.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Использование люциферазы в Изображение Бактериальные инфекции у мышей

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Истощение и разведения макрофагов у мышей

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Культивирование Микроглии от новорожденных и взрослых центральной нервной системы

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Неинвазивного Модель Neuropathogenic<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; Инфекция в новорожденной крысы

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Анализ функций тучных клеток In Vivo с использованием 'Mast Cell Knock-in'Mice

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice

Трансформация пробиотических дрожжей и их восстановление из желудочно-иммунных тканей После желудочный зонд у мышей

Development of recombinant oral therapy would allow for more direct targeting of the mucosal immune system and improve the ability to combat ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Неинвазивный выборки слизистую жидкость для количественной оценки в Vivo иммунной посредника уровня верхних дыхательных путей

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Исследования вирусов гриппа A в мышиной модели инфекции

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Характеристика тимус зависимых и тимус независимые иммуноглобулина изотипа ответов в мышей, используя энзим соединенный Assay иммуносорбента

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Раскрытие гемолимфы сбор и прививка Metarhizium блапопоры в Рипикцефалия Microplus клещей по направлению к патологии беспозвоночных исследований

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...