Name: two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door het ministerie van wetenschap en technologie, Taiwan (meest 106-2320-B-038-024, de meeste 105-2221-E-038-007-MY3 en meest 104-2320-B-424-001) en Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Dit manuscript werd uitgegeven door Wallace academische bewerken.

De verzorging van de dieren van de institutionele en gebruik commissies van de Academia Sinica en Taipei Medizinische Universität goedgekeurd dit protocol voor het gebruik van proefdieren.
1. MCAO/reperfusie model
<ol><li>De muizen voorzien van gratis toegang tot water en chow tot de operatie.</li>
	<li>Autoclaaf de chirurgische instrumenten en zuiveren van de operatie tafel en apparatuur met behulp van 70% ethanol. Het dragen van een chirurgisch masker en steriele handschoenen. Gebruik een...

<ol>
	<li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology,+treatment,+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke.">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).</li><li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+acute+stroke.">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).</li><li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury.">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li><li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice:+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery.">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li><li>Wellons, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia.">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li><li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+hypoxic+stroke:+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput,+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit.">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li><li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia:+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion.">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li><li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability.">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting.">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li><li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain.">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li><li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons.">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li><li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction.">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity.">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li><li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation.">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li></ol>

De muismodel van MCAO/reperfusie is een dierlijk model vaak werkzaam na te bootsen voorbijgaande ischemie bij de mens. Deze diermodel kan worden toegepast op transgene en knockout muizen stammen te onderzoeken de pathofysiologie van een beroerte. Verschillende stappen in het protocol staan vooral kritisch tegenover. (1) de microdrill moet zorgvuldig worden gebruikt bij het maken van een gat in de schedel, met ongepaste actie veroorzaakt gemakkelijk bloeden uit de MCA. (2) het MCA moet niet worden beschadigd, en bloeden m...

De cerebrale ischemie-reperfusie muismodel is één van de meest gebruikte experimentele benaderingen voor het onderzoek naar de pathofysiologie van hersenen ischemie-veroorzaakte schade1. Omdat cerebrale ischemie-reperfusie het perifere immuunsysteem activeert, perifere immuuncellen infiltreren in de ischemische hersenen en neuronale schade2veroorzaken. Dus, een betrouwbare en reproduceerbare muismodel dat cerebrale ischemie-reperfusie nabootst is vereist voor het begrijpen van de pathofysiologie van een beroerte.
C57BL/6J (B6) muizen zijn de meest gebruikte stam in lijn experimenten omdat ze kunnen gemakkelijk genetisch gemanipuleerd worden. Twee gemeenschappelijke modellen van MCAO/reperfusie die de toestand van cerebrale ischemie-reperfusie na te bootsen zijn verkrijgbaar. De eerste is de intraluminale gloeidraad model van proximale MCAO, waar een gloeidraad silicon beklede werkzaam is aan intravascularly occlude de bloedstroom in de MCA; de occluding gloeidraad wordt daarna verwijderd om te herstellen van de bloed stroom3. De duur van een korte occlusie resulteert in een laesie van de subcorticale regio, overwegende dat een langere duur van de occlusie infarcten in de corticale en subcorticale gebieden veroorzaakt. Het tweede model is het model van de afbinding van distale MCAO, waarbij extravascular Afbinding van de MCA en CCA te verminderen van de doorbloeding van het MCA, waarna de bloedstroom door de verwijdering van de hechtdraad en aneurysma clip4wordt hersteld. In dit model een infarct wordt veroorzaakt in de corticale gebieden, en het sterftecijfer is laag. Omdat de afbinding van MCAO/reperfusie model craniectomy om de site van de distale MCA bloot te stellen vereist, de site gemakkelijk kan worden bevestigd, en onderzoekt de bloedstroom in de distale MCA wordt verstoord tijdens de procedure is eenvoudig.
B6 muizen vertonen aanzienlijke verschillen in de anatomie van de cirkel van Willis; Dit kan gevolgen hebben voor het volume van de infarct na cerebrale ischemie-reperfusie5,6,7. Op dit moment kan dit probleem worden overwonnen door middel van afbinding van de distale MCA-8. In deze studie stellen we een methode voor de doorbloeding van MCA occluding en het inschakelen van reperfusie na een vooraf bepaalde periode van ischemie. Twee-schip occlusie van de cerebrale ischemie-reperfusie model induceert voorbijgaande ischemie van het grondgebied van de MCA via Afbinding van de juiste distale MCA en de juiste CCA, met bloedstroom hersteld na een bepaalde periode van ischemie. Dit model MCAO/reperfusie induceert een infarct van stabiele omvang, een bulk van hersenen-infiltreren immuuncellen in het ischemische hersenen en een gedrags tekort na cerebrale ischemie-reperfusie4.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bone rongeur</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>Friedman</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1097603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Petpro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator dry bead sterilizer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdrill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>FOREEDOM K.1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-scissors-Vannas</td>
			<td>HEISS</td>
			<td>H-4240</td>
			<td>blade 7mm, 8 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain matrix</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-invasive blood pressure system</td>
			<td>Muromachi</td>
			<td>MK-2000ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Monitoring System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Ever-Ready</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stoelting Rodent Warmers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53810</td>
			<td>Heating pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture clip</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>IDEALTEK</td>
			<td></td>
			<td>No.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>15672</td>
			<td>Surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 suture</td>
			<td>UNIK</td>
			<td>NT0410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion

In deze studie is een middelste cerebrale slagader (MCA) occlusie muismodel aangewend om te studeren van cerebrale ischemie-reperfusie. Een reproduceerbare en betrouwbare muismodel is nuttig voor onderzoek naar de pathofysiologie van cerebrale ischemie-reperfusie en het bepalen van mogelijke therapeutische strategieën voor patiënten met een beroerte. Variaties in de anatomie van de cirkel van Willis van C57BL/6 muizen beïnvloedt hun infarct volume na cerebrale ischemie-veroorzaakte schade. Studies hebben aangegeven dat distale MCA occlusie (MCAO) kan dit probleem te verhelpen en leiden tot een stabiele infarct grootte. In deze studie stellen wij een muismodel van de twee-schip occlusie van cerebrale ischemie-reperfusie door de onderbreking van de bloedtoevoer naar de juiste MCA. Wij distally afbinden de juiste MCA en rechts gemeenschappelijke halsslagader (CCA) en doorbloeding te herstellen na een bepaalde periode van ischemie. Deze verwonding ischemie-reperfusie induceert een infarct van stabiele grootte en een gedrags tekort. Perifere immuuncellen infiltreren de ischemische hersenen binnen de 24u infiltratie periode. Daarnaast is de neuronale verlies in de corticale gebied minder voor een langere duur van de reperfusie. Dit twee-schip occlusie model is daarom geschikt voor het onderzoeken van de immuunrespons en neuronale herstel binnen de periode van de reperfusie na cerebrale ischemie.

Deze MCAO/reperfusie-procedure een corticale infarct in de nabijheid van de juiste MCA geproduceerd en veroorzaakt een gedrags tekort. Verschillende graden van ischemie-veroorzaakte infarct volume (figuur 1AB) en neuronale verlies (Figuur 1 cD) ontstonden in de hersenschors voor de juiste MCA-omgeving via een toename van de duur van de afbinding. Deze MCAO/reperfusie schade daalde de motorische a...

Watch this Scientific Journal Video about Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion at JoVE.com

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

Muismodel van twee-schip occlusie van cerebrale ischemie-reperfusie

Een muismodel van cerebrale ischemie-reperfusie is gevestigd te onderzoeken de pathofysiologie van een beroerte. We distally de rechts midden cerebrale slagader en rechts gemeenschappelijke halsslagader afbinden en bloedstroom herstellen na 10 of 40 min van ischemie.

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Dit twee-vaans occlusie muis model van cerebrale ischemie-reperfusie kan de pathofysiologie van een beroerte te onderzoeken. Dit model zal leiden tot een stabiel infarct volume van de bulk van de hersenen infiltreren immuuncellen in de ischemische hersenen en het gedragstekort na cerebrale ischemie-reperfusie. In dit model wordt een infarct veroorzaakt in de corticale gebieden en is het sterftecijfer laag.Omdat de ligatie MCAO reperfusie model vereist craniotomie om de grootte van distale MCA bloot, de grootte kan gemakkelijk worden bevestigd, en het onderzoek of de bloedstroom in de distale MCAO wordt verstoord tijdens de procedure is eenvoudig. Geef de muizen gratis toegang tot water en voedsel tot aan de operatie. Autoclave de chirurgische instrumenten, en gebruik 70% ethanol om de operatie tafel en apparatuur te ontsmetten.Na het verdoven van een acht tot twaalf weken oude muis, zorg ervoor dat het niet over een pedaal reflex bij het testen met behulp van een stevige teen knijpen. Gebruik vetzalf om droogheid van de ogen te voorkomen terwijl de muis onder narcose is. Om de bloeddruk te controleren, eerst het haar te verwijderen, en vervolgens gebruik maken van een niet-invasieve bloeddruk systeem en een fysiologische monitoring systeem om rectale temperatuur en arteriële bloedgassen te controleren.Injecteer de muis onderhuids met een profylactisch antibioticum. Plaats vervolgens de muis in de supinepositie op het verwarmingskussen. Om de huid bloot te stellen, gebruik elektrische tondeuses om de vacht te scheren op de ventrale nek regio en in het gebied tussen het rechteroog en het rechteroor.Haal de vacht uit het lichaam van het dier met epilerende crème en desinfecteer de chirurgische plaats met 70% ethanol. Snijd vervolgens een centimeter lange middellijn incisie in de nek met behulp van iris schaar. Met iris tangen, zorgvuldig ontleden de gemeenschappelijke halsslagader vrij van de vagus zenuwen zonder lichamelijk letsel veroorzaken, en gebruik 5-0 zijden hechtingen om de slagader te isoleren.Gebruik vervolgens een irisschaar om een incisie van 0,3 centimeter in de hoofdhuid te maken in het midden tussen het rechteroog en het rechteroor. Met behulp van micro schaar, snijd de temporalis spier om de zygomatische en squamosal bot bloot. Plaats de muis onder een stereo ontleden microscoop, en gebruik een micro-boor om een twee milliliter gat direct over de rechterkant distale middelste hersenslagader te creëren.Gebruik een 10-0 hechting om de romp van de rechter distale MCA te binden en gebruik een niet-traumatische aneurismeclip om de CCA aan de rechterkant af te zwakken. Na de gewenste duur van ischemie, verwijder de hechting en aneurisme clip om de bloedtoevoer naar de MCA en CCA te herstellen. Gebruik een hechtingsclip om de huidincisie op het hoofd te verzegelen en de cervicale huidinsnijdingen af te sluiten met chirurgische lijm.Injecteer buprenorfine onderhuids voor pijnbestrijding. Houd de lichaamstemperatuur van het dier op 36,5 plus of min 0,5 graden Celsius op het verwarmingskussen en laat de lichaamstemperatuur van het dier niet onbeheerd achter of breng het niet terug naar het gezelschap van andere dieren totdat het volledig is hersteld van de anesthesie. Tot slot, plaats de muis in de autoclave kooi, zodat het vrij toegang tot water en voedsel nadat het volledig is hersteld.Gebruik irisschaar om een incisie te maken in de huid van het hoofd van de verdoofde en onthoofde muis om de schedel bloot te leggen. Gebruik vervolgens een schaar om de voorste van het frontale bot door te snijden en snijd met een irisschaar de schedel langs de sagittale hechting door. Met een bot rongeur, duw opzij de frontale en pariëtale bot, en bloot de hersenen.Verwijder de hersenen, en plaats het in een muis hersenen matrix. Gebruik scheermesjes om twee milliliter coronale plakjes te verkrijgen, en leg ze in 50-milliliter buizen gevuld met vijf milliliter van 2%TTC. Bij het gebruik van muis hersenen matrix om coronale plakjes te verkrijgen, moet de snijgrootte hetzelfde zijn in verschillende hersenen.Snijgrootte invloed op de grootte van de hersenen plakjes, die ook van invloed op de berekening van het infarct grootte. Vlek de hersenen plakjes met 2%TTC en 1X PBS gedurende 10 minuten op 37 graden Celsius, en dan twee keer spoelen met 10% formaline. Fix de hersenen plakjes in 10% formaline bij kamertemperatuur gedurende 24 uur.Na het drogen van de hersenen plakjes op het weefsel papier om overtollige formaline te absorberen, schik ze op een schone plastic glijbaan, oriënteren ze van rostral naar caudal, en bedek ze met een andere schone plastic glijbaan. Scan de dia met behulp van een scanner. Draai de dia om en scan de achterzijde.Gebruik ImageJ-software om het infarctgebied van elke sectie te berekenen, door eerst het afbeeldingsbestand te openen en de schaal voor de afbeelding in te stellen. Gebruik vervolgens uit de vrije hand selectie om het infarct gebied te selecteren, en gebruik maken van de regio's van belang ROI manager om het gebied van belang te meten. Tot slot, som de infarct gebieden voor elke sectie, en vermenigvuldig het resultaat met de sectie dikte om het totale infarct volume te schatten, en vervolgens volledige statistische analyse zoals beschreven in het manuscript.Toename van de ischemieduur tijdens deze MCAO reperfusieprocedure produceerde verschillende graden van ischemie-geïnduceerde infarctvolume en neuronaal verlies in de hersenschors van het juiste MCA-gebied. Bovendien verminderde de ischemie de bewegingsactiviteit van het dier op 48 uur na de MCAO-reperfusie. Na de cerebrale ischemie-reperfusie, een bulk van perifere immuuncellen geïnfiltreerd de ipsilaterale hemisfeer van de ischemische hersenen.Bovendien, toen dit twee-schip occlusie model werd vergeleken met het MCAO-model, hun infarct volumes waren niet significant verschillend. De microboor moet zorgvuldig worden gebruikt bij het maken van een gat in de schedel. Met ongepaste actie, gemakkelijk veroorzaken bloeden uit de MCA.De MCA mag niet worden beschadigd en het bloeden moet voor en na de ligatieprocedure worden vermeden. De MCA occlusie en de reperfusie status kunnen worden gecontroleerd door de laser Doppler. Deze methode kan de toestand van de bloedstroom van MCA bevestigen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normotherme hartstilstand en cardiopulmonale reanimatie: een muismodel van ischemie-reperfusie schade

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamceltransplantatie in een In vitro Gesimuleerde ischemie / reperfusie model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Geoptimaliseerde Systeem voor cerebrale perfusie Monitoring in het Rat Stroke Model van intraluminale midden cerebrale slagader occlusie

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemie-reperfusie model van Acute Kidney Injury en Post Letsel Fibrosis in Muizen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproduceerbaar Paraplegie door thoracale aorta-occlusie in een muizenmodel van Spinal Cord ischemie-reperfusie

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Muizenmodel van Intestinale ischemie-reperfusie schade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Een muismodel van retinale ischemie-reperfusie letsel door misbruik van intra-oculaire druk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Een pre-klinische rat model voor de studie van ischemie-reperfusie letsel in reconstructieve microchirurgie

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orgaan Ischemia-Reperfusie Letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat levertransplantatie model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...