Name: two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00
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Ce travail a été soutenu par le ministère de la Science et la technologie, Taïwan (plus 106-2320-B-038-024, plus 105-2221-E-038-007-MY3 et plus 104-2320-B-424-001) et le Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Ce manuscrit a été édité par Wallace édition académique.

L’utilisation des comités de l’Academia Sinica et Université de médecine de Taipei et le soin des animaux institutionnelle a approuvé ce protocole pour l’utilisation des animaux d’expérimentation.
1. modèle OACM/reperfusion
<ol><li>Fournir les souris avec libre accès à l’eau et chow jusqu'à ce que la chirurgie.</li>
	<li>Autoclave l’intervention chirurgicale des outils et assainir la table de chirurgie et équipements à l’aide d’éthanol à 70 %. Porter un masque ch...

<ol>
	<li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology,+treatment,+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke.">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).</li><li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+acute+stroke.">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).</li><li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury.">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li><li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice:+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery.">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li><li>Wellons, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia.">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li><li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+hypoxic+stroke:+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput,+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit.">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li><li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia:+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion.">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li><li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability.">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting.">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li><li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain.">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li><li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons.">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li><li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction.">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity.">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li><li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation.">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li></ol>

Le modèle de souris OACM/reperfusion est un modèle animal couramment employé pour imiter une ischémie transitoire chez l’homme. Ce modèle animal peut être appliqué à des souches de souris transgéniques et knock-out pour étudier la physiopathologie des accidents vasculaires cérébraux. Plusieurs étapes dans le protocole sont particulièrement critiques. (1) la microforages doivent être utilisé avec précaution lorsque vous créez un trou dans le crâne, par des mesures inappropriées facilement causant une...

Le modèle de souris de l’ischémie-reperfusion cérébrale est l’une des approches expérimentales plus largement utilisés pour étudier la physiopathologie des induite par l’ischémie cérébrale lésion1. Car l’ischémie-reperfusion cérébrale active le système immunitaire périphérique, les cellules du système immunitaires périphérique s’infiltrer dans le cerveau ischémique et causent des dommages neuronaux2. Ainsi, un modèle de souris fiable et reproductible qui imite l’ischémie-reperfusion cérébrale est nécessaire pour comprendre la physiopathologie des accidents vasculaires cérébraux.
C57BL/6J (B6) souris sont la souche plus couramment utilisée dans les expériences de course car ils peuvent facilement être génétiquement manipulés. Il existe deux modèles courants d’OACM/reperfusion qui imitent la condition d’ischémie-reperfusion cérébrale. Le premier est le modèle de filament d’intraluminale d’OACM proximale, où il est employé un filament de silicium enduit d’occlure intravasculaire le flux sanguin dans le MCA ; le filament occlusion est ensuite supprimé pour restaurer le flux de sang3. Une durée courte occlusion entraîne une lésion de la région sous-corticale, considérant qu’une plus longue durée de l’occlusion provoque un infarctus dans les régions corticales et sous-corticales. Le second modèle est le modèle de ligature d’OACM distal, qui implique la ligature extravasculaire du MCA et CCA pour réduire la circulation sanguine par l’intermédiaire de la MCA, après quoi la circulation sanguine est rétablie par la suppression de la suture et anévrisme clip4. Dans ce modèle, un infarctus est causé dans les aires corticales, et le taux de mortalité est faible. Car la ligature du modèle OACM/reperfusion nécessite craniotomie afin d’exposer le site de la MCA distale, le site peut être facilement confirmé, et tente de déterminer si le flux sanguin dans le MCA distale est perturbé au cours de la procédure est simple.
B6 souris présentent des variations considérables dans l’anatomie de leur cercle de Willis ; Cela pourrait affecter le volume d’un infarctus après ischémie-reperfusion cérébrale5,6,7. Actuellement, ce problème peut être surmonté grâce à la ligature du MCA distale8. Dans cette étude, nous établir une méthode d’occlusion de l’écoulement de sang MCA et permettant de reperfusion après une période d’ischémie. Deux vaisseaux occlusion du modèle d’ischémie-reperfusion cérébrale induit une ischémie transitoire du territoire MCA par ligature du MCA distale droite et droite CCA, avec débit sanguin restauré après une certaine période d’ischémie. Ce modèle OACM/reperfusion provoque un infarctus de taille stable, une grande partie de cerveau-infiltration de cellules immunitaires dans le cerveau ischémique et un déficit comportemental après ischémie – reperfusion cérébrale4.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bone rongeur</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>Friedman</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1097603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Petpro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator dry bead sterilizer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdrill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>FOREEDOM K.1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-scissors-Vannas</td>
			<td>HEISS</td>
			<td>H-4240</td>
			<td>blade 7mm, 8 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain matrix</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-invasive blood pressure system</td>
			<td>Muromachi</td>
			<td>MK-2000ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Monitoring System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Ever-Ready</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stoelting Rodent Warmers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53810</td>
			<td>Heating pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture clip</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>IDEALTEK</td>
			<td></td>
			<td>No.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>15672</td>
			<td>Surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 suture</td>
			<td>UNIK</td>
			<td>NT0410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion

Dans cette étude, un modèle de souris de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCA) est utilisé pour étudier l’ischémie-reperfusion cérébrale. Un modèle de souris fiable et reproductible est utile pour étudier la physiopathologie de l’ischémie-reperfusion cérébrale et de déterminer des stratégies thérapeutiques potentiels pour les patients atteints d’accident vasculaire cérébral. Variations dans l’anatomie du cercle de Willis de C57BL/6 mâles affecte leur volume d’infarctus après lésion cérébrale induite d’ischémie. Des études ont indiqué qu’occlusion distale du MCA (OACM) peut remédier à ce problème et entraîner une taille de l’infarctus stable. Dans cette étude, nous établissons un modèle de souris de deux vaisseaux occlusion d’ischémie-reperfusion cérébrale par l’intermédiaire de l’interruption de la circulation sanguine vers la droite MCA. Nous distalement ligaturer le MCA droite et artère carotide commune droite (CCA) et de restaurer le flux sanguin après une certaine période d’ischémie. Cette lésion d’ischémie-reperfusion provoque un infarctus de taille stable et un déficit comportemental. Les cellules du système immunitaires périphérique infiltrent le cerveau ischémique dans le délai de l’infiltration de 24h. En outre, la perte de neurones dans la zone corticale est moindre pour une plus longue durée de reperfusion. Par conséquent, ce modèle de deux-bateau occlusion est approprié pour étudier la réponse immunitaire et la récupération neuronale au cours de la période de reperfusion après une ischémie cérébrale.

Cette procédure OACM/reperfusion produit un infarctus cortical dans le voisinage de la MCA droite et causé un déficit comportemental. Différents niveaux de volume induite par l’ischémie du myocarde (Figure 1 aB) et la perte neuronale (Figure 1D) ont été créés dans le cortex cérébral de la zone droite de MCA à travers une augmentation de la durée de la ligature. Cette blessure OACM/...

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Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

Modèle de souris de deux vaisseaux Occlusion d’ischémie-reperfusion cérébrale

Un modèle murin d’ischémie-reperfusion cérébrale est mis en place pour étudier la physiopathologie des accidents vasculaires cérébraux. Nous distalement ligaturer l’artère cérébrale moyenne droite et artère carotide commune droite et restaurer le flux sanguin après 10 ou 40 min d’ischémie.

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Ce modèle de souris occlusion à deux vaisseaux de l’ischémie cérébrale-reperfusion peut étudier la pathophysiologie de la course. Ce modèle induirea un volume infarctus stable de la majeure partie du cerveau infiltrant des cellules immunitaires dans le cerveau ischémique et le déficit comportemental après ischémie-reperfusion cérébrale. Dans ce modèle, un infarctus est causé dans les zones corticales et le taux de mortalité est faible.Puisque le modèle de reperfusion de MCAO de ligature exige craniotomy pour exposer la taille du MCA distal, la taille peut être facilement confirmée, et l’examen si le flux sanguin dans le MCAO distal est perturbé pendant la procédure est simple. Fournir aux souris un accès gratuit à l’eau et à la nourriture jusqu’à la chirurgie. Autoclave les outils chirurgicaux, et utiliser 70% d’éthanol pour assainir la table de chirurgie et de l’équipement.Après avoir anesthésié une souris de huit à 12 semaines, assurez-vous qu’elle n’a pas de réflexe de pédale lorsqu’elle est testée à l’aide d’un pincement ferme des pieds. Utilisez de l’onguent vétérinaire pour prévenir la sécheresse oculaire pendant que la souris est sous anesthésie. Pour surveiller la pression artérielle, retirez d’abord les cheveux, puis utilisez un système de pression artérielle non invasive et un système de surveillance physiologique pour surveiller la température rectale et les gaz sanguins artériaux.Injecter la souris sous-cutanée avec un antibiotique prophylactique. Ensuite, placez la souris en position supine sur le coussin chauffant. Pour exposer la peau, utilisez des tondeuses électriques pour raser la fourrure sur la région ventrale du cou et dans la région entre l’œil droit et l’oreille droite.Dégagez la fourrure du corps de l’animal avec de la crème épilatrice et désinfectez le site chirurgical avec 70 % d’éthanol. Ensuite, coupez une incision médiane d’un centimètre de long au cou à l’aide de ciseaux d’iris. Avec des forceps d’iris, disséquez soigneusement l’artère carotide commune libre des nerfs de vague sans causer des dommages physiques, et emploiez des sutures de soie de 5-0 pour isoler l’artère.Ensuite, utilisez des ciseaux d’iris pour faire une incision de 0,3 centimètre dans le cuir chevelu au milieu entre l’œil droit et l’oreille droite. À l’aide de micro ciseaux, couper le muscle temporalis pour exposer l’os zygomatique et squamosal. Placez la souris sous un microscope à disséquer stéréo et utilisez une micro foreuse pour créer un trou de deux millilitres directement au-dessus de l’artère cérébrale moyenne distale du côté droit.Utilisez une suture 10-0 pour ligate le tronc du MCA distal droit et utilisez un clip d’anévrisme non traumatique pour occluser le CCA côté droit. Après la durée désirée de l’ischémie, retirez la suture et le clip d’anévrisme pour reconstituer le flux sanguin au MCA et au CCA. Utilisez un clip de suture pour sceller l’incision cutanée sur la tête et sceller les incisions cervicales de la peau avec de la colle chirurgicale.Injecter la buprénorphine sous-cutanée pour soulager la douleur. Maintenez la température corporelle de l’animal à 36,5 plus ou moins 0,5 degré Celsius sur le coussin chauffant, et ne la laissez pas sans surveillance ou ne la retournez pas à la compagnie d’autres animaux tant qu’elle n’est pas complètement remise de l’anesthésie. Enfin, placez la souris dans la cage autoclave afin qu’elle puisse accéder librement à l’eau et à la nourriture une fois qu’elle a complètement récupéré.Utilisez des ciseaux d’iris pour faire une incision dans la peau de la tête de la souris anesthésiée et décapitée pour exposer le crâne. Ensuite, utilisez des ciseaux de fonctionnement pour couper l’antérieur de l’os frontal, et avec des ciseaux d’iris, couper le crâne le long de la suture sagittale. Avec un rongeur osseux, repousser l’os frontal et pariétal, et exposer le cerveau.Enlevez le cerveau et placez-le dans une matrice cérébrale de souris. Utilisez des lames de rasoir pour obtenir des tranches coronale de deux millilitres et placez-les dans des tubes de 50 millilitres remplis de cinq millilitres de 2 % de TTC. Lors de l’utilisation de la matrice cérébrale de la souris pour obtenir des tranches coronal, la taille de coupe devrait être la même dans différents cerveaux.La taille de coupe affecte la taille des tranches de cerveau, qui affectent également le calcul de la taille d’infarctus. Tacher les tranches de cerveau avec 2%TTC et 1X PBS pendant 10 minutes à 37 degrés Celsius, puis rincer deux fois avec 10% de formaline. Fixer les tranches de cerveau en formaline de 10% à température ambiante pendant 24 heures.Après avoir assécher les tranches de cerveau sur le papier de soie pour absorber l’excès de formaline, disposez-les sur une lame de plastique propre, les orientant de rostral à caudal, et couvrez-les avec une autre glissière en plastique propre. Scannez la diapositive à l’aide d’un scanner. Retournez la glissade et numérisez le revers.Utilisez le logiciel ImageJ pour calculer la zone d’infarctus de chaque section, en ouvrant d’abord le fichier d’image et en mettant en place l’échelle de l’image. Ensuite, utilisez la sélection à main levée pour sélectionner la zone infarctus, et utilisez les régions d’intérêt gestionnaire roi pour mesurer la zone d’intérêt. Enfin, résumer les zones infarctus pour chaque section, et multiplier le résultat par l’épaisseur de la section pour estimer le volume total de l’infarctus, puis compléter l’analyse statistique telle que décrite dans le manuscrit.L’augmentation de la durée d’ischémie pendant cette procédure de reperfusion de MCAO a produit différents degrés de volume infarctus ischémique-induit et de perte neuronale dans le cortex cérébral de la région droite de MCA. En outre, l’ischémie a diminué l’activité locomotrice de l’animal à 48 heures après la reperfusion de MCAO. Après l’ischémie cérébrale-reperfusion, une majeure partie des cellules immunitaires périphériques se sont infiltrées dans l’hémisphère ipsilateral du cerveau ischémique.De plus, lorsque ce modèle d’occlusion à deux navires a été comparé au modèle MCAO, leurs volumes infarctus n’étaient pas significativement différents. La micro foreuse doit être soigneusement utilisée lors de la création d’un trou dans le crâne. Avec une action inappropriée, facile de provoquer des saignements du MCA.Le MCA ne doit pas être endommagé, et le saignement doit être évité avant et après la procédure de ligature. L’occlusion MCA et l’état de reperfusion peuvent être vérifiés par le laser Doppler. Cette méthode peut confirmer l’état de la circulation sanguine du MCA.

Research

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Medicine

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