Name: two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי משרד המדע, הטכנולוגיה, טייוואן (ביותר 106-2320-B-038-024, רוב 105-2221-E-038-007-MY3 ו ביותר 104-2320-B-424-001) בית החולים האוניברסיטאי הרפואי טייפה (107TMUH-SP-01). כתב יד זה נערך על-ידי עריכה אקדמית וואלאס.

טיפול בבעלי חיים מוסדיים וועדות שימוש של אקדמיה Sinica, טייפה הרפואי האוניברסיטאי אושר פרוטוקול זה לשימוש של חיות ניסוי.
1. MCAO/פגיעה reperfusion מודל
<ol><li>מספקים העכברים עם גישה חופשית לחדר האוכל והמים עד הניתוח.</li>
	<li>אוטוקלב כירורגי כלים, לנקות את שולחן הניתוחים וציוד באמצעות אתנו...

<ol>
	<li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology,+treatment,+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke.">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).</li><li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+acute+stroke.">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).</li><li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury.">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li><li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice:+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery.">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li><li>Wellons, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia.">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li><li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+hypoxic+stroke:+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput,+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit.">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li><li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia:+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion.">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li><li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability.">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting.">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li><li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain.">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li><li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons.">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li><li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction.">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity.">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li><li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation.">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li></ol>

המודל העכבר MCAO/פגיעה reperfusion הוא במודל חיה בדרך כלל המועסקים לחקות איסכמיה ארעי אצל בני אדם. מודל זה בעל חיים ניתן להחיל העכברים הטרנסגניים ו נוקאאוט זנים לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. מספר צעדים בפרוטוקול הם קריטיים במיוחד. (1) microdrill, אליו חייב לשמש בזהירות בעת יצירת חור בגולגולת, עם פעולה לא ...

המודל העכבר איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion היא אחת הגישות ניסיוני הנפוצה ביותר עבור חוקרים הפתופיזיולוגיה של המוח הנגרמת איסכמיה פציעה1. בגלל איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion מעורר את המערכת החיסונית היקפיים, תאים חיסוניים היקפיים לחדור לתוך איסכמי במוח וגורמים נזקים עצביים2. לכן, מודל העכבר אמין לשחזור המחקה איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion נדרש להבין הפתופיזיולוגיה של שבץ.
C57BL/6J (B6) עכברים הם המתח הנפוצות ביותר בניסויים שבץ, כי הם יכולים בקלות להיות גנטית מניפולציה. שני דגמים נפוצים של MCAO/פגיעה reperfusion המחקים את התנאי של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion זמינים. הראשון הוא הדגם נימה intraluminal של MCAO הפרוקסימלית, איפה נימה מצופה סיליקון הוא מועסק כדי intravascularly occlude את זרימת הדם ב- MCA; חוט הלהט occluding תוסר לאחר מכן כדי לשחזר את זרימת הדם3. משך זמן קצר סגר גורמת פגיעה של האזור subcortical, ואילו משך זמן ארוך יותר סגר גורמת infarcts באזורים קורטיקליים ו subcortical. המודל השני הוא הדגם מצדו של MCAO הדיסטלי, שכרוך extravascular מצדו של MCA, המרכז לאמנות עכשווית כדי להקטין את זרימת הדם דרך MCA, אחרי אשר שוקמו זרימת הדם דרך הסרת תפרים, מפרצת סרטון4. במודל זה, לאוטם נגרמת באזורים קורטיקליים, שיעור התמותה הוא נמוך. כי מצדו של דגם MCAO/פגיעה reperfusion דורש craniectomy לחשוף את האתר של MCA הדיסטלי, האתר יכול להיות מאושרות בקלות, תוך בחינת השאלה זרימת הדם ב- MCA דיסטלי מופרת במהלך ההליך היא פשוטה.
B6 עכברים התערוכה וריאציות ניכר באנטומיה של שלהם מעגל ויליס; זה עשוי להשפיע על אמצעי האחסון לאוטם בעקבות איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion5,6,7. כיום, בעיה זו ניתן להתגבר באמצעות מצדו של MCA דיסטלי8. במחקר זה, אנו להקים שיטה occluding את זרימת הדם MCA ולאפשר פגיעה reperfusion לאחר פרק זמן מוגדר מראש של איסכמיה. שתיים, כלי סגר של המודל איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion גורם איסכמיה ארעית של השטח MCA דרך מצדו של MCA הדיסטלי הימני, נכון המרכז לאמנות עכשווית, עם זרימת דם משוחזרים לאחר תקופה מסוימת של איסכמיה. דגם MCAO/פגיעה reperfusion זה גורם לאוטם של גודל יציב, בכמויות גדולות של תאים חיסוניים הסתננות מוח איסכמי במוח, גרעון התנהגותית אחרי איסכמיה מוחית – פגיעה reperfusion4.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bone rongeur</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>Friedman</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1097603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Petpro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator dry bead sterilizer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdrill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>FOREEDOM K.1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-scissors-Vannas</td>
			<td>HEISS</td>
			<td>H-4240</td>
			<td>blade 7mm, 8 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain matrix</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-invasive blood pressure system</td>
			<td>Muromachi</td>
			<td>MK-2000ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Monitoring System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Ever-Ready</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stoelting Rodent Warmers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53810</td>
			<td>Heating pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture clip</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>IDEALTEK</td>
			<td></td>
			<td>No.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>15672</td>
			<td>Surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 suture</td>
			<td>UNIK</td>
			<td>NT0410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion

במחקר זה, מודל העכבר חסימה בעורק האמצעי (MCA) הוא מועסק ללמוד איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion. מודל אמין הדירים העכבר הוא שימושי עבור חוקרים הפתופיזיולוגיה של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion וקביעת אסטרטגיות טיפוליות אפשריות עבור חולים עם קו. וריאציות באנטומיה של מעגל וויליס של C57BL/6 עכברים משפיע על נפח לאוטם שלהם לאחר פגיעה מוחית-איסכמיה-induced. מחקרים הראו הזה סגר MCA הדיסטלי (MCAO) ניתן להתגבר על בעיה זו, לגרום לאוטם יציב במידה. במחקר זה, אנו להקים מודל העכבר סגר שתיים, כלי של מוחי איסכמיה-פגיעה reperfusion דרך ההפרעה של זרימת הדם MCA הנכון. אנו יש מאתרים ומפסיקים את MCA נכון ולא נכון עורק תרדמני (המרכז לאמנות עכשווית), להחזיר את זרימת הדם לאחר תקופה מסוימת של איסכמיה. הפציעה איסכמיה-פגיעה reperfusion גורם לאוטם של גודל יציב של גירעון התנהגותית. תאים חיסוניים היקפיים לחדור איסכמי במוח במהלך תקופת הסתננות 24 שעות ביממה. בנוסף, אובדן העצבית באזור קורטיקליים היא פחות עבור משך זמן ארוך יותר פגיעה reperfusion. לכן, מודל סגר שתיים, כלי זה מתאים חוקרים את התגובה החיסונית ושחזור העצבית במהלך תקופת פגיעה reperfusion לאחר קליפתית.

הליך MCAO/פגיעה reperfusion המיוצר לאוטם בקליפת המוח באזור MCA נכון וגרם גרעון התנהגותית. דרגות שונות של איסכמיה-induced לאוטם נפח (איור 1 א'ב') ואובדן עצביים (איור 1CD) נוצרו בקליפת של האזור MCA נכון דרך עלייה משך מצדו. הפציעה הזאת MCAO/פגיע...

Watch this Scientific Journal Video about Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion at JoVE.com

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

מודל העכבר הזה של איסכמיה מוחית דו-כלי יכול לחקור את הפתופיזיולוגיה של שבץ. מודל זה יגרום נפח אוטם יציב של רוב המוח חודר תאים חיסוניים במוח איסכמי ואת הגירעון ההתנהגותי לאחר איסכמיה מוחית-reperfusion. במודל זה, אוטם נגרם באזורים קליפת המוח ושיעור התמותה נמוך.בגלל מודל הרפיה MCAO קשירה דורש craniotomy לחשוף את הגודל של MCA דיסטלי, הגודל ניתן לאשר בקלות, ואת הבדיקה אם זרימת הדם MCAO דיסטלי הוא שיבש במהלך ההליך הוא פשוט. לספק לעכברים גישה חופשית למים ומזון עד הניתוח. אוטול את הכלים הכירורגיים, ולהשתמש 70% אתנול כדי לחטא את שולחן הניתוח וציוד.לאחר הרדמה של עכבר בן שמונה עד 12 שבועות, ודא שאין לו רפלקס דוושה כאשר הוא נבדק באמצעות קמצוץ בוהן מוצק. השתמש משחה וטרינר כדי למנוע יובש בעיניים בזמן העכבר נמצא תחת הרדמה. כדי לפקח על לחץ הדם, תחילה להסיר את השיער, ולאחר מכן להשתמש במערכת לחץ דם לא פולשנית מערכת ניטור פיזיולוגית כדי לפקח על טמפרטורה רקטליים וגזי דם עורקיים.להזריק את העכבר תת עורית עם אנטיביוטיקה מניעתית. לאחר מכן, מניחים את העכבר במצב supine על כרית החימום. כדי לחשוף את העור, השתמש קוצץ חשמלי לגלח את הפרווה על אזור הצוואר הגחוני באזור שבין העין הימנית לאוזן ימין.לנקות את הפרווה מהגוף של החיה עם קרם epilating, ולחטא את האתר הכירורגי עם 70% אתנול. ואז לחתוך חתך קו אמצע באורך סנטימטר אחד בצוואר באמצעות מספריים איריס. עם מלקעי הקשתית, בזהירות לנתח את העורק הראשי נפוץ ללא עצבי vagus מבלי לגרום לפציעה פיזית, ולהשתמש 5-0 תפרים משי כדי לבודד את העורק.לאחר מכן, השתמש מספריים איריס לעשות חתך 0.3 ס"מ בקרקפת במרכז בין העין הימנית לאוזן ימין. בעזרת מיקרו מספריים, חותכים את שריר הטמפורליס כדי לחשוף את עצם הזיגומטית והסקוומוסאלית. מניחים את העכבר מתחת למיקרוסקופ ניתוח סטריאו, ולהשתמש במקדח מיקרו כדי ליצור חור שני מיליליטר ישירות מעל עורק המוח הדיסטלי באמצע בצד ימין.השתמש בתפר 10-0 כדי לייגד את תא המטען של MCA דיסטל בצד ימין, ולהשתמש קליפ מפרצת לא טראומטית כדי occlude CCA בצד ימין. לאחר משך הזמן הרצוי של איזמיה, להסיר את קליפ התפר והמפרצת כדי לשחזר את זרימת הדם MCA ו CCA. השתמש קליפ תפר כדי לאטום את חתך העור על הראש ולאטום את החתכים בעור צוואר הרחם עם דבק כירורגי.להזריק buprenorphine תת עורית להקלה על הכאב. לשמור על טמפרטורת הגוף של החיה ב 36.5 פלוס או מינוס 0.5 מעלות צלזיוס על כרית החימום, ולא להשאיר ללא השגחה או להחזיר אותו לחברה של בעלי חיים אחרים עד שהוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה. לבסוף, מניחים את העכבר לתוך כלוב autoclave, כך שהוא יכול לגשת בחופשיות מים ומזון לאחר שהוא התאושש לחלוטין.השתמש מספריים איריס לעשות חתך בעור של הראש של העכבר הרדמה ערוף כדי לחשוף את הגולגולת. לאחר מכן השתמש במספריים הפעלה כדי לחתוך את הקדמי של העצם הקדמית, ועם מספריים איריס, לחתוך את הגולגולת לאורך התפר sagittal. בעזרת רונגור עצם, דחפו הצידה את העצם הקדמית והקודקודית, וחשפו את המוח.הסר את המוח, והצב אותו במטריצת מוח של עכבר. השתמשו בסכיני גילוח כדי להשיג פרוסות קורונול של שני מיליליטר, והצבו אותן בצינורות של 50 מיליליטר מלאים בחמישה מיליליטר של 2%TTC. בעת שימוש במטריצת מוח העכבר כדי להשיג פרוסות coronal, גודל החיתוך צריך להיות זהה במוחות שונים.גודל החיתוך משפיע על גודל פרוסות המוח, אשר משפיעות גם על חישוב גודל אוטם. הכתם את פרוסות המוח ב-2%TTC וב-PBS 1X למשך 10 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן שטף פעמיים ב-10% פורמלין. לתקן את פרוסות המוח ב 10% פורמלין בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות.לאחר ייבוש פרוסות המוח על נייר הרקמה כדי לספוג עודפי פורמלין, מסדרים אותם על מגלשת פלסטיק נקייה, ומכווןים אותם מ rostral כדי caudal, ולכסות אותם עם עוד שקופית פלסטיק נקי. סרוק את השקופית באמצעות סורק. הפוך את השקופית וסרוק את הצד ההפוך.השתמש בתוכנת ImageJ כדי לחשב את אזור האוטם של כל מקטע, על-ידי פתיחת קובץ התמונה תחילה והגדרת קנה המידה של התמונה. לאחר מכן השתמש בבחירה ביד חופשית כדי לבחור את האזור האוטם, ולהשתמש באזורים של מנהל ההשקעות של הריבית כדי למדוד את תחום העניין. לבסוף, סכם את אזורי האוטם עבור כל מקטע והכפל את התוצאה בעובי המקטע כדי להעריך את נפח האוטם הכולל ולאחר מכן השלם ניתוח סטטיסטי כמתואר בכתב היד.עלייה משך איזכמיה במהלך הליך זה MCAO reperfusion הפיק דרגות שונות של נפח אוטם הנגרמת על ידי איזכמיה ואובדן עצבי בקליפת המוח של אזור MCA הנכון. יתר על כן, האיזכמיה הפחיתה את פעילות לוקומוטור של החיה ב 48 שעות לאחר ההתרשות MCAO. לאחר איסכמיה מוחית-reperfusion, חלק גדול של תאים חיסוניים היקפיים חדרו את חצי הכדור ipsilateral של המוח האיסכמי.בנוסף, כאשר מודל זה של שתי חללית occlusion הושווה עם מודל MCAO, נפחי אוטם שלהם לא היו שונים באופן משמעותי. יש להשתמש בזהירות במקדחת המיקרו בעת יצירת חור בגולגולת. עם פעולה בלתי הולמת, קל לגרום לדימום מ MCA.MCA לא צריך להיפגע, ואת הדימום יש להימנע לפני ואחרי הליך הקשירה. העורקה MCA ואת מצב ההשלכות ניתן לבדוק על ידי דופלר לייזר. שיטה זו יכולה לאשר את מצב זרימת הדם של MCA.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

גזע השתלת תאים ב במבחנה דגם סימולציה איסכמיה / reperfusion

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

פרפלגיה Reproducable ידי בית חזה אבי העורקים ספיגה במודל Murine של חוט השדרה איסכמיה reperfusion

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

מודל מפרה קליני לחקר איסכמיה-reperfusion פציעה במיקרו-כירורגיה משחזרת

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

פגיעה באיבר איסכמיה-רפרופוזיה על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...